ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2018 года по МПК A61K45/00 A61K31/405 A61K31/41 A61K31/47 A61P35/00 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0001] Настоящее изобретение относится к противоопухолевому средству, средству облегчающему боль, которая сопровождает опухоль(и), и ингибитору стромальной гиперплазии, который содержит ингибитор лейкотриена в качестве эффективного ингредиента.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] Рак представляет собой заболевание, которое насчитывает большую долю смертельных случаев у современных японцев. В настоящий момент разработаны и используются на практике различные противораковые средства, но противораковые средства имеют сильные побочные эффекты и они дают сильную нагрузку на организмы пациентов. В последние годы на практике используют лучевую терапию тяжелыми частицами, но стоимость терапии высока, и терапия доступна только в ограниченных учреждениях. Таким образом, лучевая терапия тяжелыми частицами не может быть так называемым основным выбором, который может быть свободно выбран в настоящее время. Следовательно, все еще сохраняется выраженная потребность в противораковых средствах, которые очень эффективны против рака, имеют только небольшие побочные эффекты и могут быть предоставлены при низкой стоимости.

[0003] В качестве примера экономически эффективного противоракового средства, которое содержит в качестве эффективного ингредиента противоаллергическое средство оксатомид или азеластин их или фармацевтически приемлемые соли, раскрыто в патентном документе 1. Как оксатомид так и азеластин представляют собой средства, относящиеся к классу антагонистов H1 рецептора гистамина. Противоопухолевое применение оксатомида и азеластина и их фармацевтически приемлемых солей, описанных в патентном документе 1, более конкретно представляет собой терапевтическое применение для злокачественных опухолей. В патентном документе 1 вовсе не раскрыто то, что ингибиторы лейкотриенов, такие как антагонисты лейкотриеновых рецепторов, в действительности эффективны при различных эпителиальных и неэпителиальных опухолях, которые самопроизвольно развиваются in vivo, при этом давая небольшие побочные эффекты. В патентном документе 1 также не раскрыт эффект, оказываемый на доброкачественные опухоли. Кроме того, в патентном документе 1 вовсе не описано действие оксатомида и азеластина на стромальные компоненты, такие как нервы, кровеносные сосуды и фибробласты в локализациях опухолей.

ДОКУМЕНТ(Ы) ИЗВЕСТНОГО УРОВНЯ ТЕХНИКИ

[Патентный документ(ы)]

[0004] Патентный документ 1: JP 2003-252763

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ПРОБЛЕМЫ, ПОДЛЕЖАЩИЕ РЕШЕНИЮ С ПОМОЩЬЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0005] Цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы предоставить фармацевтические средства, которые эффективны при лечении, предотвращении и т.п. рака и обладают меньшими побочными эффектами.

СРЕДСТВА РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМ

[0006] В результате интенсивного исследования авторы настоящего изобретения обнаружили, что ингибиторы лейкотриенов эффективны для опухолей, самопроизвольно развивающихся in vivo, и едва дают побочные эффекты. Кроме того, поскольку дегенерацию периферических нервных клеток в локализациях опухолей обнаруживали в группах, которые лечили ингибитором лейкотриена, то обнаружено, что ингибиторы лейкотриенов также эффективны для облечения боли, сопровождающей опухоли. Кроме того, авторы настоящего изобретения проводили иммуноокрашивание тканевых образцов различных полученных у человека опухолей, а также самопроизвольно развившихся опухолевых тканей крыс с использованием антитела против лейкотриеновых рецепторов. Как результат, присутствие клеток, положительных по антителу против лейкотриеновых рецепторов, можно обнаруживать во всех различных исследованных опухолевых тканях, независимо от того, является ли опухоль эпителиальной или неэпителиальной, и является ли опухоль озлокачествленной или доброкачественной. Таким образом, подтверждали, что ингибиторы лейкотриенов эффективны при различных опухолях, тем самым выполнив настоящее изобретение.

[0007] То есть, настоящее изобретение предусматривает противоопухолевое средство, которое содержит по меньшей мере один ингибитор лейкотриена в качестве эффективного ингредиента. Настоящее изобретение также относится к облегчающему средству против боли, которая сопровождает опухоль(и), это средство содержит по меньшей мере один ингибитор лейкотриена в качестве эффективного ингредиента. Настоящее изобретение также относится к ингибитору стромальной гиперплазии, который содержит по меньшей мере один ингибитор лейкотриена в качестве эффективного ингредиента. Настоящее изобретение также относится к способу лечения, предотвращения, подавлению метастазов или подавлению рецидивов опухоли(ей) у нуждающегося в этом субъекта, этот способ включает введение эффективного количества по меньшей мере одного ингибитора лейкотриена субъекту. Настоящее изобретение также относится к способу облечения боли, сопровождающей опухоль(и), у нуждающегося в этом субъекта, этот способ включает введение эффективного количества по меньшей мере одного ингибитора лейкотриена субъекту. Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования стромальной гиперплазии у нуждающегося в этом субъекта, этот способ включает введение эффективного количества по меньшей мере одного ингибитора лейкотриена субъекту. Настоящее изобретение также относится к ингибитору лейкотриена для использования в лечении, предотвращении, подавлении метастазов или подавлении рецидивов опухоли(ей). Настоящее изобретение также относится к ингибитору лейкотриена для использования в облегчении боли, сопровождающей опухоль(и). Настоящее изобретение также относится к ингибитору лейкотриена для использования при ингибировании стромальной гиперплазии. Настоящее изобретение также относится к способу скрининга противоопухолевого средства, облегчающего средства против боли, которая сопровождает опухоль(и), или ингибитора стромальной гиперплазии, в этом способе используют в качестве индикатора способность ингибировать путь передачи сигнала, опосредованной связыванием лейкотриена с лейкотриеновым рецептором. Настоящее изобретение также относится к способу получения противоопухолевого средства, облегчающего средства против боли, которая сопровождает опухоль(и), или ингибитора стромальной гиперплазии, этот способ включает стадии: скрининга противоракового средства, облегчающего средства против боли, которая сопровождает опухоль(и), или ингибитора стромальной гиперплазии с помощью способа скрининга согласно описанному выше настоящему изобретению; и получение противоопухолевого средства, облегчающего средства против боли, которая сопровождает опухоль(и), или ингибитора стромальной гиперплазии, полученного с помощью скрининга.

ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0008] Подтверждено, что противоопухолевое средство по настоящему изобретению фактически эффективно для опухолей, самопроизвольно развивающихся in vivo, и почти не дает побочных эффектов. Поскольку ингибиторы лейкотриенов, используемые на практике в качестве противоаллергических средств, можно использовать в качестве эффективных ингредиентов, противоопухолевое средство по настоящему изобретению можно предоставлять при низкой стоимости. Авторы настоящего изобретения обнаружили экспрессию лейкотриеновых рецепторов на различных опухолях независимо от того, является ли опухоль эпителиальной или неэпителиальной и является ли злокачественной или доброкачественной (см. примеры, далее). Ингибиторы лейкотриенов могут проявлять свои противоопухолевые эффекты против различных опухолей посредством ингибирования сигнальной трансдукции, опосредованной лейкотриеновыми рецепторами, в локализациях опухолей, посредством такого действия, как антагонистическое действие на лейкотриеновые рецепторы или ингибирование образования лейкотриена.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ

[0009] На фиг. A представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которые не получали лечения (сравнительный пример 1). E, эндотелиальная клетка сосуда; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно.

На фиг. В представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили монтелукаст натрия (пример 1; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; F, фибробласт; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда.

На фиг. С представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили монтелукаст натрия (пример 1; период дозирования, 3 суток). L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; F, фибробласт; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда; F-apo, апоптоз фибробласта.

На фиг. D представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили пранлукаста гидрат (пример 3; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда.

На фиг. E представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили пранлукаста гидрат (пример 3; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда.

На фиг. F представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили пранлукаста гидрат (пример 3; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда.

На фиг. G представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зафирлукаст (пример 2; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; E, эндотелиальная клетка сосуда; F, фибробласт; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда; F-apo, апоптоз фибробласта.

На фиг. H представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зафирлукаст (пример 2; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; F, фибробласт; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда.

На фиг. I представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зафирлукаст (пример 2; период дозирования, 3 суток). L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; E, эндотелиальная клетка сосуда.

На фиг. J представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зилейтон (пример 4; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда; F-apo, апоптоз фибробласта.

На фиг. К представлена электронная микрофотография опухолевой ткани из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зилейтон (пример 4; период дозирования, 3 суток). RBC, красная клетка крови; L, внутрисосудистый просвет; V, кровеносный сосуд; C, коллагеновое волокно; E-apo, апоптоз эндотелиальной клетки сосуда.

На фиг. L представлена электронная микрофотография гладкомышечной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили монтелукаст натрия (пример 1; период дозирования, 3 суток). SMC-Apo, апоптоз гладкомышечной клетки.

На фиг. M представлена электронная микрофотография гладкомышечной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили пранлукаста гидрат (пример 3; период дозирования, 3 суток). SMC-Apo, апоптоз гладкомышечной клетки.

На фиг. N представлена электронная микрофотография гладкомышечной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зафирлукаст (пример 2; период дозирования, 3 суток). SMC-Apo, апоптоз гладкомышечной клетки; C, коллагеновое волокно.

На фиг. О представлена электронная микрофотография гладкомышечной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зилейтон (пример 4; период дозирования, 3 суток). SMC-Apo, апоптоз гладкомышечной клетки.

На фиг. P представлена электронная микрофотография периферической нервной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили монтелукаст натрия (пример 1; период дозирования, 3 суток), a, аксон; m, миелиновая оболочка; ★, вакуолизация и дегенерация аксона; стрелка и ※, дегенерация миелиновой оболочки.

На фиг. Q представлена электронная микрофотография периферической нервной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили пранлукаста гидрат (пример 3; период дозирования, 3 суток), a, аксон; m, миелиновая оболочка; ★ вакуолизация и дегенерация аксона; стрелка и ※, дегенерация миелиновой оболочки.

На фиг. R представлена электронная микрофотография периферической нервной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зафирлукаст (пример 2; период дозирования, 3 суток), a, аксон; m, миелиновая оболочка; ★, вакуолизация и дегенерация аксона; стрелка и ※, дегенерация миелиновой оболочки.

На фиг. S представлена электронная микрофотография периферической нервной клетки в локализации опухоли из группы крыс-опухоленосителей, которым вводили зилейтон (пример 4; период дозирования, 3 суток), a, аксон; m, миелиновая оболочка; ★, вакуолизация и дегенерация аксона; стрелка - дегенерация миелиновой оболочки.

На фиг. T представлено изображение иммуноокрашивания самопроизвольно развивающейся опухолевой ткани молочной железы крысы, это изображение получали с использованием антитела против лейкотриеновых рецепторов. Стрелка - клетка, положительно окрашенная антителом против лейкотриеновых рецепторов (клетка окрашена коричневым).

На фиг. U представлено изображение иммуноокрашивания ткани злокачественной опухоли молочной железы человека, это изображение получали с использованием антитела против лейкотриеновых рецепторов. Стрелка - клетка, положительно окрашенная антителом против лейкотриеновых рецепторов (клетка окрашена коричневым).

На фиг. V представлено изображение иммуноокрашивания ткани злокачественной опухоли желудка человека, это изображение получали с использованием антитела против лейкотриеновых рецепторов. Стрелка - клетка, положительно окрашенная антителом против лейкотриеновых рецепторов (клетка окрашена коричневым).

На фиг. W представлено изображение иммуноокрашивания лейомиомы матки человека, это изображение получали с использованием антитела против лейкотриеновых рецепторов. Стрелка - клетка, положительно окрашенная антителом против лейкотриеновых рецепторов (клетка окрашена коричневым).

На фиг. X представлено изображение иммуноокрашивания лейомиосаркомы человека, это изображение получали с использованием антитела против лейкотриеновых рецепторов. Стрелка - клетка, положительно окрашенная антителом против лейкотриеновых рецепторов (клетка окрашена коричневым).

ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0010] В настоящем изобретении «ингибитор лейкотриена» представляет собой вещество, которое ингибирует путь передачи сигнала, опосредованной связыванием лейкотриена с лейкотриеновым рецептором. Ингибирование может происходить на любой стадии пути от биосинтеза лейкотриена до пути передачи сигнала, расположенного ниже по каскаду реакций относительно лейкотриенового рецептора. Возможные конкретные примеры ингибитора лейкотриена включают вещества, которые ингибируют образование лейкотриена, вещества, которые ингибируют связывание лейкотриена с лейкотриеновым рецептором, и вещества, которые подавляют активацию лейкотриеновых рецепторов для того, чтобы ингибировать сигнальную трансдукцию факторов, расположенных ниже по каскаду реакций. Типично, ингибитор лейкотриена может представлять собой вещество, которое ингибирует или подавляет функцию лейкотриена in vivo, и включает ингибиторы образования лейкотриенов и антагонисты лейкотриеновых рецепторов.

[0011] В настоящем изобретении примеры «ингибиторов образования лейкотриенов» включают вещества, которые ингибируют такие факторы, как ферменты, которые функционируют в пути биосинтеза лейкотриена (ингибиторы биосинтеза лейкотриенов), и вещества, которые ингибируют высвобождение лейкотриена из клеток, которые образуют лейкотриен, таких как тучных клетки, эозинофилы, нейтрофилы, базофилы и моноциты (ингибиторы высвобождения лейкотриена). Конкретные примеры ингибиторов образования лейкотриенов, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают ингибиторы 5-липоксигеназы, такие как зилейтон, ABT-761, CJ-13610, ZD-2138, AA-861 и цирсилиол; ингибиторы белков, активирующих 5-липоксигеназу, такие как MK-886 и BAY XI005. Фармацевтически приемлемые соли этих соединений и фармацевтически приемлемые сольваты этих соединений и их соли также можно использовать. Однако ингибиторы образования лейкотриенов, которые можно использовать в качестве эффективных ингредиентов в настоящем изобретении, не ограничены этими конкретными примерами.

[0012] В настоящем изобретении «антагонисты лейкотриеновых рецепторов» включают различные вещества, которые антагонистически функционируют против действия лейкотриена на лейкотриеновый рецептор. Примеры антагонистов лейкотриеновых рецепторов включают вещества, которые конкурентно или неконкурентно ингибируют связывание лейкотриена с лейкотриеновым рецептором, и вещества, обладающие действием, подавляющим активацию лейкотриенового рецептора, чтобы ингибировать сигнальную трансдукцию для факторов, расположенных ниже по каскаду реакций. Примеры «антагонистов лейкотриеновых рецепторов» также включают молекулы, такие как обратные агонисты, которые связываются с лейкотриеновым рецептором для того, чтобы стабилизировать рецептор в виде неактивной структуры, которые представляют собой один из примеров антагонистов. Конкретные примеры антагонистов лейкотриеновых рецепторов, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают зафирлукаст, монтелукаст, пранлукаст, FPL55712, BAYu9773, LY293111 Na, CGS 25019C, ONO-4057, SB201993, CP195543, SC53228 и BIIL 284 (BIIL 260). Фармацевтически приемлемые соли этих соединений и фармацевтически приемлемые сольваты этих соединений и их соли также можно использовать. Однако антагонисты лейкотриеновых рецепторов, которые можно использовать в качестве эффективных ингредиентов в настоящем изобретении, не ограничены этими конкретными примерами.

[0013] Примеры фармацевтически приемлемых солей включают кислотно-аддитивные соли, такие как соль соляной кислоты, соль серной кислоты, соль фумаровой кислоты, соль маллеиновой кислоты, соль винной кислоты и соль лимонной кислоты. В случаях, когда ингибитор лейкотриена представляет собой кислоту, примеры фармацевтически приемлемых солей также включают соли металлов, такие как соль натрия, соль калия и соль кальция. Примеры фармацевтически приемлемых сольватов включают сольваты с органическим растворителем и гидраты. Однако фармацевтически приемлемые соли и фармацевтически приемлемые сольваты не ограничены этим конкретными примерами.

[0014] Предпочтительные конкретные примеры ингибитора лейкотриена включают по меньшей мере одно, выбранное из группы, состоящей из: соединений, выбранных из монтелукаста, зафирлукаста, пранлукаста и зилейтона; фармацевтически приемлемых солей соединений; и фармацевтически приемлемых сольватов соединений и солей соединений.

[0015] В настоящем изобретении, термин «противоопухолевый» включает подавление опухолеобразования (инициацию, метастазирование и рецидивирование) и подавление пролиферации опухоли. Соответственно, «противоопухолевое средство» включает терапевтические средства, профилактические средства, подавляющие метастазирование средства и подавляющие рецидивирование средства для опухолей. Термин «опухоль» включает как доброкачественные опухоли, так и злокачественные опухоли. Более конкретно, опухоль можно относить к озлокачествленным эпителиальным опухолям, доброкачественным эпителиальным опухолям, озлокачествленным неэпителиальным опухолям и доброкачественным неэпителиальным опухолям. Примеры злокачественных опухолей включают солидные злокачественные опухоли и злокачественные опухоли крови. Примеры солидных злокачественных опухолей включают карциномы (озлокачествленные эпителиальные опухоли), саркомы (озлокачествленные неэпителиальные опухоли) и озлокачествленные солидные опухоли нервной системы, такие как меланома и глиома (озлокачествленные неэпителиальные опухоли). Примеры злокачественных опухолей крови включают злокачественные опухоли крови, такие как лейкоз, злокачественная лимфома и множественная миелома. Термин «солидная опухоль» включает не только солидные злокачественные опухоли, но также доброкачественные солидные опухоли.

[0016] Противоопухолевое средство по настоящему изобретению содержит по меньшей мере один ингибитор лейкотриена в качестве эффективного ингредиента. Противоопухолевое средство может содержать два или более ингибитора лейкотриенов в качестве эффективных ингредиентов. В случаях, когда противоопухолевое средство по настоящему изобретению используют для лечения злокачественных опухолей, средства, содержащие в качестве эффективного ингредиента по меньшей мере одно, выбранное из оксатомида и азеластина и их фармацевтически приемлемых солей, можно исключать из противоопухолевого средства по настоящему изобретению, независимо от того, включены или нет эти противоаллергические средства в ингибитор лейкотриена, который определен в настоящем изобретении. В случаях, когда противоопухолевое средство по настоящему изобретению используют в качестве подавляющего метастазирование средства или подавляющего рецидивирование средства для злокачественных опухолей, средства, содержащие в качестве эффективного ингредиента по меньшей мере одно, выбранное из оксатомида и азеластина и их фармацевтически приемлемых солей, можно исключать из противоопухолевого средства по настоящему изобретению. В случаях, когда противоопухолевое средство по настоящему изобретению используют в качестве профилактического средства для злокачественных опухолей, средства, содержащие в качестве эффективного ингредиента по меньшей мере одно, выбранное из оксатомида и азеластина и их фармацевтически приемлемых солей, можно исключать из противоопухолевого средства по настоящему изобретению.

[0017] Как описано далее в примерах, экспрессию лейкотриеновых рецепторов подтверждали в опухолях разлиных типов независимо от того, является ли опухоль доброкачественной или озлокачествленной и является ли эпителиальной или неэпителиальной. Полагают, что ингибиторы лейкотриенов проявляют свои противоопухолевые эффекты посредством ингибирования сигнальной трансдукции, опосредованной лейкотриеновыми рецепторами, экспрессированными в локализации опухоли, посредством антагонистического действия против лейкотриеновых рецепторов или посредством ингибирования образования лейкотриена. Таким образом, ингибиторы лейкотриенов могут широко проявлять свой противоопухолевый эффект против озлокачествленных и доброкачественных эпителиальных опухолей, а также озлокачествленных и доброкачественных неэпителиальных опухолей. Противоопухолевое средство по настоящему изобретению предпочтительно можно использовать, например, для солидных опухолей или злокачественных опухолей или солидных злокачественных опухолей, несмотря на то, что использование противоопухолевого средства не ограничено этим.

[0018] Ингибиторы лейкотриенов оказывают действие, которое индуцирует апоптоз опухолевых клеток, самопроизвольно развившихся in vivo (см. примеры далее). В частности, поскольку апоптоз и дегенерацию также находят не только в клетках эндотелия вновь образованных кровеносных сосудов, которые представляют собой стромальные компоненты опухолевых тканей и незаменимы в качестве путей снабжения опухолевых клеток ферментами и питательными веществами, но также в других стромальных клетках, таких как периферические нервные клетки, которые пролиферируют рядом с вновь образованными кровеносными сосудами в локализациях опухолей, и гладкомышечные клетки, участвующие в сократительных движениях кровеносных сосудов, среди опухолей ингибиторы лейкотриенов предпочтительно можно использовать для солидных опухолей, в частности, солидных злокачественных опухолей.

[0019] Индукцию апоптоза клеток эндотелия вновь образованных кровеносных сосудов ингибитором лейкотриена находят только в кровеносных сосудах в тканях солидных опухолей, и не находят в неопухолевых здоровых тканях. С точки зрения этого эффекта, противоопухолевое средство по настоящему изобретению, используемое для солидных опухолей, также может представлять собой так называемый ингибитор ангиогенеза, специфичный к солидным опухолям. С точки зрения ингибирующего действия против гиперплазии стромальных клеток, средство также может представлять собой так называемый ингибитор стромальной гиперплазии, специфичный к солидным опухолям. Вновь образованные кровеносные сосуды незаменимы в качестве путей для доставки ферментов и питательных веществ в опухолевые клетки, а другие стромальные компоненты, такие как фибробласты, коллагеновые волокна, образуемые фибробластами, периферические нервные клетки и гладкомышечные клетки составляют локализацию опухоли вместе с опухолевыми клетками. Поскольку ингибитор лейкотриена может подавлять рост и метастазирование солидной опухоли посредством блокирования путей для доставки ферментов и питательных веществ в опухолевые клетки и уничтожения пролиферированных стромальных клеток, возможно лечение и предотвращение солидных опухолей (включая предотвращение метастазирования и рецидивирования злокачественных опухолей).

[0020] Однако поскольку, как описано выше, индукцию апоптоза посредством ингибитора лейкотриена можно найти не только во вновь образованных кровеносных сосудах, но также в самих опухолевых клетках, эффект противоопухолевого средства по настоящему изобретению не ограничен солидными опухолями, и средство также эффективно для злокачественных опухолей крови.

[0021] В целом, в случаях, когда пациента оценивают как потенциально обладающего или обладающего злокачественной опухолью при медицинском обследовании или медицинском осмотре, и в результате подробного исследования затем обнаруживают наличие доброкачественной опухоли, после этого пациента наблюдают с помощью регулярных посещений больницы с целью раннего обнаружения и лечения озлокачествленного изменения (перерождения в злокачественную опухоль). Поскольку ингибиторы лейкотриенов проявляют свои терапевтические эффекты, такие как ингибирование роста, также на доброкачественных опухолях, ингибиторы лейкотриенов также можно использовать для предотвращения опухолей (более конкретно, злокачественных опухолей). В случаях, когда противоопухолевое средство используют с целью предотвращения, средство типично можно вводить субъекту, который имеет доброкачественную опухоль, более конкретно, субъекту, который имеет доброкачественную опухоль, которая может претерпеть озлокачествленное изменение.

[0022] Поскольку ингибиторы лейкотриенов вызывают дегенерацию периферических нервных клеток в локализациях опухолей и уничтожают пролиферировавшие нервные клетки в локализациях опухолей, ингибиторы лейкотриенов также эффективны для облечения боли, сопровождающей опухоли.

[0023] Как описано выше, известны различные ингибиторы лейкотриенов, а также известны способы синтеза этих ингибиторов лейкотриенов.

[0024] Путь введения противоопухолевого средства по настоящему изобретению может представлять собой пероральное введение или парентеральное введение (например, внутривенное введение, подкожное введение, внутримышечное введение, ректальное введение или тому подобное), и может представлять собой системное введение или топическое введение. Пероральное введение является предпочтительным с точки зрения простоты. Дозу надлежащим образом устанавливают в зависимости от тяжести симптомов (например, размер опухоли, степень прогрессирования и/или злокачественное новообразование) у пациента, типа используемого ингибитора лейкотриена и т. п. Несмотря на то, что противоопухолевый эффект можно получать при дозе, в которой средство используют в качестве противоаллергического средства, противоопухолевое средство можно вводить, в случае необходимости, в дозе, которая от 10 до 100 раз превышает применение в качестве противоаллергического средства, или даже в более высокой дозе. Противоопухолевое средство по настоящему изобретению можно использовать в количестве приблизительно от 1 мг до 200000 мг, например, приблизительно от 10 мг до 100000 мг, приблизительно от 100 мг до 100000 мг, приблизительно от 10 мг до 50000 мг, приблизительно от 100 мг до 50000 мг или приблизительно от 10 мг до 10000 мг в отношении количества ингибитора лейкотриена на взрослого в сутки, хотя доза не ограничена этим.

[0025] Дозированная форма противоопухолевого средства не ограничена и может быть надлежащим образом выбрана в зависимости от пути введения. Противоопухолевое средство можно получать с помощью способов формулирования, широко используемых в области фармацевтики. Противоопухолевое средство по настоящему изобретению может иметь тот же состав, и состав, коммерчески доступный в качестве противоаллергического средства.

[0026] Субъект, которому вводят ингибитор лейкотриена, представляет собой млекопитающее, и примеры млекопитающего включают, но не ограничиваясь этим, человека, собаку, кошку, кролика, хомяка, мышь, крысу, хорька, лошадь, крупный рогатый скот, свинью, овцу и обезьяну.

[0027] Используя в качестве индикатора способность ингибировать путь передачи сигнала, опосредованной связыванием лейкотриена с лейкотриеновым рецептором, можно осуществлять скрининг нового противоопухолевого средства, облегчающего средства против боли, которая сопровождает опухоль(и), или ингибитора стромальной гиперплазии. Ингибирование пути передачи сигнала, опосредованной связыванием лейкотриена с лейкотриеновым рецептором, может представлять собой, как описано выше, ингибирование образования лейкотриена, ингибирование связывания лейкотриена с лейкотриеновым рецептором, подавление активации лейкотриенового рецептора для того, чтобы ингибировать сигнальную трансдукцию к факторам, расположенным ниже по каскаду реакций, или тому подобное. Обладает ли средство действием для того, чтобы ингибировать путь передачи сигнала, или нет, можно исследовать, например, на основании того, ингибирует ли средство функцию стимулирующего фактора в пути передачи сигнала или нет, или содействует ли средство функции подавляющего фактора в пути передачи сигнала или нет. Ингибирование функции стимулирующего фактора может представлять собой, например, ингибирование экспрессии фактора в клетке или ингибирование физиологической активности фактора. Содействие функции подавляющего фактора может представлять собой, например, содействие экспрессии фактора в клетке или содействие физиологической активности фактора.

ПРИМЕРЫ

[0028] Настоящее изобретение конкретно описано ниже в виде примеров. Однако настоящее изобретение не ограничено примерами, которые приведены ниже.

[0029]

<Материалы>

Крыс Sprague-Dawley, которые имели самопроизвольно развившуюся опухоль во время воспроизводства (далее в настоящем документе обозначаемых как крысы-опухоленосители) приобретали в Charles River Japan, Inc., и использовали для экспериментов. Все наблюдаемые опухоли представляли собой опухоли молочной железы (аденокарцинома и аденома). Все они представляли собой самопроизвольные опухоли, и крысы представляли собой несущих злокачественную опухоль животных, которые имеют различные условия онкогенеза, включая канцерогенные факторы у млекопитающих, включая человека.

[0030]

<Способы>

Сравнительный пример 1: наблюдение образцов опухолевого повреждения от крыс-опухоленосителей, которые не получали лечения (3 случая)

При эфирном анестезировании опухолевые ткани удаляли у крыс-опухоленосителей. Удаленные опухоли фиксировали и после этого получали и исследовали образцы для световой микроскопии (окрашивание гематоксилином-эозином) и образцы для электронной микроскопии (двойное окрашивание ураном-свинцом).

[0031] Пример 1: терапевтический эффект монтелукаста натрия у крыс-опухоленосителей (3 случая)

Крысам-опухоленосителям перорально вводили ингибитор лейкотриена, содержащий монтелукаст натрия в качестве активного ингредиента (антагонист лейкотриеновых рецепторов; торговое название таблетки «Singulair»; производства MSD К. K.), вплоть до 7 суток в суточной дозе 0,16 мг/кг массы тела в пересчете на монтелукаст натрия. На сутки 3 и сутки 7 опухолевые ткани удаляли под эфирным анестезированием. Аналогичным образом, как в сравнительном примере 1, удаленные опухоли фиксировали и после этого получали и исследовали образцы для световой микроскопии (окрашивание гематоксилином-эозином) и образцы для электронной микроскопии (двойное окрашивание ураном-свинцом).

[0032] Пример 2: терапевтический эффект зафирлукаста у крыс-опухоленосителей (3 случая)

Крысам-опухоленосителям перорально вводили ингибитор лейкотриена, содержащий зафирлукаст в качестве активного ингредиента (антагонист лейкотриеновых рецепторов; торговое название «Accolate»; производства AstraZeneca К. K.), вплоть до 7 суток в суточной дозе 1,33 мг/кг массы тела в пересчете на зафирлукаст. На сутки 3 и сутки 7 опухолевые ткани удаляли под эфирным анестезированием. Аналогичным образом, как в сравнительном примере 1, удаленные опухоли фиксировали, и после этого получали и исследовали образцы для световой микроскопии (окрашивание гематоксилином-эозином) и образцы для электронной микроскопии (двойное окрашивание ураном-свинцом).

[0033] Пример 3: терапевтический эффект пранлукаста гидрата у крыс-опухоленосителей (3 случая)

Крысам-опухоленосителям перорально вводили ингибитор лейкотриена, содержащий пранлукаста гидрат в качестве активного ингредиента (антагонист лейкотриеновых рецепторов; торговое название «Onon»; производства Ono Pharmaceutical Co., Ltd.), вплоть до 7 суток в суточной дозе 7,5 мг/кг массы тела в пересчете на пранлукаста гидрат. На сутки 3 и сутки 7 опухолевые ткани удаляли под эфирным анестезированием. Аналогичным образом, как в сравнительном примере 1, удаленные опухоли фиксировали, и после этого получали и исследовали образцы для световой микроскопии (окрашивание гематоксилином-эозином) и образцы для электронной микроскопии (двойное окрашивание ураном-свинцом).

[0034] Пример 4: терапевтический эффект зилейтона у крыс-опухоленосителей (3 случая)

Крысам-опухоленосителям перорально вводили ингибитор лейкотриена, содержащий зилейтон в качестве активного ингредиента (ингибитор биосинтеза лейкотриена; торговое название «ZYFLO»; производства Abbott Laboratories), вплоть до 7 суток в суточной дозе 34,3 мг/кг массы тела в пересчете на зилейтон. На сутки 3 и сутки 7 опухолевые ткани удаляли под эфирным анестезированием. Аналогичным образом, как в сравнительном примере 1, удаленные опухоли фиксировали, и после этого получали и исследовали образцы для световой микроскопии (окрашивание гематоксилином-эозином) и образцы для электронной микроскопии (двойное окрашивание ураном-свинцом).

[0035]

<Результаты>

В отличие от изображений опухолевых тканей крыс-опухоленосителей, которые не получали лечение, из сравнительного примера 1, в опухолевых клетках у всех крыс-опухоленосителей, которые получали лечение ингибитором лейкотриена, а именно монтелукаст натрия (антагонист лейкотриеновых рецепторов, пример 1), зафирлукаст (антагонист лейкотриеновых рецепторов, пример 2), пранлукаста гидрат (антагонист лейкотриеновых рецепторов, пример 3) или зилейтон (ингибитор биосинтеза лейкотриена, пример 4), наблюдали индукцию апоптоза уже в сутки 3, а также наблюдали заметный ингибирующый эффект, оказываемый на развитие и рост опухолевых клеток.

[0036] Во всех группах, получавших лечение, апоптоз индуцировали в клетках эндотелия вновь образованных кровеносных сосудов, которые представляют собой стромальные компоненты опухолевых тканей и незаменимы в качестве путей доставки ферментов и питательных веществ в опухолевые клетки. Следовательно, полагают, что поток крови в опухоли блокирован, что ведет к ингибирующему эффекту, оказываемому на развитие и рост опухолевых клеток. В дополнение к эндотелиальным клеткам сосудов, апоптоз также наблюдали в фибробластах и гладкомышечных клетках, и, кроме того, также обнаруживали дегенерацию периферических нервных клеток, проходящих рядом с кровеносными сосудами. Такой апоптоз и дегенерацию стромальных клеток обнаруживали только в опухолевых тканях в группах, получавших лечение, и не обнаруживали в нормальных местах во всех группах, получавших лечение, и опухолевых тканях в группе, не получавшей лечение.

[0037] Побочные эффекты у крыс в группах, получавших лечение, не наблюдали.

[0038] Далее приведено более подробное объяснение патологических находок, описанных выше, на основании микрофотографий патологических образцов.

[0039] На фиг. A представлена электронная микрофотография опухолевой ткани группы, которая не получала лечение (сравнительный пример 1), на которой наблюдают нормальную эндотелиальную клетку сосуда (E на фиг.).

[0040] На фиг. В и С представлены электронные микрофотографии опухолевых тканей группы, которой вводили монтелукаст натрия (пример 1, период дозирования, 3 суток). В кровеносных сосудах опухолевых тканей наблюдали апоптоз клеток эндотелия (E-apo на фиг.). Эти клетки эндотелия демонстрировали неравномерную конденсацию и фрагментацию (* на фиг.) своих ядер. Эти состояния соответствуют стадиям апоптоза от II до III (T. Ihara, et al. The process of ultrastructural changes from nuclei to apoptotic body. Virchow Arch (1998) 433: 443-447). Посредством апоптоза клеток эндотелия можно добиваться эффекта ингибирования потока крови к опухолевым тканям (ингибирующий эффект, оказываемый на вновь образованные кровеносные сосуды). Индуцировали апоптоз фибробласта (F-apo на фиг.), который продуцирует коллагеновые волокна и образует строму опухолевой ткани, а также наблюдали уменьшение коллагеновых волокон (C на фиг.). Таким образом, также наблюдали эффект ингибирования стромальной гиперплазии.

[0041] На фиг. с D до F представлены электронные микрофотографии опухолевых тканей из группы, которой вводили пранлукаста гидрата (пример 3; период дозирования, 3 суток). В кровеносных сосудах в опухолевых тканях наблюдали апоптоз клеток эндотелия (E-apo на фиг.). Эти клетки эндотелия демонстрировали неравномерную конденсацию и фрагментацию (* на фиг.) своих ядер. Эти состояния соответствуют стадии апоптоза от II до III (T. Ihara, et al. 1998, описано выше). Аналогично группе, которой вводили зилейтона, можно добиваться эффекта ингибирования потока крови к опухолевым тканям посредством апоптоз клеток эндотелия (ингибирующий эффект, оказываемый на вновь образованные кровеносные сосуды).

[0042] На фиг. с G до I представлены электронные микрофотографии опухолевых тканей из группы, которой вводили зафирлукаста (пример 2; период дозирования, 3 суток). В кровеносных сосудах опухолевых тканей наблюдали апоптоз клеток эндотелия (E-apo на фиг.). Эти клетки эндотелия демонстрировали неравномерную конденсацию и фрагментацию (* на фиг.) своих ядер. Эти состояния соответствуют стадиям апоптоза от II до III (T. Ihara, et al. 1998, описано выше). Кроме того, наблюдали дегенерацию (→) эндотелиальных клеток сосудов (E) (фиг. I). Посредством апоптоза и дегенерации клеток эндотелия можно достигать эффекта ингибирования потока крови к опухолевым тканям (ингибирующий эффект, оказываемый на вновь образованные кровеносные сосуды).

[0043] На фиг. J и К представлены электронные микрофотографии опухолевых тканей из группы, которой вводили зилейтона (пример 4, период дозирования, 3 суток). В кровеносных сосудах опухолевых тканей наблюдали апоптоз клеток эндотелия (E-apo на фиг.). Эти клетки эндотелия демонстрировали неравномерную конденсацию и фрагментацию (* на фиг.) своих ядер. Эти состояния соответствуют стадиям апоптоза от II до III (T. Ihara, et al. 1998, описано выше). Посредством апоптоза клеток эндотелия можно достигать эффекта ингибирования потока крови к опухолевым тканям (ингибирующий эффект, оказываемый на вновь образованные кровеносные сосуды). Также индуцировали апоптоз фибробласта (F-apo на фиг.), который продуцирует коллагеновые волокна и образует строму опухолевых тканей. Таким образом, также наблюдали эффект ингибирования стромальной гиперплазии.

[0044] На фиг. с L до О представлены электронные микрофотографии гладкомышечных клеток из групп, которым вводили ингибиторы лейкотриенов. В любой из групп, которые получали лечение, наблюдали апоптоз гладкомышечных клеток (SMC-Apo) в опухолевой ткани. Эти гладкомышечные клетки демонстрировали неравномерную конденсацию и фрагментацию (*) своих ядер. Эти состояния соответствуют стадиям апоптоза от II до III (T. Ihara, et al. 1998, описано выше). Из-за апоптоза гладкомышечных клеток в опухолевых тканях обнаруживали ингибирующий эффект, оказываемый на вновь образованные кровеносные сосуды (поскольку апоптоз также наблюдали в гладкомышечных клетках вблизи кровеносных сосудов), и ингибирующий эффект, оказываемый на стромальную гиперплазию (поскольку гладкомышечные клетки, вместе с фибробластами, продуцируют коллагеновые волокна, которые являются компонентами, образующими строму). Эти находки обнаруживали только в группах, которым вводили ингибитор лейкотриена, и не обнаруживали в группе, которая не получала лечение.

[0045] На фиг. С P до S представлены электронные микрофотографии периферических нервных клеток из групп, которым вводили ингибиторы лейкотриенов. В периферических нервах в опухолевых тканях наблюдали дегенерацию аксонов (a) и миелиновых оболочек (m). Эти находки указывают на повреждение периферических нервных клеток. Таким образом, введение ингибиторов лейкотриенов вызывало эффект подавления пролиферации нервов, которые идут рядом с кровеносными сосудами. Кроме того, ингибирующий эффект, оказываемый на боль при опухолях, можно получать из-за подавления клеточной пролиферации нервов в опухолевой ткани. Эти находки обнаруживали только в группах, которым вводили ингибиторы лейкотриенов, и не обнаруживали в группе, которая не получала лечение. Дегенерацию не наблюдали вовсе в периферических нервных клетках на контралатеральной стороне относительно локализации опухоли (не локализация опухоли) у каждой крысы-опухоленосителя в группах, которым вводили ингибиторы лейкотриенов. Следовательно, полагают, что ингибиторы лейкотриенов не обладают побочными эффектами.

[0046] Пример 5: исследование лейкотриеновых рецепторов посредством иммуноокрашивания с использованием антитела против лейкотриеновых рецепторов

В различных опухолевых тканях способом иммуноокрашивания (Simple Stain MAX PO method, Nichirei Corporation) изучали, присутствуют ли лейкотриеновые рецепторы или нет, используя их парафиновые срезы м антитело против лейкотриеновых рецепторов (Polyclonal Antibody to CysLTl and Polyclonal Antibody to CysLT2, Acris Antibodies GmbH). Исследованные опухолевые ткани представлены в таблице 1.

[0047]

[Таблица 1] Крыса Самопроизвольная опухоль молочной железы Человек (Злокачественные опухоли) злокачественная опухоль желудка, злокачественная опухоль ободочной кишки, злокачественная опухоль печени, злокачественная опухоль почки, злокачественная опухоль щитовидной железы, злокачественная опухоль глотки, злокачественная опухоль пищевода, злокачественная опухоль желчного протока, злокачественная опухоль поджелудочной железы, злокачественная опухоль молочной железы, злокачественная опухоль предстательной железы, лейомиосаркома, рабдомиосаркома, ангиосаркома (молочная железа) (Доброкачественные опухоли) аденома гипофиза, менингиома, струма, невринома, лейомиома

[0048] Во всех опухолевых тканях, исследованных в данном примере, можно найти клетки, положительные по антителу против лейкотриеновых рецепторов. Репрезентативные примеры изображений иммуноокрашивания представлены на фиг. с T до X.

[0049] Использованные выше ингибиторы лейкотриенов четырех типов представляют собой лекарственные средства, которые антагонистически действуют против лейкотриеновых рецепторов или которые ингибируют образование лейкотриена. Поскольку большое число лейкотриеновых рецепторов экспрессировано на различных клетках в опухолевых тканях, полагают, что терапевтические эффекты против опухолей получают посредством ингибирования сигнальной трансдукции, опосредованной лейкотриеновыми рецепторами. Поскольку экспрессию лейкотриеновых рецепторов наблюдают как в эпителиальных, так и в неэпителиальных опухолевых тканях, то полагают, что ингибиторы лейкотриенов проявляют свои терапевтические эффекты в обеих группах опухолей. Кроме того, поскольку экспрессию лейкотриеновых рецепторов также подтверждали в тканях доброкачественных опухолей, то полагают, что ингибиторы лейкотриенов проявляют свои терапевтические эффекты не только при злокачественных опухолях, но также при доброкачественных опухолях.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой терапевтическое средство для индукции апоптоза клеток злокачественных опухолей и сосудистых эндотелиальных клеток в ткани(ях) злокачественной опухоли, а также средство для лечения доброкачественной опухоли(ей), которая может подвергнуться злокачественному перерождению, где указанная доброкачественная опухоль представляет собой аденому молочной железы, аденому гипофиза, менингиому, зоб, невриному, лейомиому. Данные терапевтические средства содержат по меньшей мере один ингибитор лейкотриена, выбранный из группы соединений, состоящей из монтелукаста, зафирлукаста и пранлукаста; фармацевтически приемлемых солей указанных соединений и фармацевтически приемлемых сольватов указанных соединений и указанных солей. Изобретения также включают терапевтическое средство для лечения доброкачественной опухоли(ей), которая может подвергнуться злокачественному перерождению, которое содержит по меньшей мере один ингибитор лейкотриена, выбранный из группы соединений, состоящей из монтелукаста и зафирлукаста. Изобретения уменьшают побочные эффекты при лечении злокачественных и доброкачественных опухолей. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 24 ил., 1 табл., 5 пр.

1. Средство для индукции апоптоза клеток злокачественных опухолей и сосудистых эндотелиальных клеток в ткани(ях) злокачественной опухоли, которое содержит по меньшей мере один ингибитор лейкотриена, выбранный из группы соединений, состоящей из монтелукаста, зафирлукаста и пранлукаста; фармацевтически приемлемых солей указанных соединений и фармацевтически приемлемых сольватов указанных соединений и указанных солей.

2. Средство по п.1, где указанная опухоль представляет собой солидную опухоль(и).

3. Средство по п.1 или 2, где указанная злокачественная опухоль является по меньшей мере одной, выбранной из рака молочной железы, рака желудка, рака печени, рака щитовидной железы, фарингеального рака, рака пищевода, рака желчного протока, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, лейомиосаркомы, рабдомиосаркомы, ангиосаркомы (молочной железы).

4. Терапевтическое средство для лечения доброкачественной опухоли(ей), которая может подвергнуться злокачественному перерождению, которое содержит по меньшей мере один ингибитор лейкотриена, выбранный из группы соединений, состоящей из монтелукаста и зафирлукаста; фармацевтически приемлемых солей указанных соединений и фармацевтически приемлемых сольватов указанных соединений и указанных солей.

5. Терапевтическое средство для лечения доброкачественной опухоли(ей), которая может подвергнуться злокачественному перерождению, содержащее по меньшей мере один ингибитор лейкотриена, выбранный из группы соединений, состоящей из монтелукаста, зафирлукаста и пранлукаста; фармацевтически приемлемых солей указанных соединений и фармацевтически приемлемых сольватов указанных соединений и указанных солей, где указанная доброкачественная опухоль представляет собой по меньшей мере одну, выбранную из аденомы молочной железы, аденомы гипофиза, менингиомы, зоба, невриномы, лейомиомы.