Показать метаданные Скрыть метаданные

(19)

(11)

2 338 784

(13)

(51)

МПК

C12N15/00(2006-01-01)

C12N15/60(2006-01-01)

C12P13/04(2006-01-01)

(21) (22)

Заявка

2006109216/13, 2006-03-24

(24)

Дата начала отсчета патента

2006-03-24

(22)

дата подачи заявки

2006-03-24

(45)

опубликовано

2008-11-20

(72)

авторы

Смирнов Сергей ВасильевичСамсонова Наталья НиколаевнаКодера ТомохироМацуи Казухико

(73)

патентообладатели

Закрытое Акционерное Общество Институт Аджиномото-Генетика" Агри)Аджиномото Ко., Инк.

(56)

Документы, цитированные в отчете о поиске

WO 2004018672, 04.03.2004HAEFELE С etalPhytochemistryRU 2005108605 A, 27.10.2005.

НОВАЯ АЛЬДОЛАЗА, ДНК, КОДИРУЮЩАЯ АЛЬДОЛАЗУ, КЛЕТКИ, ТРАНСФОРМИРОВАННЫЕ ДНК, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬДОЛАЗЫ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2008 года по МПК C12N15/00 C12N15/60 C12P13/04

Описание патента на изобретение RU2338784C2

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Похожие патенты RU2338784C2

название	год	авторы	номер документа
СПОСОБ ПРОДУКЦИИ 4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА	2007	Смирнов Сергей Васильевич Самсонова Наталья Николаевна Котлярова Вероника Александровна Рушкевич Наталия Юрьевна Козлов Юрий Иванович Кодера Томохиро Симизу Сакаю Огава Джюн Хиби Макото	RU2402608C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОКСИЛИРОВАННОГО L-ЛЕЙЦИНА И БАКТЕРИЯ, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ ДНК, КОДИРУЮЩЕЙ ДИОКСИГЕНАЗУ	2011	Смирнов Сергей Васильевич Рушкевич Наталия Юрьевна Соколов Павел Михайлович Имабаяси Юки Сузуки Синъичи Сугияма Масаказу	RU2468085C1
БАКТЕРИЯ - ПРОДУЦЕНТ ПРОДУКТА РЕАКЦИИ, КАТАЛИЗИРУЕМОЙ БЕЛКОМ, ОБЛАДАЮЩИМ АКТИВНОСТЬЮ 2-ОКСОГЛУТАРАТ-ЗАВИСИМОГО ФЕРМЕНТА, И СПОСОБ ПРОДУКЦИИ УКАЗАННОГО ПРОДУКТА	2008	Смирнов Сергей Васильевич Самсонова Наталья Николаевна Котлярова Вероника Александровна Рушкевич Наталия Юрьевна Безнощенко Ольга Сергеевна Бачина Татьяна Александровна Имабаяси Юки Сугияма Масаказу Сузуки Сунъичи	RU2444568C2
НОВАЯ АЛЬДОЛАЗА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОПТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ IHOG И МОНАТИНА	2005	Сугияма Масаказу Ватанабе Кунихико Мори Кенити Нозаки Хироюки	RU2313579C2
НОВАЯ АЛЬДОЛАЗА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗАМЕЩЕННЫХ α-КЕТОКИСЛОТ	2003	Сугияма Масаказу Ватанабе Кунихико	RU2307871C2
СПОСОБ ПРОДУКЦИИ (2S,3R,4S)-4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, В КОТОРОЙ РАЗРУШЕНА АКТИВНОСТЬ 4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНДЕГИДРОГЕНАЗЫ	2007	Смирнов Сергей Васильевич Самсонова Наталья Николаевна Котлярова Вероника Александровна Рушкевич Наталия Юрьевна Козлов Юрий Иванович Кодера Томохиро Хиби Макото Огава Джюн Симизу Сакаю	RU2395578C2
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА 4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА ИЛИ ЕГО СОЛИ	2006	Смирнов Сергей Васильевич Самсонова Наталья Николаевна Новикова Анна Евгеньевна Матросов Николай Георгиевич Рушкевич Наталия Юрьевна Котлярова Вероника Александровна	RU2355767C2
СПОСОБ КОНСТРУИРОВАНИЯ БАКТЕРИИ-ПРОДУЦЕНТА (2S,3R,4S)-4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА, БАКТЕРИЯ-ПРОДУЦЕНТ (2S,3R,4S)-4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА И СПОСОБ ПРОДУКЦИИ (2S,3R,4S)-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА ИЛИ ЕГО СОЛИ	2007	Смирнов Сергей Васильевич Самсонова Наталья Николаевна Котлярова Вероника Александровна Рушкевич Наталия Юрьевна Безнощенко Ольга Сергеевна	RU2395580C2
СПОСОБ ПРОДУКЦИИ 2-АМИНО-3-МЕТИЛ-4-КЕТОПЕНТАНОАТА	2007	Смирнов Сергей Васильевич Самсонова Наталья Николаевна Котлярова Вероника Александровна Рушкевич Наталия Юрьевна Козлов Юрий Иванович Кодера Томохиро Хиби Макото Огава Джюн Симизу Сакаю	RU2392323C2
САМОИНДУЦИРУЕМАЯ ЭКСПРЕССИОННАЯ СИСТЕМА И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛЕЗНЫХ МЕТАБОЛИТОВ С ПОМОЩЬЮ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae	2013	Сычёва Елена Викторовна Самсонов Валерий Васильевич Саврасова Екатерина Алексеевна Ерёмина Наталья Сергеевна Гераскина Наталья Владимировна Стойнова Наталия Викторовна	RU2549708C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 338 784 C2

Реферат патента 2008 года НОВАЯ АЛЬДОЛАЗА, ДНК, КОДИРУЮЩАЯ АЛЬДОЛАЗУ, КЛЕТКИ, ТРАНСФОРМИРОВАННЫЕ ДНК, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬДОЛАЗЫ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 4-ГИДРОКСИ-L-ИЗОЛЕЙЦИНА (ВАРИАНТЫ)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения 4-гидрокси-L-изолейцина или его соли, включающий стадии: взаимодействия ацетальдегида и α-кетомасляной кислоты в водном растворе в присутствии по крайней мере одной альдолазы, выбранной из группы, состоящей из белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2; белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, инсерцию, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2, и проявляющего активность альдолазы; и белка, который по крайней мере на 70% гомологичен аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2 и обладает активностью альдолазы; превращения полученной 4-гидрокси-3-метил-2-кетопентановой кислоты в 4-гидрокси-L-изолейцин при участии аминотрансферазы и/или дегидрогеназы, обладающей трансаминазной активностью по продукции 4-гидрокси-L-изолейцина из 4-гидрокси-3-метил-2-кетопентановой кислоты в присутствии донора аминогруппы; и выделения полученного 4-гидрокси-L-изолейцина. Изобретение позволяет получать 4-гидрокси-L-изолейцин с высокой степенью эффективности. 8 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил.

Формула изобретения RU 2 338 784 C2

1. Фрагмент ДНК, кодирующий белок, проявляющий активность альдолазы, выбранный из группы, состоящей из:

(а) фрагмента ДНК, включающего нуклеотидную последовательность SEQ ID No: 1;

(б) фрагмента ДНК, который гибридизуется в жестких условиях с фрагментом ДНК, имеющим нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеотидной последовательности SEQ ID No: 1, и кодирующей белок, обладающий активностью альдолазы;

(в) фрагмент ДНК, кодирующий белок, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2;

(г) фрагмент ДНК, кодирующий белок, имеющий аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, инсерцию, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2 и обладающий активностью альдолазы; и

(д) фрагмент ДНК, кодирующий белок, имеющий аминокислотную последовательность, которая по крайней мере на 70% гомологична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 и обладающий активностью альдолазы.

2. Рекомбинантная ДНК для экспрессии альдолазы, полученная путем лигирования ДНК по п.1 в ДНК экспрессионного вектора.

3. Клетка бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированная рекомбинантной ДНК по п.2, - продуцент альдолазы.

4. Способ получения белка, обладающего активностью альдолазы, включающий: выращивание клеток по п.3. в питательной среде; и накопление белка, обладающего активностью альдолазы, в культуральной среде, в клетках, либо в них обоих.

5. Белок, обладающий активностью альдолазы, выбранный из группы, состоящей из:

(а) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2;

(б) белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, инсерцию, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2, обладающего активностью альдолазы; и

(в) белка, который по крайней мере на 70% гомологичен аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2, и обладающего активностью альдолазы;

6. Белок, выделенный из бактерии, принадлежащей к роду Arthrobacter simplex, который:

(а) обладает способностью катализировать реакцию по продукции 4-гидрокси-3-метил-2-кето-пентановой кислоты из ацетальдегида и α-кетомасляной кислоты;

(б) активность указанного белка зависит от присутствия двухвалентных катионов, включая Zn²⁺, Mn²⁺ и Mg²⁺; и

(в) молекулярный вес указанного белка, измеренный методом гель-фильтрации, составляет приблизительно 186 кДа, а молекулярный вес отдельной субъединицы, измеренный методом электрофореза в полиакриламидном геле с SDS (SDS-PAGE) составляет приблизительно 27 кДа.

7. Способ получения 4-гидрокси-L-изолейцина или его соли, включающий стадии: взаимодействия ацетальдегида и α-кетомасляной кислоты в водном растворе в присутствии по крайней мере одной альдолазы, выбранной из группы, состоящей из:

(а) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2;

(б) белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, инсерцию, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2, и проявляющего активность альдолазы; и

(в) белка, который по крайней мере на 70% гомологичен аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2 и обладает активностью альдолазы; превращения полученной 4-гидрокси-3-метил-2-кетопентановой кислоты в 4-гидрокси-L-изолейцин при участии аминотрансферазы и/или дегидрогеназы, обладающей трансаминазной активностью по продукции 4-гидрокси-L-изолейцина из 4-гидрокси-3-метил-2-кетопентановой кислоты в присутствии донора аминогруппы; и выделение полученного 4-гидрокси-L-изолейцина.

8. Способ получения 4-гидрокси-L-изолейцина или его соли, включающий стадии: взаимодействия ацетальдегида и α-кетомасляной кислоты в водном растворе в присутствии бактерии, содержащей белок альдолазу, выбранную из группы, состоящей из:

(а) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2,

(б) белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, инсерцию, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No: 2, и обладающего активностью альдолазы; и

и содержащей по крайней мере один из ферментов, аминотрансферазу или дегидрогеназу, которые катализируют реакцию по превращению 4-гидрокси-3-метил-2-кетопентановой кислоты в 4-гидрокси-L-изолейцин в присутствии донора аминогруппы; и выделения полученного 4-гидрокси-L-изолейцина.

9. Способ по любому из пп.7 и 8, отличающийся тем, что донор аминогруппы выбран из группы, состоящей из L-аминокислот.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанной аминотрансферазой является аминотрансфераза разветвленных аминокислот.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что аминотрансфераза разветвленных аминокислот выделена из бактерии, выбранной из группы, состоящей из Escherichia и Bacillus.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что аминотрансфераза разветвленных аминокислот выделена из бактерии, выбранной из группы, состоящей из Escherichia и Bacillus.

13. Способ по п.8, отличающийся тем, что бактерия модифицирована таким образом, что активность по крайней мере одного из ферментов, а именно альдолазы или аминотрансферазы разветвленных аминокислот, в такой бактерии увеличена.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что активность альдолазы и аминотрансферазы разветвленных аминокислот увеличена путем усиления экспрессии альдолазы и/или аминотрансферазы разветвленных аминокислот.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что экспрессия альдолазы и/или аминотрансферазы разветвленных аминокислот усилена путем изменения последовательности, контролирующей экспрессию гена, кодирующего альдолазу и/или аминотрансферазу разветвленных аминокислот, или путем увеличения количества копий гена, кодирующего альдолазу и/или аминотрансферазу разветвленных аминокислот.

16. Способ по п.8, отличающийся тем, что бактерия принадлежит к роду Escherichia, Pseudomonas, Corynebacterium, Arthrobacter, Aspergillus или Bacillus.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что бактерия принадлежит к виду Escherichia coli, Arthrobacter simplex, Corynebacterium glutamicum, Arthrobaclor globiformis, Arthrobactor sulfureus, Arthrobaclor viscosus или Bacillus subtilis.

18. Способ по п.8, отличающийся тем, что бактерией является культура бактериальных клеток, бактериальные клетки или обработанные бактериальные клетки.

19. Способ по любому из п.7 или 8, отличающийся тем, что 4-гидрокси-L-изолейцин выбран по крайней мере из одного члена группы, состоящей из (2S,3S,4S)-4-гидроксиизолейцина, (2S,3S,4S)-4-гидроксиизолейцина, (2S,3S,4R)-4-гидроксиизолейцина и (2S,3R,4S)-4-гидроксиизолейцина.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2008 года RU2338784C2

WO 2004018672, 04.03.2004
HAEFELE С et
al
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды	1921	Богач Б.И.	SU4A1
Phytochemistry
Электрическое сопротивление для нагревательных приборов и нагревательный элемент для этих приборов	1922	Яковлев Н.Н.	SU1997A1
RU 2005108605 A, 27.10.2005.

RU 2 338 784 C2

Авторы

Смирнов Сергей Васильевич

Самсонова Наталья Николаевна

Кодера Томохиро

Мацуи Казухико

Даты

2008-11-20—Публикация

2006-03-24—Подача