ЦИКЛОПЕПТИДЫ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1999 года по МПК C07K7/64 A61K38/12 

Изобретение относится к новым циклопептидам формулы (I):
Цикло-(Arg-В-Asp-Х-Y)
где В = Gly, Ala, -NH-Q-CO -, причем Q =/C-C/ алкилен;
X = Phe, D-Phe, D-(4-Hal-Phe), D-Lys, D-Orn, D-Pro, D-Tic, D-Nal, D-Phg
Y = Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Phe, D-Phe, Leu, D-Leu, Nle, Lys, Lys (Ac), Lys (AcSH), Orn, D-Orn;
Ac = алканоил с 1-10-C-атомами;
Hal = хлор, фтор, бром, иод,
и к их физиологически приемлемым солям.

Подобные соединения известны из Pharmazie, 40 (8), 532 - 535/1985/. Задачей изобретения является получение новых соединений с ценными свойствами, в особенности пригодных для приготовления лекарственных средств.

Показано, что соединение формулы (I) и их соли обладают очень ценными свойствами, а именно свойствами антагониста α11bβ₃ и α∨β₃-интегринов, причем в особенности они ингибируют адгезию, рецепторов β₃ - или β₅-интегрина с лигандами. Это действие можно подтвердить, например, методом, который описывается J. W. Smith и др., в J.Biol.Chem. 265, 12267-12271 (1990). Дополнительно имеют место противовоспалительные эффекты, которые также можно подтвердить с помощью известных из литературы методов.

Соединения можно применять в качестве лекарственных биологически активных веществ в медицине и ветеринарии, в особенности для профилактики и лечения заболеваний кровообращения, тромбоза, инфаркта сердца, артериосклероза, воспалений, апоплексии, стенокардии, опухолевых заболеваний, остеолитических заболеваний, в особенности остеопороза, антиогенеза и рестеноза после ангиопластики. Далее, соединения можно использовать для улучшения заживления ран.

К тому же соединения пригодны в качестве антимикробных биологически активных веществ, которые предотвращают инфекции, которые возбуждаются, например, бактериями, грибками или дрожжами. Вещества можно использовать в качестве сопутствующих антимикробных биологически активных веществ при вмешательстве в организмы, во время которых используются чужеродные вещества, как, например, биоматериалы, имплантаты, катетеры или электростимуляторы сердца. Они действуют как антисептики.

Наиболее предпочтительными согласно изобретению являются циклопептиды формулы I, представляющие собой
/a/ Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Lys-Val)
/b/ Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys)
/c/ Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Gly)
/d/ Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Phe)
/e/ Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu)
/f/ Cyclo-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Leu)
Выше- и нижеуказанные сокращения аминокислотных остатков обозначают остатки следующих аминокислот:
Abu 4 - аминомасляная кислота
Aha 6 - аминогексановая кислота
Ala аланин
Asn аспарагин
Asp аспарагиновая кислота
Asp (OR) аспарагиновая кислота (β- сложный эфир
Arg аргинин
Cha 3-циклогексилаланин
Cit литруллин
Cys цистеин
Dab 2,4-диаминомасляная кислота
Gln глутамин
Glu глутаминовая кислота
Gly глицин
His гистидин
Ile изолейцин
Leu лейцин
Lys лизин
Lys (Ac) N^ε- алканоиллизин
Lys (AcNH₂) N^ε- аминоалканоиллизин
Lys (AcSH) N^ε- меркаптоалканоиллизин
Met метионин
Nal 3-/2-нафтил/-аланин
Nle норлейцин
Orn орнитин
Phe фенилаланин
H-Hal-Phe 4-галоген-фенилаланин
Phg фенилглицин
Pro пролин
Pya 3-/2-пиридил/-аланин
Ser серин
Tia 3-/2-тиенил/-аланин
Tic тетрагидроизохинолин-З-карбоновая кислота
Thr треонин
Trp триптофан
Tyr тирозин
Val валин
Далее, в последующем вводятся следующие обозначения:
BOC трет.-бутоксикарбонил
CBZ бензилоксикарбонил
DCCI дициклогексилкарбодиимид
ДМФ диметилформамид
ЕДCl N-этил-N'-/3-диметиламинопропил/-карбодиимидгидрохлорид
Et этил
Fmoc 9-флуоренилметоксикарбонил
HOBt 1-гидроксибензотриазол
Me метил
Mtr 4-метокси-2,3,6-триметилфенил-сульфонил
OBut трет.-бутиловый сложный эфир
OMe метиловый сложный эфир
OEt этиловый сложный эфир
POA феноксиацетил
TBTV 2-/1Н-бензотриазол-1-ил/-1,1,3,3- тетраметилуронийтетрафторборат
ТФК трифторуксусная кислота
Поскольку вышеуказанные аминокислоты могут находиться в нескольких энантиомерных формах, то включаются выше- и нижеуказанные, например, в виде составной части соединений формулы (I), все эти формы и также их смеси (например, DL - формы). Далее, аминокислоты, например, в виде составной части соединений формулы (I) могут содержать соответствующие, само по себе известные защитные группы.

Предметом изобретения, далее, является способ получения соединения формулы (I) по п. 1 или одной из его солей, заключающийся в том, что используют твердофазный метод синтеза, получают линейный пептид общей формулы II:
X-Z-OH,
где Z = Arg-B-Asp-X-Y
B-Asp-X-Y-Arg
Asp-X-Y-Arg-B
X-Y-Arg-B-Asp
или
Y-Arg-B-Asp-X
значения B, Y и Х- указаны в 1-м пункте формулы изобретения,
или реакционноспособное производное такого пептида подвергают циклизации путем обработки циклизующим агентом с последующим в случае необходимости взаимодействием с кислотой или основанием с образованием соли.

Способ целесообразно осуществляют согласно обычным методам синтеза пептидов, которые описаны, например в Губен-Вейль, цитировано выше, том 15/11, с. 1-806 (1974).

Реакцию предпочтительно осуществляют в присутствии дегидратирующего средства, например карбодиимида, как ДСС1 или ЕДС1: далее, ангидрида пропанфосфоновой кислоты [см. Angew. Chem. 92, 129 /1980/], дифенилфосфорилазида или 2-этокси-N-этоксикарбонил-1,2- дигидрохинолина; в инертном растворителе, например в галогенированном углеводороде, как дихлорметан; простом эфире, как тетрагидрофуран или диоксан; амиде, как ДМФ или диметилацетамид; нитриле, как ацетонитрил; или в смесях этих растворителей; при температурах примерно до -10^oC до 40^oC, предпочтительно при 0-30^oC. Для того, чтобы способствовать внутримолекулярной циклизации перед межмолекулярным связыванием пептида, целесообразно работать в разбавленных растворах (принцип разбавления).

Вместо соединений формулы (II) также можно использовать в реакции пригодные реакционноспособные производные этих веществ, например такие, в которых реакционноспособные группы промежуточно блокированы за счет защитных групп. Аминокислотные производные формулы (II) можно применять, например, в виде их активированных сложных эфиров, которые целесообразно получают in situ, например, благодаря добавке HOBt или N-гидроксисукцинимида.

Исходные вещества формулы (II), как правило, являются новыми. Их можно получать известными способами, например вышеуказанными методами синтеза пептидов и отщепления защитных групп.

Как правило, сначала синтезируют защищенные пентапептидные сложные эфиры формулы R'-Z-OR'', например BOC-Z-OMe или BOC-Z-OEt, которые прежде всего омыляют до кислот формулы R'-Z-OH, например BOC-Z-OH; от них отщепляют защитную группу R', благодаря чему получают свободные пептиды формулы H-Z-OH (II).

В молекуле исходного вещества может быть несколько одинаковых или разных - защищенных амино- и/или гидроксильных групп. В случае, если имеющиеся защитные группы отличны друг от друга, во многих случаях их можно селективно отщеплять.

Выражение "защитная для амино-группы группа" общеизвестно и относится к группам, которые пригодные для защиты /блокирования/ амино-группы от химических превращений, и которые, однако, легко удаляются после того, как произошла желательная химическая реакция в других местах молекулы. Типичны для таких групп незамещенные или замещенные ацильные, арильные, аралкоксиметильные или аралкильные группы. Так как защитные группы удаляются после желательной реакции или последовательности реакций, то их род и размер, впрочем, не критические; предпочтительные, однако, группы с 1-20, в особенности с 1-8 C-атомами. Выражение "ацильная группа" в связи с настоящим способом нужно понимать в самом широком смысле. Оно охватывает производимые ацильные группы алифатических, аралифатических, ароматических или гетероциклических карбоновых или сульфоновых кислот, а также в особенности алкоксикарбонильные, арилоксикарбонильные и прежде всего аралкоксикарбонильные группы. Примерами такого рода ацильных групп являются алканоил, как ацетил, пропионил, бутирил; аралканоил, как фенилацетил; ароил, как бензоил или толуол; арилоксиалканоил; алкоксикарбонил, как метоксикарбонил; этоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, BOC, 2- иод-этоксикарбонил; аралкилоксикарбонил, как CBZ ("карбобензокси"); 4- метоксибензилоксикарбонил, FMOC; арилсульфонил, как Mtr. Предпочтительными защитными для аминогруппы группами являются BOC и Mtr далее, CBZ , Fmocбензил и ацетил.

Выражение "защитная для гидроксильной группы группа" также общеизвестно и относится к группам, которые пригодны для защиты гидроксильной группы от химических взаимодействий, и которые, однако, легко удаляются после того, как произошла желательная химическая реакция в других местах молекулы. Типичны для таких групп вышеуказанные незамещенные или замещенные арильные, аралкильные или ацильные группы; далее, также алкильные группы. Природа и величина защитных для гидроксильных групп групп не критические, так как их после желательной химической реакции или последовательности реакций снова удаляют; предпочтительны группы с 1-20, в особенности с 1-10 C-атомами. Примерами защитных для гидроксильной группы групп являются, между прочим, бензил, п-нитробензоил, п-толуолсульфонил, трет. -бутил и ацетил, причем особенно предпочтительны бензил и трет.-бутил, COOH-группы в аспарагиновой кислоте и глутаминовой кислоте предпочтительно защищаются в форме их сложных трет.-бутиловых эфиров (например, Asp [OBut]).

Основание формулы (I) с помощью кислоты можно переводить в соответствующую соль присоединения кислоты. Для этого взаимодействия используют кислоты, которые дают физиологически приемлемые соли. Так, можно применять неорганические кислоты, например, как серная кислота; азотная кислота; галоген-водородные кислоты, как соляная кислота или бромоводородная кислота; фосфорные кислоты, как ортофосфорная кислота; сульфаминовая кислота; далее, органические кислоты, в особенности алифатические, алициклические, аралифатические, ароматические или гетероциклические одно- или многоосновные карбоновые, сульфоновые или серные кислоты, например, как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, пивалиновая кислота, диэтилуксусная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, пимелиновая кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, молочная кислота, винная кислота, яблочная кислота, бензойная кислота, салициловая кислота, 2-или 3-фенилпропионовая кислота, лимонная кислота, глюконовая кислота, аскорбиновая кислота, никотиновая кислота, изоникотиновая кислота, метан- или этансульфокислота, этандисульфокислота, 2-гидроксиэтансульфокислота, бензолсульфокислота, п-толуолсульфокислота, нафталин-моно- и -ди-сульфокислоты, лаурилсерная кислота. Для выделения и/или очистки соединений формулы (I) можно применять соли физиологически неприемлемых кислот, например пикраты.

С другой стороны, кислоту формулы (I) путем введения во взаимодействие с основанием можно переводить в одну из ее физиологически приемлемых солей металлов или аммония. В качестве солей при этом принимают во внимание в особенности соли натрия, калия, магния, кальция и аммония; далее, замещенные аммониевые соли, например, как диметил-, диэтил- или диизо-пропил-аммониевые соли; моноэтанол-, диэтанол- или триэтанол-аммониевые соли; циклогексил-, дициклогексил-аммониевые соли; дибензилэтилендиаммониевые соли; далее, например, соли с N-метил-D- глюкамином или с аргинином или лизином.

Новые соединения формулы (I) и их физиологически приемлемые соли можно применять для получения фармацевтических препаратов тем, что их в эффективном количестве вместе по меньшей мере с одним носителем или вспомогательным веществом и, если желательно, вместе с одним или несколькими другими биологически активными веществами доводят до пригодной дозировочной формы. Таким образом полученные композиции можно использовать в качестве лекарственного средства в медицине или ветеринарии. В качестве носителей принимают во внимание, например, неорганические вещества, которые пригодны для энтерального [например, орального или ректального], парентерального [например, внутривенной инъекции] или локального [например, топического, а также через кожу, глаза или нос] введения или для введения в форме ингаляционных препаратов и не реагируют с новыми соединениями, например, как вода или водный изотонический раствор хлорида натрия, низшие спирты, растительные масла, бензиловые спирты, полиэтиленгликоли, триацетат целлюлозы и другие глицериды жирных кислот, желатина, соевый лецитин; углеводы, как лактоза или крахмалы, стеарат магния, тальк, целлюлоза, вазелин. Для орального применения служат в особенности таблетки, драже, капсулы, сиропы, соки или капли; специальный интерес представляют лакированные таблетки и капсулы с резистентными к желудочному соку покрытиями, соответственно оболочками капсул. Для ректального применения служат свечи; для парентерального введения служат растворы, предпочтительно масляные или водные растворы, далее, суспензии, эмульсии или имплантаты. Для топического применения пригодны, например, растворы, которые можно применять в виде глазных капель; далее, например, суспензии, эмульсии, кремы, мази или аэрозоли. Для применения в виде ингаляционных препаратов можно применять пульверизаторы, которые содержат биологически активное вещество либо растворенным, либо суспендированным в рабочем газе или смеси рабочих газов (например, CO₂ или фторхлоруглеводороды). При этом целесообразно применяют биологически активное вещество в микронизированной форме, причем можно добавлять один или несколько дополнительных, физиологически приемлемых растворителей, например этанол. Растворы для ингаляций можно вводить с помощью обычных ингаляторов. Новые соединения можно также лиофилизировать и полученные лиофилизаты применять, например, для приготовления препаратов для инъекции. При этом инъекции можно осуществлять дозированно или в виде непрерывного вливания [например, внутривенно, внутримышечно, подкожно или внутрь ликворного пространства]. Указанные композиции могут быть стерилизованы и/или могут содержать вспомогательные вещества, как консерванты, стабилизаторы и/или смачиватели, эмульгаторы, соли для влияния на осмотическое давление, буферные вещества, красители и/или ароматизирующие вещества. Если желательно, они могут содержать также одно или несколько других биологически активных веществ, например один или несколько витаминов.

Предлагаемые согласно изобретению вещества, как правило, можно вводить по аналогии с другими известными, имеющимися в продаже пептидами, в особенности по аналогии с описанными в патенте США A-4 472305 соединениями, предпочтительно в дозах примерно 0,05-500, в особенности 0,5-100 мг на дозировочную единицу. Суточная доза составляет предпочтительно примерно 0,01-2 мг/кг веса тела. Специальная доза для каждого определенного пациента зависит, однако, от самых различных факторов, например от эффективности используемого соединения, возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола, стоимости, момента и пути введения, скорости выделения, комбинации лекарственных веществ и тяжести соответствующего заболевания, которое имеет значение для терапии. Предпочтительно парентеральное введение.

Далее, новые соединения формулы (I) можно применять в качестве интегриновых лигандов для изготовления колонок для аффинной хроматографии с целью получения чистыми интегринов.

Лиганд, т. е. пептидное производное формулы (I), при этом за счет анкерных функций ковалентно связывается с полимерным носителем.

В качестве полимерных носителей пригодны само по себе известные в химии пептидов полимерные твердые фазы предпочтительно с гидрофильными свойствами, например поперечно сшитые полисахара, как целлюлоза, сефароза или сефадекс^® акриламид, полимеры на основе полиэтиленгликоля или Tentakel- полимеры^®.
В качестве анкерных функций, которые связаны с полимерными носителями, пригодны предпочтительно линейные алкиленовые цепи с 2-12 C-атомами, которые одним своим концом непосредственно связаны с полимером, а на другом конце содержат функциональную группу, как, например, гидроксил, амино, меркапто, малеинимидо или - COOH, и поэтому пригодны для связывания с C- или N-концевым отрезком соответствующего пептида.

При этом возможно, что пептид связывается с анкером полимера непосредственно или также через вторую анкерную функцию. Далее, возможно, что пептиды, которые содержат аминокислотные остатки с функционализированными боковыми цепями, через них связываются с анкерной функцией полимера.

Сверх того, определенные аминокислотные остатки, которые представляют собой составную часть пептидов формулы (I), можно модифицировать в их боковых цепях таким образом, чтобы они были доступны для связывания через, например, SH-, OH-, NH₂ - или COOH-группы с анкером полимера.

При этом возможны необычные аминокислоты, как, например, производные фенилаланина, которые в 4-положении фенильного кольца содержат меркаптогидрокси-, амино- или карбоксиалкильную цепь, причем функциональная группа находится на конце цепи.

Примерами аминокислотных остатков, боковая цепь которых может служить непосредственно в качестве анкерной функции, являются, например, Lys, Orn, Arg, Dab, Asp, Asn, Glu, Gln, Ser, Thr, Cys, Cit или Tyr.

Примерами N-концевых анкеров являются такие остатки, как, например, -CO-C_nH_2n-NH₂; -CO-C_nH_2n-OH; -CO-C_nH_2n-SH или -CO-C_nH_2n-COOH с "n"= 2-12, причем длина алкиленовой цепи не критическая и в случае необходимости она может быть заменена также, например, соответствующими арильными или алкиларильными остатками.

C-концевые анкеры могут представлять собой, например, -O-C_nH_2n-SH; -O-C_nH_2n-OH; -O-C_nH_2n-NH₂; -O-C_nH_2n-COOH, -NH-C_nH_2n-SH; -NH-C_nH_2n-OH; -NH-C_nH_2n-NH₂ или -NH-C_nH_2n-COOH, причем "n" , а также алкиленовая цепь имеют уже указанное в предыдущем абзаце значение.

N- и C-концевые анкеры также могут служить в качестве анкерных звеньев уже функционализированной боковой цепи аминокислотного остатка. Здесь принимают во внимание, например, аминокислотные остатки, как Lys (CO-C₅H₁₀-NH₂), Asp (NH-C₃H₆-COOH) или Cys (C₃H₆-NH₂), причем анкер всегда связан с функциональной группой боковой цепи.

Получение материалов для аффинной хроматографии для очистки интегрина осуществляют при условиях, которые сами по себе известны для конденсации аминокислот.

Температура указана в градусах Цельсия. В нижеприведенных примерах "обычная обработка" обозначает: добавляют, если необходимо, воду; нейтрализуют; экстрагируют эфиром или дихлорметаном; отделяют, сушат органическую фазу над сульфатом натрия; отфильтровывают; выпаривают и очищают путем хроматографии на силикагеле и/или путем кристаллизации. RZ = время удерживания (минуты) при ВЭЖХ на Lichrosorb^® RP Select В (250-4,7 мкм)-колонке; растворитель: 0,3% ТФК в воде; изопропанольный градиент 0-80 объемн. % за 50 мин при скорости 1 мл/мин. Истечение и детектирование при 215 нм. М⁺ = молекулярный пик в масс-спектре; получают согласно методу "бомбардировки быстрыми атомами " (FAB).

Пример 1
Раствор 0,2 г H-Arg-Gly-Asp-D-Pro,-Val-ONa [например, получен из Fmoc-Arg-Gly-Asp-D-Pro-Val-O-Wang, причем-O-Wang обозначает используемый в модифицированном способе Merrifield остаток 4-оксиметил-феноксиметил-полистирольной смолы, путем отщепления Fmoc-группы с помощью пиперидина в ДМФ и отщепления смолы с помощью ТФК в CH₂Cl₂ (1:1) ] в 15 мл ДМФ разбавляют с помощью 85 мл дихлорметана и смешивают с 50 мг бикарбоната натрия. После охлаждения в смеси сухого льда с ацетоном добавляют 40 мкл дифенилфосфорилазида.

После стояния в течение 16 часов при комнатной температуре раствор концентрируют. Концентрат подвергают гель-фильтрации (Сефадекс GIO-колонка в смеси изопропанола с водой в соотношении 8:2) и затем очищают как обычно с помощью ВЭЖХ. Получают цикло- (Arg-Gly-Asp-D-Pro-Val); PZ = 13,4; М⁺ = 525. Аналогичным образом, путем циклизации соответствующих линейных пептидов получают
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Tic-Val); RZ= 18,4; М⁺ 587;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val); М⁺ 575;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Lys-Val); RZ= 6,8; M⁺ 556;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys); RZ= 10,9; M⁺ 604;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Gly); RZ= 13,1; M⁺ 533;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D- Phe-Ala); RZ= 14,3; M⁺ 547;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Phe); RZ = 22,0; M⁺ 623;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu); RZ = 21,2; M⁺ 589;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Nal-Val); RZ = 24,7; M⁺ 625;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phg-Val); RZ = 16,5; M⁺ 561;
цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-Gly); RZ = 13,2; M⁺ 533;
цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-D-Ala); RZ = 14,8; M⁺ 547;
цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-D-Phe); RZ = 20,2; M⁺ 623;
цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-D-Leu); RZ= 21,4; M⁺ 589;
цикло - (Arg-(Mtr)-Gly-Asp-D-Phe-Lys); RZ = 23,4; M⁺ 816;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(H₃C-CO); RZ = 17,0; M⁺ 646;
цикло - (Arg(Mtr)-β-Ala-Asp-Phe-D-Val); RZ = 28,2; M⁺ 801;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Nle); RZ = 22,0; M⁺ 589;
цикло - (D-Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-Val); RZ = 17,5; M⁺ 575;
цикло - (Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-D-Gly); RZ = 18,7; M⁺ 575;
цикло - (Arg -D- Ala-Asp-D-Phe-Val); RZ = 18,9; M⁺ 589;
цикло - (Arg-D-Ala-Asp-Phe-D-Val); RZ = 19,1: M⁺ 589;
цикло - (Arg-Aha-Asp-D-Phe-Val); RZ = 20,8; M⁺ 631;
цикло - (Arg-Abu-Asp-Phe-D-Val); RZ = 17,2; M⁺ 603;
цикло - (Arg-Aha-Asp-Phe-D-Val); RZ = 19,8; M⁺ 631;
цикло - (Arg-Abu-Asp-D-Phe-Val); RZ = 17,8; M⁺ 603;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-(4-I-Phe)-Val); RZ = 23,3; M⁺ 701;
цикло - (Arg-Gly-Asp-Phe-Val); RZ = 21,8; M⁺ 575;
цикло - (Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-Val); RZ = 20,7; M⁺ 575;
цикло - (D-Arg-Gly-Asp-Phe-D-Val); RZ = 20,8; M⁺ 575;
цикло - (D-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val); RZ = 21,9; M⁺ 575;
цикло - (Arg-Gly-D-Asp-D-Phe-Val); RZ = 20,7; M⁺ 575;
Пример 2
Раствор 0,28 г цикло -(Arg[Mtr]- β -Ala-Asp-Phe-D-Val) [получен путем циклизации согласно примеру 1] в 8,4 мл ТФК, 1,7 мл дихлорметана и 0,9 мл тиофенола выдерживают 4 часа при комнатной температуре, затем концентрируют и после разбавления водой подвергают сушке вымораживанием. Гель-фильтрация на Сефадексе G10 (уксусная кислота/вода 1:1) и последующая очистка путем препаративной ВЭЖХ в указанных условиях дают цикло-(Arg--β--Ala-Asp-Phe-D-Val); RZ = 17,0; М⁺ 589.

Аналогичным образом получают:
Cyclo-(Arg (Mtr)-Gly-Asp-D-Phe-Lys);
Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys); RZ = 10,9; M⁺ 604
Пример 3
80 мг цикло-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) растворяют 5-6 раз в 0,01 М HCl и после каждого процесса растворения подвергают сушке вымораживанием. Последующая очистка с помощью ВЭЖХ дает цикло- (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu)•HCl; RZ = 20,6; М⁺ 589.

Аналогичным образом получают из цикло-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val): цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val)•HCl; RZ = 18,4; М⁺ 575;
из цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu): цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu)• HCl;
из цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) путем обработки уксусной кислотой;
цикло - (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu)•H₃C-COOH; RZ = 19,2; М⁺ 589,
из цикло-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu) путем обработки азотной кислотой,
цикло -(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu)•HNO₃; RZ = 20,4; М⁺ 589.

Пример 4
Для приготовления афинных фаз 0,9 г N-малеинимидо-(CH₂)₅-CO-NH- (CH₂)₃-полимера [получен путем конденсации N -малеинимидо-(CH₂)₃,- COOH с H₂N -(CH₂)₃-полимером] суспендируют в 10 мл 0,1М натрийфосфатного буфера при pH = 7 и при 4^oC добавляют 1 эквивалент цикло- [Arq-Gly-Asp-D-Phe-Lys (CO(CH₂)₂SH)]. Перемешивают в течение 4-х часов при одновременном нагревании реакционной смеси до комнатной температуры, отфильтровывают твердый остаток и промывают дважды по 10 мл буферным раствором (pH= 7) и затем трижды по 10 мл водой. Получают цикло- [Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys/CO/CH₂/₂S- 3-(N- малеинимидо-(CH₂)₅-CONH (CH₂)₃-полимер)]
Пример 5
Аналогично примеру 1, путем конденсации полимер-O-(CH₂)₃-NH₂- (выпускается в продажу) с цикло-(Arg-Gly-Asp-D-Pro-Lys(CO)CH₂)₄-COOH) [получается путем конденсации алипиновой кислоты с цикло - [Arg-Gly-Asp-D-Pro-Lys] при указанных условиях] получают следующую полимерную фазу: цикло-[Arg-Gly-Asp-D-Pro-Lys-/CO/CH₂/₄ -CO-NH-/CH₂/₃-O-полимер]
Аналогичным образом, путем конденсации цикло - [Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-/CO-/CH₂/₅ -NH₂/] с HOOC-CH₂-O-полимером получают
цикло - [Arg- Gly-Asp-D-Phe-Lys-/CO-/CH₂/₅-NH-CO-CH₂-O- полимер/]
Нижеприведенные примеры относятся к фармацевтическим композициям:
Пример А
Стеклянные пузырьки с препаратом для инъекции
В растворе из 100 г циклопептида формулы (I) и 5 г динатрийгидрофосфата в 3 л бидистиллированной воды с помощью 2 н. соляной кислоты устанавливают pH= 6,5, стерильно фильтруют, разливают в стеклянные пузырьки для препаратов для инъекции, лиофилизируют в стерильных условиях и стерильно закрывают. Каждый пузырек с препаратом для инъекции содержит 5 мг биологически активного вещества.

Пример Б:
Свечи
Смесь 20 г биологически активного вещества формулы (I) со 100 г соевого лецитина и 1400 г масла какао расплавляют, выливают в формы и оставляют охлаждаться. Каждая свеча содержит 20 мг биологически активного вещества.

Пример В:
Раствор
Готовят раствор из 1 г биологически активного вещества формулы 1, 9, 38 г NaH₂PO₄•2H₂O, 28,48 г Na₂HPO₄•12H₂O и 0,1 г бензальконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. Устанавливают pH = 6,8, доливают до 1 л и стерилизуют путем облучения. Этот раствор применяют в форме глазных капель.

Пример Г:
Мазь
Смешивают 500 мг биологически активного вещества формулы I с 99,5 г вазелина в асептических условиях.

Пример Д:
Таблетки
Смесь 100 г циклопептида формулы (I), 1 кг лактозы, 600 г микрокристаллической целлюлозы, 600 г кукурузного крахмала, 100 г поливинилпирролидона, 80 г талька и 10 г стеарата магния обычным образом прессуют в таблетки так, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг биологически активного вещества.

Пример Е:
Драже
Прессуют таблетки, как указано в примере Д, и затем их покрывают обычным образом покрытием из сахарозы, кукурузного крахмала, талька, траганта и красителя.

Пример Ж:
Капсулы
Обычным образом твердые желатиновые капсулы заполняют биологически активным веществом формулы (I) так, чтобы каждая капсула содержала 5 мг биологически активного вещества.

Пример 3
Ингаляционный пульверизатор
14 г биологически активного вещества формулы (I) растворяют в 10 л изотонического раствора NaCl и раствор заливают в продажные сосуды для распыления с помощью насоса. Раствор можно распылять в рот или нос. Один впрыск (примерно 0,1 мл) соответствует дозе примерно 0,14 мг.

Изобретение относится к новым циклопептидам формулы (I): циклo-(Arg-B-Asp-X-Y), где B, Х и Y имеют указанное в п. 1 формулы изобретения значение, а также к их солям. Эти соединения действуют как ингибиторы интеграна и могут применяться в особенности для профилактики и лечения заболеваний круга кровообращения и в терапии опухолей. Способ получения соединений формулы (I) заключается в том, что соответствующий линейный пептид или реакционноспособное производное такого пептида подвергают циклизации путем обработки циклизующим агентом с последующим в случае необходимости взаимодействием с кислотой или основанием с образованием соли. Описываются способ получения фармацевтической композиции и фармацевтическая композиция - антагонист α11bβ₃- и α∨β₃- интегринов, содержащая соединения формулы (I). 4 с. и 3 з.п. ф-лы.

1. Циклопептиды общей формулы I
цикло-(Arg-B-Asp-X-Y),
где B = Gly, Ala, -NH-Q-CO-, причем Q = (C₁ - C₆) алкилен;
X = Phe, D-Phe, D-(4-Hal-Phe), D-Lys, D-Orn, D-Pro, D-Tic, D-Nal, D-Phg;
Y = Gly, Ala, D-Ala, Val, D-Val, Phe, D-Phe, Leu, D-Leu, Nle, Lys, Lys(Ac), Lys(AcSH), Orn, D-Orn
Ac = алканоил с 1 - 10-C-атомами;
Hal = хлор, фтор, бром, йод, или их физиологически приемлемые соли. 2. Циклопептиды формулы I по п.1, представляющие собой:
(a) Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Lys-Val);
(b) Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys);
(c) Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Phe);
(d) Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Gly);
(e) Cyclo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Leu);
(f) Cyclo-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Leu). 3. Циклопептиды формулы I по п.1 или их физиологически приемлемые соли, обладающие свойствами антагониста α11bβ₃ и α∨β₃-интегринов. 4. Циклопептиды формулы I по п.1 в качестве ингибитора адгезии. 5. Способ получения циклопептидов формулы I по п.1 или их физиологически приемлемых солей, заключающийся в том, что используют твердофазный метод синтеза, получают линейный пептид общей формулы II:
X-Z-OH,
где Z = Arg-B-Asp-X-Y
B-Asp-X-Y-Arg
Asp-X-Y-Arg-B
X-Y-Arg-B-Asp
или
+Y-Arg-B-Asp-X
значения B, Y, X указаны в 1-м пункте формулы изобретения, затем этот пептид или реакционноспособное производное такого пептида подвергают циклизации путем обработки циклизующим агентом с последующим в случае необходимости взаимодействием с кислотой или основанием с образованием соли. 6. Способ получения фармацевтической композиции, отличающийся тем, что циклопептид формулы I по п.1 или одну из его физиологически приемлемых солей смешивают с по меньшей мере одним твердым, жидким или полужидким носителем, или вспомогательным веществом. 7. Фармацевтическая композиция - антагонист α11bβ₃ и α∨β₃ -интегринов, содержащая активный ингредиент и носитель или вспомогательное вещество, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента она содержит один из циклопептидов общей формулы I по п.1 или одну из его физиологически приемлемых солей в эффективном количестве.