2,3-ДИФЕНИЛТИАЗОЛО /3',2',2,3/-1,2,4-ТРИАЗИНО-/5,6-B/ ИНДОЛ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Советский патент 1996 года по МПК C07D513/14 A61K31/53 

Изобретение относится к синтезу нового химического соединения, конкретно к 2,3-дифенилтиазоло(3', 2', 2,3)-1,2,4-триазин(5,6-b)индола, обладающего противовоспалительной активностью, которое может найти применение в медицине.

Из ближайших аналогов известны производные тиазоло(3',2',2,3)-1,2,4-триазино(5,6-b)индола, обладающего антимикробной активностью [1]
Среди нестероидных противовоспалительных средств индольного ряда широкое применение в медицинской практике получил индометацин (1-n-хлорбензолил-n-метокси-3-индолилуксусная кислота [2]
Индометацин является активным противовоспалительным препаратом, он оказывает также анальгезирующее и жаропонижающее действие. Однако при применении индометацина возможны побочные явления. Препарат следует применять с осторожностью у больных с психическими расстройствами. Индометацин применяется в виде капсул и драже, а также в виде свечей, т.к. он нерастворим в воде.

Целью изобретения является расширение средств воздействия на живой организм, обладающих противовоспалительной активностью и улучшенными свойствами.

Поставленная цель достигается описываемым 2,3-дифенилтиазоло(3', 2', 2,3)-1,2,4-триазино(5,6-b)индолом формулы I.

2,3-Дифенилтиазоло(3', 2', 2,3)-1,2,4-триазино(5,6-b)индол является биологически активным соединением. Он обладает противовоспалительной активностью.

Вещество представляет собой темно-красные кристаллы, т.пл. 268-272^oC, после многократной перекристаллизации из диметилформамида 280^oC. Не растворяется в воде, растворимо в диметилсульфоксиде при нагревании. Вещество устойчиво при хранении, не гигроскопично.

Вещество однородно по данным тонкослойной хроматографии. Для его очистки достаточна 2-кратная перекристаллизация.

Условия тонкослойной хроматографии. Адсорбент окись алюминия II степени активности, растворитель для нанесения ацетон, подвижный растворитель - гексан-спирт, 4: R_f 0,38. Вещество как в видимом, так и в УФ-свете не содержит примесей, в том числе исходных веществ.

Строение вещества (I) подтверждается данными элементного анализа, а также ИК- и УФ-спектров.

УФ-спектр: , нм (lg ε) 266 (4,47), 319 (4,58), 464 (3,53). УФ-спектр измерен для 3,64•10^-5 М раствора в спирте, содержащем 0,16% диметилсульфоксида по объему, на приборе СФ-8.

По сравнению с промежуточным соединением (II) электронный спектр характеризуется значительным батохромным сдвигом длинноволновой полосы поглощения, что согласуется с увеличением цепи сопряжения в результате циклизации.

ИК-спектр: n см^-1: 405, 460, 520 (сл), 545 (оч. сл), 565, 610 (сл), 630 (оч. сл), 640 (оч. сл), 660, 680 (сл), 700 (с), 730, 750, 770 (с), 780 (с), 785 (сл), 840 (сл), 910, 920 (сл), 940 (сл), 1000 (сл), 1040 (сл), 1080, 1110, 1142 (С), 1193 (оч. с), 1221 (с), 1240, 1270, 1290 (с), 1321 (сл), 1360, 1390 (с), 1420 (оч. с), 1502 (оч. с), 1543 (оч. с), 1571, 1582, 1618. ИК-спектр снят в таблетке KBr на приборе UR-20. В спектре отсутствуют характерные для промежуточного соединения (II) полосы карбонильной группы, а также групп СН и NH, что подтверждают его циклизацию с отщеплением воды.

Названное соединение получают обычным методом путем конденсации 2,3-дигидро-1,2,4-триазино(5,6-b)индолтиона-3(III) с бромистым дезилом (IV) и последующей циклизацией полученного 3-бензолфенилметилтио-1,2,4-триазино(5,6-b)индола (II) с отщеплением воды.

Циклизацию 3-бензоилфенилметилтио-1,2,4-триазино(5,6-b)индола осуществляют путем нагревания в присутствии полифосфорной кислоты. Выход продукта реакции (I) 80-85%
Найдено, С 72,60, 72,63; Н 3,81, 3,90; N 14,88, 15,62; S 8,28, 8,16.

C₂₃H₁₄N₄S.

Вычислено, С 72,99; Н 3,73; N 14,80; S 8,47.

П р и м е р. Смешивают 4,04 г 2,3-дигидро-1,2,4-триазино(5,6-b)индолтиона-3, 6,2 г бромистого дезила и 100 мл безводного спирта и при перемешивании кипятят с обратным холодильником в течение 6 ч. После остывания нейтрализуют концентрированным водным аммиаком (1,7 мл). При этом окраска осадка изменяется от желтой до желтовато-розовой, а окраска раствора от красной до коричневой. Фильтруют, осадок промывают спиртом (2х5 мл), эфиром (2х15 мл) и сушат под вакуумом над фосфорным ангидридом при 80^oC. Выход 3-бензилфенилметилтио-1,2,4-триазино(5,6-b)индола 5 г (63% от теор.), т.пл. 219^oC. После перекристаллизации из бутилового спирта (30 мл на 1 г) мелкие желтовато-розовые кристаллы. Т. пл. 221^oС. Выход при перекристаллизации 80%
К 3 мл 87% фосфорной кислоты при интенсивном перемешивании и охлаждении во льду без доступа влаги постепенно прибавляют 4 г фосфорного ангидрида и нагревают до 100^oC в течение 20 мин. К полученной полифосфорной кислоте прибавляют 1,2 г тонкоизмельченного 3-бензоилфенилметилтио-1,2,4-триазино(5,6-b)индола, нагревают до 150^oC и перемешивают при этой температуре в течение 5,5 ч. Полученную вязкую жидкость медленно приливают к 1 кг смеси воды со льдом. При этом образуется желтый кристаллический осадок. Добавляют порошкообразный карбонат калия до рН 8 (10 г); окраска осадка переходит в бордовую. Фильтруют, осадок многократно промывают водой и сушат под вакуумом над фосфорный ангидридом при 80^oC. Выход продукта реакции 1 г (83,4% от теор. ), т. пл. 268-272^oC. После перекристаллизации из диметилформамида (13 мл на 1 г) темно-красные кристаллы, т. пл. 280^oC. Выход при перекристаллизации 70%
Ниже приведены результаты исследования противовоспалительной активности и токсичности заявленного соединения (лабораторный шифр 402/48) (см. фиг. 1-3).

Определение острой токсичности проводилось при внутрибрюшинном введении препарата в виде 1%-ного раствора в диметилсульфоксиде. Этот растворитель разрешен для медицинского применения и широко используется при работе с препаратами, нерастворимыми в воде.

В данных условиях опыта DL₅₀ для препарата N 402/48 составляет 200 мг/кг ± 21,6. Внутрибрюшинное введение препарата в дозах 5-10 и 20 мг/кг в течение шести дней не показало каких-либо видимых токсических реакций со стороны желудочно-кишечного тракта, а также общего состояния животных. Изъязвления слизистой желудка и кишечника отмечено не было. Напротив, группа животных, которым вводился индометацин в дозе 20 мг/кг, погибла на 3-4 сутки. У животных, получавших индометацин, наблюдались диспептические расстройства и изъязвления слизистой желудочно-кишечного тракта.

Противовоспалительная активность.

Изучение проводилось на модели асептического воспаления по методу "ватной" гранулемы и модели отека легких, вызванного введением адреналина гидрохлорида.

Данные, полученные при введении препарата N 402/48, сравнивались с данными контрольной группы животных и с результатами экспериментов при введении индометацина.

Изучение препарата N 402/48 на экссудативные и пролиферативные компоненты асептического воспаления по методу "ватной" гранулемы вводилось в дозе 5-10 мг/кг в виде раствора в ДМСО с лечебной и лечебно-профилактической целью. В первой серии экспериментов препарат вводился в течение трех дней после операции, во второй три дня до операции и три дня после операции. По истечении указанного срока животных забивали, гранулемы взвешивались в свежеотсепарированном виде и в высушенном до постоянного веса.

Изучение активности препарата проводилось в сравнении с индометацином в дозе 1 и 20 мг/кг, который вводился в/брюшинно в виде раствора на 2,5% растворе натрия карбоната.

Результаты экспериментов показали, что препарат N 402/48 в дозах 5-10 и 20 мг/кг значительно снижает образование грануляционной ткани и скопление жидкости во влажной гранулеме.

При введении препарата с лечебной целью в дозе 5 мг/кг снижает образование жидкости во влажной гранулеме в 2,2 раза, в дозе 20 мг/кг в 2,3 раза, в дозе 10 мг/кг в 2,5 раза в сравнении с животными контрольной группы, которым вводился диметилсульфоксид (табл. 1). Наиболее активной оказалась доза, равная 10 мг/кг. Препарат N 402/48 в дозе 10 мг/кг при применении с лечебной целью снижает образование жидкости в воспаленном участке в 2,4 раза в сравнении с индометацином, который вводился в/брюшинно в дозе 1 мг/кг. Доза 5 мг/кг в 2 раза активнее индометацина, а доза 20 мг/кг в 2,1 раза.

При данной методике исследования индометацина в дозе 20 мг/кг оказался не активным на экссудативные и пролиферативные фазы воспаления.

Препарат N 402/48 обладает активным действием и на фазу пролиферации во всех трех дозах 5-10 и 20 мг/кг (фиг.2).

Препарат снижает образование грануляционной ткани в дозе 5 мг/кг в 2,2 раза, в дозе 20 мг/кг в 2,1 раза, а в дозе 10 мг/кг в 3,2 раза. Было обнаружено, что по сравнению с индометацином, активность препарата в дозе 10 мг/кг на фазу пролиферации в 2,9 раза выше.

При введении препарата с лечебно-профилактической целью в течение трех до операции и трех дней после операции, наиболее выраженным действием так же, как и с лечебной целью обладает препарат в дозе 10 мг/кг. Вес жидкости во влажной гранулеме в группе животных, которым вводился препарат N 402/48 в 3 раза меньше, чем в контрольном опыте и в 2,8 раза меньше, чем у индометацина (фиг.1).

Как видно из фиг.N 2 препарат N 402/48 в дозе 10 мг/кг с лечебно-профилактической целью увеличил привес ватного шарика лишь на 0,0076 ± 0,0002, что в 3,5 раза меньше, чем в контроле и в 3 раза меньше, чем у животных, получавших индометацин. Эти данные также характеризуют высокую активность препарата при пролиферативной фазе воспаления.

В дозе 5 мг/кг образование жидкости во влажной гранулеме в 2,1 раза меньше, чем в контрольном опыте и в 1,9 раза, чем у индометацина. В дозе 20 мг/кг в 2,2 раза меньше, чем в контрольном опыте и в 2 раза, чем у индометацина (фиг.2).

Доза 5 мг/кг снижает образование грануляционной ткани в 2,2 раза в сравнении с контролем и в 1,9 в сравнении с индометацином. Доза 20 мг/кг в 2,6 раза в сравнении с контрольным опытом в 2,1 раза в сравнении с индометацином (фиг.2).

Определить же действие индометацина в дозе 20 мг/кг с лечебно-профилактической целью не удалось, т.е. животные погибали на 3-4 сутки, наступал перитонит, вызванный утончением или перфорацией тонкой кишки.

Изучение препарата N 402/48 на модели "адреналинового" отека легких показало, что препарат обладает выраженным противовоспалительным действием.

Отек легких вызывался п/к введением 0,05% раствора адреналина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг. О развитии воспалительного процесса делали заключение по величине "коэффициент отека легких" который представляет собой отношение массы легких в граммах к 100 г массы животного.

Препарат вводился однократно с профилактической целью за час до введения раствора адреналина гидрохлорида в виде 0,25%-ного раствора на диметилсульфоксиде в/брюшинно. Испытуемые дозы препарата N 402/48 1-5-10-20 и 50 мг/кг. Все дозы являются активнее индометацина. Наиболее активной дозой препарата N 402/48 на данной модели воспаления является доза 5 мг/кг, при введении которой легочный коэффициент равен исходному 0,80 ± 0,01 (фиг.3). В дозе 1 мг/кг равен 0,83 ± 0,01; в дозе 10 мг/кг равен 0,88 ± 0,01; в дозе 20 мг/кг 0,92 ± 0,01; в дозе 50 мг/кг 0,95 ± 0,01. Индометацин проявляет свое действие на модели "адреналинового" отека легких только в дозе 20 мг/кг, легочный коэффициент равен 1,21 ± 0,03.

Таким образом, установлено, что препарат N 402/48 обладает выраженным противовоспалительным действием, неуступающим и даже превосходящим по активности широко применяемый индометацин. Препарат обладает более выраженным действием. Отмечено, что при длительном введении препарата N 402/48 в противовес индометацину не наблюдается никакого видимого токсичного действия, в том числе отрицательного действия на желудочно-кишечный тракт.

2,3-Дифенилтиазоло(3¹, 2¹, 2,3)- -1,4,4-триазино(5,6-в)андол формулы

обладающий противовоспалительной активностью.

2,3-Дифенилтиазоло(3¹, 2¹, 2,3)- 1,2,4-триазино(5,6-в)андол формулы

обладающий противовоспалительной активностью.