СПОСОБ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ Российский патент 2006 года по МПК A61K39/10 A61K39/02 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к профилактике инфекционных заболеваний.

Известен способ специфической профилактики инфекционного эпидидимита баранов, основанный на использовании живой вакцины из штамма В. melitensis Rev-1, которая вводится конъюнктивально в дозе 100 млн микробных клеток. Применяется на баранах всех возрастов, формируя иммунитет достаточной напряженности в течение 6-ти месяцев после прививки. Известным методом неблагополучные по инфекционному эпидидимиту отары баранов оздоровливают в течение 1,5-2-х лет, проводят 6-7 диагностических исследований (см. Наставление №13-3-2/1419 от 13.10.1998 г.).

Однако вакцина из штамма Rev-1, представляющая собой взвесь микробных клеток на буферной основе, которую готовят на базе ВНИИБТЖ, имеет ограниченный срок годности (один месяц). Кроме того, требуются особые условия хранения и транспортировки (температура 2-8°С), что ведет к гибели части живых микробных клеток вакцинного штамма и снижению результативности применения препарата.

Задачей изобретения является повышение эффективности специфической профилактики инфекционного эпидидимита баранов путем использования вакцины из штамма В. abortus 19 в дозе 2-4 млрд микробных клеток, которую вводят конъюнктивально животным всех возрастов, а баранчикам текущего года рождения с 3-4 мес. возраста, затем проводят ежегодную ревакцинацию в той же дозе до оздоровления фермы.

Препарат выпускается промышленным способом в лиофилизированной форме, что удлиняет срок его годности.

Использование вакцины из штамма 19 при конъюнктивальном введении в дозе 2-4 млрд микробных клеток формирует напряженный иммунитет при слабовыраженной поствакцинальной серопозитивности, повышает эффективность специфической профилактики в 1,5 раза.

Пример 1. Определение оптимальной дозы для конъюнктивальной иммунизации вакциной из штамма B. abortus.

Поствакцинальные реакции (РА и РСК с бруцеллезным антигеном) изучали на 60 животных, которых поделили на три группы: 1-ю - привили в дозе 500 млн. микробных клеток, 2-ю - 4 млрд. микробных клеток, 3-ю - 10 млрд. микробных клеток.

Исследования проводили на 30, 60, 90 и 120 дни после прививки. Результаты серологических исследований показывают, что РА и РСК в 1-й и 2-й группах полностью угасают к 90-му дню после прививки, тогда как в 3-й группе (10 млрд. микробных клеток) поствакцинальные реакции (РА) продолжают сохраняться на протяжении всего опыта, т.е. 120 дней.

Для проверки иммунитета из каждой группы было отобрано по 6 баранов, которых через 120 дней после прививки заражали вирулентной культурой В. ovis подкожно в дозе 40 млрд. микробных клеток. Результаты опыта (табл.1) показали, что дозы 4 и 10 млрд. микробных клеток обеспечивают формирование равноценного иммунитета на уровне 83,3%. Учитывая обстоятельство, что при использовании дозы 2-4 млрд. микробных клеток значительно раньше угасают поствакцинальные реакции, эта доза вакцинного штамма В. abortus 19 является оптимальной.

Таблица 1
Результаты изучения иммунитета у баранов, привитых вакциной из штамма B.abortus конъюнктивально в различных дозах№ п/пДоза вакциныКоличество животныхЗаразилосьИммунитет1500 млн м.к.6350,024 млрд м.к.6183,3310 млрд м.к.6183,34контроль330

Пример 2. Проводили сравнительную оценку реактогенных и агглютиногенных свойств вакцин из штаммов В. abortus 19 и В. melitensis Rev-1 в производственных условиях на половозрелых баранах-производителях, которых привили конъюнктивально в дозе 4 млрд микробных клеток вакциной из штамма В. abortus 19 при соответствующем контроле и также вакциной из штамма Rev-1 в дозе 100 млн микробных клеток. Наблюдения за подопытными животными проводились клиническим и серологическим методами (РА и РСК с бруцеллезным антигеном, РДСК с овисным антигеном и РИД с O-полисахаридным бруцеллезным антигеном) в течение 250 дней.

Результаты исследования показали следующие данные. При клиническом методе изучения реактогенных свойств вакцины из штамма 19 (исследования температуры, пульса, дыхания, аппетита, общего поведения, наличие отека, воспалительных и гнойных процессов), введенной конъюнктивально в дозе 4 млрд микробных клеток, никаких общих или местных отклонений не установлено в течение всего срока наблюдения (10 дней). В том числе не обнаружено клинических признаков эпидидимита или орхита.

В обеих группах серопозитивность после иммунизации животных конъюнктивальным методом агглютиногенными вакцинами выражена слабо. Практически уже через 3 месяца РА и РСК были отрицательными. При этом синтез антител и сроки их сохранения зависели от дозы вакцины. При иммунизации штаммом Rev-1 в дозе 100 млн микробных клеток на 30-й день регистрировалась только РСК у 5,8% животных при среднем титре 1:10, а на 60-й день - только РА у 24,6% со средним титром 43,7 ME.

У баранов, привитых штаммом 19 в дозе 4 млрд микробных клеток, на 30-й день отмечались в РА у 11,7% (средний титр 25,0 ME) и в РСК также у 11,7% (средний титр 1:5). К 60-му дню эти реакции сохранялись соответственно у 12,5% (25,0 ME) и у 6,2% (1:10).

К 90-му дню у подопытных животных, привитых вакцинами из штаммов В. abortus 19 и В. melitensis Rev-1 наблюдали угасание поствакцинальных реакций, то есть по агглютиногенным свойствам вакцины не отличаются.

Результаты серологических исследований на 120, 150, 180, 210 и 250 день были отрицательные. Что касается РДСК с овисным антигеном и РИД с O-полисахаридным бруцеллезным антигеном, то они во все сроки исследования у всех животных были отрицательными.

Пример 3. Напряженность иммунитета у баранов, привитых вакцинами из штаммов 19 и Rev-1, изучалась в эксперименте через 250 дней после прививки. Опыт был поставлен на экспериментальной базе ВНИИБТЖ. Животных для заражения завозили из хозяйства, в котором проводилось изучение поствакцинальных реакций.

Опыт проводился по следующей схеме. Первую группу (9 гол.) животных прививали конъюнктивально вакциной из штамма 19 в дозе 4 млрд микробных клеток Вторую группу (9 гол.) баранов также иммунизировали конъюнктивально вакциной из штамма Rev-1 в дозе 100 млн микробных клеток. Третья группа (5 гол.) служила контролем (не вакцинировали). Интактным животным одновременно с подопытными баранами 1-й и 2-й групп было введено 40 млрд микробных клеток вирулентной культуры B. ovis.

Серологические исследования проводились до и после заражения на 7-й, 14-й и перед убоем на 30-й дни. Материал от убитых животных исследовали бактериологически на мясо-печеночный-пептонный агар и мясо-печеночный-пептонный бульон с добавлением негативной сыворотки крупного рогатого скота.

Результаты опыта приведены в таблице 2, из которой следует, что иммунитет у животных, привитых вакциной из штамма 19, составил 77,8%, а у животных, вакцинированных штаммом Rev-1, составил 66,6%, то есть выше на 11,2%. Индекс инвазивности - соответственно 4,4 и 7,7.

Характерно, что у всех подопытных животных инфекция носила региональный характер. Тогда как в контроле все пять баранов были инфицированы с весьма высоким индексом инвазивности - 42,0.

Таблица 2
Результаты изучения иммунитета у барановГруппаВид и доза вакциныКол-во животныхЗаразилось гол.Абсолютный иммунитет, %Форма инфицированностиИндекс инвазиврегиональнаяжелезистаягенерализованная1шт. 19 4 млрд м.к. 9277,82--4,42Rev-1, 100 млн м.к.9366,63--7,73Контроль5500,021242,0

Изучение иммунологических реакций с помощью PA, PCK и РИД с бруцеллезными антигенами и РДСК с овисным антигеном показало, что у всех животных до заражения они были отрицательными (табл.3).

Таблица 3
Результаты серологических исследований барановГруппаВид и доза вакциныКол-во животныхРеагировало положит. в РДСК с овисным антигеномдо зараженияпосле заражения (дни)71430головср. титрголовср. титрголовср. титрголовср. титр1шт. 19,4 млрд микробных клеток9--61:10,891:57,891:34,42Rev-1, 100 млн микробных клеток9--41:7,591:4591:27,83Контроль5--11:1051:5151:16

(S-) антитела не выявлены ни у одного животного во все сроки исследования.

После введения вирулентной культуры В. ovis соответствующие овисные (R) антитела появились на 7-й день как у подопытных, так и контрольных баранов в невысоких средних титрах (в пределах 1:7,5-1:10,8). Максимально овисные комплементсвязывающие антитела у всех животных проявились на 14-й день после заражения, средний титр составлял от 1:45 до 1:57,8, т.е. повышался более чем в 5 раз. К 30-му дню антитела сохранялись у всех баранов, но титры снизились в 2-3 раза.

Таким образом, по иммуногенным показателям вакцина из штамма 19 имеет преимущество перед Rev-1 при конъюнктивальном методе её введения.

Пример 4.

Параллельно с изучением реактогенных, агглютиногенных и иммуногенных свойств вакцины из штамма 19 проводились исследования по выявлению способности препарата вызывать провокацию (проявление в крови) специфических овисных (R-) антител у баранов латентно (скрытно) больных инфекционным эпидидимитом.

С этой целью в производственных условиях в двух отарах, неблагополучных по ИЭБ, были поставлены специальные опыты. Схема и результаты опытов отражены в таблице 4, из которой следует, что штамм 19 обладает более выраженными провоцирующими свойствами по сравнению со штаммом Rev-1.

Из таблицы видно, что на 14-й день после введения вакцины из штамма 19 выявлено 22,1% реагирующих, после иммунизации штаммом Rev-1 - в два раза меньше /только 11,3%/. Аналогичная тенденция отмечена и при исследовании животных на 21-й день после вакцинации: в группе привитых штаммом 19 реагировало 27,2% баранов, а штаммом Rev-1 - только 19,3%.

Дополнительно к контролю выявлено методом провокации с помощью вакцины из штамма 19 на 14-й день после иммунизации 14,1% латентно больных инфекционным эпидидимитом баранов, а после прививки штаммом Rev-1, только 4,4%. На 21-й день после иммунизации животных эти показатели распределились соответственно 16,6% и 8,5%. Таким образом, провоцирующие свойства штамма 19 выражены в 2-3 раза выше, чем при использовании штамма Rev-1.

Таблица 4
Результаты исследования баранов на инфекционный эпидидимит при использовании различных провоцирующих средств№ п/пКол-во животныхВакцина, дозаДни исследования после вакцинацииРеагировалоВыявлено дополнительно к контролю, %всегоРСКРДСКчисло%число%число%166штамм 19, 4 млрд микробных клеток141422,11219,769,114,1211827,21522,7812,116,6262Rev-1, 100 млн микробных клеток14711,369,669,64,4211219,31117,7914,68,5328контроль1427,127,127,1 21310,7210,713,6

Эпизоотическая опасность животных-бруцеллоносителей, спровоцированных штаммом 19, подтверждена в 50,0% случаев результатами бактериологического исследования с применением биопробы на морских свинках.

Таким образом, предлагаемый способ профилактики обеспечивает более напряженный иммунитет у животных на 11,2% и выявляет в 2-3 раза больше латентно больных животных методом провокации антител.

Изобретение относится к области ветеринарии. Вакцину из штамма B. abortus 19 в дозе 2-4 млрд. микробных клеток вводят конъюнктивально животным всех возрастов, начиная с 3-4 месячного возраста. Затем проводят ежегодную ревакцинацию в той же дозе до оздоровления фермы. Способ позволяет повысить эффективность специфической профилактики инфекционного эпидидимита баранов. 4 табл.

Способ специфической профилактики инфекционного эпидидимита баранов, включающий иммунизацию конъюнктивально животных всех возрастов с 3-4 месячного возраста, ежегодную ревакцинацию до оздоровления фермы, отличающийся тем, что используют вакцину из штамма В. abortus 19 в дозе 2-4 млрд, микробных клеток, а ежегодную ревакцинацию осуществляют в той же дозе.