КРИСТАЛЛ ЦИКЛОПЕПТИДА ВЫСОКОЙ ЧИСТОТЫ, А ТАКЖЕ СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ Российский патент 2017 года по МПК C07K7/56 C07K1/14 A61K38/12 A61P31/10 

Область техники

Настоящее изобретение относится к кристаллам соединения; и, в частности, относится к кристаллам циклопептидного вещества высокой чистоты, способу их получения и применения.

Предшествующий уровень техники

Грибковые инфекции становятся ведущей причиной высокой заболеваемости и смертности пациентов с ослабленным иммунитетом. В течение последних 20 лет существенно увеличилось число случаев грибковой инфекции. К людям с высоким риском грибковых инфекций относятся пациенты в критическом состоянии, пациенты после хирургических вмешательств и пациенты, страдающие ВИЧ инфекцией, лейкемией и другими опухолями. Пациенты с трансплантированными органами также относятся к высокому риску грибковых инфекций.

Эхинокандины, как новый класс противогрибковых агентов, проявляют хорошую эффективность при лечении инфекций, вызванных Candida или Aspergillus. Представителями таких лекарственных препаратов являются каспофунгин и микафунгин. Эхинокандины ингибируют грибы за счет подавления образования 1,3-β-гликозидной связи, таким образом, уменьшая вред, наносимый человеческому телу, и снижая побочные эффекты, в то же время сохраняя эффективность. Таким образом, они безопаснее в применении, чем обычные противогрибковые агенты.

FK463 (микафунгин натрия) представляет собой соединение формулы II (R представляет собой ион натрия), разработанное Japan Fujisawa Toyama Co., Ltd, Takaoka Plant под торговой маркой Mycamine и в настоящее время продаваемое в нескольких странах в качестве противогрибкового агента для внутривенного введения. Соединение получено посредством отрезания боковой цепи FR 901379 в качестве предшественника (соединение формулы III, R представляет собой ион натрия или ион водорода) при помощи фермента, таким образом, формируя FR 179642 (соединение формулы I, R представляет собой водород или ион натрия) (см. патент США No. US 5376634, ЕР 0431350 и патент КНР CN 1161462C для конкретных способов), и затем химической модификации FR 179642 (см. патент WO 9611210, WO 9857923, WO 2004014879 в отношении конкретных способов получения и очистки).

Ниже приведена конкретная схема:

Как хорошо известно в области техники, кристаллы обычно более стабильны, чем аморфное состояние. Поэтому авторы настоящего изобретения хотят найти приемлемый кристалл соединения формулы I, в качестве промежуточного лекарственного средства, так чтобы соединение формулы I являлось более стабильным при хранении.

Соединение формулы I сложно кристаллизовать, и обычно оно находится в аморфном состоянии. В отношении конечного применения при лечении или в качестве промежуточного продукта соединения формулы II желательно получить кристаллы с хорошей стабильностью и высокой чистотой.

Некоторые кристаллы с хорошей стабильностью, приемлемые для транспортировки и хранения, с высоким выходом получают при помощи способа по настоящему изобретению.

Краткое описание изобретения

Одна из целей изобретения предложить некоторые кристаллы соединения формулы I.

Другой целью изобретения является предложение способа получения новых кристаллов.

Еще одна цель изобретения предложить применение некоторых кристаллов.

Получение кристаллов соединения формулы I

В настоящем изобретении термин «кристалл» относится к твердому веществу, молекула или атом которого проявляют определенное расположение. Настоящее изобретение предлагает способ получения кристаллов соединения формулы I. Например, кристаллы с различными кристаллическими формами могут быть получены при помощи различных систем и способов высушивания.

После исследования авторы изобретения неожиданно обнаружили, что кристаллы с превосходной морфологией могут быть получены из соединений формулы I при помощи растворения соединения в воде или смеси раствора вода-смешиваемые низшие спирты, поддерживая раствор, содержащий соединение формулы I, в состоянии насыщенной растворимости и поддерживая значение pH раствора в определенном диапазоне. Кристалл, полученный из соединения формулы I, включает кристаллическую воду. Кристаллическое соединение формулы I будет терять кристаллическую воду в течение вакуумной сушки и будет происходить кристаллическая трансформация. Соответственно, некоторые кристаллические формы соединения формулы I до и после кристаллической трансформации, а также способы его получения раскрыты в настоящем изобретении.

В другом аспекте при изучении систем растворения для кристалла соединения формулы I и влияния кристаллической воды в кристалле на кристаллическую форму, авторы изобретения открыли, что при применении низших спиртов в качестве системы растворения для кристаллизации кристаллические формы могут быть поделены на 3 типа. Например, рентгеновские порошковые дифрактограммы (XRPD) для полученных кристаллов посредством применения н-пропанола, этанола, изопропанола и воды в качестве кристаллизующего растворителя по существу идентичны, поэтому кристаллы могут быть классифицированы как одна кристаллическая форма. Более того, другая кристаллическая форма может быть получена при помощи метанола и воды в качестве кристаллизующего растворителя. Еще одна кристаллическая форма может быть получена при помощи воды в качестве только кристаллизующего растворителя, когда снижают температуру. При интенсивном исследовании кристаллизующего растворителя, авторы изобретения обнаружили, что растворители, за исключением вышеупомянутых растворителей, такие как ацетон, ацетонитрил, изобутиловый спирт, н-бутанол, этилацетат, метиленхлорид не приемлемы для кристаллизации соединения формулы 1. Твердые вещества, полученные при помощи данных систем растворения, представляют собой аморфные твердые вещества и обладают низкой стабильностью.

В другом аспекте для вышеупомянутых кристаллов, кристаллизованных в различных растворителях, кристаллическая форма обладает тесной связью с количеством кристаллической воды. Исследователи обнаружили, что кристаллическая трансформация будет происходить в течение вакуумной сушки всех вышеупомянутых кристаллов, т.е. в течение процесса потери воды кристаллом. Например, кристалл А будет оставаться в виде одной и той же кристаллической формы, когда содержание влаги составляет от 30% до 12%. В случае, когда содержание влаги снижено до 12%-6% при помощи вакуумной сушки в комбинации с осушителем (Р₂О₅) для удаления воды из кристалла А, кристалл А трансформируют в кристалл В. В случае, когда воду из кристалла B в дальнейшем удаляют, и содержание влаги снижено до 6%, кристалл В трансформируют в кристалл С. Аналогично, кристалл D может быть получен при помощи применения метанола и воды в качестве кристаллизующей системы растворителей, где содержание влаги составляет более 10%. Когда содержание влаги снижено до менее 10% за счет вакуумной сушки в комбинации с осушителем (Р₂О₅) для удаления воды из кристалла D, кристалл D трансформируют в кристалл Е. Кристалл F может быть получен при помощи применения воды в качестве только кристаллизующего растворителя, где содержание влаги составляет более 10%. В случае, когда содержание влаги снижено до менее 10% при помощи применения вакуумной сушки в комбинации с осушителем (Р₂О₅) для удаления воды из кристалла F, кристалл F трансформируют в кристалл G.

Кроме того, в течение трансформации кристалла А посредством высушивания может возникнуть состояние, при котором присутствуют оба кристалла А и В и которое авторы изобретения называют смешанным кристаллом формулы I. Аналогично, может быть состояние, при котором присутствуют оба кристалла В и С, и которое авторы изобретения называют смешанным кристаллом соединения формулы I. Аналогично, также могут представлять собой смешанный кристалл для кристалла D и кристалла Е, или кристалла F и кристалла G.

Определенные связи суммированы в виде следующего:

В одном аспекте новая кристаллическая форма соединения I предложена настоящим изобретением.

Кристалл А циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный к формированию фармацевтически приемлемой соли, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла А содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,1±0,2, 8,0±0,2, 14,7±0,2, 16,8±0,2, 18,9±0,2, 20,3±0,2, 21,1±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения, рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла А дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2, 11,9±0,2, 12,3±0,2, 16,1±0,2, 18,5±0,2, 19,6±0.2, 22,1±0,2, 22,8±0,2, 23,1±0,2, 24,3±0,2, 25,4±0,2, 28,3±0,2, 33,5±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла А дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 9,1±0,2, 10,4±0,2, 15,6±0,2, 24,9±0,2, 26,0±0,2, 28,8±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл А имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), приведенную на фиг. 1.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл А имеет ИК-спектрограмму, приведенную на фиг. 2.

Кристалл В циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный образовывать фармацевтически приемлемую соль, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла В содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2°, 11,9±0,2°, 12,8±0,2°, 16,8±0,2°, 19,6±0,2°, 21,1±0,2°, 22,1±0,2°, 22,8±0,2°, 24,3±0,2°, 25,4±0,2°.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла В дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 20: 8.3±0,2°, 13,4±0,2°, 14,0±0,2°, 15,3±0,2°, 15,9±0,2°, 18,5±0,2°, 26,9±0.2°, 30,5±0,2°.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл В имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), приведенную на фиг. 3.

Кристалл С циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный образовывать фармацевтически приемлемую соль, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) С содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 8,6±0,2°, 11,9±0,2°.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла В дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 20,7±0,2°.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения, кристалл С имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), приведенную на фиг. 4.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл С обладает ИК-спектрограммой, приведенной на фиг. 5.

Кристалл D циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный образовывать фармацевтически приемлемую солю, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла D содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 5,6±0,2, 14,4±0,2, 19,8±0,2, 22,7±0,2, 23,0±0,2, 23,9±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла D дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,4±0,2, 8,2±0,2, 9,7±0,2, 12,2±0,2, 16,5±0,2, 18,6±0,2, 22,3±0,2, 28,2±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла D дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 6,0±0,2, 6,4±0,2, 6,8±0,2, 11,2±0,2, 14,9±0,2, 15,5±0,2, 17,3±0,2, 19,1±0,2, 20,3±0,2, 21,5±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл D имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), приведенную на фиг. 6.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл D обладает ИК-спектрограммой, приведенной на фиг. 7.

Кристалл Е циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный образовывать фармацевтически приемлемую соль, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла Е содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 9,7±0,2°, 19,8±0,2°, 23,0±0,2°.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла Е дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 6,9±0,2°, 13,0±0,2°, 17,5±0,2°, 24,5±0,2°.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл Е имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), приведенную на фиг. 8.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл Е обладает ИК-спектрограммой, приведенной на фиг. 9.

Кристалл F циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный образовывать фармацевтически приемлемую соль, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла F содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,0±0,2, 7,9±0,2, 12,6±0,2, 14,1±0,2, 18,5±0,2, 20,6±0,2, 21,6±0,2, 35,6±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла F дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2, 12,1±0,2, 14,4±0,2, 16,7±0,2, 19,8±0,2, 21,1±0,2, 22,9±0,2, 23,6±0,2, 24,9±0,2, 30,7±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла F дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 15,8±0,2, 18,0±0,2, 19,3±0,2, 25,4±0,2.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл F имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), приведенную на фиг. 10.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл F обладает ИК-спектрограммой, приведенной на фиг. 11.

Кристалл G циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный образовывать фармацевтически приемлемую соль, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла F содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2°, 19,8±0,2°, 21,1±0,2°.

Кристалл G циклопептида формулы I, где R представляет собой Н или катион, способный образовывать фармацевтически приемлемую соль, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) кристалла F содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 8,3±0,2°, 12,0±0,2°, 12,9±0,2°, 13,3±0,2°, 14,1±0,2°, 15,3±0,2°, 16,8±0,2°, 18,6±0,2°, 22,7±0,2°, 25,8±0,2°, 26,9±0,2°.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл G имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму (XRPD), приведенную на фиг. 12.

В другом предпочтительном воплощении настоящего изобретения кристалл G обладает ИК-спектрограммой, приведенной на фиг. 13.

В другом аспекте изобретения предложен способ получения кристаллов A-G циклопептида.

Способ получения кристаллов A-G циклопептида включает следующие стадии:

(a) растворение соединения формулы I в воде или водном органическом растворителе (i) и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) получение кристалла циклопептида посредством снижения температуры и/или добавления органического растворителя (i).

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, боле предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (b), температура снижена от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из метанола, этанола, н-пропанола и изопропанола.

В одном воплощении настоящего изобретения после стадии (b), может следовать стадия (с): получение кристаллов циклопептида посредством центрифугирования или фильтрования.

В одном воплощении настоящего изобретения после стадии (с), может следовать стадия (d): вакуумная сушка для контроля содержания влаги, таким образом, получения кристаллов.

Способ получения кристалла А циклопептида включает следующие стадии:

(a) растворение соединения формулы I в водном органическом растворителе (i) и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) получение кристалла А циклопептида посредством снижения температуры и/или добавления органического растворителя (i).

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (b), температура снижена от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более, выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

Кроме того, кристалл А циклопептида может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А соединения формулы I за счет снижения температуры и добавления органического растворителя (i), или полное осаждение кристалла А соединения формулы I за счет добавления органического растворителя (i).

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температура снижена от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10 и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

В одном воплощении настоящего изобретения кристалл А соединения формулы I может быть получен посредством следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном органическом растворителе (i), и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А соединения формулы I за счет снижения температуры и добавления органического растворителя (i);

(c) получение кристалла А за счет центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадиях (а) и (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более, выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

В одном воплощении настоящего изобретения кристалл А соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном органическом растворителе (i) и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А соединения формулы I за счет снижения температуры;

(c) получение кристалла А за счет центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температура снижена от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

В одном воплощении настоящего изобретения кристалл А соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном органическом растворителе (i) и контроль pH раствора соединения формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А соединения формулы I посредством добавления органического растворителя (i);

(с) получение кристалла А за счет центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадиях (а) и (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл А соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А соединения формулы I за счет снижения температуры раствора и добавления органического растворителя (i);

(c) получение кристалла А за счет центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл А соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А соединения формулы I посредством добавления органического растворителя (i);

(c) получение кристалла А при помощи центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10 и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

Способ получения кристаллов В и С циклопептида включает следующие стадии:

(a) растворение соединения формулы I в водном органическом растворителе (i) и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) получение кристалла А циклопептида по п. 1 или 2 за счет снижения температуры и/или добавления органического растворителя (i);

(c) вакуумная сушка кристалла А, полученного на стадии (b), и контроль содержания влаги, таким образом, получение кристаллов.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

На стадии вакуумной сушки (с), кристалл С соединения формулы I может быть получен при помощи поддержания содержания влаги на уровне менее 6%, и кристалл В соединения формулы I может быть получен за счет поддержания содержания влаги на уровне от 6% до 12%.

Кроме того, кристаллы В и С циклопептида могут быть получены при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) получение кристалла А циклопептида по п.1 или 2 за счет снижения температуры и добавления органического растворителя (i), или получение кристалла А циклопептида по п.1 или 2 за счет добавления органического растворителя (i);

(c) вакуумное высушивание кристалла А, полученного на стадии (b), и контроль содержания влаги, так чтобы получить кристаллы.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более, выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

При вакуумной сушке на стадии (с), кристалл С соединения формулы I может быть получен за счет поддержания содержания влаги на уровне менее 6%, и кристалл В соединения формулы I может быть получен за счет поддержания содержания влаги на уровне от 6% до 12%.

В одном воплощении настоящего изобретения кристалл В или С соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

вакуумной сушки кристалла А соединения формулы I и контроля содержания влаги, так чтобы получить кристалл В или С, или их комбинацию.

В случае вакуумной сушки кристалл С соединения формулы I может быть получен за счет поддержания содержания влаги на уровне менее 6%, и кристалл В соединения формулы I может быть получен за счет поддержания содержания влаги на уровне от 6% до 12%.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл В соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном органическом растворителе (i) и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А циклопептида за счет снижения температуры и/или добавления органического растворителя (i);

(c) получение кристалла А при помощи центрифугирования или фильтрования;

(d) вакуумная сушка кристалла А, полученного на стадии (с), и поддержание содержания влаги на уровне от 6% до 12%, так чтобы получить кристалл В.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном органическом растворителе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°C, предпочтительно от -10 до 35°C, более предпочтительно от -5 до 30°C, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°C.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл В соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А циклопептида за счет снижения температуры и добавления органического растворителя (i);

(c) получение кристалла А при помощи центрифугирования или фильтрования;

(d) вакуумное высушивание кристалла А, полученного на стадии (с), и поддержание содержания влаги на уровне от 6% до 12%, так чтобы получить кристалл В.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°C, предпочтительно от 20 до 40°C.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл С соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном органическом растворителе (i) и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А циклопептида за счет снижения температуры и/или добавления органического растворителя (i);

(c) получение кристалла А при помощи центрифугирования или фильтрования;

(d) вакуумная сушка кристалла А, полученного на стадии (с), и поддержание содержания влаги на уровне менее 6%, так чтобы получить кристалл С.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора контролируют от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение органического растворителя (i) к воде в водном растворе (i) составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10 и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл С соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла А циклопептида за счет снижения температуры и добавления органического растворителя (i) или полного осаждения кристалла А за счет добавления органического растворителя (i);

(c) получение кристалла А при помощи центрифугирования или фильтрования;

(d) вакуумная сушка кристалла А, полученного на стадии (с), и поддержание содержания влаги на уровне менее 6%, так чтобы получить кристалл С.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение органического растворителя (i) к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

На стадии (а) и/или (b), упомянутый органический растворитель (i) представляет собой один или более выбранный из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

Способ получения кристалла D циклопептида включает следующие стадии:

(a) растворение соединения формулы I в водном метаноле и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) получение кристалла D циклопептида за счет снижения температуры и/или добавления метанола.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора контролируют от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение метанола к воде в водном метаноле составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

Кристалл D циклопептида также может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет снижения температуры и добавления метанола или полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет добавления метанола.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -5 до 30°С, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10 и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

В одном воплощении настоящего изобретения после стадии (b) может следовать стадия (с): получение кристалла D циклопептида при помощи центрифугирования или фильтрования.

В одном воплощении настоящего изобретения кристалл D соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном метаноле и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет добавления метанола;

(c) получение кристалла D при помощи центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение метанола к воде в водном метаноле составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10 и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

В одном воплощении настоящего изобретения кристалл D соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном метаноле и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет снижения температуры;

(c) получение кристалла D при помощи центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение метанола к воде в водном метаноле составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл D соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в водном метаноле и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет добавления метанола;

(c) получение кристалла D при помощи центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение метанола к воде в водном метаноле составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл D соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет снижения температуры и добавления метанола;

(c) получение кристалла D при помощи центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -5 до 30°С, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл D соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

(а) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет добавления метанола;

(c) получение кристалла D при помощи центрифугирования или фильтрования.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

Способ получения кристалла Е циклопептида включает следующие стадии:

(a) растворение соединения формулы I в водном метаноле и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет снижения температуры и/или добавления метанола;

(c) получение кристалла D при помощи центрифугирования или фильтрования;

(d) вакуумная сушка кристалла D, полученного на стадии (с), и поддержание содержания влаги на уровне менее 10%, так чтобы получить кристалл Е.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), объемное отношение метанола к воде в водном метаноле составляет от 0,01 до 100, предпочтительно от 0,1 до 10, более предпочтительно от 0,5 до 3,0.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

Кристалл Е циклопептида может быть получен при помощи следующих стадий:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла D соединения формулы I за счет снижения температуры и добавления метанола или полное осаждение кристалла D за счет добавления метанола;

(c) получение кристалла D при помощи центрифугирования или фильтрования;

(d) вакуумная сушка кристалла D, полученного на стадии (с) и поддержание содержания влаги на уровне менее 10%, так чтобы получить кристалл Е.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора контролируют от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -40 до 35°С, предпочтительно от -10 до 35°С, более предпочтительно от -5 до 30°С, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

На стадии (b), объемное отношение метанола к раствору стадии (а) составляет от 0,1 до 50, предпочтительно от 0,1 до 10, и наиболее предпочтительно от 1 до 5.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл Е соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

вакуумной сушки кристалла D соединения формулы I и контроля содержания влаги, так чтобы получить кристалл Е или комбинацию кристалла D и кристалла Е.

В случае вакуумной сушки, кристалл Е соединения формулы I может быть получен при помощи контроля содержания влаги на уровне менее 10%.

Способ получения кристалла F циклопептида включает следующие стадии:

(a) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла F соединения формулы I (циклопептид) за счет снижения температуры.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -10 до 35°С, предпочтительно от -5 до 30°С, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

В одном воплощении настоящего изобретения после стадии (b) может следовать стадия (с): получение кристалла F циклопептида при помощи центрифугирования или фильтрования.

Способ получения кристалла G циклопептида включает следующие стадии:

(а) растворение соединения формулы I в воде и контроль pH раствора, содержащего соединение формулы I;

(b) полное осаждение кристалла F соединения формулы I за счет снижения температуры;

(c) получение кристалла F при помощи центрифугирования или фильтрования;

(d) вакуумная сушка кристалла F, полученного на стадии (с), и поддержание содержания влаги на уровне менее 10%, так чтобы получить кристалл G.

На стадии (а), температура растворения составляет от 10 до 50°С, предпочтительно от 20 до 40°С.

На стадии (а), pH раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, предпочтительно от 3,5 до 4,5.

На стадии (а), раствор содержит от 50 до 500 мг/мл, предпочтительно от 80 до 450 мг/мл, более предпочтительно от 100 до 300 мг/мл соединения формулы I, на основании общего объема раствора на стадии (а).

На стадии (b), температуру снижают до значений от -10 до 35°С, предпочтительно от -5 до 30°С, и наиболее предпочтительно от 5 до 10°С.

В другом воплощении настоящего изобретения кристалл G соединения формулы I может быть получен при помощи следующих стадий:

вакуумной сушки кристалла F соединения формулы I и контроля содержания влаги, так чтобы получить кристалл G или комбинацию кристаллов F и G.

В случае вакуумной сушки кристалл G соединения формулы I может быть получен при помощи поддержания содержания влаги на уровне менее 10%.

Как употреблено в данном документе, «соединение I», «соединение формулы I» или «формулы I соединение» могут быть употреблены взаимозаменяемо, все из них относятся к аморфному веществу с химической структурой формулы I или веществу с другой кристаллической формой, отличной от кристаллов A-G соединения формулы I по изобретению, или соединению, имеющему следующую структурную формулу, или его фармацевтически приемлемой соли:

где R представляет собой Н или катион, способные образовывать фармацевтически приемлемую соль.

Предпочтительно, фармацевтически приемлемые соли включают: соли металлов, такие как соли щелочных металлов (такие как соль натрия, соль калия), соли щелочно-земельных металлов (такие как соль кальция, соль магния и т.д.), аммониевые соли, соли, образованные при помощи органических оснований (например, соль триметиламина, соль триэтиламина, соль пиридина, соль пиколина, соль дициклогексинамина, соль N,N,-дибензилэтилендиамина, диизопропилэтиламина и т.д.), соли присоединения органических кислот (такие как формат, ацетат, трифторацетат, малеат, тартрат, метансульфонат, бензолсульфонат, толуол сульфонат и т.д.), соли присоединения неорганических кислот (например, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, сульфат, фосфат и т.д.), соли, образованные при помощи аминокислот (например, аргининовой, аспарагиновой, глутаминовой кислот и т.д.) и т.п.

Соединение формулы I может быть получено посредством обычных способов в области техники, например, но не ограничено, при помощи способа получения данного соединения, описанного в WO 9611210; альтернативно, соединение также может быть получено из коммерческих источников, таких как, но не ограничено, Fujisawa, Япония.

Идентификация кристалла соединения формулы I и его свойств

После получения кристаллов формулы I авторы изобретения в дальнейшем изучили его свойства при помощи различных способов и инструментов.

В настоящее время рентгеновская порошковая дифракция, также известная как рентгеновская поликристаллическая дифракция (XRD или XRPD), является рутинным экспериментальным способом определения структуры кристалла (т.е. кристаллической формы). При помощи рентгеновского порошкового дифрактометра, серии дифракционных диаграмм могут быть получены при пропускании рентгеновских лучей через кристалл. В диаграмме различные линии дифракции и их интенсивность определяют при помощи атомного кластера, имеющего определенную структуру, таким образом, может быть определена структура кристалла.

Способы определения рентгеновской порошковой дифрактограммы кристалла хорошо известны в области техники. Например, рентгеновская порошковая дифрактограмма может быть получена при помощи улучшенной модели рентгеновского порошкового дифрактометра Bruker D8 со скоростью сканирования 2°/мин. Для получения диаграммы применяют медь в качестве облучаемой мишени.

Кристаллическая структура также может быть определена при помощи инфракрасной спектрометрии (ИК), известной в области техники. Например, она может быть определена при помощи РЕ Spectrum One В, таблетирование в KBr:образец = 200:1, и сканировании с 400~4000 см^-1.

Содержание влаги в кристалле определяют при помощи обычных способов детекции в области техники, например, при помощи способа Карла Фишера.

Применения кристаллов соединения формулы I и их композиций.

Применения кристаллов соединения формулы I предложено в изобретении. В одном аспекте они могут быть применены для получения соединения формулы II;

Пути синтеза описаны в WO 9611210, 9857923, 2004014879.

В другом аспекте соединение формулы I, предложенное в настоящем изобретении, может непосредственно быть применено для получения лекарственных препаратов для лечения грибковых инфекций. Может быть предложена фармацевтическая композиция, содержащая кристалл соединения формулы I, и фармацевтически приемлемый носитель.

Как употреблено в данном документе, термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к носителю для введения терапевтического агента, включая различные эксципиенты и разбавители. Термин относится к таким носителям, которые сами по себе не являются активными ингредиентами и не будут давать неспецифическую токсичность при введении. Приемлемые носители хорошо известны специалистам в области техники. В "Remington's Pharmaceutical Sciences" (Mack Pub. Co., NJ 1991) можно найти полное обсуждение фармацевтически приемлемых эксципиентов. В композиции фармацевтически приемлемые носители могут включать жидкости, такие как вода, солевой раствор, глицерол и этанол. Кроме того, вспомогательные вещества могут присутствовать вместе с данными носителями, такие как разрыхлители, смачивающие агенты, эмульгаторы, вещества, регулирующие pH и т.п.

Преимущества изобретения в основном включают:

1. В данном изобретении чистота кристалла соединения формулы I значительно улучшена и количество примесей значительно снижено для получения кристалла соединения формулы I с высокочистой и стабильно кристаллической формой, таким образом, решая технические проблемы, существующие в области техники.

2. Авторы изобретения выбрали определенные условия получения в результате повторных экспериментов, были получены неожиданные технические эффекты, так что предложен способ получения кристалла соединения формулы I высокой чистоты, и такой способ приемлем для крупномасштабной продукции и высокого выхода.

3. В настоящем изобретении предложен способ получения соединения формулы II высокой чистоты с хорошей стабильностью, где соединение формулы II может быть получено из предшественника, соединения формулы I. Усилия по очистке соединения II значительно снижены, и конечный продукт, соединение формулы II, может быть получен при помощи простого способа очистки. Выход также существенно улучшен, таким образом достигая неожиданных технических эффектов.

Краткое описание графических материалов

Фигура 1 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму кристалла А соединения формулы I; где

Фигура 2 представляет собой инфракрасный спектр (ИК) кристалла А соединения формулы I.

Фигура 3 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму кристалла В соединения формулы I; где

Фигура 4 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму кристалла С соединения формулы I; где

Фигура 5 представляет собой инфракрасный (ИК) спектр кристалла С соединения формулы I.

Фигура 6 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму кристалла D соединения формулы I; где

Фигура 7 представляет собой инфракрасный (ИК) спектр кристалла D соединения формулы I.

Фигура 8 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму кристалла Е соединения формулы I; где

Фигура 9 представляет собой инфракрасный (ИК) спектр кристалла Е соединения формулы I.

Фигура 10 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму кристалла F соединения формулы I; где

Фигура 11 представляет собой инфракрасный (ИК) спектр кристалла F соединения формулы I.

Фигура 12 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму кристалла G соединения формулы I; где

Фигура 13 представляет собой инфракрасный (ИК) спектр кристалла G соединения формулы I.

Фигура 14 представляет собой рентгеновскую порошковую дифрактограмму аморфного порошка соединения формулы I.

Способ осуществления изобретения

Изобретение будет в дальнейшем проиллюстрировано при помощи ссылки на следующие конкретные примеры. Следует понимать, что данные примеры предназначены только для иллюстрации данного изобретения, но не для ограничения объема изобретения. В отношении экспериментальных способов в следующих примерах без конкретных условий они предложены для обычных условий или согласно инструкции производителя. Если не указано иное, все проценты, отношения, пропорции и части указаны по массе.

Единицы массовых/объемных процентов в данном изобретении хорошо известны специалистам в области техники, например масса растворенного вещества в 100 мл раствора.

Если не определено иное, все научные и технические термины, примененные в данном документе, имеют значение, обычно понимаемое специалистами в области техники. Кроме того, любой способ или материал, сходный или эквивалентный таковым, описанным в данном документе, могут быть применены в способе по изобретению. Предпочтительные воплощения и материалы, описанные в данном документе, приведены только в качестве иллюстраций.

Пример 1

Получение соединения I

76 г соединения формулы I в твердом порошке получали согласно способу примера 1 патента США 5,376,634 (см. фиг. 14 диаграмму XRPD).

Пример 2

Получение кристалла А соединения формулы I

При 50°С, 3,5 г твердого порошка соединения I, полученного в примере 1, растворяли в смешанном растворе, состоящем из 5 мл воды и 3 мл н-пропанола, и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 2,0 при помощи ледяной уксусной кислоты, и раствор охлаждали до 30°С. Кристаллы соединения I осаждали и систему перемешивали в течение 5 часов при 30°С, так, что кристаллы соединения I постепенно увеличивались. Кристалл А соединения формулы I получали при помощи фильтрации и XRPD, их ИК- спектры можно увидеть на фигурах 1 и 2.

Пример 3

Получение кристалла А соединения формулы I

При 10°С, 1,5 г твердого порошка соединения I, полученного в примере 1, растворяли в смешанном растворе, состоящем из 20 мл воды и 10 мл н-пропанола, и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 5,0 при помощи ледяной уксусной кислоты, и 40 мл н-пропанола добавляли медленно по капле. И затем раствор охлаждали до -5°С. Раствор перемешивали при -5°С в течение 2 часов. Кристалл А соединения формулы I получали при помощи фильтрации и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 1 и 2.

Пример 4

Получение кристалла А соединения формулы I

При 30°С, 1,6 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 9 мл воды и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 2,8 при помощи ледяной уксусной кислоты, и раствор охлаждали до 11°С. Кристаллы соединения I осаждали, и 61 мл этанола медленно добавляли по капле. Раствор перемешивали при 11°С в течение 2 часов. Кристалл А соединения формулы I получали при помощи фильтрации, и его XRPD и ИК-спектр можно найти на фигурах 1 и 2.

Пример 5

Получение кристалла А соединения формулы I

При 28°С, 1,8 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 5 мл воды и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 3,6 при помощи ледяной уксусной кислоты, и 30 мл н-пропанола добавляли медленно по капле при 28°С. Кристаллы соединения I осаждали. Кристалл А соединения формулы I получали при помощи фильтрации, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 1 и 2.

Пример 6

Получение кристалла А соединения формулы I

При 30°С, 2,8 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 7 мл 0,02 моль/л натрий-ацетатного буфера (pH 4,0), и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 4,0 при помощи ледяной уксусной кислоты, и 14 мл н-пропанола добавляли медленно по капле. Кристаллы соединения I осаждали, и систему перемешивали в течение 10 часов при 30°С, так что кристаллы соединения I постепенно увеличивались. Кристалл А соединения формулы I получали посредством фильтрации при помощи воронки Бюхнера, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 1 и 2.

Пример 7

Получение кристалла В соединения формулы I

При 30°С, 2,5 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в смешанном растворе, состоящем из 9 мл воды и 7 мл н-пропанола, и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 4,0 при помощи ледяной уксусной кислоты, и раствор охлаждали до 10°С. Кристаллы соединения I осаждали и 16 мл н-пропанола медленно добавляли по капле. Раствор перемешивали при 10°С в течение 2 часов. Кристаллы получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь). Кристалл В соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 6,2%, и его XRPD можно увидеть на фигуре 3.

Пример 8

Получение кристалла В соединения формулы I

При 45°С, 1,6 г соединения, полученного в примере 1, растворяли в смешанном растворе, состоящем из 3 мл воды и 2 мл этанола, и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 3,2 при помощи ледяной уксусной кислоты, и раствор охлаждали до 30°С. Кристаллы соединения I осаждали и систему охлаждали до 10°С. И затем 25 мл этанола добавляли медленно по капле. Конечную смесь перемешивали при 10°С в течение 2 часов. Кристаллы получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь). Кристалл В соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 9,0%, и его XRPD можно увидеть на фигуре 3.

Пример 9

Получение кристалла В соединения формулы I

При 28°С, 1,8 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в смешанном растворе, состоящем из 5 мл воды и 5 мл изопропанола, и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 3,6 при помощи ледяной уксусной кислоты и раствор охлаждали до 17°С. Кристаллы соединения I осаждали, систему перемешивали при 17°С в течение 2 часов. Кристаллы получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь). Кристалл В соединения формулы I получали, когда содержание влаги составило 10,1%, и его XRPD можно увидеть на фигуре 3.

Пример 10

Получение кристалла В соединения формулы I

Кристалл А, полученный в примере 2, высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь). Кристалл В соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 11,9%, и его XRPD можно увидеть на фигуре 3.

Пример 11

Получение кристалла С соединения формулы I

Кристалл В, полученный в примере 7, в дальнейшем высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь) для удаления влаги. Кристалл С соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 5,1%, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 4 и 5.

Пример 12

Получение кристалла С соединения формулы I

Кристалл В, полученный в примере 8, в дальнейшем высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь) для удаления влаги. Кристалл С соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 5,9%, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 4 и 5.

Пример 13

Получение кристалла С соединения формулы I

Кристалл В, полученный в примере 9, в дальнейшем высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь) для удаления влаги. Кристалл С соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 4,1%, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 4 и 5.

Пример 14

Получение кристалла С соединения формулы I

При 30°С, 2,8 г твердого порошка соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 7 мл 0,02 моль/л натрий-ацетатного буфера (pH 4,0), и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 4,0 при помощи ледяной уксусной кислоты, и 14 мл н-пропанола добавляли медленно по капле. Кристаллы соединения I осаждали, и систему перемешивали в течение 10 часов при 30°С, так что кристаллы соединения I постепенно увеличивались. И затем раствор охлаждали до 10°С и перемешивали в течение 3 часов. Кристаллы соединения формулы I получали при помощи фильтрации при помощи воронки Бюхнера и высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь) для удаления влаги. Кристалл С соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 4,5%, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 4 и 5.

Пример 15

Получение кристалла D соединения формулы I

При 25°С, 2,0 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в смешанном растворе, состоящем из 5 мл воды и 15 мл метанола, и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 3,5 при помощи ледяной уксусной кислоты, и раствор охлаждали до 10°С. Кристаллы соединения I осаждали и систему охлаждали до -40°С и перемешивали в течение 2 часов при -40°С. Кристалл D соединения формулы I получали при помощи фильтрации, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 6 и 7.

Пример 16

Получение кристалла Е соединения формулы I

При 40°С, 2,1 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в смешанном растворе, состоящем из 5 мл воды и 16 мл метанола, и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 3,5 при помощи ледяной уксусной кислоты. Раствор охлаждали до 12°С, и кристаллы соединения I осаждали. Затем 60 мл метанола добавляли медленно по капле и конечную систему перемешивали при 12°С в течение 2 часов. Кристаллы получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь). Кристалл Е соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 9,5%, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 8 и 9.

Пример 17

Получение кристалла F соединения формулы I

При 40°С, 2,5 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 5 мл воды и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 3,9 при помощи ледяной уксусной кислоты. Раствор охлаждали до 35°С, и кристаллы соединения I осаждали. Конечную систему перемешивали при 35°С в течение 10 часов. Кристалл F получали при помощи фильтрации, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 10 и 11.

Пример 18

Получение кристалла G соединения формулы I

При 20°С, 0,23 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 5 мл воды и перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 3,9 при помощи ледяной уксусной кислоты. Раствор охлаждали до 5°С, и кристаллы соединения I осаждали. Конечную систему перемешивали при 5°С в течение 10 часов. Кристаллы получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом (где Р₂О₅ помещали в вакуумную печь). Кристалл G соединения формулы I получали, когда содержание влаги составляло 9,8%, и его XRPD и ИК-спектр можно увидеть на фигурах 12 и 13.

Пример 19

Получение соединения формулы II из кристалла соединения формулы I

Соединение формулы II синтезировали из соединения формулы I согласно способу синтеза микафунгина в WO 2004014879.

Кристалл А соединения формулы I, полученный в примере 2 настоящей заявки (1,07 ммоль, 1,00 г), растворяли в 12 мл ДМФ. Конечный раствор охлаждали до температуры ниже 0°С на ледяной бане. Диизопропилэтиламин (0,22 г, 1,67 ммоль) добавляли, и температуру поддерживали при 0°С. МКС-8 (1-[4-[5-(4-пентилоксифенил)изоксазол-3-ил]бензоилокси]-1Н-1,2,3-бензотриазол) (0,53 г, 1,14 ммоль) медленно добавляли, и реакцию нагревали до 2-6°С и поддерживали в течение 4 часов. 60 мл этилацетата добавляли непосредственно в реакционную жидкость в конце реакции, перемешивали в течение 1 часа и фильтровали для получения микафунгин диизопропилэтиламина. Соль растворяли в 30 мл ацетона и 30 мл этилацетата и фильтровали с помощью целлюлозного фильтра. Микафунгин диизопропилэтиламин высушивали в вакууме для удаления органического растворителя. Чистота микафунгин диизопропилэтиламина составляла 99,15% при помощи ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), и выход составил 91,6%.

Пример 20

Получение соединения формулы II из кристаллов В, С, D, Е, F, G соединения формулы I

Соединение формулы II синтезировали из соединения формулы I согласно способу синтеза микафунгина в WO 2004014879.

Кристаллы В, С, D, Е, F и G соединения формулы I, полученные в примере 7, примере 14, примере 15, примере 16, примере 17 и примере 18 настоящей заявки (1,07 ммоль, 1,00 г) растворяли в 12 мл ДМФ соответственно. Конечный раствор охлаждали до температуры ниже 0°С на ледяной бане. Диизопропилэтиламин (0,22 г, 1,67 ммоль) добавляли, и температуру поддерживали при 0°С. МКС-8 (1-[4-[5-(4-пентилоксифенил)изоксазол-3-ил]бензоилокси]-1Н-1,2,3-бензотриазол) (0,53 г, 1,14 ммоль) медленно добавляли, и реакцию нагревали до 2-6°С и поддерживали в течение 4 часов. 60 мл этилацетата добавляли непосредственно к каждой реакционной смеси в конце реакции, перемешивали в течение 1 часа и фильтровали для получения микафунгин диизопропилэтиламина. Соль растворяли в 30 мл ацетона и 30 мл этилацетата. Фильтровали с помощью целлюлозного фильтра. Микафунгин диизопропилэтиламин высушивали в вакууме для удаления остаточного органического растворителя. Чистоту микафунгин диизопропилэтиламина определяли при помощи ВЭЖХ.

Результаты и выход приведены в таблице 1

Таблица 1

Сравнительный пример 1

Получение соединения формулы II из аморфного твердого вещества соединения формулы I

Соединение формулы II синтезировали из соединения формулы I согласно способу синтеза микафунгина в WO 2004014879.

Аморфный порошок соединения формулы I, полученного в примере 1 настоящей заявки (1,07 ммоль, 1,00 г), растворяли в 12 мл ДМФ. Конечный раствор охлаждали до температуры ниже 0°С на ледяной бане. Диизопропилэтиламин (0,22 г, 1,67 ммоль) добавляли, и температуру поддерживали при 0°С. МКС-8 (1-[4-[5-(4-пентилоксифенил)изоксазол-3-ил]бензоилокси]-1Н-1,2,3-бензотриазол) (0,53 г, 1,14 ммоль) медленно добавляли, и реакцию нагревали до 2-6°С и поддерживали в течение 4 часов. 60 мл этилацетата добавляли непосредственно в реакционную жидкость в конце реакции, перемешивали в течение 1 часа и фильтровали для получения микафунгин диизопропилэтиламина. Соль растворяли в 30 мл ацетона и 30 мл этилацетата и фильтровали с помощью целлюлозного фильтра. Микафунгин диизопропилэтиламин высушивали в вакууме для удаления остаточного органического растворителя. Чистоту микафунгин диизопропилэтиламина определяли в качестве 95,75% при помощи ВЭЖХ, и выход составил 75,2%.

Исходя из вышеприведенного сравнительного примера очевидно, что по сравнению с аморфным твердым веществом соединения формулы I, ВЭЖХ чистота и выход соединения формулы II существенно улучшен за счет применения соединения формулы I с хорошей кристаллической формой.

Сравнительный пример 2

Влияние pH на получение кристалла соединения формулы I

При 30°С, 1,2 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 6 мл воды при помощи перемешивания. pH доводили до 1,8 при помощи ледяной уксусной кислоты. 20 мл этанола медленно растворяли, и твердые вещества соединения I осаждали. Систему перемешивали в течение 1 часа. 1,0 г твердого вещества соединения формулы I получали при помощи фильтрации и высушивали в вакууме. Микроструктуру твердого вещества наблюдали под микроскопом и обнаруживали, что вещество обладает нерегулярной структурой и его диаграммы XRPD можно увидеть на фигуре 14.

Сравнительный пример 3

Влияние pH на получение кристалла соединения формулы I

При 30°С, 1,2 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 6 мл воды при помощи перемешивания. pH доводили до 5,4 при помощи ледяной уксусной кислоты. 20 мл этанола добавляли медленно, и твердые вещества соединения I осаждали. Систему перемешивали в течение 1 часа. 0,90 г твердого вещества соединения формулы I получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом. Микроструктуру твердого вещества наблюдали под микроскопом и обнаружили, что вещество обладает нерегулярной структурой, и его диаграмму XRPD можно увидеть на фигуре 14.

Сравнительный пример 4

Влияние pH на получение кристалла соединения формулы I

При 30°С, 1,2 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 6 мл воды при помощи перемешивания. pH доводили до 6,5 при помощи ледяной уксусной кислоты. 20 мл этанола медленно добавляли, и твердые вещества соединения 1 осаждали. Систему перемешивали в течение 1 часа. 0,86 г твердого вещества соединения формулы I получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом. Микроструктуру твердого вещества наблюдали под микроскопом и обнаружили, что вещество обладает нерегулярной структурой, и его диаграмму XRPD можно увидеть на фигуре 14.

Сравнительный пример 5

Влияние растворителей на получение кристалла соединения формулы I

При 20°С, 2,4 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 7 мл воды. pH доводили до 4,0 при помощи ледяной уксусной кислоты. Конечную смесь перемешивали до полного растворения соединения I. 15 мл ацетонитрила медленно добавляли. Конечную смесь перемешивали в течение 2 часов, и твердые вещества осаждали. Микроструктуру твердого вещества наблюдали под микроскопом и обнаружили, что оно обладает нерегулярной структурой и его диаграмму XRPD можно увидеть на фигуре 14.

Сравнительный пример 6

Влияние растворителей на получение кристалла соединения формулы I

При 8°С, 2,1 г соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 7 мл воды. pH доводили до 3,8 при помощи ледяной уксусной кислоты. Конечную смесь перемешивали до полного растворения соединения I. 20 мл ацетона медленно добавляли, конечную смесь перемешивали в течение 2 часов, и твердые вещества осаждали. Микроструктуру твердого вещества наблюдали под микроскопом и обнаружили, что вещество обладает нерегулярной структурой. Полученное соединение формулы I фильтровали и высушивали под вакуумом, и его диаграмму XRPD можно увидеть на фигуре 14.

Сравнительный пример 7

Влияние концентрации раствора на получение кристалла соединения формулы I

При 10°С, 1,0 г твердого порошка соединения I, полученного в примере 1, растворяли в 25 мл. Конечную смесь перемешивали до полного растворения соединения I. pH доводили до 4,5 при помощи ледяной уксусной кислоты. 150 мл н-пропанола медленно добавляли, конечный раствор охлаждали до -5°С и перемешивали при -5°С в течение 2 часов. 0,41 г кристалла А соединения формулы I получали при помощи фильтрации и высушивали под вакуумом. Выход после очистки был низким в основном из-за низкой концентрации раствора, содержащего соединение формулы I. Другие 150 мл н-пропанола в дальнейшем добавляли, и конечную систему перемешивали при -5°С в течение 2 часов, только 0,52 г кристалла А соединения формулы I получали при помощи фильтрации и вакуумного высушивания. Поэтому раствор соединения I, концентрация которого составляет менее 50 мг/мл, является приемлемым для способа кристаллизации и промышленного производства.

Исходя из упомянутого выше сравнительного примера, очевидно, что выбор pH в течение способа очистки очень важен для получения соединения формулы I. Если pH не поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0, то сложно получить хорошие кристаллы соединения формулы I, полученное твердое вещество наблюдали в виде аморфного твердого вещества под микроскопом, и пик, характерный для диаграммы XRPD, отсутствовал.

Выбор растворителя также очень важен для получения соединения формулы I. За исключением вышеупомянутых растворителей хорошие кристаллы соединения формулы I не могут быть получены при помощи других растворителей. Полученное твердое вещество наблюдали в виде аморфного твердого вещества под микроскопом, и пик, характерный для кристалла в диаграмме XRPD, отсутствовал.

Пример 21

Тест на чистоту и стабильность

В данном примере сравнивали чистоту и стабильность образцов, полученных в сравнительных примерах и примерах. Конкретный способ описан следующим образом:

Образцы из сравнительного примера 2, сравнительного примера 3, сравнительного примера 4, сравнительного примера 5, сравнительного примера 6, сравнительного примера 7, примера 1, примера 2, примера 3, примера 4, примера 5, примера 6, примера 7, примера 8, пример 9, примера 10, примера 11, примера 12, примера 13, примера 14, примера 15, примера 16, примера 17, примера 18 получали и помещали в герметичные контейнеры при температуре от 0 до 8°С в течение 7 дней, соответственно. И затем анализировали содержание примесей в каждом образце.

Результаты приведены в следующей таблице 2:

Исходя из вышеупомянутых данных, можно увидеть, что кристаллы соединений формулы I проявляют более высокую чистоту и лучшую стабильность после хранения в течение длительного периода времени.

Пример 22

Получение фармацевтической композиции

20 г лактозы растворяли в чистой воде (200 мл) при температуре менее 50°С. После охлаждения ниже 20°С в раствор лактозы добавляли 2,5 г кристалла В соединения формулы I, полученного в примере 7. Конечный раствор осторожно перемешивали, чтобы избежать образования пузырей. 2% водную лимонную кислоту (0,95 мл) добавляли, и затем в раствор добавляли 0,4% водный NaOH (приблизительно 24 мл) для доведения pH до 5,5. И затем конечный раствор разбавляли чистой водой для получения заданного объема (250 мл). Конечным раствором наполняли 100 сосудов (объем которых составлял 10 мл) по 2,5 мл каждый. Раствор в каждом сосуде лиофилизировали согласно обычным способам, так чтобы получить лиофилизированные композиции, каждая из которых содержит 25 мг кристалла соединения I.

Вышеупомянутые примеры представляют собой только предпочтительные примеры для настоящего изобретения, и такие примеры не могут быть применены для ограничения объема изобретения. Существенное техническое содержание согласно настоящему изобретению широко определено в формуле изобретения. И любые сущности или способы, выполненные другими, должны быть рассмотрены в качестве эквивалентов и подпадать под объем изобретения, как определено формулой изобретения, если упомянутые сущности или способы являются такими же, как таковые, определенные формулой изобретения.

Изобретение относится к кристаллу циклопептида формулы I, способам его получения и применению для получения соединения, обладающего противогрибковой активностью. Кристалл циклопептида обладает высокой чистотой и стабильностью. Способ получения позволяет получить кристалл циклопептида формулы I с высоким выходом и приемлем для крупномасштабного производства. 20 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 14 ил.

1. Кристалл А циклопептида формулы I, где R представляет собой ион Na, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD - Х-ray powder diffraction pattern) указанного кристалла А содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,1±0,2, 8,0±0,2, 14,7±0,2, 16,8±0,2, 18,9±0,2, 20,3±0,2, 21,1±0,2;

2. Кристалл А циклопептида формулы I по п. 1, где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла А дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2, 11,9±0,2, 12,3±0,2, 16,1±0,2, 18,5±0,2, 19,6±0,2, 22,1±0,2, 22,8±0,2, 23,1±0,2, 24,3±0,2, 25,4±0,2, 28,3±0,2, 33,5±0,2.

3. Кристалл В циклопептида формулы I, где R представляет собой ион Na, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла В содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2°, 11,9±0,2°, 12,8±0,2°, 16,8±0,2°, 19,6±0,2°, 21,1±0,2°, 22,1±0,2°, 22,8±0,2°, 24,3±0,2°, 25,4±0,2°

4. Кристалл С циклопептида формулы I, где R представляет собой ион Na, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла С содержит характеристические пики при следующих 2θ углах: 8,6±0,2°, 11,9±0,2°

5. Кристалл D циклопептида формулы I, где R представляет собой ион Na, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла D содержит характеристические пики при следующих 2θ углах: 5,6±0,2°, 14,4±0,2°, 19,8±0,2°, 22,7±0,2°, 23,0±0,2°, 23,9±0,2°

6. Кристалл D циклопептида формулы I по п. 5, где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла D дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,4±0,2°, 8,2±0,2°, 9,7±0,2°, 12,2±0,2°, 16,5±0,2°, 18,6±0,2°, 22,3±0,2°, 28,2±0,2°.

7. Кристалл Е циклопептида формулы I, где R представляет собой ион Na, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла Е содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 9,7±0,2°, 19,8±0,2°, 23,0±0,2°

8. Кристалл F циклопептида формулы I, где R представляет собой ион Na, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла F содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,0±0,2°, 7,9±0,2°, 12,6±0,2°, 14,1±0,2°, 18,5±0,2°, 20,6±0,2°, 21,6±0,2°, 35,6±0,2°

9. Кристалл F циклопептида формулы I по п. 8, где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла F дополнительно содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2°, 12,1±0,2°, 14,4±0,2°, 16,7±0,2°, 19,8±0,2°, 21,1±0,2°, 22,9±0,2°, 23,6±0,2°, 24,9±0,2°, 30,7±0,2°.

10. Кристалл G циклопептида формулы I, где R представляет собой ион Na, и где рентгеновская порошковая дифрактограмма (XRPD) указанного кристалла G содержит характеристические пики при следующих углах 2θ: 7,3±0,2°, 19,8±0,2°, 21,1±0,2°

11. Способ получения кристалла А циклопептида по любому из пп. 1 или 2, включающий следующие стадии:

(а) растворение соединения формулы I в воде или водном органическом растворителе (i) и контроль рН раствора, содержащего соединение формулы I, где R представляет собой ион Na

(b) получение кристалла А циклопептида по любому из пп. 1 или 2 за счет снижения температуры и/или добавления органического растворителя (i);

где органический растворитель (i) представляет собой одно или более веществ, выбранных из группы, состоящей из метанола, этанола, н-пропанола и изопропанола.

12. Способ получения по п. 11, где на стадии (а) рН раствора поддерживают на уровне от 2,0 до 5,0.

13. Способ получения по п. 11, где на стадии (а) раствор содержит от 50 до 500 мг/мл соединения формулы I, относительно общего объема раствора на стадии (а).

14. Способ получения кристалла циклопептида по любому из пп. 3 или 4, включающий следующие стадии:

(а) растворение соединения формулы I в воде или водном органическом растворителе (i) и контроль рН раствора, содержащего соединение формулы I, где R представляет собой ион Na

(b) получение кристалла А циклопептида по любому из пп. 1 или 2 за счет снижения температуры и/или добавления органического растворителя (i);

(c) вакуумное высушивание кристалла А, полученного на стадии (b), и контроль содержания влаги так, чтобы получить кристалл по любому из пп. 3 или 4;

где органический растворитель (i) представляет собой одно или более веществ, выбранных из группы, состоящей из этанола, н-пропанола и изопропанола.

15. Способ получения по п. 14, где кристалл С по п. 4 получают за счет поддержания содержания влаги на уровне менее 6%, и кристалл В по п. 3 получают за счет поддержания содержания влаги на уровне от 6% до 12%.

16. Способ получения кристалла D циклопептида по любому из пп. 5 или 6, включающий следующие стадии:

(а) растворение соединения формулы I в воде или водном метаноле и контроль рН раствора, содержащего соединение формулы I, где R представляет собой ион Na

(b) получение кристалла D циклопептида по любому из пп. 5 или 6 за счет снижения температуры и/или добавления метанола.

17. Способ получения кристалла Е циклопептида по п. 7, включающий следующие стадии:

(а) растворение соединения формулы I в воде или водном метаноле и контроль рН раствора, содержащего соединение формулы I, где R представляет собой ион Na

(b) получение кристалла D циклопептида по любому из пп. 5 или 6 за счет снижения температуры и/или добавления метанола;

(c) вакуумное высушивание кристалла D, полученного на стадии (b), и контроль содержания влаги так, чтобы получить кристалл Е.

18. Способ получения кристалла F циклопептида по любому из пп. 8 или 9, включающий следующие стадии:

(а) растворение соединения формулы I в воде и контроль рН раствора, содержащего соединение формулы I, где R представляет собой ион Na

(b) получение кристалла F циклопептида по любому из пп. 8 или 9 за счет снижения температуры.

19. Способ получения кристалла G циклопептида по п. 10, включающий следующие стадии:

(а) растворение соединения формулы I в воде и контроль рН раствора, содержащего соединение формулы I, где R представляет собой ион Na

(b) получение кристалла F циклопептида по любому из пп. 8 или 9 за счет снижения температуры;

(c) вакуумное высушивание кристалла F, полученного на стадии (b), и контроль содержания влаги так, чтобы получить кристалл G.

20. Применение кристалла циклопептида по любому из пп. 1-10 для получения соединения формулы II, где R представляет собой ион Na:

21. Применение кристалла циклопептида по любому из пп. 1-10 для получения лекарственных препаратов для лечения грибковых инфекций, где R представляет собой ион Na.

22. Противогрибковая фармацевтическая композиция, включающая кристалл циклопептида по любому из пп. 1-10 и фармацевтически приемлемый носитель.

23. Способ получения фармацевтической композиции по п. 22, включающий следующую стадию:

кристалл циклопептида по любому из пп. 1-10 смешивают с фармацевтически приемлемым носителем так, чтобы получить фармацевтическую композицию по п. 22.

24. Композиция циклопептида для получения соединения формулы II, где R представляет собой ион Na, включающая один или более кристалл циклопептида, выбранный из группы, состоящей из: кристалла А циклопептида по любому из пп. 1 или 2, кристалла В циклопептида по п. 3, кристалла С циклопептида по п. 4

25. Композиция циклопептида для получения соединения формулы II, где R представляет собой ион Na, включающая кристалл D циклопептида по любому из пп. 5 или 6 и кристалл Е циклопептида по п. 7

26. Композиция циклопептида для получения соединения формулы II, где R представляет собой ион Na, включающая кристалл F циклопептида по любому из пп. 8 или 9 и кристалл G циклопептида по п. 10