СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ И СОСТОЯНИЙ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ РВОТОЙ, ДИАРЕЕЙ И ИНТОКСИКАЦИЕЙ Российский патент 1997 года по МПК A61K31/41 

Изобретение относится к области лекарственных средств, в частности к созданию лекарственных средств, применяемых в медицине и ветеринарии для лечения и профилактики заболеваний и состояний, сопровождающихся интоксикацией, рвотой, диареей, таких как желудочно-кишечные заболевания, пищевые отравления, септические состояния.

Этиологические факторы, вызывающие желудочно-кишечные заболевания патогенетические и другие патологические состояния животных и человека, сопровождающиеся интоксикацией, гипертермией, рвотой, диаpеей, разнообразны и сложны. К этиологическим факторам относятся грамотрицательные бактерии: V.cholerae, E.coli, Salmonellae, Iersinia, Campylobacter, Shigella и др. За последние 20 лет были выделены, очищены и охарактеризованы ведущие факторы патогенности этих микроорганизмов белковые экзоэнтеротоксины, вызывающие основной симптомокомплекс желудочно-кишечных заболеваний диарею. Диарея - это выход электролитов и жидкости в просвет тонкого кишечника животных и человека и удаление их во внешнюю среду.

Среди экзоэнтеротоксинов грамотрицательных бактерий наиболее сильными являются холерный токсин V.cholerae (ХТ), термолабильный энтеротоксин E.coli (ТЛ токсин, Е.coli). Известно, что ХТ и холероподобный токсин Е.coli являются универсальными стимуляторами аденилатциклазы (АЦ) во всех клетках эукариотов, в том числе и в энтероцитах животных и человека.

В результате активации АЦ увеличивается циклический 3'-5'-аденозинмонофосфат (цАМФ) внутри клеток-мишеней, что в свою очередь приводит к диарее.

Кроме того, как показано [1,2,3] ХТ и ТЛ-токсин E.coli, ингибируя синтез ДНК в иммунокомпетентных клетках организма, снижают их функциональную активность, что приводит к иммунодепрессии. Снижение местного иммунитета в кишечнике при желудочно-кишечных заболеваниях и в крови при сепсисе, способствует развитию и дальнейшему распространению патологического процесса.

В патогенезе указанных заболеваний участвует еще одна группа токсинов эндотоксины грамотрицательных бактерий. За интоксикацию и синдром септического шока ответственен липид А, входящий в структуру эндотоксинов - липополисахаридов грамотрицательных бактерий. При воздействии его на иммунокомпетентные клетки макроорганизма ими вырабатываются цитокины (интерлейкины, фактор некроза опухолей и др.). Эти биологически активные вещества и вызывают описанный выше симптомокомплекс и обуславливают тяжелое клиническое состояние больных [4,5]
Средства, применяемые для лечения диарей, можно разделить на несколько групп:
1) антибактериальные антибиотики и сульфаниламиды;
2) антисептические средства;
3) средства, используемые для регидрационной терапии;
4) противовоспалительные средства;
5) лекарственные средства, прерывающие развитие транспортных и биологических процессов, вызывающих диарею.

К первой группе относятся антибиотики широкого спектра действия: пенициллин, цефалоспорины, тетрациклины, макролидовые антибиотики.

Лечение этими препаратами обладает рядом существенных недостатков. Их применение ведет к появлению высокотоксичных лекарственно-устойчивых штаммов бактерий, т.к. гены, ответственные за токсигенность, часто сцеплены с генами устойчивости к антибиотикам. Подавляется полезная микрофлора в кишечнике, что ведет к дисбактериозу. Подавляется иммунитет у человека и животных, повышается их аллергизация. Лечение сульфаниламидами (фталазол, норсульфазол, сульгин) имеет те же недостатки, что и лечение антибиотиками [6,7]
Ко второй группе лечебных средств относятся бактисубтил, интерикс, энтеродез. Эти препараты вызывают дисбактериоз, тошноту, рвоту.

К третьей группе препаратов относятся орасан, раствор Рингера, физиологический раствор препараты симптоматического действия. Сюда же относятся вяжущие, обволакивающие средства, например смекта.

К четвертой группе относится индометацин, ингибирующий синтез простогландинов и арахидоновой кислоты. Он также обладает рядом серьезных побочных эффектов: повышенной кровоточивостью, может вызвать кровотечение в кишечнике, его нельзя применять беременным женщинам и детям.

К пятой группе относятся такие лекарственные средства, как сильные гипотензивные клонидин (гемитон, клофелин): психотропные: амитриптилин, аминазин; опиоиды кодеин, лоперамид (имодиум), галоперидол. Кроме того, такие препараты, как аминазин могут вызывать тошноту, рвоту, аллергические кожные реакции и др. Эти препараты обладают тяжелыми побочными эффектами, действием на ЦНС, седативным и депрессивным эффектом, резко снижают кровяное давление.

Как было упомянуто выше, для перечисленной группы заболеваний и патологических состояний характерен симптомокомплекс интоксикации, к которому относят гипертермию, рвоту, головную боль, одышку, тахикардию, вялость, заторможенность и др. Лечение интоксикации проводят симптоматически: с помощью внутренних инъекций кровезаменителей, физиологического раствора, раствора Рингера, переливаний крови, сердечных средств и т.д.

Профилактику желудочно-кишечных заболеваний проводят при помощи иммунизации специфическими сыворотками и вакцинами. Но эффективность этих мероприятий крайне низка, т.к. защита организма человека и животных от этих заболеваний зависит от выработки антител иммунокомпетентными клетками кишечника, а для этого нужны пероральные вакцины, созданные на основе высокоспецифических высокоочищенных полноценных антигенов. До настоящего времени в России такие вакцины не выпускаются.

Целью настоящего изобретения является разработка лекарственного средства для лечения и профилактики диарейных заболеваний и патологических состояний, сопровождающихся интоксикацией, которое не обладает указанными выше побочными эффектами.

Поставленная цель достигается с помощью средства для лечения и профилактики заболеваний и состояний, сопровождающихся рвотой, диареей и интоксикацией, содержащее активное начало и вспомогательные компоненты, отличающегося тем, что в качестве активного начала оно содержит 2-(фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид и такие вспомогательные компоненты, как интерполимерный комплекс полиметакриловой кислоты с полиэтиленгликолем в мольном соотношении 1: 1 (ИПК), сахарозу и стеарат кальция (магния) при следующем соотношении компонентов, мас.ч.

2 (Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид 100
ИПК 10 20
Сахароза 50 67
Стеарат кальция (магния) 5 10
2 (Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид является известным лекарственным средством и применяется в медицине в качестве сосудорасширяющего, спазмалитического, гипотензивного средства при спазмах артериальных сосудов конечностей, язвенной болезни, а также при остаточных явлениях невритов периферических нервов у детей. Противопоказаний и побочных действий на протяжении 30 лет его применения не обнаружено [6,7]
Интерполимерный комплекс полиметакриловой кислоты с полиэтиленгликолем в мольном соотношении: 1:1 уже использовали ранее в качестве вспомогательного средства для приготовления таблеток [8]
Было обнаружено, что средство, имеющее следующий состав, мас.ч.

2(Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид 100
ИПК 10 20
Сахароза 50 67
Стеарат кальция (магния) 5 10,
при введении в организм перорально в виде таблеток обладает эффективной антитоксинной (против холерного токсина и термолабильного токсина E.coli) антидиарейной активностью. Эта активность была показана модели экспериментальной диареи у мышей и крыс. Кроме того, также было установлено, что вышеуказанное средство обладает антитоксическим (детоксицирующим) действием против эндотоксинов грамотрицательных бактерий (E.coli и S.typhimurium). Оказалось также, что 2-(фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид стимулирует фагоциты животных. Это свойство препарата усиливает его профилактическое и лечебное действие при указанных выше заболеваний и патологических состояниях за счет усиления системы неспецифической резистентности макроорганизма. Это же его свойство лежит в основе влияния на продолжительность жизни мышей и их выживаемость при заражении их смертельными дозами вакцинного штамма S.typhi.

Комплексный полифункциональный эффект предлагаемого средства выгодно отличает его от вышеописанных средств лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний и патологических состояний, вызываемых грамотрицательными бактериями.

Пример 1. Готовят смесь следующего состава,г:
2(Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид 2
ИПК 0,2
Сахароза 10
Стеарат кальция (магния) 0,1
При прессовании данного состава получают 100 таблеток, содержащих 0,02 г активного начала.

Пример 2. Готовят смесь следующего состава, г:
2(Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид 2
Сахароза 12
Стеарат кальция (магния) 0,15
При прессовании данного состава получают 100 таблеток, содержащих 0,02 г активного начала.

Пример 3. Готовят смесь следующего состава, г:
2(Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид 2
ИПК 0,4
Сахароза 13,4
Стеарат кальция (магния) 0,2
При прессовании данного состава получают 100 таблеток, содержащих 0,02 г активного начала.

Cпецифическая фармакологическая активность предлагаемого средства: антитоксинная антидиарейная против энтеротоксинов ХТ и ТЛ токсина была изучена на модели экспериментальной диареи у лабораторных животных.

Модель экспериментальной диареи
В опытах использовали самцов мышей линии С57В16 и крыс линии Wistar. Животных лишали пищи, но не воды, на 24 ч. Через 24 ч опытным группам животных внутрижелудочно через зонд вводили измельченные и суспендированные в физиологическом растворе таблетки по примеру 3. Контрольным группам животных вводили внутрижелудочно плацебо только из ИПК, сахарозы и стеарата кальция (магния). Другим контрольным группам животных внутрижелудочно вводили физиологический раствор. Для сравнения проводили испытания с аминазином, который близок к предлагаемому средству по механизму действия. Через 30 мин после введения в желудок вышеописанных веществ животным для наркоза внутрибрюшинно вводили гексенал из расчета 70 мг на 1 кг массы тела. Наркотизированным животным делали лапоротомию по срединной линии, выделяли тонкий кишечник и накладывали лигатуру у мышей на расстоянии 6 см с промежутком 3 см (2 петли на мышь) и у крыс на расстоянии 3 см с промежутком 1 см (6 петель на крысу). В образованные петли тонкого кишечника шприцем вводили холерный токсин в дозах 0,1 1 мкг на петлю и термолабильный токсин E.coli в дозах 0,25 1мкг на петлю. В контрольные петли вводили физиологический раствор. Кишечник убирали в брюшную полость. Брюшную стенку зашивали. Результаты эксперимента учитывали через 3 ч у мышей и через 4 ч у крыс по накоплению жидкости в просвете тонкого кишечника мышей и крыс, выраженному в индексе дилятации (ИД), представляющем собой отношение веса петли в мг к длине петли в см. Животных в эксперименте разделили на 7 групп: 3 контрольные группы и 4 опытные. 1-й контрольной группе животных внутрижелудочно вводили физиологический раствор, 2-й контрольной группе вводили плацебо, 3-й контрольной группе предлагаемый препарат. В кишечные петли этих животных вводили физиологический раствор. ИД для всех контрольных групп животных равен 30±3.

В табл. 1 приведены данные для 4-х опытных групп животных (Р<0,05).

Всего в опыте было использовано 114 мышей, на каждую точку приходилось по 6 животных.

Как видно из данных табл. 1, термолабильный токсин Е.coli вызывает гиперсекрецию жидкости в просвет петель тонкого кишечника мышей, что видно по увеличению индекса дилятации в сравнении с контролем. Внутрижелудочное введение предлагаемого лекарственного средства снижало выход жидкости в просвет тонкого кишечника мышей до уровня контроля. Внутрижелудочное введение плацебо не отменяло действия термобильного токсина E.coli, т.е. снижало гиперсекреции жидкости в просвет тонкого кишечника. Введение аминазина, взятого для сравнения в качестве стандарта, снижало гиперсекрецию жидкости в просвет тонкого кишечника мышей. В зависимости от дозы токсина и аминазина ИД снижался на 30 50% а в некоторых случаях до уровня контроля.

Примечание к табл. 2:
1-я контрольная группа животные, которым внутрижелудочно ввели 0,2 мл физиологического раствора (21 животное)
2-я контрольная группа животные, которым внутрижелудочно ввели плацебо в 0,2 мл физиологического раствора (плацебо ИПК, сахароза, стеарат кальция (магния) (21 животное)
1-я опытная группа животные, которым вводили 2 (фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид (63 животных, по 21 на каждую концентрацию)
2-я опытная группа животные, которым вводили аминазин (21 животное)
Р<0,05.

Всего в опыте было использовано 126 крыс.

Как видно из данных табл. 2, холерный токсин и ТЛ-токсин вызывают гиперсекрецию жидкости в просвет петель тонкого кишечника крыс, что следует из увеличения индекса дилятации, в сравнении с контрольными петлями. Внутрижелудочное введение предлагаемого нами средства снижало выход жидкости в просвет тонкого кишечника крыс, вызванный токсинами, практически до уровня контроля. Внутрижелудочное введение плацебо не отменяло действия этих энтеротоксинов, т. е. не снижало гиперсекреции в просвет тонкого кишечника крыс. Введение аминазина снижало выход жидкости в просвет тонкого кишечника в некоторых случаях до уровня контроля. Специально надо отметить, что введение аминазина лабораторным животным вызывало следующие побочные эффекты: потенциировало наркоз, т.е. вызывало резкое увеличение продолжительности сна. После пробуждения животные были вялыми, сонливыми, мало подвижными.

Специфическую детоксицирующую активность против эндотоксинов S.typhimurium и E.coli изучали на мышах С57BL/6. Животным весом 18 г вводили внутрибрюшинно эндотоксины в дозах 0,001 мкг/мышь. Контрольной группе внутрижелудочно вводили смесь ИПК, сахарозы и стеарата кальция (магния) без эндотоксинов. 1-й опытной группе вводили эндотоксины, 2-й опытной группе - предлагаемое средство, содержащее 2-(фенилметил)-1Н-бензимидазола гидрохлорида из расчета 5 мг/кг массы тела по схеме: 2 раза в день в течение 3 дней, через 3 дня вводили внутрибpюшинно эндотоксины, 3-й опытной группе животных вводили препарат с токсинами по схеме: 1-й день препарат за 1 ч до инъекции токсинов и через 4 ч после инъекции токсинов; 2-й и 3-й дни препарат без токсинов - 2 раза в день.

Результаты испытаний приведены в табл. 3.

Как следует из табл. 3, смесь ИПК, сахарозы и стеарата кальция (магния), введенная внутрижелудочно мышам, не влияет на самочувствие и выживаемость животных. Эндотоксины вызывают резкую интоксикацию. Животные становятся неопрятными, шерсть взъерошена, мокрая, наблюдается одышка, тахикардия, диарея, отсутствует аппетит. Со 2-го для эксперимента начинается падеж животных. К концу 3-го дня гибель животных достигает 100% (опытная группа 1). Введение препарата за 3 дня до инъекции токсинов по схеме: 2 раза в день в дозе 5 мг/кг массы тела в течение 3 дней, увеличивает продолжительность жизни животных и защищает их от гибели в 80-90% случаев (опытная группа 2). Введение препарата вместе с токсинами по схеме: 1-й день препарат за 1 ч до инъекции токсинов и через 4 ч после инъекции токсинов; 2-й и 3-й дни препарат без токсинов Х 2 раза в день, увеличивает продолжительность жизни животных и защищает их от гибели в 50 60% случаев (опытная группа 3).

Кроме описанной выше антитоксинной антидиарейной и детоксицирующей активности, предлагаемое средство обладает стимулирующим действием на фагоцитирующие клетки макроорганизма, участвующие в деградации бактерий и вирусов. В результате клинические симптомы исчезают и наступает выздоровление. В отличие от антибиотиков, лечение которыми проводят в течение 7 10 дней, лечение предлагаемым средством проводят в течение 3 5 дней.

Влияние предлагаемого средства на функциональную активность фагоцитирующих клеток перитониального эксудата мышей С57BL/6 изучали по выбросу активных форм кислорода в процессе адгезии и фагоцитоза клеток. В опыте использовали мышей-самцов весом 18 20 г. Контрольной группе вводили внутрибрюшинно физиологический раствор. Опытной группе мышей вводили предлагаемое средство в дозе 5 мг активного вещества/кг массы тела по схеме: внутрижелудочно однократно в течение 3 дней. Через 3 дня животных забивали и выделяли клетки перитониального эксудата. Клетки культивировали в среде RPMI 1640, добавляли люминол в контроль и в опыт, и в опыт зимазан. Фагоциты перитониального эксудата в процессе адгезии (без зимазана) и фагоцитоза (с зимазаном) выбрасывают свободные формы кислорода (супероксиданион радикал), участвующие в деградации различных бактерий и вирусов. Выброс супероксиданион радикала регистрировали с помощью метода люминолзависимой хемилюминесценции на сцинциляционном счетчике.

Результаты приведены в табл. 4.

Как видно из данных табл. 4, предлагаемое средство увеличивает функциональную активность перитонеальных фагоцитов мышей в процессе адгезии и фагоцитоза по сравнению с контролем.

В следующей серии экспериментов изучали влияние предлагаемого средства на выживаемость мышей при заражении их смертельными дозами вакцинного штамма S.typhi.

Контрольным животным вводили внутрижелудочно препарат в дозе 5 мг/кг массы тела по схеме: 2 раза в день в течение 3 дней. Опытным животным (группа 1) вводили внутрижелудочно двукратно на протяжении 3 х дней препарат. На 3-й день их заражали возбудителем брюшного тифа (вакцинным штаммом S.typhi) в смертельных дозах внутрибрюшинно. Опытных животных (группа 2) заражали возбудителем брюшинного тифа (вакцинным штаммом S.typhi) в смертельных дозах внутрибрюшинно.

Результаты приведены в табл. 5. (М.т микробные тела; * цифры обозначают количество выживших животных).

Как видно из табл. 5, все контрольные животные остались живы при наблюдении за ними в течение 12 дней. Опытные животные (группа 1) выжили в 60 80% случаев. В опытной группе 2 все животные погибли на 2-й день.

Таким образом, предлагаемое средство увеличивает продолжительность жизни и защищает животных от гибели при введении им смертельных доз возбудителя брюшного тифа. По нашим данным, предлагаемое средство снимает интоксикацию и обеспечивает время для лечения больного, который в противном случае погибает за 2 3 дня. Это действие связано с влиянием препарата на функциональную активность фагоцитов в процессе адгезии и фагоцитоза.

Принимая во внимание тот факт, что грамотрицательные бактерии, вызывающие желудочно-кишечные заболевания и другие патологические состояния, сопровождающиеся диареей, рвотой, интоксикацией у людей и животных, вырабатывают одни и те же токсины (ХТ,ТЛ-токсины E.coli, эндотоксины), ответственные за эти симптомокомплексы, результаты проведенных экспериментов дают основание сделать выводы о возможности использования предлагаемого средства для профилактики и лечения людей и сельскохозяйственных животных, страдающих желудочно-кишечными заболеваниями и другими патологическими состояниями, вызываемыми грамотрицательными бактериями, вырабатывающими энтеро- и эндотоксины. Целесообразно вводить его в организм перорально в виде таблеток следующего состава,г
2-(Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид 0,02
ИПК 0,002 0,004
Сахароза 0,1 0,134
Стеарат кальция (магния) 0,001 0,002
Разовая доза для профилактики и лечения людей составляет 0,002 г активного вещества. Схема лечения по 1 таблетке 3 раза в день в течение 3 - 5 дней.

Разовая доза для профилактики и лечения животных составляет 5 7 мг активного вещества на 1 кг массы тела, но не более 50 мг. Суточная доза не более 150 мг. Схема лечения 2 3 раза в сутки перорально в течение 3 дней.

Использование: в медицине для лечения и профилактики заболеваний и состояний, сопровождающихся рвотой, диареей и интоксикацией. Сущность изобретения: средство содержит 100 мас.ч. 2-(фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорида, 10 - 20 мас.ч. интерполимерного комплекса полиметакриловой кислоты с полиэтиленгликолем в мольном соотношении 1:1, 50 - 67 мас.ч. сахарозы и 5 - 10 мас.ч. стеарата кальция или магния. 5 табл.

Средство для лечения и профилактики заболеваний и состояний, сопровождающихся рвотой, диареей и интоксикацией, содержащее активное начало и вспомогательные компоненты, отличающееся тем, что в качестве активного начала оно содержит 2-(фенил-метил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид, а в качестве вспомогательных компонентов интерполимерный комплекс полиметакриловой кислоты с полиэтиленгликолем в массовом соотношении 1:1 (ИПК), сахарозу и стеарат кальция (магния) при следующем соотношении компонентов, мас.ч.

2-(Фенилметил)-1Н-бензимидазол гидрохлорид 100
ИПК 10 20
Сахароза 50 67
Стеарат кальция (магния) 5 10