СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИР Российский патент 1999 года по МПК A61K39/42 

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и может найти применение для получения противолептоспирозных сывороток с целью приготовления диагностических и лечебных препаратов.

Наиболее близким по сущности к предлагаемому изобретению является способ получения гипериммунной сыворотки к лептоспирам, предусматривающий введение антигена лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови от продуцента (см. Тарасевич Н.Н.- Иммунология и серологическая диагностика лептоспирозной инфекции.- М. -Медицина.- 1972.-С. 137).

Однако недостатком способа является:
- недостаточная стабильность титров антител в сыворотках от 1: 20000 до 1:200000;
- длительная иммунизация, следовательно, и сроки получения сыворотки составляют более 80-82 дней;
- необходимость получения из лептоспир сухой массы клеток, что усложняет способ и ограничивает возможности его применения.

Изобретение направлено на получение сывороток со стабильно высокими титрами специфических антител и сокращение сроков иммунизации.

Способ получения гипериммунной сыворотки против лептоспир предусматривает введение лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови от продуцента. Можно использовать лептоспиры любой серологической группы, в зависимости от цели (лечебная сыворотка, агглютинирующая сыворотка для типирования лептоспир, для приготовления диагностикума). Так, например, использование лептоспир серогрупп Icterohaemorrhagiae и Canicola позволяет получить сыворотку для лечения лептоспироза у собак.

Авторами разработана оригинальная схема введения лептоспир продуценту. Для достижения поставленной цели лептоспиры первоначально вводят в одну конечность внутримышечно и в область лимфатического узла в дозе по (1,0•10⁸-1,5•10⁸) мк на кг массы продуцента. По истечении 5-6 суток по той же схеме лептоспиры вводят в другую конечность. Ревакцинацию проводят через 35-40 дней в нарастающей дозе (1•10⁸-1,5•10⁸ мк, (2•10⁸-2,5•10⁸) мк, (3•10⁸-3,5•10⁸) мк, (5•10⁸-5,5•10⁸) мк, (6•10⁸-6,5• 10⁸) мк на кг массы через каждые двое суток. Первую - внутримышечно, остальные подкожно. Через 8-10 дней проводят забор крови. Иммунизация концентрированным антигеном позволяет уменьшить объем вводимого препарата, а смена выбранных рецепторных зон приводит к включению в иммуногенез значительного количества иммунокомпетентных клеток и обеспечивает депонирование антигена для пролонгированного раздражения; выбранный порядок введения антигена, его концентрация и интервалы между инъекциями исключают появление у реципиента рефракторного состояния, это обеспечивает получение высокоактивной специфической сыворотки, а также воспроизводимость способа. Кроме того, предлагаемый способ позволяет максимально сократить расход антигена, а следовательно, число вакцинированных животных и время содержания их в опыте.

Изобретение реализуется следующим образом.

Пример 1. Получение гипериммунной сыворотки.

Культуры лептоспир серогрупп Icterohaemorrhagiae и Canicola, выращенные на питательной среде Терских, инактивировали в течение 30 минут при 56^o, концентрировали центрифугированием при 10000 об/ч разводили физиологическим раствором до концентрации 5 • 10 мк/мл, соединяли в равных объемах лептоспиры двух серогрупп и иммунизировали баранов - самцов массой 35-40 кг по следующей схеме:
1-я иммунизация. 4 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 4 мл антигена в область подколенного лимфатического узла левой ноги.

2-я иммунизация через 5 дней - 4 мл антигена - в правую заднюю ногу и 4 мл антигена в правый подколенный узел.

3-я иммунизация через 35 дней - 8 мл антигена внутримышечно.

4-я иммунизация через 2 дня - 16 мл антигена подкожно.

5-я иммунизация через 2 дня - 24 мл антигена подкожно.

6-я иммунизация через 2 дня - 40 мл антигена подкожно.

7-я иммунизация через 2 дня - 48 мл антигена подкожно.

Через 10 дней после последней иммунизации производили кровопускание и определяли титр антител в реакции микроагглютинации с лептоспирами серогрупп Icterohaemorrhagiae и Canicola. Титр антител составляет 1:50000 1:100000.

Весь цикл иммунизации баранов составляет 58 дней.

Пример 2.

Культуры лептоспир серогруппы Grippotyphosa для иммунизации готовили так же, как в примере 1, и вводили их баранам массой 35-40 кг по следующей схеме:
1-я иммунизация - 6 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 6 мл антигена в область подколенного лимфатического узла левой ноги.

2-я иммунизация - через 5 дней - 6 мл антигена в правую заднюю ногу внутримышечно и столько же антигена в область правого подколенного узла.

3-я иммунизация - через 35 дней - 12 мл антигена внутримышечно.

4-я иммунизация - через 2 дня - 20 мл антигена подкожно.

5-я иммунизация - через 2 дня - 28 мл антигена подкожно.

6-я иммунизация - через 2 дня - 44 мл антигена подкожно.

7-я иммунизация - через 2 дня - 52 мл антигена подкожно.

Через 8 дней после последней иммунизации производили забор крови.

В реакции микроагглютинации с лептоспирами серогруппы Grippotyphosa титр антител составил 1:50000-1:100000.

Весь цикл иммунизации баранов составил 58 дней.

Пример 3.

Культуру лептоспир серогруппы Pomona готовили для иммунизации так же, как в примере 1, и вводили кроликам массой 3 кг по следующей схеме:
1-я иммунизация - 0,3 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 0,3 мл антигена в левый подколенный лимфатический узел.

2-я иммунизация - через 5 дней - 0,3 антигена внутримышечно в область правой задней ноги и 0,3 мл - в правый подколенный узел.

3-я иммунизация - через 35 дней - 0,6 мл антигена внутримышечно.

4-я иммунизация - через 2 дня - 1,2 мл антигена подкожно.

5-я иммунизация - через 2 дня - 1,8 мл антигена подкожно.

6-я иммунизация - через 2 дня - 3 мл антигена подкожно.

7-я иммунизация - через 2 дня -3,6 мл антигена подкожно.

Через 10 дней после последней иммунизации производили забор крови. В реакции микроагглютинации титр антител 1:50000. Весь цикл иммунизации составил 58 дней.

Пример 4.

Культуру лептоспир серогруппы Pomona готовили для иммунизации так же, как в примере 1, и вводили кроликам массой 3 кг по следующей схеме:
1-я иммунизация - 0,3 мл антигена внутримышечно в левую заднюю ногу и 0,3 мл в левый подколенный лимфатический узел.

2-я иммунизация - через 5 дней - 0,3 мл антигена внутримышечно в область правой задней ноги и 0,3 мл - в правый подколенный узел.

3-я иммунизация - через 5 дней - 0,6 мл антигена внутримышечно.

4-я иммунизация - через 5 дней - 1,2 мл антигена вводим подкожно.

5-я иммунизация - через 5 дней - 1,8 мл антигена подкожно.

6-я иммунизация - через 5 дней - 3 мл антигена подкожно.

7-я иммунизация - через 5 дней - 3,6 мл антигена подкожно.

Через 10 дней после последней иммунизации производили забор крови. В реакции микроагглютинации титр антител 1: 6400-1: 12800.

Весь цикл иммунизации составил 40 дней.

В последующие дни (через 20 и 30 дней после последней иммунизации) нарастания титра антител не было.

Изменение интервалов между введением антигена сократило сроки иммунизации, но не позволило получить сыворотки с высокими титрами антител.

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и может быть использовано для получения противолептоспирозных сывороток для приготовления диагностических и лечебных препаратов. Способ предусматривает введение лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови. Предложено лептоспиры первоначально вводить в одну конечность внутримышечно и в область лимфатического узла по 1х10⁸ - 1,5x10⁸ микробных клеток (мк) на 1 кг массы и через 5-6 суток - в другую конечность по той же схеме. Через 35-40 дней проводят ревакцинацию в нарастающей дозе: первую - внутримышечно 1х10⁸ - 1,5х10⁸ мк, затем подкожно 2х10⁸ - 2,5х10⁸ мк, 3х10⁸ - 3,5х10⁸ мк, 5х10⁸ - 5,5х10⁸ мк, 6х10⁸ - 6,5х10⁸ мк на кг массы через каждые двое суток. Способ позволяет получить сыворотки со стабильно высокими титрами специфических антител и сократить сроки иммунизации.

Способ получения гипериммунной сыворотки против лептоспир путем введения лептоспир продуценту сыворотки с последующим забором крови от продуцента, отличающийся тем, что лептоспиры первоначально вводят в одну конечность внутримышечно и в область лимфатического узла по 1 х 10⁸ - 1,5 х 10⁸ микробных клеток (мк) на 1 кг массы, через 5 - 6 суток в другую конечность по той же схеме, а через 35 - 40 дней проводят ревакцинацию в нарастающей дозе: первую - внутримышечно 1 х 10⁸ - 1,5 х 10⁸ мк, затем подкожно 2 х 10⁸ - 2,5 х 10⁸ мк, 3 х 10⁸ - 3,5 х 10⁸ мк, 5 х 10⁸ - 5,5 х 10⁸ мк, 6 х 10⁸ - 6,5 х 10⁸ мк на 1 кг массы через каждые двое суток.