Способ получения средства антипротеиназного действия Советский патент 1983 года по МПК A61K38/16 

:С &9

00 i(ib it vl

Изобретение относится к области медицины, а именно х-ематологии и касается получения лечебного средства ингибитора протеиназ.

Известен способ получения средства антипротеиназного действия путем фракционирования плазмы крови этанолом, выделения фракции III по Кону, добавления полиэтиленгликояя, переосаждения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стеияизации целевого продукта 1.

Однако средство полученное известным способом обладает узким спектром нтипротеиназного действия, то есть способно подавлять активность лишь одной или двух протеиназ,

Целью изобретения является придаие средству поливалентного действия.

Это достигается тем, что при Осуествлении способа получения средства антипротеиназного действия путем фракционирования плазмы крови этанолом, выделения фракции III по Кону, добавления полиэтиленгликоля, переосаждения этанолом, центрифугиования осадка, растворения и стери изации целевого продук.та отличительной особенностью является то, что обавляют к фракции III по Кону 14-18%-ный раствор полиэтиленгликоля npVi рН 7,5 - 6,9, полученную надосадочную жидкость обрабатывают равным объемом 5.0-56%, этанола, затем удаляют осадок и к надосадочной жидкости добавляют соляную кислоту до рН 5,9-6,3.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Плазму крови человека фракционируют с помощью этанола, выделенный осадок III Кона замораживают и со- храняют при температуре -10 -20°С ,.При фракционировании осадка III Кона его суспендируют в воде . для экстракции - макроглобулина и балластные белки отделяют центрифугированием при комнатной температуре, К полученному центрифугату при рН 8,7 добавляют равный объем 14% раствора полиэтиленгликоля с мол.мае. 6000 и оставляют на 2-4 ч при 4-6 С. Образовавшийся осадок липопротеидов и других балластных белков отделяют центрифугированием, а к центрифугату при температуре О С добавляют охлажденный до -10°С этиловый спирт до конечной концентрации 26 об.% и оставляют смесь на 10-16 ч при (-6°)-(-9)°С-. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при -6°С, в центрифугате устанавливают рН 6Д и оставляют на 12-16 Чо Осадок отделяют центрифугированием при -6 С и растворяют в физиологическом растворе. Полученный раствор представляет собой концентрат od-макроглобулина/ содержание которого составляет 60-80% от общего белка.

Пример. Плазму донорской крови подвергают фракционированию с помощью этанола, полученный осадок фракции III Кона замораживают при (-10 - (-20°С/. 1 кг замороженного

осадка фракции III Кона растворяют в 5 л дистиллированной воды и ооадок отделяют центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 20 мин при комнатной температуре. В надосаQ дочной жидкости (4200-4500 мл с помощью 0,5 н. раствора МаОН устанавливают рН 7,5-8,9 (предпочтительно 8,6-8,7 I и, перемешивая постепенно добавляют равный объем (4200-4500 мл 14%-ного раствора полиэтиленгликоля с

с мол.мае. 6000, приготовленный на 0,85% Л/аСВ . Смесь оставляют на 2-4 ч при температуре . Осадок отделяют центрифугированием при 25003000 об/мин в течение 20 мин при

0 4-6°С и отбрасывают. Надосадочную жидкость (7500-7800 мп охлаждают до О - ( и постепенно при этой температуре добавляют при перемешивании равный объем 7500-7800 мл/

5 предварительно охлажденного до 53% - этанола. Смесь перемешивают и постепенно В течение 2-3 ч снижают температуру до (-6 / - () и оставляют на 10-16 ч при этой температуQ ре Полученный осадок отделяют

центрифугированием, а в центрифугате посредством 0,1 и раствора НС доводят рН до 5,9-6,3 (предпочтительно 6,1-6,3 и оставляют на 12-16 ч при температуре (-6 J - Осадок

отделяют центрифугированием при

4000-6000 об/мин в течение 25-30 мин при температуре (-6 ) - (-Э°С). Полученный осадок растворяют в 0,85% NaC, подвергают стерилизующей фильтрации.

Конечный продукт представляет собой прозрачный раствор белков, обогащенный в 7-15 раз С 2 кро обулч ном крови человека. Концентрация

5 -макроглобулина в конечном стерильном растворе составляет 12002500 мг.%.

Выход препарата составляет 1-2% от общего белка плазмы крови человека. Средство обладаетвыраженным антипротеиназнь1м поливалентным действием. Концентрат макроглобули на подавляет активность многих протеолитических ферментов животного - происхождения: трипсина (4 мЕД/мг ),

фибринолизина (15 мЕД/мг ), плазмина ( 10 мЕД/мг ), химотрипсина ( 7 мЕД/мг / калликреина - 1 мЕД препарата эквивалейта 5 калликреинингибиторным единицам траэиллола , растительного происхождения: папаина (3 мЕД/мг и других) бактериального происхождения (Subtilopepti«Jase А, тип VIII) .

Препарат хорошо растворим в физиологическом растворе до концентра3938447Л

ции 70-90 мг/мл, не теряет активное-ленного его поливалентными свойстти в течение 1-1,5 лет при хранениивами. При введении больным с деств растворе при температуре .руктивными заболеваниями (панкреатит,

Данный способ позволяет на уже ожоговая травма, экзогенные отравимеющихся производственных мощное-ления средство,коррегирует нарутях, в едином технологическом процес-- шения в системе гомеостаза, что

се, без дополнительных затрат полу-будет усиливать и ускорять лечебный

чать лечебное средство, обладающееэффект. того, предлагаемое

поливалентным антипротеиназнымантипротеинаэное средство способно

действием.подавлять активность многих бакте--Результаты биологического изу-тов, что обусловит его эффектив ения и исследования in vitro поз-ность при лечении перитонита, сепволяют ожидать положительный эффектсиса и других воспалительных забов лечебном действии предлагаемого леваний в комплексе общей антимикробантипротеиназного средства, обуслов-ной терапии.

10риальных протеолитических фермен

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА АНТИПРОТЕИНA3НОГр ДЕЙСТВИЯ путем фракционирования плазмы крови этанолом, вьшеления фракции III по Кону, добавления полиэтиленгликоля, переосазвдения этанолом, центрифугирования осадка, растворения и стерилизации целевого продукта, о т л и чающийся тем, что, с целью придания Средству поливалентного действия, добавляют к фракции III по Кону 14-18%-ный раствор полиэтиленгликоля при рН 7,5-8,9, полученную надосадочную жидкость обрабатывают равным объемом 50-56% этанола, затем удаляют осадок и к надосадочной жидкости добавляют соляную Чсислоту до рН 5,9-6,3. (П