(54) СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ МЕТИЛАЗЫ ЕСО RI ИЗ ESCHER1CHIA СО LI
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ СИСТЕМЫ РЕСТРИКЦИИ-МОДИФИКАЦИИ | 1984 |
|
SU1262952A1 |
| Способ получения полинуклеотидлигазы, индуцируемой фагом т4 в клетках | 1977 |
|
SU659614A1 |
| Способ выделения полинуклеотидфосфорилазы | 1981 |
|
SU1076445A1 |
| Способ получения фермента днк-цитозин-метилазы 1 из клеток | 1977 |
|
SU737443A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТИЛАЗЫ E. CO R11 | 1984 |
|
SU1311253A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕСТРИКТАЗЫ E.CORII ИЗ ШТАММА БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI B 834/PSK 323 | 1984 |
|
SU1321060A1 |
| Способ получения рибонуклеазы Н из ЕSснеRIснIасоLI | 1987 |
|
SU1495377A1 |
| Способ получения ДНК-полимеразы 1 ЕSснеRIснIа coLI | 1988 |
|
SU1622393A1 |
| СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГОРМОНА РОСТА ЧЕЛОВЕКА | 1987 |
|
SU1596731A1 |
| Способ получения комплексного ферментного препарата ацетокиназы и аденилаткиназы из биомассы Е.coLI | 1979 |
|
SU837066A1 |
Изобретение относится к способам выделения ферментов, а именно к способам вьоделения высокоочищенных ДНК метилаз, которые находят.применение в экспериментах по изучению структуры и функции ДНК и в генной инженерии.
Известно несколько методов выделения метилазы Есо R I.
Они основаны на фракционировании белков с помощью сульфата стрептомицина, сульфата аммония, ионообменной хроматографии и позволяют получать высокоочищенные препараты 1.
Однако эти методы трудоемки, длительны и дают низкий выход фермента.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является способ выделения метилазы Еоо RI из Escherichia coli, предусматривающий дезинтеграцию, фракционирование сульфатом стрептомицина, концентрирование сульфатом аммония и диализ.
В этом способе в качестве источника фермента используют клетки Escherichia coli RI 13. После дезинтеграции клеток и последующего центрифугирования белки неочищенного экстракта фракционируют сульфатом стрептомицина, осадки экстрагируют растворами различных концентраций
сульфата аммония, концентрируют сульфатом аммония, осадок растворяют в буферном растворе и диализуют, диа5 лизат хроматографируют на колонках с фосфоцеллюлозой Р-11, гидроксилаппатитом, фракции, содержащие метилазу Есо RI,диализуют, концентрируют на колонке с гидроксилаппатитом и
IQ подвергают гельфильтрации на колонке с Bio-Gel-0,5 m, препарат фермента концентрируют диализом против раствора с 50%-ным глицерином. Выход 16%, удельная активность 7,500-. 8,000 ед/мг белка 2.
Недостатками этого способа явлА ется низкий выход целевого продукта, и наличие большого количества трудоемких стадий.
20
Цель - увеличение выхода целевого продукта и ускорение процесса выделения.
Указанная цель достигается тем, что в способе выделения метилазы
25 Есо RI из Escherichia coli, предусматривающем дезинтеграцию, фракционирование сульфатом стрептомицина, концентрирование сульфатом аммония и диализ, после диализа проводят фрак30ционирование на колонках с полиэтилен
