СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ МОДУЛЯТОРА СВЯЗЫВАНИЯ МЕЖДУ ПОЛИПЕПТИДОМ α И VCAM-1 (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2003 года по МПК C07K14/705 G01N33/50 

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для поиска модулятора биологической активности β₂-интегрина человека. Модулятор связывания между полипептидом α_d(α-субъединица β₂-интегрина) и VCAM-1 идентифицируют путем контактирования полипептида α_d с последовательностью аминокислот SEQ ID N2, 53, 55 или 103 и VCAM-1 и детектированием связывания. Полипептид α_d или VCAM-1 иммобилизуют на твердом носителе, неиммобилизованный партнер связывания метят детектируемым агентом, в частности флуоресцентным агентом. Детектирование связывания осуществляют по эмиссии света из флуоресцентного агента. Изобретение позволяет разрабатывать практические средства для терапевтического вмешательства в связанные с β₂-интегрином иммунные и воспалительные реакции. 2 с и 2 з.п.ф-лы, 4 ил., 2 табл.

1. Способ идентификации модулятора связывания между полипептидом α_d и VCAM-1, включающий в себя а) контактирование полипептида α_d как изложено в SEQ ID Nos: 2, 53, 55 или 103, и VCAM-1 в присутствии и в отсутствие предполагаемого модуляторного соединения; b) детектирование связывания между α_d и VCAM-1 и с) идентификацию предполагаемого модуляторного соединения в связи с уменьшенным или увеличенным связыванием между α_d и VCAM-1 в присутствии предполагаемого модулятора в сравнении со связыванием в отсутствие предполагаемого модулятора. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что его осуществляют в клетке-хозяине, содержащей растворимый α_d и растворимый VCAM-1, а уменьшенное или увеличенное связывание определяют количественно посредством измерения зависимого от связывания фенотипического изменения в клетке-хозяине, возникающего вследствие изменения в экспрессии продукта репортерного гена. 3. Способ идентификации модулятора связывания между полипептидом α_d и VCAM-1, включающий в себя а) иммобилизацию полипептида α_d как изложено в SEQ ID Nos: 2, 53, 55 или 103, или его фрагмента или VCAM-1 или его фрагмента на твердом носителе; b) мечение неиммобилизованного партнера связывания детектируемым агентом; с) контактирование указанного иммобилизованного партнера связывания с указанным меченым партнером связывания в присутствии и в отсутствие предполагаемого модуляторного соединения, способного специфически реагировать с α_d или VCAM-1; d) детектирование связывания между указанным иммобилизованным партнером связывания и указанным меченым партнером связывания и е) идентификацию модулирующих соединений как соединений, влияющих на связывание между указанными иммобилизованным партнером связывания и меченым партнером связывания. 4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что α_d или VCAM-1 иммобилизуют на твердом носителе, покрытом или пропитанном флуоресцентным агентом, указанный неиммобилизованный партнер связывания метят соединением, способным возбуждать указанный флуоресцентный агент, и взаимодействие α_d с партнером связывания α_d детектируют по эмиссии света из указанного флуоресцентного агента.