СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПОЛЛУРОЗА-ТИФА ПТИЦ Российский патент 2019 года по МПК G01N33/531 C12Q1/689 

Описание патента на изобретение RU2685413C1

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к способам получения диагностических препаратов, используемых для массовой прижизненной диагностики пуллороза тифа птиц.

Известен способ получения эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella pullorum-gillinarum, выделение из нее антигенной фракции, формалинизацию эритроцитов баранов и сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов полученным антигеном, отличающийся тем, что выделяют O-антигенную фракцию гидролизом бактериальной массы в 0,1%-ном растворе КОН при температуре 92-94°C в течение 110 120 мин, а сенсибилизацию проводят при температуре 45 50°C в течение 4 ч при концентрации O-антигенной фракции 1 1,2 мг на 1,0 см3 19 20%-ной взвеси эритроцитов в фосфатно-буферном растворе (Патент РФ №2070055, МПК A61K 39/112, G01N 33/555, опубликовано 10.12.1996).

Однако известный процесс изготовления пуллорного эритроцитарного антигена является недостаточно эффективным из-за низкого выхода целевого продукта.

Известен также способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93 96°C с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии (Патент РФ №2085949, МПК G01N 33/555, A61K 39/112, G01N 33/539, A61K 39/02, опубликовано 27.07.1997).

Задачей предполагаемого изобретения является повышение чувствительности целевого продукта.

Это достигается в способе изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93 96°C с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии тем, что в качестве поверхностно-активного вещества для выделения антигенной фракции используют 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%, а сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%.

Известно моюще-дезинфицирующие средства, представляющие собой смеси синтетических детергентов, главным образом анионоактивных и бактерицидных хлорсодержащих веществ. К числу таких средств относится дезмол (авт. свид. №223979, кл. C11D 3/065, 1966 г.). Дезмол содержит поверхностно-активное - вещество триполифосфат натрия, метасиликат натрия, хлорамин, кальцинированную соду, сульфат натрия и воду.

Известен способ получения натриевой соли сукцината хитозана (Патент RU 2144040, МПК С08В 37/08, A61K 31/722, Опубликовано 10.01.2000), который может быть использован в ветеринарии, медицине и косметике в качестве пленкообразователя, гидранта или эмульгатора.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы способа изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц аналогичное заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизны».

Все режимы способа осуществимы в промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:

Пример 1.

А. Получение O-антигенной фракции.

Собранную биомассу после глубинного культивирования в биореакторах штамма S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя пуллороза-тифа ресуспендируют с помощью поверхностно-активного вещества и щелочи (0,8%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1% и 1%-ный водный раствор двууглекислого натрия, взятый в конечной весовой концентрации 0,1% или 0,2%-ный раствор NaOH, взятый в конечной весовой концентрации 0,01%) до концентрации 25 млрд. микробных клеток в 1 мл и экстрагируют в течение 60 мин при t 93-96°C. Экстракт освобождают от клеточного дейтрита центрифугированием на центрифуге OTP-101 К (20000 об/мин) и прогревают при t 93°C в течение 50 мин. Полученный экстракт фильтруют и используют для сенсибилизации эритроцитов барана.

Б. Сенсибилизация эритроцитов барана.

Сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят экстрактом антигенного комплекса в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5%. На 1 л 20% взвеси формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе pH 7,2 добавляют 300 мл экстракта антигена. Тщательно перемешивают и подогревают в водяной бане при t 56°C 30 мин. Затем взвесь эритроцитов выдерживают при t 40°C 2 ч или при комнатной температуре 12 ч. Бутыли оставляют для осаждения методом отстоя. По мере оседания эритроцитов сенсибилизирующий раствор сливают, а к осадку доливают равный объем буфера с 0,15% формальдегида. Операцию повторяют 3-4 раза до полного осветления надосадочной жидкости.

Отмытые сенсибилизированные эритроциты фильтруют через бязево-марлевую салфетку, ресуспендируют в стерильном фосфатно-буферном растворе, содержащем 0,15% формальдегида, до 10% концентрации и выдерживают при t 37°C 24 ч. Далее производится расфасовка в 20 мл флаконы, получая состав 1 эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц.

Пример 2.

А. Получение О-антигенной фракции.

Собранную биомассу после глубинного культивирования в биореакторах штамма S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя пуллороза-тифа ресуспендируют с помощью поверхностно-активного вещества и щелочи (1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,5% и 2%-ный водный раствор двууглекислого натрия, взятый в конечной весовой концентрации 0,2% или 0,3%-ный раствор NaOH, взятый в конечной весовой концентрации 0,015%) до концентрации 25 млрд. микробных клеток в 1 мл и экстрагируют в течение 80 мин при t 96°C. Экстракт освобождают от клеточного дейтрита центрифугированием на центрифуге OTP-101 К (16000 об/мин) и прогревают при t 96°C в течение 60 мин. Полученный экстракт фильтруют и используют для сенсибилизации эритроцитов барана.

Б. Сенсибилизация эритроцитов барана.

Сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят экстрактом антигенного комплекса в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 1,5%. На 1 л 20% взвеси формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе pH 7,2 добавляют 300 мл экстракта антигена. Тщательно перемешивают и подогревают в водяной бане при t 56°C 30 мин. Затем взвесь эритроцитов выдерживают при t 40°C 2 ч или при комнатной температуре 12 ч. Бутыли оставляют для осаждения методом отстоя. По мере оседания эритроцитов сенсибилизирующий раствор сливают, а к осадку доливают равный объем буфера с 0,15% формальдегида. Операцию повторяют 3-4 раза до полного осветления надосадочной жидкости.

Отмытые сенсибилизированные эритроциты фильтруют через бязево-марлевую салфетку, ресуспендируют в стерильном фосфатно-буферном растворе, содержащем 0,2% формальдегида, до 10% концентрации и выдерживают при t 37°C 24 ч. Далее производится расфасовка в 20 мл флаконы, получая состав 2 эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц.

Пример 3. Эффективность эритроцитарного диагностикума (полученного согласно примерам 1-2 и прототипа) для диагностики пуллороза-тифа птиц определяют на курах. 60 цыплят в возрасте от 50 дней заражают возбудителем пуллороза-тифа в дозе 0,03 мл штаммом S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя и делят на три группы по 20 цыплят в каждой группы. Через 10 дней диагностику пуллороза-тифа определяют в кровекапельной реакции непрямой гемаплютинации (ККРНГА) на предметном стекле путем выявления антигена пуллороза-тифа. Кровь для ККРНГА берут у птиц из гребня или подкрыльцовой вены. Каплю крови наносят на сухое, обезжиренное предметное стекло и добавляют к ней каплю эритроцитарного диагностикума (полученного согласно примерам 1-2 и прототипа). Соотношение состава 1 или 2 или прототипа и крови должно быть 1:1. Кровь цыплят каждой группы смешивают с составом 1, 2 и прототипа (кровь группы 1 смешивают с составом 1, кровь группы 2 смешивают с составом 2, кровь группы 3 смешивают с составом, полученным согласно способу-прототипу). Предметное стекло покачивают на грелке-качалке при температуре от 37° до 40°C. Температура в помещении, где ставят реакцию, должна быть не ниже 18°C. На одном предметном стекле ставят одновременно не более трех реакций. Учет результатов реакции проводят визуально. Реакцию на эритроцитарный антиген считают положительной, если в течение 2 минут в смеси крови с антигеном выпали хорошо заметные хлопья коричневого цвета с просветлением жидкости Реакцию считают сомнительной, если в течение 2 минут в смеси крови с антигеном появились слабовыраженные мелкозернистые хлопья коричневого цвета; Отрицательная реакция характеризуется образованием в капле крови с антигеном равномерной стабильной гомогенной взвеси эритроцитов барана.

В группах 1 и 2 цыплят у всех цыплят реакция на эритроцитарный антиген была положительной. В группе 3 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была положительной у 12 цыплят, у 5 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была сомнительной, а у 3 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была отрицательной.

Таким образом, чувствительность целевого продукта повысилась на 40%.

Кроме того, пуллорный эритроцитарный диагностикум, приготовленный предлагаемым способом, сохраняет свою активность и специфичность в течение 3-х лет при 4-8°C. При таком способе получают из бактериальной массы S.gallinarum-pullorum O-антиген, обладающий максимально возможной сенсибилизирующей, антителосвязывающей, агглютинирующей активностью, комплементарностью и способностью вступать в прочную химическую связь с рецепторами эритроцитов, который по своей диагностической ценности в кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации превосходит известный пуллорный эритроцитарный диагностикум.

Похожие патенты RU2685413C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПОЛЛУРОЗА-ТИФА ПТИЦ 1996
  • Скичко Николай Данилович
  • Мельник Николай Васильевич
  • Зенов Николай Иванович
  • Желтов Виктор Викторович
  • Ерохин Владимир Иванович
  • Чукаева Елена Николаевна
RU2085949C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПУЛЛОРОЗА-ТИФА ПТИЦ 1993
  • Киржаев Ф.С.
  • Мишурнова Н.В.
RU2070055C1
Способ получения антигена для диагностики пуллороза-тифа птиц 1975
  • Киржаев Федор Сергеевич
  • Бурмистрова Тамара Ивановна
SU594173A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ 2015
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Мельник Роман Николаевич
  • Сусский Евгений Владимирович
  • Дадасян Артур Яппарович
RU2609771C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ САЛЬМОНЕЛЛОНОСИТЕЛЬСТВА У КУР 1998
  • Носырева Л.А.
  • Туркова Н.В.
  • Кокорев В.С.
  • Вахрушева Д.В.
  • Кирсанов Ю.А.
  • Егоров К.Е.
  • Сканчев А.И.
  • Заднишевских Н.Ю.
RU2158133C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕННОГО ПАСТЕРЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА 2007
  • Ставцева Лилия Яковлевна
  • Крюков Сергей Вениаминович
  • Рахманин Павел Петрович
  • Мельник Николай Васильевич
  • Соловьев Борис Васильевич
  • Майстренко Евгения Семеновна
  • Тренев Василий Николаевич
RU2353387C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РНГА) ПРИ КЛОСТРИДИОЗАХ ЖИВОТНЫХ 2020
  • Спиридонов Геннадий Николаевич
  • Хурамшина Миляуша Талгатевна
  • Иванова Светлана Викторовна
  • Мельникова Лилия Арсентьевна
  • Косарев Максим Аркадьевич
  • Спиридонов Антон Геннадьевич
  • Махмутов Айдар Фаритович
  • Макаев Харис Нуртдинович
RU2754465C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ПРИ КОКСИЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 2009
  • Красиков Александр Пантелеевич
  • Наконечный Олег Игоревич
RU2410698C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ 2011
  • Дегтяренко Людмила Владимировна
  • Карлова Мария Юрьевна
  • Скляров Олег Дмитриевич
RU2484481C1
Способ изготовления бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) 2019
  • Микаилов Микаил Муслимович
  • Яникова Эльмира Арслановна
  • Халиков Ахмед Алиасхабович
  • Гулиева Атия Темирболатовна
RU2714305C1

Реферат патента 2019 года СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПОЛЛУРОЗА-ТИФА ПТИЦ

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии. В качестве ПАВ используется 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятый в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%. Сенсебилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%. Изобретение обеспечивает получение эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц с повышенной чувствительностью. 3 пр.

Формула изобретения RU 2 685 413 C1

Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°С с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии, отличающийся тем, что в качестве поверхностно-активного вещества для выделения антигенной фракции используют 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%, а сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2685413C1

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПОЛЛУРОЗА-ТИФА ПТИЦ 1996
  • Скичко Николай Данилович
  • Мельник Николай Васильевич
  • Зенов Николай Иванович
  • Желтов Виктор Викторович
  • Ерохин Владимир Иванович
  • Чукаева Елена Николаевна
RU2085949C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ 2015
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Мельник Николай Васильевич
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Мельник Роман Николаевич
  • Сусский Евгений Владимирович
  • Дадасян Артур Яппарович
RU2609771C1
Машина для чистки кинолент 1930
  • Мирошник М.А.
SU22469A1
Силовая передача в ветросиловой установке 1940
  • Егоров И.Д.
SU63003A1
Панферова Ю.А
и др
Детекция инфекции Coxiella burnetii у мигрирующих птиц в Болгарии //Инфекция и иммунитет
Способ защиты переносных электрических установок от опасностей, связанных с заземлением одной из фаз 1924
  • Подольский Л.П.
SU2014A1
Т
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды 1921
  • Богач Б.И.
SU4A1
Печь для непрерывного получения сернистого натрия 1921
  • Настюков А.М.
  • Настюков К.И.
SU1A1

RU 2 685 413 C1

Авторы

Самуйленко Анатолий Яковлевич

Гринь Светлана Анатольевна

Мельник Николай Васильевич

Мельник Роман Николаевич

Клюкина Валентина Ивановна

Майстренко Евгения Семеновна

Сусский Евгений Владимирович

Литенкова Ирина Юрьевна

Клюшинцева Наталья Сергеевна

Ярцев Сергей Николаевич

Даты

2019-04-18Публикация

2018-04-13Подача