СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОМСКОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ ЛИХОРАДКИ И КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА Российский патент 1999 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к вирусологии, точнее к дифференциальной лабораторной диагностике омской геморрагической лихорадки (ОГЛ) и клещевого энцефалита (КЭ).

Известно использование реакции связывания комплемента (РСК) для диагностики ОГЛ и КЭ у больных людей с применением инфекционных боратно-солевых (БСА) или сахарозо-ацетоновых антигенов (САА) вирусов ОГЛ и КЭ (Федорова Т. Н. и др. //Методические указания по дифференциальной эпидемиологической и серологической диагностике клещевого энцефалита и омской геморрагической лихорадки. - Омск, 1972. - 10 с.). Однако ввиду антигенной близости вирусов ОГЛ и КЭ дифференциация в РСК с БСА и САА этих вирусов видоспецифических антител в сыворотках крови больных вызывает значительные затруднения. Видовую специфичность обнаруженных антител оценивают по разнице их титров с БСА или САА вирусов ОГЛ и КЭ, причем достоверной считают четырехкратную и более высокую разницу. Низкая дифференцирующая способность БСА и САА вынуждает к повторным постановкам РСК, причем выявить достоверную разницу титров антител зачастую не удается, так как она колеблется от опыта к опыту.

Задача изобретения - повышение точности дифференциальной диагностики заболеваний ОГЛ и КЭ у людей в РСК.

Технический результат - усовершенствование лабораторной диагностики ОГЛ и КЭ, а следовательно, создание предпосылок для оптимизации противоэпидемических и лечебно-профилактических мероприятий в отношении данных инфекций.

Новым в достижении поставленной задачи является то, что в качестве диагностикумов ОГЛ и КЭ в РСК используют растворимые антигены (РА) вирусов ОГЛ и КЭ.

Показано, что представители комплекса клещевого энцефалита обладают способностью синтезировать неструктурный растворимый антиген (Smith T.J., Holt D. //Bull. Wild Hith Org. 1961, 24, 749-795). Нами впервые выявлена циркуляция в крови людей в период заболевания ОГЛ и КЭ антител, специфичных к неструктурным растворимым антигенам вирусов ОГЛ и КЭ. Нами также показана чрезвычайно высокая специфичность РА вирусов ОГЛ и КЭ при дифференцировании видоспецифических антител в РСК, которая проявляется в отсутствии перекрестных реакций при их использовании в качестве диагностикумов.

Способ осуществляется следующим образом. Для получения РА используют САА или БСА вирусов ОГЛ и КЭ. К САА или БСА добавляют сухую мочевину (мочевина чда, 6691-67, молекулярный вес 60 H₂NCONH₂) до конечной концентрации 8М. Чтобы получить такую концентрацию, надо на каждые 10 мл САА или БСА добавить 4,8 г мочевины. При растворении мочевины температура смеси резко снижается. Однако процесс растворения должен быть быстрым, чтобы не было участков с избыточной концентрацией детергента. Химический стакан с обрабатываемым антигеном помещают в водяную баню с температурой 37-40^oC, всю навеску мочевины добавляют сразу и встряхивают стакан 3-4 раза. Мочевина должна растворится в течение 10-15 секунд. Антиген с растворившейся мочевиной тотчас помещают в термостат (37^oC) на 30 минут, после чего пипеткой собирают его в диализный мешочек. Диализуют в течение 20-24 часов против 100 объемов боратного буферного раствора pH 9,0 (производства Томского НПО "Вирион") при 4^oC для удаления мочевины из препарата.

Чтобы получить РА с титром, достаточным для использования в РСК, необходимо учитывать следующее: обработка мочевиной снижает титр комплементсвязывающей активности в 2-4 раза, поэтому для получения РА можно использовать исходные САА или БСА с титром не ниже 1:160. РА сохраняют свою активность при 4^oC в течение 2-х месяцев.

РА вирусов КЭ и ОГЛ используют для дифференциального выявления в РСК видоспецифических антител к вирусам КЭ и ОГЛ в сыворотках крови больных людей, взятых в начальном периоде заболевания и реконвалесценции. РА вирусов КЭ и ОГЛ вступают во взаимодействие в РСК только с гомологичными антителами, что позволяет их четко идентифицировать без перекрестных реакций.

Способ иллюстрируется следующим примером.

Пример. Сыворотки крови от больных людей с подозрением на арбовирусные инфекции, взятые в начальном периоде заболевания и реконвалесценции, исследуют в РСК с использованием РА, приготовленных из штамма вируса КЭ Софьин и штамма вируса ОГЛ Боголюбовка. Результаты исследования парных сывороток больных представлены в таблице.

Как видно из таблицы РА обладают в РСК наибольшей специфичностью, что позволяет четко отдифференцировать антитела к вирусу ОГЛ от антител к вирусу КЭ.

Эффективность заявляемого способа доказана при расшифровке эпидемических вспышек заболеваний неясной этиологии среди населения юга Сибири в 1988-1996 гг. Оценку видовой принадлежности антител (ОГЛ или КЭ) проводили по результатам комплекса методов - РТГА с САА и БСА, РБН и (или) РН на микрокультуре СПЭВ, РСК с САА, БСА и РА. В ряде случаев диагноз у больных подтверждали вирусологически.

Изобретение относится к медицине, в частности вирусологии, точнее к дифференциальной лабораторной диагностике омской геморрагической лихорадки (ОГЛ) и клещевого энцефалита (КЭ). Проводят постановку серологической реакции связывания комплемента, при этом в качестве диагностикумов используются растворимые антигены вирусов омской геморрагической лихорадки и клещевого энцефалита, не дающие перекрестных реакций с гетерологичными антителами, которые получают путем обработки мочевиной боратно-солевых или сахарозо-ацетоновых антигенов вирусов омской геморрагической лихорадки и клещевого энцефалита, имеющих титр комплементсвязывающей активности не ниже 1 : 160. Способ обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики заболеваний ОГЛ и КЭ у людей в РСК за счет использования в качестве диагностикумов комплементсвязывающих, неструктурных белков вирусов ОГЛ и КЭ - растворимых антигенов, не дающих перекрестных реакций с гетерологичными антителами, что представляется возможным при использовании других диагностических препаратов. 1 табл.

Способ дифференциальной диагностики омской геморрагической лихорадки и клещевого энцефалита, включающий постановку серологической реакции связывания комплемента, отличающийся тем, что в качестве диагностикумов используют растворимые антигены вирусов омской геморрагической лихорадки и клещевого энцефалита, не дающие с гетерологичными антителами перекрестных реакций, которые получают путем обработки мочевиной боратно-солевых или сахарозо-ацетоновых антигенов вирусов омской геморрагической лихорадки и клещевого энцефалита, имеющих титр комплементсвязывающей активности не ниже 1:160.