СПОСОБ ОЦЕНКИ НАСЫЩЕНИЯ ЭОЗИНОФИЛОВ МОКРОТЫ И НАЗАЛЬНОГО СЕКРЕТА ЭОЗИНОФИЛЬНЫМ КАТИОННЫМ ПРОТЕИНОМ Российский патент 2020 года по МПК G01N33/48 G01N1/30 

Описание патента на изобретение RU2733451C1

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использовано в клинической аллергологии и иммунологии, гистологии, патологической физиологии при исследовании содержания катионных протеинов в эозинофилах мокроты и мазка со слизистой оболочки носа у пациентов с аллергическим ринитом и бронхиальной астмой.

В настоящий момент общепринятой методикой изучения цитологии дыхательных путей является микроскопия мазка со слизистой оболочки носа (или микроскопия мокроты), окрашенного по методу Романовского-Гимзе, в котором подсчитываются нейтрофилы и эозинофилы не менее чем в 10 полях зрения, при подсчете не менее 200 клеточных элементов.

Данный метод успешно используется в медицине, однако имеет ряд недостатков. Во-первых, показатели цитологии динамичны и способны изменяться в течение суток, что требует неоднократного повтора исследования. Во-вторых, количественные показатели клеток в ряде случаев не коррелируют с выраженностью (тяжестью) клинических симптомов.

В основу изобретения положена задача нивелировать указанные недостатки, путем оценки функциональной активности клеток, а не их количества.

Эозинофильные катионные протеины являются главным фактором, приводящим к повреждению клеток слизистых оболочек дыхательных путей при аллергическом воспалении [Колобовникова, Ю.В. Эозинофил в норме и при патологии/ Ю.В. Колоборовникова, О.И. Новицкий. - Томск: Изд-во «Печатная мануфактура», 2014. - 124 с.], в связи с чем, количество данных протеинов в клетках может отражать интенсивность воспалительного процесса и коррелировать с тяжестью клинической картины.

В предлагаемом способе цитологического изучения секретов слизистых оболочек дыхательных путей впервые используется окраска водным раствором бромфенолового красителя и оценка количественного содержания бромфенол-положительных гранул в эозинофилах.

Применение данного способа возможно не только для диагностики аллергической природы воспаления, что можно осуществить и при известных методиках исследования, но также для оценки интенсивности воспалительного процесса и ответа на медикаментозную терапию.

Способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином включает в себя:

1. Биологический материал (мазок со слизистой носа или мокрота) нанести тонким слоем на предметное стекло (фиг. 1).

2. Высушить при комнатной температуре строго в горизонтальном положении.

3. Зафиксировать в 95% этилового спирта (нанести 1-2 капли 95% этилового спирта на мазок) (фиг. 2).

4. Высушить мазок.

5. Окрасить 0,5% водным раствором бромфенолового синего (так, чтобы весь биоматериал был покрыт красителем) в течение 20 минут (фиг. 3).

6. Тщательно промыть в дистиллированной воде и высушить на воздухе (фиг. 4).

7. Осуществить иммерсионную микроскопию при увеличении не менее ×1000. При микроскопии эозинофилы определяются как клетки, содержащие крупные темно-фиолетовые гранулы с неокрашенной цитоплазмой и ядром (фиг. 5).

8. Оценить визуализируемые эозинофилы полуколичественно от 1 до 3 баллов, где «3» балла соответствуют полному заполнению цитоплазмы гранулами без светлых промежутков (фиг. 6, В)., «2» балла - наличию немногочисленных просветов между гранулами (фиг. 6, Б)., «1» балл - единичным гранулам цитоплазмы (фиг. 6, А).

9. Провести расчет насыщения эозинофилов бромфенол-положительными гранулами (среднего коэффициента насыщения эозинофилов) в условных единицах с помощью модифицированной формулы Астальди-Верга (1957). Для этого число клеток с одинаковым содержанием гранул умножить на соответствующее данной группе число баллов, сумма этих произведений делится на общее количество подсчитанных эозинофилов. Пример расчета: в мазке выявлено 10 эозинофилов, оцененных на «1 балл», 20 эозинофилов, оцененных на «2 балла» и 30 эозинофилов, оцененных на «3 балла».

Расчет:

Механизм действия основан на переходе красителя в окрашенную форму при связывании с катионными белками.

Пример конкретного осуществления

Пример 1

Пациент А., 16 лет, впервые поступил на обследование в аллергологическое отделение, диагноз J45.9 - астма неуточненная. При поступлении до начала базисной терапии было выполнено цитологическое исследование индуцированной мокроты, а также определялся средний коэффициент насыщения эозинофилов катионным протеином. Результат:

Через 7 дней от начала лечения ингаляционными кортикостероидами выполнено повторное цитологическое исследование с определением среднего коэффициента насыщения эозинофилов катионным протеином. Результат:

На фоне приема базисной терапии, несмотря на отсутствие существенных количественных изменений цитологического состава, отмечено снижение содержания катионного протеина в эозинофилах мокроты, что говорит о положительной динамике на фоне лечения.

Похожие патенты RU2733451C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ОКРАСКИ ЭОЗИНОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ В МАЗКАХ МОКРОТЫ 2007
  • Корякин Софрон Павлович
RU2350951C2
Способ флуоресцентной цитохимической оценки содержания биогенных аминов в эритроцитах 2018
  • Зиновьев Сергей Викторович
  • Плехова Наталья Геннадьевна
  • Радьков Иван Валерьевич
  • Лаптев Виктор Викторович
RU2709212C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТАВА БИОПСИЙНОГО МАТЕРИАЛА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ НОСА 2022
  • Шабалдина Елена Викторовна
  • Шабалдин Андрей Владимирович
  • Астафьева Евгения Анатольевна
  • Шаравина Александра Александровна
  • Бедарева Алена Владимировна
RU2819990C1
Способ донозологической неинвазивной диагностики состояния здоровья работников 2019
  • Важенина Антонина Анатольевна
  • Транковская Лидия Викторовна
  • Зиновьев Сергей Викторович
  • Плехова Наталья Геннадьевна
RU2725291C1
Способ прогнозирования риска развития заболеваний органов дыхания у работников, занятых в производстве синтетических моющих средств 2022
  • Алексеев Вадим Борисович
  • Власова Елена Михайловна
  • Горбушина Ольга Юрьевна
  • Воробьева Алена Алексеевна
  • Лешкова Ирина Владимировна
  • Тиунова Мария Ивановна
RU2802198C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЭОЗИНОФИЛОВ ПРИ ГЛИСТНОЙ ИНВАЗИИ 2011
  • Бондарь Татьяна Петровна
  • Ишкова Наталья Михайловна
  • Эльканова Айшат Борисовна
RU2464559C1
СПОСОБ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ БАЗАЛЬНОГО ТРАХЕОБРОНХИАЛЬНОГО СЕКРЕТА У ЗДОРОВЫХ ЛИЦ ПРИ КОРРЕКЦИИ АНТИОКСИДАНТАМИ ВОЗДЕЙСТВИЯ НИЗКОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ НА ОРГАНИЗМ 2011
  • Целуйко Сергей Семенович
  • Доровских Владимир Анатольевич
  • Кондрахина Анна Петровна
  • Зиновьев Сергей Викторович
  • Штарберг Михаил Анатольевич
  • Лакоценина Ольга Юрьевна
RU2490633C2
Способ профилактики бронхиальной астмы при инфекции грибом рода Peacilomyces 2019
  • Ахунов Василий Михайлович
  • Сизова Жанна Михайловна
RU2730938C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДАПТАЦИОННЫХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ОРГАНИЗМА 1991
  • Носова Людмила Ивановна[Ua]
  • Панченко Надежда Алексеевна[Ua]
  • Филимонов Иван Сергеевич[Ua]
  • Загоруйко Евгений Епифанович[Ua]
  • Лобода Елена Ивановна[Ua]
  • Накоренок Галина Борисовна[Ua]
RU2043631C1
Способ проведения цитологического исследования при дифференциальной диагностике узловых образований щитовидной железы 2019
  • Рева Иван Владимирович
  • Рева Галина Витальевна
  • Калинин Илья Олегович
  • Григорян Виктория Самвеловна
  • Цегольник Екатерина Вадимовна
  • Тудаков Владислав Сергеевич
  • Гармаш Адель Игоревна
  • Гармаш Роман Александрович
  • Зудина Анна Алексеевна
  • Барановская Ирина Анатольевна
  • Пуга Дмитрий Петрович
  • Можилевская Екатерина Сергеевна
  • Накоренок Анна Анатольевна
  • Гордзиевская Яна Владимировна
RU2712080C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 733 451 C1

Реферат патента 2020 года СПОСОБ ОЦЕНКИ НАСЫЩЕНИЯ ЭОЗИНОФИЛОВ МОКРОТЫ И НАЗАЛЬНОГО СЕКРЕТА ЭОЗИНОФИЛЬНЫМ КАТИОННЫМ ПРОТЕИНОМ

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине. Описан способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином. Проводят цитологическое исследование назального секрета или индуцированной мокроты при окраске 0,5% водным раствором бромфенолового синего с последующей иммерсионной микроскопией. При микроскопии эозинофилы определяются как клетки, содержащие крупные темно-фиолетовые гранулы с неокрашенной цитоплазмой и ядром. Затем проводят полуколичественную оценку визуализируемых эозинофилов от 1 до 3 баллов, где «3» балла соответствует полному заполнению цитоплазмы гранулами без светлых промежутков, «2» балла соответствует наличию немногочисленных просветов между гранулами, «1» балл соответствует единичным гранулам цитоплазмы. После чего проводят подсчет среднего коэффициента насыщения эозинофилов бромфенол-положительными гранулами. Технический результат - возможность избирательной оценки содержания в эозинофилах катионных протеинов, являющихся главным фактором повреждения слизистых оболочек дыхательных путей при аллергическом воспалении. 6 ил., 2 табл., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 733 451 C1

Способ оценки насыщения эозинофилов мокроты и назального секрета эозинофильным катионным протеином, включающий окраску мазка 0,5% водным раствором красителя бромфеноловым синим, последующую иммерсионную микроскопию, где при микроскопии эозинофилы определяются как клетки, содержащие крупные темно-фиолетовые гранулы с неокрашенной цитоплазмой и ядром, оценку визуализируемых эозинофилов полуколичественно от 1 до 3 баллов, где «3» балла соответствует полному заполнению цитоплазмы гранулами без светлых промежутков, «2» балла соответствует наличию немногочисленных просветов между гранулами, «1» балл соответствует единичным гранулам цитоплазмы, и подсчет среднего коэффициента насыщения эозинофилов бромфенол-положительными гранулами.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2020 года RU2733451C1

КОЛОБОВНИКОВА Ю.А
и др
Эозинофил в норме и при патологии, Томск, Печатная мануфактура, 2014, с.123
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ 2005
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Рослякова Елена Петровна
  • Печеркина Ирина Николаевна
  • Будкова Алла Александровна
  • Варвянская Наталья Владимировна
  • Ямкина Наталья Сергеевна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
RU2298183C2
СПОСОБ ОКРАСКИ ЭОЗИНОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ В МАЗКАХ МОКРОТЫ 2007
  • Корякин Софрон Павлович
RU2350951C2
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ЦИТОХИМИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ, ПРОТЕКАЮЩЕЙ В НЕЙТРОФИЛАХ И ЭОЗИНОФИЛАХ МОКРОТЫ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ 2005
  • Черногорюк Георгий Эдинович
  • Рослякова Елена Петровна
  • Печеркина Ирина Николаевна
  • Будкова Алла Александровна
  • Варвянская Наталья Владимировна
  • Ямкина Наталья Сергеевна
  • Санжаровская Мария Сергеевна
RU2298184C2
НОВИКОВА И.А
"Введение в клиничексую лабораторную диагностику", Минск, Высшая школа, 2018, с.157-158.

RU 2 733 451 C1

Авторы

Тестов Роман Михайлович

Солянникова Дарья Рашидовна

Минина Елена Евгеньевна

Брюхин Геннадий Васильевич

Даты

2020-10-01Публикация

2020-01-20Подача