РАВНОМЕРНОМЕЧЕННЫЙ ТРИТИЕМ ПИРО-Glu-His-Pro-NH Российский патент 2014 года по МПК C07K5/97 C07B59/00 A61K38/06 A61P25/00 

Изобретение относится к области органической химии и может найти применение в аналитической химии и биологических исследованиях.

При изучении физиологически активных соединений необходимы их меченые аналоги.

Известно, что замена атомов соединений на их меченые аналоги не приводит к изменению каких-либо свойств исходного соединения (Evans Е.А. - Tritium and its compounds London Butterworths, 1974, p.48) [1].

Известен пиро-Glu-His-Pro-NH₂ формулы:

пиро-Glu-His-Pro-NH₂ - пептидный гормон гипоталамуса (Е.А. Nillni, К.А. Sevarino. // Endocrine Reviews, 1999, V. 20, No 5, P.599-648 [2]; R.O'Leary, B.O'Connor. // J. Neurochem., 1995, V. 65, P.953-963 [3]; N. Shibusawa, K. Hashimoto, M. Yamada. // The Cerebellum, 2008, P.84-95 [4]; J. Boler, F. Enzmann, K. Folkers, C. Y. Bowers, A. V. Serially. //Biochem. Biophys. Res. Commun., 1969, V. 37, P. 705-710 [5]; V. Monga, C.L. Meena, N. Kaur, R. Jain. //Current Medicinal Chemistry, 2008, V. 15, P.2718-2733 [6]). Данный гормон является нейропептидом, он принимает участие в нормализации некоторых психических функций организма человека. Например, установлено наличие антидепрессивного действия экзогенного пиро-Glu-His-Pro-NH₂ при депрессиях. Основная химико-биологическая функция данного гормона заключается в усилении производства пролактина и в большей степени - усилении производства тиреотропного гормона передней долей гипофиза.

Однако его равномерномеченный тритием аналог не описан.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента меченых аналогов физиологически активных соединений.

Достигается указанный технический результат получением равномерномеченного тритием пиро-Glu-His-Pro-NH₂ формулы I:

Ниже приведен пример реализации изобретения.

Пример I

Раствором 5 мг пиро-Glu-His-Pro-NH₂ в 75 мкл метанола пропитывали 150 мг окиси алюминия и лиофилизировали. Высушенный остаток механически перемешивали с 10 мг 5% Pd/Al₂O₃. В ампулу помещали 66 мг смеси, вакуумировали и заполняли газообразным тритием до давления 400 гПа. Реакцию вели при 200°C в течение 15 мин. Ампулу снова вакуумировали, катализатор наносили на фильтр, вещество экстрагировали метанолом (5×0.5 мл). Экстракты упаривали, остаток растворяли в метаноле (3×1 мл) и вновь упаривали для удаления лабильного трития. Конечный метанольный раствор содержал 180 мКи пептида.

Анализ проводили на колонке Reprosil pur C18aq, 4*150 мм, 5 мкм, скорость потока - 1 мл/мин, А - вода с 0.1% гептафтормасляной кислотой, Б - метанол, градиент Б→0-30% за 15 мин: время удерживания пиро-Glu-His-Pro-NH₂ - 11.54 мин. Равномерномеченный пиро-Glu-His-Pro-NH₂ очищали препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией.

Хроматографию проводили на колонке Kromasil 100C₁₈, 8×150 мм, 7 мкм, система: А - вода с 0.1% гептафтормасляной кислотой, Б - метанол, градиент Б→0-50% за 30 мин, скорость потока - 2 мл/мин. В результате получен меченый пептид с 75% радиохимической чистотой (80 мКи).

После повторной очистки радиохимическая чистота равномерномеченного пиро-Glu-His-Pro-NH₂ - не менее 98%, выход - 15-20%, молярная радиоактивность - 75 Ки/ммоль.

Таким образом, получен равномерномеченный тритием пиро-Glu-His-Pro-NH₂.

Изобретение относится к равномерномеченному тритием пиро-Glu-His-Pro-NH₂, который может найти применение в аналитической химии и биологических исследованиях. 1 пр.

Равномерномеченный тритием пиро-Glu-His-Pro-NH₂ формулы: