СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИТРИПТИЛИНА Российский патент 2011 года по МПК G01N27/48 

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения медицинского препарата амитриптилина при контроле в процессе его производства и реализации, а также при проведении медико-биологических исследований.

Сущность количественного определения заключается в экстрагировании ионных ассоциатов амитриптилина с метиловым оранжевым хлороформом из ацетатного буферного раствора с pH 3.

Амитриптилин 5-(3-Диметиламинопропилиден)-10,11-дигидродибензоциклогептена гидрохлорид - это представитель антидепрессантов. Он является ингибитором обратного нейронального захвата медиаторных моноаминов, включая норадреналин, дофамин, серотонин и др. Характерна значительная М-холинолитическая (антихолинергическая), антигистаминная и альфа-адренолитическая активность. Антидепрессивное (тимоаналептическое) действие сочетается у амитриптилина с выраженным седативным, снотворным и анксиолитическим (противотревожным) эффектом. Вместе с тем амитриптилин не полностью лишен и стимулирующего, психоэнергизирующего эффекта.

Известен способ определения амитриптилина в крови методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии. Данная методика включает введение внутренних стандартов - мапротилина и его метилированного производного, жидкость - жидкостную экстракцию и дериватизацию с трифторуксусным ангидридом для улучшения газохроматографических свойств. Предел количественного обнаружения составляет 0,5 мкг/см³ [1]. Недостатком способа является использование внутренних стандартов и, кроме того, дериватизацию амитриптилина трифторуксусным ангидриридом. Несмотря на высокую воспроизводимость определения амитриптилина по данному способу, введение в анализируемую систему реагентов, обеспечивающих получение аналитической формы, усложняет анализ.

Также известен способ определения амитриптилина в трупной крови с использованием газовой хроматографии с масс-селективным детектированием, взятый нами в качестве прототипа. Пробоподготовка включает жидкость-жидкостную экстракцию и дериватизацию с трифторуксусным ангидридом. Предел обнаружения амитриптилина - 0,05 мкг/см³ крови. Диапазон количественного определения - 0,05-3,0 мкг/см³. Максимальные внутрисерийные погрешности определения анализируемых веществ не превышают 12,9% для концентраций 0,10 мкг/см³ и 10,6% для концентраций 2,0 мкг/см³. Метод апробирован на экспертном материале при производстве судебно-химических исследований [2]. Недостаток данного способа - проведение дериватизации амитриптилина с трифторуксусным ангидридом, что делает определение сложным и длительным.

Целью изобретения является разработка высокочувствительного и экспрессивного способа определения амитриптилина в лекарственных формах, основанного на экстрагировании его ионных ассоциатов с метиловым оранжевым хлороформом из ацетатного буферного раствора с рН 3 и измерении оптических плотностей хлороформных экстрактов при длине волны 430 нм в кювете толщиной 0,5 см.

Предлагаемое изобретение включает следующие стадии:

1) формирование ионных ассоциатов амитриптилина с метиловым оранжевым;

2) экстрагирование образовавшихся ионных ассоциатов хлороформом из ацетатного буферного раствора с pH 3; 3) фотометрирование экстрактов и определение содержания амитриптилина по градуировочному графику.

Градуировочный график. Взвешивают две таблетки амитриптилина и тщательно их растирают. Аккуратно взвешивают навеску, эквивалентную 25 мг амитриптилина и смешивают ее с водой. Смесь перемешивают 15 минут и затем фильтруют через бумажный фильтр. Остаток на фильтре тщательно промывают водой. Фильтрат и промывные растворы собирают в мерную колбу емкостью 100 см³ и разбавляют до метки водой. Далее в 10 центрифужных пробирок вносят 0; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,6; 0,8; 1; 2 см³ полученного раствора, вводят ацетатный буферный раствор с pH от 3 до 5 см³, 1 см³ раствора метилового оранжевого, доводят до 10 см³ хлороформом, встряхивают 5 минут, центрифугируют 5 минут при 3000 об/мин и измеряют оптические плотности хлороформных экстрактов при длине волны 430 нм в кювете толщиной 0,5 см. Градуировочный график линеен в диапазоне концентраций от 0,07 до 0,51. (Градуировочный график представлен на чертеже).

Выполнение определения: Взвешивают две таблетки амитриптилина и тщательно их растирают. Аккуратно взвешивают навеску, эквивалентную 25 мг амитриптилина и смешивают ее с водой. Смесь перемешивают 15 минут и затем фильтруют через бумажный фильтр. Остаток на фильтре тщательно промывают водой. Фильтрат и промывные растворы собирают в мерную колбу емкостью 100 см³ и разбавляют до метки водой. Аликвотную порцию раствора переносят в серию мерных центрифужных пробирок, в каждую из которых вводят ацетатный буферный раствор с рН 3 до 5 см³, 1 см³ раствора метилового оранжевого, доводят до 10 см³ хлороформом, встряхивают 5 минут, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин и измеряют оптические плотности хлороформных экстрактов при длине волны 430 нм в кювете толщиной 0,5 см.

Найдено, что данным способом можно определить 0,0015 мг амитриптилина в 1 см³ раствора.

Метрологические характеристики разработанной методики приведены в табл.1.

Таблица 1 Метрологические характеристики методики определения амитриптилина в таблетках, число опытов n=6; степень надежности р=0,95; критерий Стьюдента t_p=2,57 Взято для определения раствора амитриптилина, см³ Содержание в растворе амитриптилина, мг Найдено, мг Предлагаемым способом По способу [2] 0 0,0000 0,0000 0,0000 0,05 0.0125 0,0125±0,0010 0,0125±0,0010 0,1 0.0250 0,0250±0,0030 0,0250±0,0030 0,2 0.0500 0,0500±0,0220 0,0500±0,0150 0.3 0.0750 0,0750±0,0170 0,0750±0,0150 0.4 0.1000 0,1000±0,0290 0,1000±0,0200 0.6 0.1500 0.1500±0,0110 0,1500±0,0900 0.8 0.2000 0.2000±0,0280 0,2000±0,0130 1 0.2500 0.2500±0.0420 0,2500±0,0250

*х - найденная величина;

- среднеарифметическое из n опытов;

S - среднеквадратичное отклонение.

Сравнение предлагаемой методики и методики, взятой в качестве прототипа, показывает, что прототип обладает лучшими метрологическими характеристиками, однако предлагаемый способ является высокочувствительным, экспрессным, что и входило в цель работы. Метрологические характеристики предлагаемой методики вполне могут удовлетворить любого химика-аналитика.

Литература

1. Иванова. Е.П., Мелентьев А.Б. Количественное определение амитриптилина и нортриптилина в крови методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии. Проблемы теоретической и экспериментальной химии: Тезисы докладов 17 Российской молодежной научной конференции, Екатеринбург, 17-20 апр., 2007. С.87.

2. А.Б. Мелентьев, С.С. Катаев, Е.П. Иванова. Судебно-медицинская экспертиза 2007, т.50, с.31-34.

3. Булатов М.И., Калинкин И.П. Практическое руководство по фотоколориметрическим и спектрофотометрическим методам анализа. Л.: Химия, 1976, - 376 с.

Изобретение относится к аналитической химии. Способ определения амитриптилина основан на экстрагировании его ионных ассоциатов с метиловым оранжевым хлороформом из ацетатного буферного раствора с рН 3 и на измерении оптических плотностей хлороформных экстрактов при длине волны 430 нм в кювете толщиной 0,5 см. Техническим результатом изобретения является разработка высокочувствительного и экспрессивного способа определения амитриптилина в лекарственных формах. 1 ил., 1 табл.

Способ количественного определения амитриптилина, отличающийся тем, что в водных растворах с рН 3 проводят реакцию образования его ионных ассоциатов с метиловым оранжевым, далее экстрагируют образовавшиеся ионные ассоциаты хлороформом и по оптической плотности экстракта по градуировочному графику находят содержание амитриптилина.