Способ получения поверхностного антигена гепатита В Советский патент 1982 года по МПК A61K39/29 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ГЕПАТИТА В

Изобретение относится к медицине и касается получения поверхностного антигена гепатита В. Известен способ получения поверхностного антигена гепатита В путем осаждения из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта 1. Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода антигена. Целью изобретения является повышение выхода антигена. Цель достигается тем, что согласно способу получения поверхностного антигена гепатита В путем осаждения из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта, осаждение проводят 4%-ным раствором риванола из расчета 35-45 мл на 100 мл сыворотки, после прогревания осуществляют протеолиз 0,2-ным раствором трипсина из расчета 15-20 мл на 100 мл антигенсодержащей жидкости и очистку проводят диализом против дистиллированной воды при 4-5°С. Пример. Берут 2000 мл HBs - антигенположительной сыворотки (или плазмы), осветляют ее центрифугированием 20 мин при 3000 об/мин, доводят рН сыворотки до 8,5 с помощью 15%-го раствора углекислого натрия, после чего 30 мин при постоянном помешивании приливают 800 мл 4%-ного водного раствора риванола. Смесь оставляют на 4-5 ч при 4 С. Надосадочную жидкость декантируют и отбрасывают, так как весь HBj-aHTHreH переходит в твердую фазу. К осадку с целью его ресуспендирования. добавляют 400 мл 1,5%-го раствора хлористого натрия и оставляют на 10-12 ч при 4°С. Полученную творожистую массу центрифугируют при 3000 об/мин 30 мин. Осадок удаляют. К 570 мл супернатанта добавляют 300 мл дистиллированной воды и проводят температурную обработку при 80°С в течение 1 ч. Продукт термообработки гемогенизируют, добавляя небольшие порции дистиллированной воды, после чего центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. К 540 мл супернатанта добавляют 81 мл 0,2%-го раствора трипсина, доводят рН до 7,8 и при 20°С перемешивают 4-5 ч. Продукты деградации белков удаляют и раствор отдиализовывают против дистиллированной воды 24 ч. Далее НВ-антигенную фракцию концентрируют с помощью сефадекса Г-200, который после этого регенерируют. Весь процесс очистки поверхностного антигена гепатита В контролируют реакциями встречного иммуноэлектрофореза, преципитацией в геле с полипреципитирующей кроличьев сывороткой против человеческих сывороточных белков, спектрометрически. Выход целевого продукта 33%, относительный показатель очистки 128,2. Предлагаемый способ обеспечивает высокий выход целевого продукта при хорошей степени очистки. Формула изобретения Способ получения поверхностного антигена гепатита В путем осаждения из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода антигена, осаждение проводят 4%-ным раствором риванола из расчета 35-45 мл на 100 мл сыворотки, после прогревания осуществляют протеолиз 0,2%-ным раствором трипсина из расчета 15-20 мл на 100 мл антигенсодержащей жидкости и очистку проводят диализом против дистиллированной воды при 4-5°С. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 545356, кл. А 61 К 35/16, 1976.