СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИДКОГО БАКТЕРИАЛЬНОГО КОНЦЕНТРАТА И ПРИМЕНЕНИЕ ЕГО В КАЧЕСТВЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ К ПИЩЕ Российский патент 2008 года по МПК A23C9/127 A23C21/02 A23N1/02 A23L1/30 

Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована для приготовления жидких бактериальных концентратов «Курунгин» или «Кумысин», применяемых в качестве биологически активных добавок к пище.

Известен способ получения закваски для приготовления кисломолочного напитка типа «Курунга», предусматривающий ферментацию обезжиренного молока кефирной грибковой закваской и хлебными крошками в соотношении 1,5:0,5 в течение 8 часов до образования сгустка кислотностью 120°Т в деревянной таре [Патент №2059380, Россия, МКИ А23С 9/12, Способ получения закваски для приготовления сброженного продукта типа «Курунга», опубл. 10.05.96, бюл. №13].

Однако кислотность продукта, полученного по вышеуказанному способу, низкая, что не обеспечивает соответствие органолептическим свойствам курунги, которая должна иметь кислотность 180-200°Т. Следует отметить, что хлебные крошки являются источниками дрожжей Sacch.cerevisiae, не характерных для микрофлоры курунги. Данные о предпочтительном культивировании закваски в деревянной таре свидетельствуют о нестабильности симбиоза микрофлоры кефирной грибковой закваски и хлебных крошек. Предлагаемая продолжительность культивирования закваски - 8 часов, недостаточна для достижения наиболее активной стадии развития лактобактерий и дрожжей, продуцирующих антибиотические вещества, витамины и др.

В связи с указанными причинами известный способ не позволяет получить закваску с характерными для курунги качественными показателями. Кроме этого, вышеуказанный способ не обеспечивает стойкости заквасок к длительному хранению.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ приготовления бактериального концентрата, предусматривающий приготовление питательной среды на основе молочной сыворотки, внесение инокулята, культивирование, раскисление питательной среды, отделение полученной биомассы (см. SU 1082371 А, А23С 9/12; C12N 1/20, 30.03.84 "Способ получения бактериального концентрата").

К причинам, препятствующим достижению указанного ниже технического результата при использовании вышеуказанного способа, принятого за прототип, относится то, что в известном способе получения бактериального концентрата в питательную среду вносят культуру уксуснокислых бактерий, после чего инокулируют молочнокислыми стрептококками, что не обеспечивает в готовом продукте необходимую кислотность, содержание спирта и летучих органических соединений.

Таким образом, при производстве жидких бактериальных концентратов "Кумысин" и "Курунгин", используемых в качестве биологически активных добавок к пище, основной задачей является подбор условий культивирования кефирной закваски и термофильных лактобактерий для достижения оптимального соотношения микроорганизмов, близкого к естественной микрофлоре кумыса и курунги.

Технический результат заявленной группы изобретений заключается в повышении кислотообразующей и спиртообразующей способности закваски и увеличении количества дрожжей.

Указанный технический результат, при осуществлении изобретения, достигается тем, что в способе приготовления жидкого бактериального концентрата, предусматривающем приготовление питательной среды на основе осветленной молочной сыворотки, внесение инокулята, культивирование, раскисление питательной среды, отделение полученной биомассы, согласно изобретению для активизации роста дрожжей в процессе приготовления питательной среды в молочнокислую сыворотку вносят картофельный отвар в количестве 7-10%, а в качестве инокулята для заквашивания питательной среды используют закваску, полученную путем культивирования кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий (болгарской и ацидофильной палочки) при температуре (30±2)°С в течение 2-3 суток.

Кроме того, особенность способа заключается в том, что для получения жидкого бактериального концентрата "Кумысин" кефирную грибковую закваску и термофильные лактобактерии (болгарскую и ацидофильную палочки) берут в соотношении 3:0,5:0,5 соответственно.

Кроме того, особенность способа заключается в том, что для получения жидкого бактериального концентрата "Курунгин" кефирную грибковую закваску и термофильные лактобактерии (болгарскую и ацидофильную палочки) берут в соотношении 1:0,5:0,5 соответственно.

Указанный технический результат достигается также при применении жидкого бактериального концентрата "Курунгин" или "Кумысин" в качестве биологически активной добавки к пище.

Отличительными признаками заявляемого изобретения являются новые условия культивирования, а именно использование в качестве инокулята закваски, полученной методом культивирования кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий, а также внесение в питательную среду картофельного отвара в количестве 7-10%.

Кроме того, отличительной особенностью заявляемого изобретения является применение жидкого бактериального концентрата "Курунгин" или "Кумысин", полученного предлагаемым способом, в качестве биологически активных добавок к пище.

Следует отметить, что способы приготовления курунговой и кумысной заквасок близки по технологии и составу микрофлоры. Основными компонентами являются различные виды дрожжей, мезофильных и термофильных лактобактерий, уксуснокислые бактерии, которые находятся в различных соотношениях в естественных заквасках. Многокомпонентность микрофлоры является основной проблемой, затрудняющей создание заквасок и их промышленное производство.

Известно, что микрофлора кефирной грибковой закваски представляет собой сложный симбиоз различных видов микроорганизмов, характерных для курунги и кумыса. Кроме того, установлено, что микрофлора кефирной закваски обладает уникальной способностью к саморегуляции состава в зависимости от воздействия физико-химических факторов и состава питательной среды.

Исходя из этого, нами была выдвинута гипотеза о возможности получения из кефирной грибковой закваски путем создания определенных условий культивирования популяции микроорганизмов, идентичной консорциуму микроорганизмов естественной курунговой и кумысной заквасок.

Характерной особенностью курунги является почти параллельное развитие молочнокислого и спиртового брожения. Необходимо отметить, что развитие дрожжей находится в весьма сильной зависимости от хода молочнокислого процесса. Для их роста благоприятна кислая реакция среды. Поскольку грибковая закваска не обладает высокой кислотностью, с целью активизации кислотообразования в начальной стадии культивирования в закваску введены чистые культуры болгарской и ацидофильной палочек.

Повышение температуры культивирования до 30°С стимулирует развитие дрожжевой микрофлоры и термофильных лактобактерий. В связи с этим, исследование по подбору соотношения культур в закваске проводили при 30°С с учетом развития дрожжевой микрофлоры и активности спиртового брожения. Экспериментальные данные представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что соотношение 1:0,5:0,5 наиболее благоприятно для спиртового брожения. При этом соотношении созданы оптимальные рН среды, стимулирующие развитие дрожжей. Дальнейшее повышение количества активных кислотообразователей приводит к подавлению спиртового брожения молочнокислым из-за недостаточного количества дрожжевых клеток, отличающихся более длительным инкубационным периодом развития, чем лактобактерии.

Таблица 1.
Подбор соотношения кефирной грибковой закваски, болгарской и ацидофильной палочек в курунговой закваскеПоказателиВарианты соотношения кефирной грибковой закваски: L.bulgaricum: L.acidophilum1:0,7:0,71:0,5:0,51:0,3:0,3Продолжительность культивирования, ч484848Титруемая кислотность,°Т270220180Активная кислотность, рН2,93,64,1Массовая доля молочной кислоты, %2,21,81,4Массовая доля спирта, % об.0,40,50,2Общее количество дрожжей, КОЕ в 1 см³3·10²5·10⁵2·10³

С другой стороны, при увеличении количества кефирной грибковой закваски начало спиртового брожения задерживается из-за недостаточной кислотности среды.

Таким образом, оптимальным соотношением кефирной грибковой закваски, ацидофильной и болгарской палочек для создания курунговой закваски является 1:0,5:0,5, соответственно.

Активность, биохимические и органолептические показатели закваски зависят от количественного состава всех групп микроорганизмов. Температура культивирования является одним из основных физических факторов, регулирующих микробиологические процессы.

В дальнейших исследованиях изучали влияние температуры культивирования на динамику микробиологических процессов в симбиотической закваске.

Полученные результаты представлены на фиг.1 и 2.

Анализ данных, представленных на фиг.1 и 2, показывает, что повышение температуры культивирования закваски до 30°С (фиг.1) интенсифицирует развитие мезофильных молочнокислых бактерий и дрожжей. При этом рН снижается сравнительно быстро (за 48 часов) до значения 3,5. Было отмечено торможение развития и отмирание клеток мезофильных стрептококков и ароматообразующих бактерий, чувствительных к кислоте. Для развития остальных групп микроорганизмов, как более кислотоустойчивых, при повышении температуры создаются более благоприятные условия. В результате в готовой закваске накапливаются мезофильные лактобактерии 3·10⁹ КОЕ в 1 см³, дрожжи, не сбраживающие лактозу, 8·10⁷ КОЕ в 1 см³, термофильные лактобактерии 7·10⁵ КОЕ в 1 см³ и дрожжи, сбраживающие лактозу, -4·10⁵ КОЕ в 1 см³.

Полученные данные свидетельствуют о том, что температура культивирования 30°С стимулирует активное размножение дрожжевой микрофлоры и ускоряет процесс получения микрофлоры курунговой закваски на 24-48 часов. Исходя из вышесказанного, был подобран оптимальный температурный интервал культивирования, находящийся в пределах (30±2)°С.

В дальнейших исследованиях изучали возможность использования способа получения курунговой закваски для приготовления кумысной закваски. Исследования показали, что кумысная закваска, полученная с использованием курунговой микрофлоры, характеризовалась повышенной кислотностью и по органолептическим показателям отличалась от традиционной кумысной закваски.

В этой связи, для снижения кислотности необходимо было изменить характер взаимоотношений микроорганизмов в разработанной микробной ассоциации путем уменьшения количества термофильных лактобактерий, как наиболее сильных кислотообразователей, вводимых с кефирной грибковой закваской. Для исследования были выбраны следующие соотношения кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий (болгарской и ацидофильной палочек) - 2:0,5:0,5 и 3:0,5:0,5. Культивирование проводили при (30±2)°С. В качестве контроля использовалось соотношение 1:0,5:0,5, используемое для производства курунговой закваски. Полученные результаты представлены на фиг.3 и 4.

Анализ данных, представленных на фиг.3 и 4, свидетельствует, что оптимальным является соотношение 3:0,5:0,5, Выбранное соотношение позволяет снизить высокую кислотообразующую способность закваски и создать благоприятные условия для протекания спиртового брожения (см. фиг.3).

Таким образом, наиболее предпочтительным соотношением кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий (болгарской и ацидофильной палочек) для приготовления кумысной закваски является соотношение 3:0,5:0,5 соответственно, поскольку оно способствует снижению количества термофильных лактобактерий по сравнению с курунговой закваской и интенсифицирует развитие дрожжей (см. фиг.4).

Далее были проведены исследования по разработке жидких бактериальных концентратов "Кумысин" и "Курунгин" на основе полученных симбиотических заквасок.

Были подобраны оптимальный компонентный состав питательной среды и условия получения концентрата симбиотической закваски.

При приготовлении питательной среды была использована молочная сыворотка, которая является наиболее сбалансированным и доступным источником углеродного и азотистого питания, для развития молочнокислых бактерий и дрожжей.

Известно, что дрожжи обладают менее совершенной системой протеолитических ферментов по сравнению с молочнокислыми бактериями и не способны усваивать пептиды сыворотки. Поэтому в качестве источника азотистого питания в питательную среду вводят картофельный отвар. Картофель содержит белки и аминокислоты, выполняющие различные функции: каталитические, структурные, регуляторные и др.

При введении картофельного отвара в среду, содержащую молочную кислоту, происходит гидролиз крахмала. Вначале имеет место ослабление и разрыв ассоциативных связей между макромолекулами амилозы и амилопектина, конечным продуктом гидролиза является глюкоза - важнейший источник углеводного питания дрожжей.

Результаты исследований динамики дрожжевой микрофлоры, при внесении различных доз картофельного отвара в биомассу, представлены в таблице 2.

Таблица 2.
Динамика дрожжевой микрофлоры при добавлении картофельного отвараДоза картофельного отвара, %Количество дрожжей, сбраживающих лактозу, в 1 см³, КОЕКоличество дрожжей, не сбраживающих лактозу, в 1 см³, КОЕ0 ч12 ч24 ч0 ч12 ч24 чконтроль4·10³8·10⁵4·10⁸2·10⁴3·10⁵2·10⁸54·10³7·10⁶8·10⁸2·10⁴9·10⁵7·10⁸104·10³6·10⁷4·10⁹2·10⁴8·10⁶3·10⁹154·10³9·10⁷6·10⁹2·10⁴2·10⁷2·10¹⁰204·10³1·10⁸2·10¹⁰2·10⁴6·10⁷8·10¹⁰

Данные исследований показали, что картофельный отвар обладает значительным стимулирующим эффектом на рост дрожжей в биомассе. Максимальное содержание наблюдалось при добавлении 20% отвара - 8·10¹⁰ дрожжей, не сбраживающих лактозу, и 9·10⁹ дрожжей, сбраживающих лактозу. В питательной среде без добавления картофельного отвара (контроль) дрожжи, не сбраживающие лактозу, содержались в количестве 2·10⁸, сбраживающие лактозу 4·10⁸ КОЕ в 1 см³.

При подборе стимулирующих факторов для развития дрожжей необходимо избежать подавления дрожжами молочнокислых микроорганизмов, поэтому повышение количества отвара до 15-20% принято нецелесообразным. Оптимальной, в данных условиях, является доза отвара до 10%, способствующая увеличению дрожжевой микрофлоры на порядок. При введении в среду 7-10% отвара интенсифицируется процесс накопления биомассы, результаты представлены на фиг.5.

Оптическая плотность питательной среды при внесении 7-10% отвара увеличивается до 0,28 ед., по сравнению с образцом без добавления картофельного отвара. Был определен также выход биомассы, который составляет при добавлении 7-10% картофельного отвара до 16,6 г/л.

Таким образом, оптимальным количеством картофельного отвара, является 7-10%. Это обеспечивает высокий выход биомассы симбиотической закваски и способствует повышению количества дрожжей.

Таким образом, именно отличительные признаки заявленного изобретения - условия культивирования симбиотической закваски и добавление картофельного отвара - обеспечивают достижение технического результата, заключающегося в повышении кислотообразующей и спиртообразующей способности и увеличении количества дрожжей в микрофлоре бактериальных концентратов, применяемых в качестве биологически активных добавок к пище.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

В осветленную творожную сыворотку вносят картофельный отвар в количестве 7-10%, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (20-30) минут, затем охлаждают до температуры (30±2)°С, вносят 5-7% инокулята симбиотической закваски, полученной методом культивирования кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий (болгарской и ацидофильной палочек) на обезжиренном молоке при температуре (30±2)°С, в течение 2-3 суток, и устанавливают рН среды в пределах 6,0-6,5.

Накопление биомассы симбиотической закваски производят в условиях периодического культивирования при двукратной нейтрализации среды через 12 и 24 часа культивирования и перемешивании в течение (10-15) мин через каждые 6 часов. Продолжительность культивирования (18-24) часа, температура (30±2)°С.

По окончании процесса культивирования сливают верхний слой отделившейся сыворотки, оставшуюся биомассу охлаждают до температуры 6°С и разливают дозаторами в стерильные флаконы по (10±0,2) см³. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Жидкий бактериальный концентрат хранят при температуре(6-8)°С, срок хранения при этой температуре составляет три месяца.

Нами была изучена антибиотическая активность микрофлоры закваски методом предельных разведений на гидролизованном молоке с использованием в качестве тест-культуры М. tuberculosis, взятой с посевов на среде Левенштейна-Йенсена мокроты больных активной формой туберкулеза. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3.
Исследование антибиотической активности жидких бактериальных концентратовВид засеваемой микрофлорыРазведениеКонтроль: (тест-культура)1:11:21:41:81:161:321:641:128"Курунгин"Обильный ростПолное отсутствие ростаСледыСледыСледыСледыСледыНаличие роста тест- культурыНаличие роста тест-культуры"Кумысин"Обильный ростПолное отсутствие ростаСледыСледыСледыСледыСледыНаличие роста тест- культурыНаличие роста тест-культуры

В качестве контроля использовался посев исходной тест-культуры на гидролизованном молоке без добавления бактериального концентрата. После выдержки посевов тест-культуры совместно с разведениями бактериального концентрата на гидролизованном молоке в течение семи суток микрофлора пересевалась на среду для количественного учета микобактерий туберкулеза - Левенштейна-Йенсена. При разведении бактериального концентрата в соотношении 1:1 наблюдалось бактерицидное действие на микобактерии туберкулеза, т.е. полное отсутствие роста, это подтверждалось также при микроскопировании препарата с окрашиванием по Цилю-Нильсену. До разведения 1:32, включительно, наблюдается бактериостатическое действие, далее значительного подавления роста не наблюдается, хотя рост не столь обильный, как в пересеве исходной тест-культуры, без добавления закваски.

Данный метод позволил установить довольно высокие показатели антибиотической активности микрофлоры бактериальных концентратов: бактерицидное действие на М. tuberculosis в разведении 1:1 и бактериостатическое, до разведения 1:32 включительно.

Таким образом, разработанный по заявляемому способу жидкий бактериальный концентрат отличается многокомпонентным составом микрофлоры и высокой антибиотической активностью, которые достигаются благодаря оптимальным физико-химическим параметрам культивирования, дающим стабильные биохимические и микробиологические показатели. Это позволило использовать полученные по заявляемому способу концентраты "Кумысин" и "Курунгин" в качестве биологически активных добавок к пище.

Устойчивостью существующих форм заболевания туберкулезом к химиопрепаратам обуславливает поиск новых методов воздействия на возбудителя заболевания, одним из способов является применение в комплексном лечении биологически активных добавок к пище "Кумысин" и "Курунгин".

Были проведены клинические исследования жидкого бактериального концентрата в качестве биологически активной добавки к пище при лечении туберкулеза на базе противотуберкулезного диспансера, которые показали широкие перспективы использования препарата-симбиотика в качестве антистрессорного и иммуномодулирующего средства, применяемого одновременно с туберкулостатиками.

В таблице 4 представлены качественные показатели жидких бактериальных концентратов, которые могут применяться в качестве биологически активных добавок к пище.

Таблица 4.
Качественные показатели жидкого бактериального концентратаПоказателиНормаБактериальный концентрат "Курунгин"Бактериальный концентрат "Кумысин"Внешний видМутная жидкость с характерными хлопьями беловатого или бледно-желтого цвета. Допускается небольшой отстой сывороткиАктивная кислотность, рН6,0-6,26,2-6,5Количество микроорганизмов на конец срока годности, в 1 см³, КОЕ, не менее  Термофильные лактобактерии10¹⁰10⁹Мезофильные лактобактерии10⁹10¹⁰Дрожжи, сбраживающие лактозу10⁹10⁹Дрожжи, не сбраживающие лактозу10⁹10⁹Антибиотическая активность (тест-культура M.tuberculosis), до разведения1:321:32Клетки в микроскопическом препаратеТонкие палочки, много мелких круглых и овальных клеток дрожжей, одиночных или собранных в гроздьяБГКП (колиформы), в 3 гНе допускаютсяПатогенные микроорганизмы (в т.ч. сальмонеллы), в 10 гНе допускаютсяПлесени, КОЕ/г, не более чем5Содержание витамина С, мг/100 г1,41,5Содержание витамина В₁₂, мг/100 г142136

Пример 1. Получение жидкого бактериального концентрата "Курунгин" для использования в качестве биологически активной добавки к пище.

В осветленную творожную сыворотку вносят картофельный отвар в количестве 10%, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут, затем охлаждают до температуры 30°С, вносят 5% курунговой закваски (соотношение кефирной закваски и культур ацидофильной и болгарской палочек 1:0,5:0,5, соответственно, время культивирования 3 суток при температуре 30°С) и устанавливают рН среды в пределах 6,0.

Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратной нейтрализации среды через 12 и 24 часа культивирования и перемешивании в течение 15 мин через каждые 6 часов. Продолжительность культивирования 24 часа, температура 30°С.

После окончания процесса культивирования сливают верхний слой отделившейся сыворотки, оставшуюся биомассу охлаждают до температуры 6°С и разливают дозаторами в стерильные флаконы по 10 см³. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Срок хранения жидкого бактериального концентрата, при температуре 6°С, составляет три месяца.

Пример 2. Получение жидкого бактериального концентрата "Кумысин" для использования в качестве биологически активной добавки к пище.

В осветленную творожную сыворотку вносят картофельный отвар в количестве 7%, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут, затем охлаждают до температуры 32°С, вносят 5% кумысной закваски (соотношение кефирной закваски и культур ацидофильной и болгарской палочек 3:0,5:0,5, соответственно, время культивирования 3 суток при температуре 32°С) и устанавливают рН среды в пределах 6,5.

Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратной нейтрализации среды через 12 и 24 часа культивирования и перемешивании в течение 15 мин через каждые 6 часов. Продолжительность культивирования 24 часа, температура 30°С.

После окончания процесса культивирования сливают верхний слой отделившейся сыворотки, оставшуюся биомассу охлаждают до температуры 6°С и разливают дозаторами в стерильные флаконы по 10 см³. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Срок хранения жидкого бактериального концентрата, при температуре 6°С, составляет три месяца.

Пример 3. Получение жидкого бактериального концентрата «Курунгин» для использования в качестве биологически активной добавки к пище.

В осветленную творожную сыворотку вносят картофельный отвар в количестве 10%, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут, затем охлаждают до температуры 28°С, вносят 7% курунговой закваски (соотношение кефирной закваски и культур ацидофильной и болгарской палочек 1:0,5:0,5, соответственно, время культивирования 3 суток при температуре 28°С) и устанавливают рН среды в пределах 6,0.

Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратной нейтрализации среды через 6 и 18 часов культивирования и перемешивании в течение 15 мин через каждые 6 часов. Продолжительность культивирования 18 часов, температура 28°С.

После окончания процесса культивирования сливают верхний слой отделившейся сыворотки, оставшуюся биомассу охлаждают до температуры 6°С и разливают дозаторами в стерильные флаконы по 10 см³. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Срок хранения жидкого бактериального концентрата, при температуре 6°С, составляет три месяца.

Пример 4. Получение жидкого бактериального концентрата «Кумысин» для использования в качестве биологически активной добавки к пище.

В осветленную творожную сыворотку вносят картофельный отвар в количестве 7%, 1 г/л натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1 г/л калия фосфорнокислого однозамещенного, 0,1 г/л магния сернокислого, 0,5 г/л сахарозы, 0,1 г/л аскорбиновой кислоты и стерилизуют при температуре 121°С в течение 30 минут, затем охлаждают до температуры 30°С, вносят 7% кумысной закваски (соотношение кефирной закваски и культур ацидофильной и болгарской палочек 3:0,5:0,5, соответственно, время культивирования 2 суток при температуре 30°С) и устанавливают рН среды в пределах 6,5.

Накопление биомассы производят в условиях периодического культивирования при двукратной нейтрализации среды через 6 и 18 часов культивирования и перемешивании в течение 15 мин через каждые 6 часов. Продолжительность культивирования 18 часов, температура 30°С.

После окончания процесса культивирования сливают верхний слой отделившейся сыворотки, оставшуюся биомассу охлаждают до температуры 6°С и разливают дозаторами в стерильные флаконы по 10 см³. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Срок хранения жидкого бактериального концентрата, при температуре 6°С, составляет три месяца.

Пример 5. Применение бактериального концентрата "Курунгин" в качестве биологически активной добавки к пище.

Применение полученного по примеру 1 бактериального концентрата "Курунгин" в качестве биологически активной добавки к пище производится для восстановления нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта, снижения тяжести побочных реакций на противотуберкулезные препараты, частоты токсикоаллергических реакций на микобактерии туберкулеза и в качестве иммуномодулирующего средства.

Пример 6. Применение бактериального концентрата "Кумысин" в качестве биологически активной добавки к пище.

Применение полученного по примеру 2 бактериального концентрата "Кумысин" в качестве биологически активной добавки к пище производится для восстановления нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта, снижения тяжести побочных реакций на противотуберкулезные препараты, частоты токсикоаллергических реакций на микобактерии туберкулеза и в качестве иммуномодулирующего средства.

Пример 7. Применение бактериального концентрата "Курунгин" в качестве биологически активной добавки к пище.

Жидкий бактериальный концентрат "Курунгин", полученный по примеру 3, используют как самостоятельную биологически активную добавку в рационе питания для детей старше пяти лет 3 раза в день по одной чайной ложке за 30 минут до или после приема пищи, для взрослых 3 раза в день по одной столовой ложке за 30 минут до или после приема пищи.

Пример 8. Применение бактериального концентрата "Кумысин" в качестве биологически активной добавки к пище.

Жидкий бактериальный концентрат "Кумысин", полученный по примеру 4, используют как самостоятельную биологически активную добавку в рационе питания для детей старше пяти лет 3 раза в день по одной чайной ложке за 30 минут до или после приема пищи, для взрослых 3 раза в день по одной столовой ложке за 30 минут до или после приема пищи.

Способ предусматривает приготовление питательной среды на основе молочной сыворотки и картофельного отвара, внесение симбиотической закваски, полученной методом культивирования кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий (болгарской и ацидофильной палочек) при температуре (30±2)°С в течение 2-3 суток, накопление биомассы симбиотической закваски в условиях периодического культивирования при двукратной нейтрализации среды и отделение полученной биомассы. Кефирная грибковая закваска и термофильные лактобактерии могут быть использованы в следующих соотношениях 1:0,5:0,5 или 3:0,5:0,5. Способ позволяет повысить кислотообразующую и спиртовую способность закваски и увеличить количество дрожжей. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 табл., 5 ил.

1. Способ получения жидкого бактериального концентрата, предусматривающий приготовление питательной среды на основе молочной сыворотки, внесение инокулята, культивирование, раскисление питательной среды, отделение полученной биомассы, отличающийся тем, что в процессе приготовления питательной среды в молочную сыворотку вносят картофельный отвар в количестве 7-10%, а в качестве инокулята используют закваску, полученную методом культивирования кефирной грибковой закваски и термофильных лактобактерий (болгарской и ацидофильной палочек) при температуре (30±2)°С в течение 2-3 сут.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что кефирную грибковую закваску и термофильные лактобактерии (болгарскую и ацидофильную палочки) берут в соотношении 1:0,5:0,5 соответственно.3. Способ по п.1, отличающийся тем, что кефирную грибковую закваску и термофильные лактобактерии (болгарскую и ацидофильную палочки) берут в соотношении 3:0,5:0,5 соответственно.4. Применение жидкого бактериального концентрата, полученного способом по пп.1-3, в качестве биологически активной добавки к пище.