СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РОДОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ У ЖИВОТНЫХ Российский патент 2000 года по МПК A61K39/35 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в диагностике инфекционных болезней животных.

Известные способы диагностики родококковых инфекций предусматривают патологоанатомические исследования и бактериологический анализ пораженных органов и тканей. При этом необходимо проводит бактериологические исследования мокроты, молока, навоза, мочи, а при отрицательных результатах произвести диагностический убой и тщательный осмотр всех органов и тканей с последующим бактериологическим исследованием взятых проб. Для диагностики некоторых хронических инфекций (туберкулез, бруцеллез, сап, туляремия и др.) применяют аллергический способ, который основан на феномене повышенной чувствительности замедленного типа, заключающийся повышенной реакцией сенсибилизированного макроорганизма на повторное введение незначительного количества аллергена (1,2). Обычно пробу ставят на коже животного. Аналогичный способ для диагностики родококковой инфекции не известен так же, как не разработан аллерген.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является аллергический способ диагностики туберкулеза с помощью туберкулина, при котором сенсибилизированный родококками макроорганизм отвечает нечетко выраженной неспецифической реакцией на внутрикожное введение препарата.

Недостатком этого способа является низкая чувствительность туберкулина, проявляющаяся в виде неспецифических реакций у животных, зараженных родококками. При этом этиологический фактор сенсибилизации остается невыявленным, а применяемые меры профилактики и борьбы оказываются неэффективными. Кроме того, патологоанатомические и бактериологические исследования на родококковую инфекцию требуют дополнительных материальных и трудовых расходов, обязательного убоя животных. Процесс постановки диагноза удлиняется до 3 месяцев.

Целью изобретения является повышение эффективности прижизненной диагностики родококковой инфекции.

Указанная цель достигается тем, что в способе аллергической диагностики болезней, при котором в качестве диагностикума используется специфический аллерген, который вводится внутрикожно в верхней средней трети шеи крупного рогатого скота в дозе 0,2 мл, с учетом и оценкой реакции через 72 часа, согласно предлагаемому способу для диагностики родококковой инфекции в качестве диагностикума используют более чувствительный и специфичный родококковый аллерген. Родококковый аллерген вводится внутрикожно, в объеме 0,2 мм, в верхнюю часть средней трети шеи. Учет и оценку реакции проводят через 72 часа после введения препарата. Реагирующими считают животных, у которых обнаруживают разницу в утолщении кожной складки в месте введения аллергена в 3 и более мм по сравнению с толщиной складки неизмененной кожи.

Заявляемое техническое решение отличается от прототипа тем, что в качестве диагностикума используется аллерген, изготовленный из родококков по следующей прописи: чистая культура бактерий Р.бронхиалис высевается на жидкую синтетическую среду Сотона в колбах и инкубируется в термостате при 37^oC в течение 2 месяцев. При этом обильная бакмасса образует на поверхности среды толстый (до 1 см), морщинистый слой, а крупные конгломераты оседают на дно колбы. Колбы вместе с культурой автоклавируют при 120^oC 30', отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием при 4000 об/мин - 20'. Осажденный белок отделяют, двукратно отмывают и чистый белковый осадок растворяют в дистиллированной воде до концентрации остаточного азота 0,7 мг/мл и стерилизуют, пропуская через фильтр Зейтца.

Это отлично позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию "новизна". Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, не выявлены в других технических решениях при изучении литературы в данной области, а именно в диагностике родококковой инфекции и, следовательно, обеспечивают заявляемому решению соответствие критерию "существенные отличия".

Опыты по отработке эффективности способа (определение чувствительности, специфичности, дозы препарата) проводили на зараженных родококками 2-годичных бычках. Оптимальной диагностической дозой оказался объем аллергена 0,2 мл. Использование его в иных дозах приводило либо к снижению чувствительности способа, либо к перерасходу аллергена. Результаты опытов приведены в табл. 1 и 2.

Пример 1. В опыт были взяты 10 голов молодняка крупного рогатого скота, сенсибилизированные родококкус бронхиалис. Предварительно выстригали и дезинфицировали 70^o спиртом участок кожи размером 3 см в диаметре в верхней средней трети шеи. Аллерген вводили в центре выстриженного участка с помощью шприца с бегунком вместимостью 1 мл и иглой для внутренних инъекций (N 0606, ТУ 46-22-607-80) в дозе 0,1 мл с правой и 0,2 мл с левой стороны шеи. Учет и оценку реакции проводили через 24, 48 и 72 ч после введения препарата. Реагирующими считали животных, у которых обнаруживали разницу в толщине кожной складки в месте введения аллергена в сравнении с таковой неизменной кожи не менее 3 мм. При этом на дозу 0,1 мл реагировали 6 животных со средней интенсивностью реакций 5,61 ± 0,44, тогда как на дозу 0,2 мл реагировали 9 животных со средней интенсивностью реакций 8,09 ± 0,23 мм.

Пример 2. В опыт были взяты 10 голов молодняка крупного рогатого скота, сенсибилизированные Р. бронхиалис. Предварительно выстригали и дезинфицировали 70^o спиртом участок кожи с размером 3 см в диаметре в верхней трети шеи. Аллерген вводили в центр выстриженного участка с помощью шприца с бегунком вместимостью 1 мл и иглой для внутрикожных инъекций (N 0606, ТУ 46-22-607-60) в дозах 0,2 мл с правой и 0,3 мл с левой стороны шеи. Учет и оценку реакции проводили через 24, 48 и 72 ч после введения препарата. Реагирующими считали животных, у которых обнаруживали разницу в толщине кожной складки в месте введения аллергена в сравнении с таковой неизменной кожи не менее 3 мм. При этом на дозу 0,2 мл реагировали 7 животных со вредней интенсивностью реакции 7,77 ± 0,21 мм, тогда как на дозу 0,3 мл реагировали 7 животных со средней интенсивностью - 7,78 ± 0,30 мм.

Пример 3. В опыт были взяты 10 голов молодняка крупного рогатого скота, сенсибилизированные Р. бронхиалис. Предварительно выстригали и дезинфицировали 70^o спиртом участок кожи размером 3 см в диаметре в верхней средней трети шеи. Аллерген вводили в центр выстриженного участка с помощью шприца с бегунком вместимостью 1 мл и иглой для внутрикожных инъекций в дозах 0,3 мл с правой и 0,4 мл с левой стороны шеи. Учет и оценку реакции проводили через 24, 48 и 72 часа после введения препарата. Реагирующими считали животных, у которых обнаруживали разницу в толщине кожной складки в месте введения аллергена в сравнении с таковой неизменной кожи не менее 3 мм. При этом на дозу 0,3 мл реагировали 7 животных со средней интенсивностью реакции 7,31 ± 0,26 мм, тогда как на дозу 0,4 мл реагировали 8 животных со средней интенсивностью - 7,32 ± 0,29 мм.

Из приведенных примеров следует, что на дозу 0,1 мл реагирует меньшее число животных, соответственно с меньшей интенсивностью реакций, чем на все остальные дозы. Не установили достоверных различий между количеством реагирующих животных на дозы 0,3; 0,4 и 0,2 мл. Поэтому оптимальной дозой аллергена для использования в целях диагностики родококковой инфекции была принята доза в объеме 0,2 мл. Вероятно, подведение концентрации белка в готовом препарате к количественному содержанию его в туберкулине (0,7 мг/мл) имеет решающее значение в определении оптимальной дозы в объемном выражении.

Источники информации
1. Борисович Ю. Ф. , Кириллов Л. В. Ветеринарные препараты - Москва, "Колос" 1981 г. - 448 с.

2. Фрадкин В.А. Диагностические и лечебные аллергены. -Москва, "Медицина", 1990 г. - 226 с.

3. Кунакова А.А. Справочник ветеринарного врача. -М., "Колос", 1996. - с. 29-30.

4. Курская биофабрика 100 лет. -Курск, 1996. - с. 374-403.

5. Петров Р.В. Иммунология. М., "Медицина", 1983, - с. 368.

6. Шевырев Н. С. Совершенстование промышленной технологии сухого очищенного туберкулина для млекопитающих //Тр. ВГНКИ ветпрепаратов. М., 1972. - т. XVIII. - с. 59.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к диагностике инфекционных болезней животных. Аллергический способ диагностики болезней, вызываемых бактериями из рода Rhodococcus, заключается во внутрикожном введении животному аллергена из родококков в дозе 0,2 мл и учете аллергической реакции. Способ позволяет эффективно и в короткие сроки установить сенсибилизацию макроорганизма, вызванную данными бактериями, что позволит принять соответствующие меры борьбы. 2 табл.

Способ диагностики родококковой инфекции животных, неспецифически реагирующих на внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих, отличающийся тем, что в качестве диагностикума используется аллерген из родококков и вводится животному внутрикожно в дозе 0,2 мл.