КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ Российский патент 2008 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для лабораторной диагностики туберкулеза.

Известна плотная питательная среда для выделения из биоматериала животных и культивирования микобактерий туберкулеза (ФАСТ-ЗЛ), содержащая яйца куриные, желтки яиц, молоко, картофельный отвар, глицерин, пептон, малахитовый зеленый, раствор минеральных солей и один из алканов с длиной цепи от С₁₄-С₁₆ (1).

Однако известная среда не позволяет выявлять микобактерии с ослабленной жизнеспособностью.

Цель изобретения - повышение выделяемости микобактерий туберкулеза при посевах проб биологического материала и объектов внешней среды.

Это достигается тем, что в среду Фаст-3Л перед посевом в качестве стимулятора роста микобактерий дополнительно вводят 10% стерильный раствор фитопрепарата «Люцевита» в дозе 0,25-0,5 мл на пробирку, содержащую 4-5 мл среды. Фитопрепарат изготовляется в ЗАО «Люцевита» регистрационный номер №004836.Р.643.09.2002.

Фитопрепарат «Люцевита» - это биологически активный на основе экстракта люцерны, полученный обработкой его экстрагентом, содержащим смесь солей Mn, Со, Cr, V, Zn, Fe, Cu, Ti и Мо.

Фитопрепарат «Люцевита» содержит до 20 жизненно необходимых аминокислот, витамины группы В, Е, К, макро- и микроэлементы, карбоновые (янтарная, щавелевая) и фенолкарбоновые кислоты, белки, углеводы, сапонины, изофлавоны (2).

«Люцевита», добавленная в питательную среду Фаст-ЗЛ, благотворно влияет на рост и размножение микобактерий, особенно патогенных, у которых снижена биохимическая активность, и они значительно медленнее размножаются, содержат меньше энзимов и ростовых веществ. Внесение дополнительно в питательные среды биологически активных добавок позволяет обогатить их состав по белкам, витаминам, макро- и микроэлементам, которые необходимы для построения клеточного материала и повышения ферментативной активности микобактерий.

Пример

Было испытано влияние различных доз "Люцевита" на выделяемость микобактерий из различных объектов.

С этой целью были приготовлены питательные среды при следующем соотношении компонентов, г:

Яйца куриные400,0-500,0Желтки куриных яиц90,0-100,0Молоко, мл140,0-160,0Картофельный отвар, мл140,0-160,02%-ный раствор малахитового зеленого10,0-12,5Солевой раствор: Калий фосфорнокислый двузамещенный0,14-0,16Натрий лимоннокислый0,14-0,16Магний сернокислый0,14-0,16Пептона0,8-1,0Глицерина3,2-4,0Алкан15,3-30,6Вода дистиллированная, млДо 140,0-160,010%-ный раствор фитопрепарата «Люцевита», млПо 0,03; 0,12; 0,25; 0,5

В качестве контроля использовали питательную среду Фаст-ЗЛ без добавления фитопрепарата.

Исследуемым материалом служили лимфатические узлы, молоко, навоз от коров, положительно реагировавших на ППД-туберкулин для млекопитающих. Предварительную предпосевную обработку проводили по методу А.П.Аликаевой. После посева пробирки помещали в термостат и инкубировали при 38°С в течение 60 дней. Результаты исследований представлены в таблице.

Влияние различных доз фитопрепарата «Люцевита» на выделяемость микобактерий из биоматериалаИсследуемый материалКоличество пробРост на питательной среде Фаст-ЗЛконтрольс добавлением "Люцевита"кол-во%0,030,120,250,5кол-во%кол-во%кол-во%кол-во%Лимфатические узлы9666,7444,4888,891009100Молоко261142,3830,81661,52588,52492,3Навоз251144,0519,21038,51350,02392,0

Данные опыта показывают, что добавление в среду фитопрепарата в дозе 0,03 мл не оказывает влияния на повышение выделяемости микобактерий. При добавлении "Люцевита" в дозе 0,12 мл повышается выделяемость микобактерий из молока до 61,5% и из лимфоузлов до 88,8%. Наиболее высокие результаты во всех случаях получены при добавлении "Люцевита" в дозе 0,25-0,5 мл. Рост культур микобактерий отмечается в 88,5-100,0% случаев.

Таким образом, предлагаемая питательная среда, которая дополнительно содержит биологически активную добавку фитопрепарата «Люцевита» в дозе 0,25-0,5 мл на пробирку, способствует повышению выделяемости микобактерий при посеве проб биоматериала (лимфатические узлы, молоко) и объектов внешней среды (корма, навоз), что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критериям новизна, изобретательский уровень, промышленная применяемость.

Источники информации

1. А.С. №2059728 С12Q 1/04. Питательная среда для выделения из биоматериала животных и культивирования микобактерий туберкулеза. Авт.: Ходун Л.М., Таллер Л.А. и др.

2. Патент РФ №2176918 СЗ. Биологически активный препарат на основе экстракта люцерны и способ его получения. Авт.: Грищенко В.В., Жолнин А.В., Камынин А.В. и др.

Композиция содержит компоненты при следующем соотношении: яйца куриные 400,0-500,0 г, желтки куриных яиц 90,0-100,0 г, молоко 140,0-160,0 г, картофельный отвар 140,0-160,0 мл, 2%-ный раствор малахитового зеленого 10,0-12,5 г, калий фосфорнокислый двузамещенный 0,14-0,16 г, натрий лимоннокислый 0,14-0,16 г, магний сернокислый 0,14-0,16 г, пептон 0,8-1,0 г, глицерин 3,2-4,0 г, алкан 15,3-30,6 г, вода дистиллированная - до 140,0-160,0 мл, 10%-ный раствор фитопрепарата «Люцевита» 0,25-0,5 мл. Изобретение обеспечивает выделения микобактерий с ослабленной жизнеспособностью. 1 табл.

Композиция для приготовления питательной среды для выделения и культивирования микобактерий, содержащая яйца куриные, желтки куриных яиц, молоко, картофельный отвар, пептон, глицерин, калий фосфорно-кислый двузамещенный, натрий лимонно-кислый, магний серно-кислый, малахитовый зеленый, алкан и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит 10%-ный раствор фитопрепарата «Люцевита» при следующем соотношении компонентов,г:

Яйца куриные400,0-500,0Желтки куриных яиц90,0-100,0Молоко, мл140,0-160,0Картофельный отвар, мл140,0-160,02%-ный раствор малахитового зеленого10,0-12,5Калий фосфорно-кислый двузамещенный0,14-0,16Натрий лимонно-кислый0,14-0,16Магний серно-кислый0,14-0,16Пептон0,8-1,0Глицерин3,2-4,0Алкан15,3-30,6Вода дистиллированная, млДо 140,0-160,010%-ный раствор фитопрепарата «Люцевита», мл0,25-0,5