3-О-2-ДЕЗОКСИ-α-L-РАМНОПИРАНОЗИД МЕТИЛОВОГО ЭФИРА ГЛИЦИРРЕТОВОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 2000 года по МПК C07J63/00 A61K31/56 

Предлагаемое соединение относится к новому биологически активному химическому соединению, конкретно к 3-О-[2-дезокси- α - L-рамнопиранозил]-11-оксо-20 β -метоксикарбонил-30-норолеан-12-ен-3 β -олу (1) формулы:

проявляющему гепатопротекторную активность (Номер Государственной регистрации 10616295).

В последнее время ведется интенсивный поиск новых веществ, обладающих гепатопротекторными свойствами, повышающих устойчивость печени к патологическим воздействиям, усиливающих ее обезвреживающие функции путем повышения активности ее ферментных систем, а также способствующих восстановлению ее функций при различных повреждениях.

Соединение (1) и его свойства в литературе не описаны.

Наиболее близким по структуре и свойствам к предлагаемому соединению является тритерпеновый гликозид - глицирризиновая кислота (ГК) (2) - основной ингредиент экстракта корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra) и уральской (Gl. uralensis), поэтому в качестве препарата сравнения мы использовали ГК (2) в равных дозах с соединением (1).

ГК защищает гепатоциты крыс при отравлении CCl₄ и галактозамином [1], а при профилактическом введении предохраняет гепатоциты крыс от некроза [2]. ГК снижает уровень трансминазы сыворотки у мышей, отравленных CCl₄, т.е. является гепатопротектором [3, 4]. ГК в сочетании с аминокислотами применяется в Японии для лечения хронических вирусных гепатитов и цирроза печени (препарат SNMC) [4].

В настоящее время в качестве специальных гепатопротекторных средств внедрены в практику некоторые отечественные препараты флавоноидной структуры, одним из которых является силибор (Siliborum) [5], также применяемый при лечении гепатитов и цирроза печени. Поэтому в качестве фармакологического аналога мы использовали силибор в равной дозе с предлагаемым гликозидом (1) и ГК.

В заявленном техническом решении синтезировано новое малотоксичное соединение среди гликозидов глицирретовой кислоты, а именно: 3-О-[2-дезокси- α -L-рамнопиранозид] -11-оксо-20 β -метоксикарбонил-30-норолеан-12-ен-3 β -ол (1), проявляющее гепатопротекторную активность.

Острая токсичность соединения (1) определялась на белых беспородных мышах массой 15-20 г при введении в желудок. Параметры токсичности вычислялись по Литгфильду и Уилкоксону. LD₅₀ соединения (1) составила 5500 мг/кг. На основании Постановления Госкомитета стандартов СМ СССР от 10 марта 1976 г. N 579 данное соединение относится к IV классу малоопасных веществ.

Влияние соединения (1) на функциональное состояние печени оценивали по желчесекреторной и желчевыделительной функции печени на интактных крысах и у животных с экспериментальным гепатитом, вызванным CCl₄, в сравнении с глицирризиновой кислотой и силибором. Все препараты вводились в дозе 50 мг/кг. Результаты опытов приведены в табл. 1 и 2.

Установлено, что соединение (1) в дозе 50 мг/кг увеличивает секрецию желчи гепатоцитами крыс по сравнению с контролем (p < 0.05) подобно силибору и ГК (табл.1), однако соединение (1) во все сроки наблюдения усиливает секрецию желчи эффективнее известного гепатопротектора силибора на интактных крысах, особенно на 2-ой и 9-й часы опыта (p< 0.05). Эффект соединения (1) был также более выражен, чем у ГК (2). Соединение (1) усиливает желчеобразовательную функцию гепатоцитов эффективнее препаратов сравнения (табл. 1).

В табл. 2 показано влияние соединения (1) на функциональное состояние печени при гепатите у крыс, вызванном CCl₄. При гепатите резко угнетается желчеобразовательная и желчевыделительная функции печени по сравнению с интактными животными. Как видно из таблицы, соединение (1) также оказалось более активным, чем препараты сравнения - силибор и ГК (2) при CCl₄ - гепатите. Силибор повышает функциональную активность гепатоцитов лишь на 1-й час опыта. ГК - на 1-е часы наблюдения, а соединение (1) увеличивает секрецию желчи во все сроки опыта (p< 0.05-0.01). Кроме того, соединение (1) увеличивает желчеобразование (общий вес желчи) у животных с экспериментальным гепатитом активнее глицирризиновой кислоты и силибора (табл. 2).

Таким образом, 3-О-2-дезокси- α -L-рамнопиранозид метилового эфира глицирретовой кислоты (1) обладает выраженным гепатопротекторным действием в дозе 50 мг/кг, превосходящим эффект известного гепатопротектора силибора и глицирризиновой кислоты.

Синтез соединения (1) проводили методом электрофильного гликозилирования [6] метилового эфира глицирретовой кислоты (3) ди-О-ацетил-L-рамналем (4) в среде хлористого метилена в присутствии ди-(сим-коллидин)-иодоний перхлората (IDCP) и молекулярных сит 4 (схема I).

Промежуточный 2-дезокси-2-иод-гликозид (5) выделяли колоночной хроматографией на силикагеле и деиодировали путем гидрогенолиза в присутствии 10% Pd/C и триэтиламина.

Образующийся ацетилированный гликозид (6) дезацетилировали 5%-ным раствором КОН в метаноле, выход соединения (1) после очистки составил 74%.

Сущность технического решения иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение 3-О-[2-дезокси- α -L-рамнопиранозил]-11- оксо-20 β -метоксикарбонил-30-норолеан-12-ен-3 β -ола (1).

2 ммоль (0.43 г) ди-О-ацетил-L-рамналя (4) и 2 ммоль (0.97 г) метилового эфира глицирретовой кислоты (3) растворяют в 50 мл абсолютного CH₂Cl₂, в присутствии прокаленных молекулярных сит 4 перемешивают в течение 30 минут, затем добавляют 1.1 г (симколлидин)₂ICO₄(IDCP). Смесь перемешивают в течение 3-4 часов (контроль по ТСХ), фильтруют, промывают 10%-ным раствором Na₂S₂O₃ (2 • 15 мл), сушат Na₂SO₄, упаривают. Выделяют с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂ - MeOH, 200 : 1, 150:1, 100:1, 50:1). Смесью растворителей 150:1 ---> 100:1 вымывают 1.38 г гликозида (5) (84%), который растворяют в 60 мл этилацетата, добавляют несколько капель Et₃N, в присутствии 1.4 г 10%-ного Pd/C гидрируют в течение 10 дней. Катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают, остаток растворяют в 130 мл метанола, приливают 20 мл 5%-ного раствора КОН в метаноле, через 1.5 часа нейтрализуют ионнообменной смолой КУ-2-8 (H⁺-форма), растворитель упаривают, гликозид (6) выделяют из хлористого метилена - пентана. Выход 1.11 г (89%), белый порошок. Т.пл. = 186-188^oC. C₃₇H₅₈O₇ (614.9). R_f = 0.48 (CH₂Cl₂) : MeOH = 10:1). Найдено, %: C - 72.3; H - 9.4. Вычислено, %: C - 72.3; H - 9.5. [α]20D

= +58^o (с 0.06, CHCl₃). УФ-спектр (MeOH), λ_max/нм 247.0 (lg ε 4.32). ИК-спектр ( ν , см^-1, вазелиновое масло) : 1650 (C₁₁=0), 1730 - 1720 (COOMe), 3600-3200 (OH). Спектр ЯМР ¹³С (CDCl₃, δ , м.д.): 20.8 (C2), 88.6 (C3), 200.4 (C11), 128.6 (C12), 169.3 (C13), 174.0 (C30), 51.9 (C31), 100.2 (Cl'), 39.3 (C2'), 69.5 (C3'), 78.5 (C4'), 67.7 (C5'), 17.5 (C6').

Пример 2. Изучение гепатопротекторной активности.

Влияние соединения (1) на функциональное состояние печени оценивали по желчесекреторной и желчевыделительной функции печени по методике Н.П.Скакунова и А.Н. Олейник (1967) [7] на интактных крысах и у животных с экспериментальным гепатитом (CCl₄). Секрецию желчи выражали в мг/мин на 100 г массы животного, а желчевыделительную функцию по общему количеству выделенной желчи за каждый час и в сумме за 4 часа наблюдения на 100 г массы. крыс. Опыты проводили на 54 крысах массой 180-200 г. В качестве препаратов сравнения использовали глицирризиновую кислоту - основной гликозид солодкового корня и известный гепатопротектор - силибор в равных дозах (50 мг/кг).

В первой серии опытов изучали влияние указанных препаратов на функциональное состояние печени у интактных животных. Результаты опытов приведены в табл. 1.

Установлено, что соединение (1), подобно силибору и ГК, увеличивает секрецию желчи гепатоцитами крыс во все сроки по сравнению с контролем (p > 0.05). Во все сроки наблюдения соединение (1) способствует усилению секреции желчи эффективнее препаратов сравнения - силибора (p < 0.05) и глицирризиновой кислоты. Соединение (1) также стимулирует желчеобразовательную функцию гепатоцитов печени более выражено, чем ГК и силибор.

В следующей серии опытов изучали влияние препаратов на функциональную активность печени крыс при гепатите, вызванном CCl₄ по методике [8].

Результаты опытов представлены в табл. 2. При гепатите резко угнетается желчеобразовательная и желчевыделительная функция печени по сравнению с интактными животными (p < 0.05-0.01).

Как видно из таблицы 2, соединение (1) увеличивает секрецию желчи во все сроки опыта (p < 0.05 - 0.01). Препарат сравнения - силибор повышает функциональную активность гепатоцитов лишь на 1-й час наблюдения, а ГК - в первые 3 часа опыта. Соединение (1) также увеличивает желчеобразование эффективнее ГК и силибора (табл. 2).

Выводы:
3-О-[2-дезокси- α -L-рамнопиранозил]-11-оксо-20 β -метоксикарбонил-30-норолеан-12-ен-3 β -ол является эффективным малотоксичным гепатопротектором, превосходящим по активности препараты сравнения ГК и силибор.

Изобретение относится к органической химии, к новому химическому соединению, а именно к 3-О-[2-дезокси-α-L-рамнопиранозил]-11-оксо-20β-метоксикарбонил-30-норолеан-12-ен-3β-олу формулы

проявляющему гепатопротекторную активность. Предлагаемое соединение является малотоксичным веществом, обладающим выраженной гепатопротекторной активностью. Гепатопротекторное действие соединения (I) превосходит эффект глицирризиновой кислоты и известного гепатопротектора силибора. 2 табл.

3-О-2-Дезокси-α-L-рамнопиранозид метилового эфира глицирретовой кислоты

проявляющий гепатопротекторную активность.