Способ получения сорбента для афинной хроматографии на основе сефарозы Советский патент 1982 года по МПК C08B37/12 B01D15/08 

(St) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ АФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ НА ОСНОВЕ СЕФАРОЗЫ

1

Изобретение относится к биологическо11 химии, в частности кпрепаративной и .технологической биохимии белков, и может быть использовано для получения и фракционирования ферментов из различных биологических объёк.O Oti/a

)

уо у

W А/-/

где R Н или

RI или Н .

при нагревании в присутствии карбона та и хлорида натрия Г.

В этом способе взаимодействие цибакронэ сунего с. себарозой (сейадектов, а таюхе сывороточных белков человека и животных.

Известен способ получения сорбента для айинной хроматографии на основе сефарозы взаимодействием сейарозы с веществом формулы

NС

се

сом ) осуществлялось в следующих условиях: к 350 мл суспензии сефадекса,

20 содержащей 10 г сефадекса, добавляли при капельным методом 60 мл раствора, содержащего 2 г цибакрон синего красителя. Перемешав 30 мин, до-бавляли kS г хлористого натрия и перемешивали еще 1 ч, после чего смесь нагревали-до , добавляли 4 г карбоната натрия и- держали в течение 2 ч при при перемешивании. После это-s го смесь охлаждали при комнаъной температуре и отмывали до обесцвечивания промывных вод. Следует заметить, что температурный реним, соблюдаемый . при этом способе (),может выдер- Ю жать сефадекс и марки сеЛарозы Ct (поперечно-сшитой ), обычная сефароза при такой температуре расплавляется. Кроме того, обрабатывая красителем, предварительно растворенным, получают ts равномерное распределение красителя по гранулам геля как на поверхности. (( fiujoua се

где R Н или S020Na;

Rj SO.,ONa или Н,

. при нагревании в присутствии карбоната и хлорида натрия к 100 вес.ч. Ьефарозы добавляют 1,8-2,2 вес.ч. ук|занного вещества, 10 вес.ч. хлорида натрия, 2 вес.ч. карбоната натрия, указанные компоненты перемешивают и подвергают тепловой обработке при 55°Г, в течение 10 ч.

Вещество указанной выше формулы называется цибакрон синий краситель.

Способ осуществляется следую1чим об- разом.

К гелю сефарозы добавляют сухой хлористый натрий, цибакрон синий кр-аситель в порошке, смесь тщательно перемешивают, добавляют сухой карбонат натрия, еще раз перемешивают и поме,- щают в суховоздушный термостат при , 55С на 10 ч. Полученный сорбент тщательно отмывают дистиллированной водой. . 50

Пример 1. К 100 вес.ч. сефарозы 6 В добавляют 10 г сухого хлористого натрия, 2 г Порошка цибакрон

синего красителя, смесь тщательно перемешивают, добавляют 2 г сухого кар- 55 боната натрия, еще раз перемешивают И ставят в суховоздушный термостат при на 10 ч.. Полученный сорбент,

так ц внутри гранул. В то же время, краситель, оказавшийсясвязанным с полимером внутри Гранул, является гораздо менее доступным для белков и ферментов из-за стерических помех, ;оказываемых на белки полимерными цепями гранул, что сникает емкость сорбента.

Целью изобретения является, упрощение способа,.удешевление продукта и повышение емкости сорбента.

Поставленная цель достигается тем что согласно способу получения сорбенТа для афинной хроматографии на осноее сефарозы взаимодействием сефароёы С веществом формулы

f,O/-P2 /v-/

тщательно отмывают дистиллированной водой. Полученный сорбент способен в экспериментах по афинной хроматографии связать около 20 мг сывороточного альбумина человека и крысы.

Пример 2.К100 вес.ч. сефарозы 4В добавляют 10 г сухого хлорида натрия, 2 г порошка цибакрон синего красителя, тщательно перемешивают, добавляют 2 г карбоната натрия , еще раз тщательно перемешивают и ставят в суховоздушный термостат при тех же условиях (повышать температуру нагревания не рекомендуется, так как это отразится на фильтрующих свойствах полученного сорбента). 1 мл полученного сорбента способен связать до Т5 мг сывороточного альбумина человека или крысы.

П р им е р 3. К 100 вес.ч. сефарозы 6В при тех же условиях добавляют 2,2 г сухого порошка цибакрон синего красителя, условия коньюгации аналогичны приведенным в примере 1. Емкость сорбента: на 1 мл геля можно выделить не более 20 мг альбумина.

Пример . К 100 вес.ч. сефарозы 4В при тех условиях добавляют 1,8 г сухого порошка цибакрон синего красителя, условия коньюгации , аналогичны приведенным в примере 2.