СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МЕЖКЛЕТОЧНЫХ ГРАНИЦ В ДВУХМЕРНЫХ ТКАНЯХ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, анатомии, патологической анатомии и может быть использовано в научно-исследовательской и диагностической практике.

Известен способ выявления межэндотелиальных границ в артериях экспериментальных животных (Masuda M. et al.// Atheroslerosis. -1989.-v.75.- р. 23-30) прототип, заключающийся в том, что животному под анестезией путем перфузии промывают артерии раствором глюкозы, затем перфузируют 0,1%-ным раствором азотнокислого серебра с глюкозой, отмывают от избытка нитрата серебра, фиксируют в альдегидном фиксаторе, затем импрегнированную артерию иссекают, вскрывают по длиннику, расправляют и проявляют продукт импрегнации на свету.

Недостатком известного способа является его непригодность для исследования состояния межклеточных границ в двумерных тканях (эпителий бронхов, мезотелей брюшины, плевры, эндотелий роговицы глаза, артерий и вен) человека, т.к. по этому способу необходимо проводить перфузию. Кроме того, технология известного способа рассчитана на использование образцов тканей для импрегнации, взятых не позднее 1 ч с момента наступления смерти, что делает невозможным его использование в условиях аутопсии человека.

Задачей изобретения является создание способа для исследования состояния межклеточных границ всех двумерных тканей организма человека и эксперементальных животных, и увеличения промежутка времени, в течении которого качественная импрегнация межклеточных границ тканей с момента наступления смерти.

Предложен способ выявления межклеточных границ в двумерных тканях, заключающийся в иссечении образцов исследуемой ткани на аутопсии или в процессе операционного вмешательства, предварительной фиксации образцов в смеси из растворов глюкозы и формалина в определенном соотношении компонентов, последующей импрегнации в растворе азотнокислого серебра и повторной фиксации в нейтральном формалине. Выявление продукта импрегнации осуществляют с помощью фотоматериалов.

Иссечение образцов в процессе аутопсии создает возможность исследования межэндотелиальных границ в двумерных тканях живых организмов. Предварительная фиксация образцов перед импрегнацией в смеси, состоящей из 40%-ного раствора глюкозы и 10%-ного раствора формалина в соотношении 1 12, способствует увеличению срока использования исследуемой ткани для импрегнации до 8-9 ч с момента наступления смерти (против 1 ч в известном способе). Выявление продукта импрегнации путем проявления и последующего закрепления с помощью фотоматериалов уменьшает продолжительность осуществления способа.

Использование предлагаемого способа позволяет упростить условия исследования, расширить его область применения и дает возможность исследовать состояние монослоя клеток в двумерных тканях у человека при различных патологических состояниях в условиях обычных аутопсий и операционных вмешательствах, что способствует повышению качества и точности диагностики.

Изобретение обладает новизной, соответствует требованиям изобретательского уровня и может найти применение на практике.

Предложенный способ осуществляется следующим образом:
иссекают образцы исследуемой ткани в процессе оперативного вмешательства или в условиях аутопсии;
отмывают образцы от биологических жидкостей путем споласкивания в изотоническом физиологическом растворе;
предварительно фиксируют образцы в смеси, состоящей из 40%-ного раствора глюкозы и 10%-ного раствора формалина в соотношении 1 12, в течение 1 ч;
проводят импрегнацию межклеточных границ в 0,1%-ном растворе азотнокислого серебра в течение 1 мин;
повторно фиксируют образцы тканей в 10%-ном растворе нейтрального формалина в течение ночи;
отмывают образцы от формалина в проточной водопроводной воде в течение 1 ч
выявляют продукт импрегнации путем проявления серебра в стандартном фотопроявителе и последующего закрепления в фотофиксаже.

Пример осуществления предлагаемого способа иллюстрируется исследованием состояния межклеточных границ эндотелия аорты умерших, взятые в различные сроки с момента наступления смерти (от 1 до 12 ч). Исследования проводились по известному и предлагаемому способам. В табл.1 представлены результаты качества импрегнации межэндотелиальных границ аорты человека по предлагаемому и известному способам.

Как видно из табл. 1 предложенный способ позволяет выявлять межклеточные границы эндотелия в аортах у умерших в течение от 1 до 11 ч с момента наступления смерти, т.е. на 8 ч больше по сравнению с возможностью известного способа. При выявлении межклеточных границ в других двумерных тканях, например эндотелия роговицы глаза, мезотелия брюшины, получены такие же положительные результаты (данные не указываются).

В табл. 2 также показано преимущество использования предложенного способа по сравнению с известным.

Изобретение относится к гистологии, к анатомии и может быть использовано в научно-исследовательской и диагностической практике. Цель: увеличение промежутка времени для проведения качественной импрегнации мелкоклеточных границ тканей с момента наступления смерти. Сущность: иссекают образцы исследуемой ткани в процессе аутопсии, образцы отмывают и предварительно фиксируют в смеси, состоящей из 40%-ной глюкозы и 10%-ного формалина в соотношении 1: 12, в течение 1 ч. Затем проводят импергнацию межклеточных границ в растворе азотнокислого серебра, вторично фиксируют образцы ткани в растворе нейтрального формалина и отмывают проточной водой. Выявление продукта импрегнации осуществляют с помощью фотоматериалов. Положительный эффект: расширение области применения, упрощение условий исследования, возможность изучения состояния монослоя клеток в двумерных тканях у человека при различных патологиях в условиях обычной аутопсии. 2 табл.

Способ выявления межклеточных границ в двухмерных тканях, включающий иссечение образцов исследуемой ткани, импрегнацию в растворе азотнокислого серебра с последующей фиксацией, иссечением и выявлением продукта импрегнации, отличающийся тем, что иссечение образцов проводят в процессе аутопсии перед импрегнацией, после иссечения образцов проводят их предварительную фиксацию в смеси, состоящей из 40%-ного раствора глюкозы и 10%-ного раствора нейтрального формалина в соотношении 1 12, а выявление продуктов импрегнации осуществляют с помощью фотоматериалов.