Способ получения L-фукозоспецифичного лектина Советский патент 1982 года по МПК A61K35/78 

центрации, а гель-хроматографию проводят i в декстрановом геле с интервалом фракционирования по белкам с молекулярной массой 4000-100000 в 1 М NaCl при рН 6,8. Сущность предлагаемого способа за ключается в том, что золотой дождь представляет собой многолетний куста ник, произрастающий на территории юж шЬс областей СССР. В большинстве слу чаев его высаживают как декоративное .растение, но имеются и дикорастущие кустарники. Кора, срезанная со средних и старых веток, может храниться в..течение года. . Очистку лектина производят путем экстракции сырья 0,9%-ньм NaCl, (}ракционирования белков сульфатом аммония, этиловым спиртом и. гель-хро матографией на геле-сефадекс G - 100 П р и гМ е р. Кору laburnum anagyro ides Medik, собраннуюво время сокодв жения весной- либо осенью после, соз ревания семян, высушивают и размалывают в порошок. 200 г порошка заливают- 1000 мл 0,9%-ного NaCl, 15 мин перемешивают, жидкость отжимают и объединяют с предыдущей порцией. Полученный экстракт (около 1,2 л) подкисляют 2 Н.НС1 до рН 4,2 и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Осадок отбрасывают, рН доводят до .6,5 - 7,0 10%-ным раствором NaOH, до бавляют сульфат аммония, доводя степень насыщения до 0,9 (430 г/л). Осадок, содержащий лектйн, собирают г нтрифугированием или фильтрованием растворяют в пятикратном объеме дистиллированной воды и добавляют 1,5 объе ма (от объема раствора лектина) 96 -ного этилового спирта при О - . Попу кнный осадок собирают центрифугирова нием, растворяют в 2 - 3-кратном объ еме 0,9%-ного NaCl и. диализируют ГО15 ч против 0,9%-ного раствора NaCl. Затем наносят на колонку 800 х 60 мм заполненную декстрановым гелем - се|дафекс G - 100 и уравновешенную 0,1 (фосфатным буфером, рН 6,8 с 1 М , Выявление фракций, содержащих лектйн, производят под контролем реакции гемагглютинации с человеческими эритроцитами 1(0) группы крови. Фракций, содержащие лектйн, собирают, белок высаливают сульфатом аммония при 0,9 насыщения (660 г/л), осадок центрифугированием, растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды, обессоливают диализином в течение 48 ч и лиофилизируют. Выход L-фукозоспецифичного лектина 40 - 45 мг с 200 г воздушно-сухой коры или 200 - 250 мг из 1 кг) . Таким образом, предлагаемый способ Позволяет расширить сырьевую базу для получения L-фукозоспецифичного лектина и получить фукозоспецифйчный лектйн из доступных источников в оптимальных количествах. Формула изобретения Способ получения L -фукозоспецифичного лектина путем экстракции растительного сырья 0,9%-ным раствором етористого натрия, фракционирования экстракта сульфатом аммония и гельхроматографии в декстрановом геле, ,отличающийся тем, что, с целью расширения сьгрьевой базы и Повышения чистоты целевого продукта, в качестве источника сырья используют кору растения золотой дождь (Laburnum anagyroides Meflik) , фракционирование осуществляют в -пределах 0,3-0,9 насыщения, далее полученный осадок обрабатывают этиловым спиртом до 60%-ной конечной концентрации, а гель-хроматографию проводят в декстрановом геле с интервалом фракционирования по белкам с молекулярной массой 4000 - 100000 в 1 М NaCl при рН 6,8. Источникиинформации, принятые «р.; внимание при экспертизе 1. Jaris J. et. al. Jsolation of an L-Pucose pinging Protein from -Lotus tetragonclobus seed Naturi, 1967, vol. 215, № 5103, p. .