Среда для культивирования продуцента @ -амилазы aSpeRGILLUS cRyZae 3-9-15 Советский патент 1982 года по МПК C12N9/22 C12N9/32 

(54) СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОДУЦЕНТА о1-.АМИЛАЗЫ Aspepcg-;ecus orvzae 3-9-15

Изобретение относится к микробиологической промышпенности, а именно касае ся состава питательных сред дпя культивирования продуцентов ферментов о1-амилазы и нуклеазы, применяемых в спиртовом, космическом, химическом производстве, в медицине и в молекулярной биологии, для расщепления полисахаридов в биологическом материале (Л-амилаза) и для изучения структур нуклеиновых кислот получения 5-нуклеотидов и лечения рака (нуклеаза S ). Известен способ получения оС-амилазы предусматривающий культивирование продушнта Asperq iKeus 5-9-15 в течение 72ч при на питательной среде, содержащей крахмал, как источник углерода, .биостимулятор - солодовый экс ракт, минеральные соли, микроэлемент и воду при следующем соотношении компонентов: крахмал 8,0; солодовый экстакт 1,0; фосфорнокислый однозамещенный калий 0,01%, магний азотнокислый 0,08; натрий азотнокислый 1,2 ; калий хлористый 0,05; магний фосфорнокислый 0,07; магний сернокислый 0,1; железо сернокислое О.ООЗ. Выход активности oL-амилазы в культурал1)ной жидкости 2Оед/мл фильтрата С 3 . Недостатками известного способа являются высокий расход сырья и сложный состав питательной среды при возможности получения только одного фермента, сравнительно низкая активность сС «милазы. Цель изобретения - повышение oL-амилазной активности продуцента и одновременно продуцирование нуклеазы S-, . Поставленная цель достигается тем, что известная среда для кулычтирования продуцента dL-амилазы Asperi iEBus 3-9-15, содержащая источник углерода крахмал, биостимулятор - солодовый экстракт, минеральные соли: натрий азотнокислый, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, микроэлемент и воду, в качестве микроэлемента соде1 жит индуктор нуклеазы S - цинк сернокислый, при следующем соотношении компонентов, вес. %: Крахмал5,5-6,0 Солодовый экстрактО,8-1,0 Калий фос форнокислый одноэа мешенный0,1«-0,2 Натрий азотнокислый0,8-1,0 Калий хлористый 0,04-0,06 Магний сернокислый 0,05-0,06 Цинк сернокислый 0.005-0,00 Вода Остальное Ионы шпсса играют существенную роль в активировании различных энзиматнчески процессов метаболизма клетки, стимулиру образование нуклеаз. Косвенно, через окс дативное фосфорирование обеспечивается полноценный обмен веществ, присутствие ионов цинка положительно влияет также на образование oL-амилазы. Соотношение в среде источншсов углерода, азота и фосфора обеспечивает оптимальное развитие кулыуры и биосинтез ot-амилазы ш нукяе аы Sxj. Максимум биосинтеза оС-амилазы и нуклеазы S-, достигается к 72ч культивированкя при в аэробных условиях. Результаты культивирования: Активность, ед/мл фильтрата ot.-амилазы 25-30, нуклеазы S 80 -10О. Пример 1. Культура /IspertjiCeo ог-агсце 3-9-15 поддерживается на суспо-агаре, пересевается 1 раз за три месяца. 1. Инокуляция пойевного материала. Для подмолаживания культуры готовят ко сяки, которые выращивают в термостате при ЗО°С 7сут, после чего выдерживают при комнатной температуре 3 сут, затем ставятся в холодильник при +4°С. Целесообразен возраст используемых культур 1О - 20 сут. Кухгьтуру с косяка смывают стерильной деминерализованной водой и засевают по 1 мл в колбах с питательной средой и размножают на качапке при 24ч. Питательная среда содержит, вес. % Крахмал5,5 Солодовый экстракт1,0 Калий фосфорнокислыйоднозамешен- шли0,1 Натрий азотно- квелый0,8 Калий хлористый0,04 Магний сернокислый0,05 LUfflK сернокислыйО, О 5 2. Ферментация культуры. Ферментация культуры производится после добавления инокулята с расчетом 1 мл культуральнЬй суспензии на 200 мл питательной среды. Ферментацию производят в 20 мл ферментера при в условиях принудительной аэрации. Во время ферментации контролируется однородность культуры, рН, температура, степень аэрации, сверх-, давление в аппарате и динамика накопления ферментов. После ферментации на 72ч отфильтровывают мицелий. Активность dL -амилазы в филытрате составляет 25 ед/ /мл, нуклеазы S-f 1ОО ед/мл. П р и м е р 2. Питательная среда содержит, вес,%: Крахмал 6,0 Солодовый экстракт0,8 Калий фосфорнокислыйоднозамешенный0,2 Натрий азот нокислый1,О Калий хлористыйО,Об Магний сернокислый О, Об Шик сернокислый0,О07 Инокуляцию посевного материала и ферментацию культуры производят аналогично примеру 1. Активность (А-амилазы в фють трате ЗО ед/мл и нуклеазы 3 8О ед/мл. Таким образом, реализация предложенного изобретения позволяет повысить ct -амилазную активность продуцента на ЗО% и добиться одновременного синтеза нуклеазы S-j . Формула изобретения Среда для культивирования продуцента о1-амилазы AsjaertjiCPus. огэ701е 3-9-15, содержащая источник углерода - крахмал, биостимуттятор - солодовый экстракт, минеральные соли: натрий азотнокислый, калий фосфорнакж;лый однозамещенный, магний сернокислый, микроэлемент и воду, о тличаюшаяс я тем, что, с целью повышения оС- милазной актив-

5 9489996

ности продуцента и одновременного про-Натрий азотнодущфования нукелазы 6 , питательнаякислый 0,8 - 1,О

среда в качестве микроэлемента содержитКалий хлорнсиндуктор нуклеаэы 5, - шшк сернокис-тый 0,04-0,06

лый н дополнительно включает калий хлорис-.- 5Магний сёрнотый, при следующем соотношении компо-кислый 0,О5-0 6

нентов, вес.%:Цинк сернокисКрахмал 5,5-6,0лый О,ОО5-О,ОО7

Солодовый ,Вода Остальное

экстракт 0,8-1,0 ЮИсточники информашш.

Калий фос- принятые во внимание при экспертизе

форнокислый1. Авторское свидетельство ССХЗР

однозамещен-№ 328746, кл. С 12 N 9/28, 1970

ный 0,1-0,2(прототип).