СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТОК Российский патент 1998 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, точнее к исследованию биологических материалов человека и животных иммунологическими методами.

Известен способ определения трансформированных клеток по регистрации на лимфоцитах LeF-антигена (A. Masakazu, 1994).

Недостатками данного способа являются: дороговизна теста и его техническая сложность (необходимо получение моноклональных антител, создание тест-систем на их основе, использование дорогостоящего оборудования для регистрации наличия LeF-антигена с помощью данных тест-систем).

Цель изобретения: повышение экономичности, с одновременным упрощением, способа определения трансформированных клеток.

Поставленная цель достигается следующим образом:
Из крови общепринятым методом выделяют HLA-позитивные клетки (В.С. Кожевников, Р.Р. Набиулин, С.В. Богидаев, В.П. Лозовой, 1987), доводят их концентрацию до 1 - 30 • 10⁵ в 1 мл и инкубируют в объеме, не превышающем 300 мкл среды 199, в течение 10 - 30 мин. Далее препарат фиксируют общепринятым методом (В.М. Никитин, 1992) и окрашивают по Романовскому-Гимза.

Под световым микроскопом регистрируют число лимфоцитов, контактно взаимодействующих с аутологичными фагоцитами (n1), сопоставляют с аналогичным среднестатистическим показателем здоровых лиц в возрасте 18 - 25 лет (n2), и при уменьшении n1 по сравнению с n2 на 30% и более делают вывод о наличии в организме обследуемого трансформированных клеток.

Пример 1. У клинически здорового пациента A число лимфоцитов, контактно взаимодействующих с аутологичными фагоцитами (n1), на 12% снижено по сравнению с n2. Результат - у пациента A отсутствуют трансформированные клетки.

Пример 2. У пациента Б число лимфоцитов, контактно взаимодействующих с аутологичными фагоцитами, на 87% ниже показателя n2. Результат - у пациента Б присутствуют трансформированные клетки. Тщательное инструментальное гистологическое исследование показало наличие рака молочной железы.

Пример 3. У пациента В, страдающего частыми простудными заболеваниями, эпизодическим подъемом температуры тела, сопровождающимся высыпаниями на коже, число лимфоцитов, контактно взаимодействующих с аутофагоцитами, на 74% ниже n2. Результат - у пациента В присутствуют трансформированные клетки. Тщательное иммуносерологическое обследование пациента В на наличие вирусной инфекции выявило высокие титры антител к вирусу герпеса.

При помощи предлагаемого метода было обследовано 55 больных раком молочной железы, матки, желудка, толстой кишки (различных стадий заболевания), 51 больной вирусной инфекцией в остром периоде (герпес, вирусный гепатит A и B).

Результаты обследования показали, что у основной массы тестируемых практически здоровых лиц количество лимфоцитов, контактно взаимодействующих с аутофагоцитами, не превышает 30% от их среднестатистического показателя (таблица).

У онкологических больных и при вирусной инфекции основная масса пациентов, напротив, имеет низкий количественный уровень аутофагоцитосвязывающих лимфоцитов.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет закономерно выявлять наличие в организме трансформированных, в том числе злокачественных, клеток.

Метод может использоваться для определения активности процесса канцерогенеза при предраковых заболеваниях, для контроля эффективности их терапии, а также для контроля эффективности оперативного удаления злокачественных опухолей, с целью контроля эффективности терапии вирусных инфекций.

Литература
1. В. С. Кожевников, Р.Р. Набиулин, С.В. Богидаев, В.П. Лозовой. Способ оценки клеточных иммунных реакций invitro, 1987, авторское свидетельство N 1575711, МКИ G 01 N 33/53.

2. В.М. Никитин. Справочник методов иммунологии. Кишинев, Штиннца, 1992, с. 114 - 119.

3. Masakazu A. Detection Method of abnormally - responding lymphocytes as well as detection reagent and kit therefore. Patent N 5236823, USA, 1994.

Изобретение может быть использовано в медицине, точнее иммунологии, и позволяет повысить экономичность способа и упростить определение трансформированных клеток. Определяют количественный уровень лимфоцитов, контактно взаимодействующих с аутофагоцитами, и при снижении этого показателя относительно среднестатистического у здоровых лиц на 30% и более делают заключение о наличии в организме трансформированных клеток. Способ может применяться для определения активности процесса канцерогенеза при предраковых заболеваниях, для контроля эффективности их терапии, а также для контроля эффективности оперативного удаления злокачественных опухолей, с целью контроля эффективности терапии вирусных инфекций. 1 табл.

Способ определения трансформированных клеток, включающий исследование клеток крови, отличающийся тем, что определяют число лимфоцитов n1, контактно взаимодействующих с аутофагоцитами при их совместной инкубации, и при снижении n1 на 30% и более от величины n2 (аналогичный среднестатистический показатель здоровых людей 18 - 25 лет), констатируют наличие трансформированных клеток у обследуемого.