СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛОФЕЛИНА Российский патент 1996 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам количественного определения лекарственных препаратов, и может быть использовано в работе контрольно-аналитических лабораторий химико-фармацевтических заводов и производственных объединений "Фармация".

В настоящее время важное значение приобретает новый показатель качества фармацевтической продукции -однородность дозирования. рекомендованный государственной Фармакопеей СССР XI издания для дозированных лекарственных форм.

Введение этого показателя связано с необходимостью контроля лекарственных препаратов списка А и Б, в которых содержание действующих веществ не превышает 0,01- 0,05г и имеющих клинические показания для такой дозировки.

К таким препаратам относятся таблетки клофелина /клонидин, катапресан, гемитон/, для которых показатель "однородность дозирования" не разработан /ФС 42-2100-83. Таблетки клофелина 0,000075 и 0,00015 г/.

Малая терапевтическая доза и высокая токсичность клофелина может привести к нежелательным явлениям при лечении дозами ниже и выше лечебной. Однако правильный выбор оптимальной дозы может быть обеспечен только в том случае, если используемые таблетки содержат постоянные стандартные количества препарата в отдельных таблетках.

Известна методика определения содержания клонидина в таблетках с использованием газожидкостной хроматографии /1/.

Диапазон линейной зависимости концентрации препарата от площадей соответствующих пиков 50-200 мкг/мл.

Недостатком данного метода является использование достаточно сложного оборудованиям необходимости многократной экстракции органическим растворителем.

Данная методика не показана для определения клонидина в одной таблетке.

В литературе описан фотометрический метод определения клонидина с таблетках /2/.

Сущность метода заключается в том, что к порошку растертых таблеток прибавляют воду 1н раствор гидроксида натрия и раствор нитропруссида натрия. Смесь оставляют на 10 мин. Затем добавляют раствор борной кислоты и выдерживают при 0^oС в течение 15 мин. Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют при длине волны около 570 нм.

Недостаток данного метода заключается в том, что методика рассчитана для анализа проб таблеток клонидина с содержанием от 200 до 1500 мкг анализируемой субстанции и не может быть использована для анализа однородности дозирования клофелина в таблетках, выпускаемых отечественной промышленностью /таблетки клофелина 0,000075 и 0,00015 г/ в виду недостаточной чувствительности.

Кроме того, методика длительна и требует соблюдения определенного температурного режима.

Наиболее близким способом определения клофелина в таблетках является методика, описанная в фармакопейной статье на таблетки клофелина /З/.

Около 0,35 г /точная навеска/ порошка растертых таблеток после прибавления 5 мл дистиллированной воды, 5 мл 0,1 н раствора едкого натра и 10 мл хлороформа энергично встряхивают в течение 2 мин в делительной воронке. После расслаивания хлороформный слой фильтруют под вакуумом через стеклянный фильтр ПС-4, на который предварительно помещают 2 г безводного сульфата натрия. Переносят фильтрат в мерную колбу вместимостью 25 мл. Повторяют извлечение 2 мл хлороформа. После расслаивания хлороформный слой фильтруют как описано выше. Хлороформный раствор в мерной колбе доводят 95% спиртом до метки. В случае появления олалесценции полученный раствор дополнительно фильтруют, как описано выше, отбрасывая первые 3 мл фильтрата. В 2 конические колбы емкостью 20 мл помещают по 10 мл полученного раствора. В первую колбу прибавляют 0,02 мл 0,1 н раствора едкого натра, во вторую 0,02 мл 0,1 н раствора соляной кислоты. Измеряют оптическую плотность щелочного раствора против кислого раствора на спектрофотометре при λ = 250 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно проводят таким же образом определение с 5 мл раствора стандартного образца клофелина / в 1 мл раствора содержится 0,000090 г клофелина/.

Этот способ выбран за прототип.

Данный способ определения клофелина позволяет анализировать лекарственное вещество по физиологически активной части молекулы, отличается высокой точностью.

Однако метод имеет и ряд недостатков:
1. Чувствительность метода не позволяет провести определение клофелина в одной дозе /таблетке/. Метод рекомендован для анализа среднего содержания клофелина из навески порошка 20 растертых таблеток.

2. Метод длителен: включает многократное разведение анализируемого и стандартного образца, двойную экстракцию.

3. Метод не экономичен, т.к. включает использование таких дорогостоящих растворителей, как этиловый спирт.

Задача решения: разработать способ количественного определения клофелина, позволяющий оценивать однородность дозирования, а именно постоянное стандартное количество препарата в отдельных таблетках.

Технический результат заключается в повышении чувствительности, точности и экономичности метода.

Технический результат достигается тем, что дезинтеграцию таблетки проводят в буферном растворе рН 3,3±0,2 в присутствии раствора бромфенолового синего. Полученный ионный ассоциат экстрагируют хлороформом, фильтруют через безводный сульфат натрия и фотометрируют. Параллельно в тех же условиях проводят определение со стандартным раствором клофелина. Содержание препарата в одной таблетке находят по формуле.

Отличительные признаки заявляемого способа от прототипа.

1. Использование в качестве реагента раствора бромфенолового синего.

2. Проведение дезинтеграции таблетки в буферном растворе рН 3,3±0,2.

3. Проведение фотометрирования при длине волны 410 нм.

В ходе исследования были разработаны оптимальные условия образования ионного ассоциата клофелина с бромфеноловым синим и проведен количественный анализ препарата в одной таблетке.

Установлено, что клофелин взаимодействует с бромфеноловым синим в мольном соотношении 1:1. Максимальная устойчивость комплекса наблюдается при 6 и более кратном избытке реактива по отношению к определяемому веществу. Оптимальный объем 0,08% раствора бромфенолового синего составляет для таблеток клофелина 0,000075 г и 0,00015 г соответственно 1,0-2,0 мл и 2,5-3,5 мл. Нижние запредельные значения объема реактива приводят к получению заниженных результатов вследствие неполного образования ионного ассоциата. Запредельные верхние значения нерациональны, т.к. могут приводить к образованию ассоциатов другого состава и снижению воспроизводимости результатов.

Наибольшее и постоянное значение оптической плотности раствора наблюдается в интервале рН от 3,1 до 3,5. Значение рН ниже 3,1 и выше 3,5 снижает степень однократной экстракции, которая при соотношении водной и органической фаз 1: 2 составляет 98,8% Концентрацию водородных ионов создавали применением цитратного буферного раствора, выбор которого обусловлен простотой в изготовлении и доступностью реактивов.

Среди бескислородных органических растворителей, приводящих к образованию практически недиссоциированных соединений был избран хлороформ, как менее токсичный, более доступный и удобный в работе.

Последовательность добавления реактивов не влияет на светопоглощение фотометрируемого раствора.

Оптимальное время экстракции ионного ассоциата с учетом требованиям Государственной фармакопеи СССР XI издания к таблетируемым лекарственным формам по тесту распадаемости /не более 15 мин/ и времени экстракции клофелина после дезинтеграции таблетки / не менее 4 мин/ составляет 20 мин.

Максимальная оптическая плотность окрашенного в желтый цвет хлороформного экстракта продукта реакции клофелина с бромфеноловым синим наблюдается при 410±2 нм, что подтверждается спектральной характеристикой, представленной на чертеже.

Кажущийся молярный коэффициент погашения составляет 1,55 х 10⁴м^-1•л•см^-1, что свидетельствует о высокой чувствительности метода. Подчинение закону Бугера-Ламберта-Бера находится в интервале концентраций от 4 до 125 мкг в 5 мл конечного объема, что является достаточным для определения содержания клофелина в одной таблетке с учетом норм допустимых отклонений. Чувствительность определения составляет 4 мкг в 5 мл конечного объема. Относительная ошибка для субстанции и модельной смеси таблеток составляет соответственно ±1,46% и ±1,72%
Разработанная методика апробирована на субстанции клофелина и на модельной массе таблеток. Результаты представлены в таблице 1, разработанная методика является чувствительной, воспроизводимой, точной, правильной. Кроме того, методика экспрессна, что особенно важно для сокращения времени анализа по тесту однородности дозирования, при котором от каждой серии подлежат анализу до 30 таблеток.

Данные определения однородности дозирования клофелина в таблетках, отвечающих требованиям ФС 42-2100-83, представлены в таблице 2. Из таблицы 2 видно, что отклонение в содержании клофелина ни в одном образце не превышает норм допустимых отклонений.

Пример 1. Методика определения клофелина в таблетках 0,000075 г.

В делительную воронку емкостью 50 мл помещают 3 мл цитратного буферного раствора рН 3,31,5 мл 0,08% раствора бромфенолового синего, 0,5 мл воды и 5 мл хлороформа. Затем вносят таблетку клофелина /серия 1401089/ и взбалтывают в течение 20 мин. После расслаивания водной и органической фаз хлороформный слой фильтруют через воронку диаметром 5 см, в которую помещен небольшой слой ваты и 1 г сульфата натрия безводного в кювету с толщиной слоя 3 мм. Оптическая плотность хлороформного экстракта из таблетки измеряют на КФК-3 при 410 нм. Раствор сравнения хлороформный экстракт реактивов. Параллельно в тех же условиях проводят определение с 0,5 мл стандартного раствора клофелина, содержащего в 1 мл 0,000150 г препарата.

Содержание клофелина /С/ в граммах в анализируемой пробе /одна таблетка/ рассчитывают по формуле

где A_ис оптическая плотность экстракта испытуемого раствора;
A_ст -оптическая плотность экстракта стандартного раствора;
0,000150 содержание клофелина в мл стандартного раствора, г;
V- объем стандартного раствора взятый для анализа, мл.

Масса таблетки 0,0594 г, оптическая плотность испытуемого раствора 0,362, оптическая плотность стандартного раствора 0,382, найдено клофелина:

Пример 2. Методика определения клофелина в таблетках 0,00015 г.

В делительную воронку емкостью 100 мл помещают 6 мл цитратного буферного раствора рН 3,3, 3 мл 0,08% раствора бромфенолового синего, 1 мл воды и 10 мл хлороформа. Затем вносят таблетку клофелина /серия 790689/. Дальнейшее определение проводят как в примере 1. Параллельно в тех же условиях проводят определение с 1 мл стандартного раствора клофелина, содержащего в 1 мл 0,000150 г препарата. Масса таблетки 0,1478, оптическая плотность испытуемого раствора 0,366, оптическая плотность экстракта стандартного раствора 0,389, найдено клофелина:

Из таблицы 3 видно, что чувствительность предлагаемого способа позволяет проводить количественное определение клофелина в одной таблетке.

Таким образом, настоящий способ количественного определения клофелина в одной таблетке обладает высокой чувствительностью, достаточной точностью, экономичен, прост в исполнении и может быть рекомендован для использования в работе контрольно-аналитических лабораторий химико-фармацевтических заводов и производственных объединений "Фармация " при оценке однородности дозирования клофелина в таблетках. ТТТ1 ТТТ2 ТТТ3 ТТТ4

Использование: аналитическая химия, а именно способы количественного определения лекарственных препаратов. Сущность изобретения: способ определения клофелина в таблетках заключается в том,что таблетку препарата дезинтегрируют в буферном растворе при рН 3,3 <$E+-> 0,2 в присутствии бромфенолового синего. Ионный ассоциат клофелина с бромфеноловым синим экстрагируют органическим растворителем - хлороформом. Органическую фазу фильтруют через безводный сульфат натрия и фотометрируют при 410 нм. Содержание клофелина в таблетке рассчитывают с использованием данных, полученных для стандартного образца клофелина. Способ обладает высокой чувствительностью, точностью, позволяет оценить однородность дозирования клофелина в таблетках. 1 ил., 3 табл.

Способ определения клофелина, включающий деструкцию таблетки, растворение в буферном растворе, экстракцию органическим растворителем и последующее определение продукта экстракции, отличающийся тем, что клофелин экстрагируют в виде ионного ассоциата с бромфеноловым синим при рН 3,3 ± 0,2 с последующим фотометрированием при длине волны 410 нм.