СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С ХОЛЕСТЕРИНОМ Российский патент 2024 года по МПК A61K39/395 A61P3/06 

Настоящая заявка испрашивает приоритет в соответствии с заявкой на патент Китая № CN 202010194665.6, поданной 19 марта 2020 г., которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к способу осуществления лечения или предупреждения заболеваний, связанных с холестерином (таких как гиперлипидемия, гиперлипидемия или дислипидемия), с применением антитела или антигенсвязывающего фрагмента к пропротеиновой конвертазе субтилин-кексинового типа 9 (PCSK9).

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сердечно-сосудистое заболевание в настоящее время является основным заболеванием, угрожающим здоровью человека. В 2016 г. Европейское общество кардиологов совместно с Европейским обществом по изучению атеросклероза (ESC/EAS) выпустило Руководство по лечению дислипидемии ESC/EAS 2016 г., в котором сообщается, что ежегодно в Европе от сердечно-сосудистых заболеваний (CVD) умирает более 4 миллионов человек. В 2009 году медицинские расходы, связанные с CVD, достигли 106 миллиардов евро, что составляет примерно 9% от общего медицинского бюджета Европейского союза. Ожидается, что в Соединенных Штатах прямые годовые расходы на CVD увеличатся в 3 раза в период с 2010 по 2030 год. В Китае около 300 млн пациентов страдают сердечно-сосудистыми заболеваниями и приблизительно 3,5 млн пациентов ежегодно умирают от различных видов сердечно-сосудистых заболеваний, при этом прямые медицинские затраты достигают 130 млрд юаней, что показывает тенденцию к росту из года в год. Исследование указывает на то, что дислипидемия, характеризующаяся повышенным уровнем холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C) или общего холестерина (TC), является важным фактором риска атеросклеротических сердечно-сосудистых заболеваний (ASCVD). Снижение уровней LDL-C или TC может значительно снизить риск заболеваемости и смертности от ASCVD. Исследование показывает, что ежегодная заболеваемость инфарктом миокарда, реваскуляризацией и ишемическим инсультом снижается на более чем 20% при снижении на каждые 1,0 ммоль/л LDL-C.

В данное время уровень лечения и цель лечения дислипидемии в Китае все еще находятся на относительно низком уровне. Лекарственные средства первой линии, используемые в клинической практике для снижения уровня холестерина, представляют собой статины (ингибиторы синтеза холестерина) и эзетимиб (ингибитор абсорбции холестерина). Статины представляют собой ингибиторы HMG-CoA-редуктазы и в основном достигают цели снижения уровня липидов за счет ингибирования фермента HMG-CoA-редуктазы, ограничивающего скорость синтеза холестерина, и, таким образом, снижения синтеза холестерина. Клинические испытания продемонстрировали, что статины могут снижать смертность в группе высокого риска с CVD. Статины эффективны при лечении ранних стадий заболевания (вторичная профилактика) и при повышенном риске без CVD (первичная профилактика). Эффект от применения статинов в группе низкого риска с CVD подлежит дальнейшему изучению. Тем не менее статины имеют побочные реакции при клиническом применении, такие как миалгия, миозит, нарушение функции печени и рабдомиолиз, а также увеличение риска развития сахарного диабета при длительном приеме статинов, при этом относящаяся к эффекту статинов заболеваемость составляет приблизительно 10-12%; эзетимиб, представляющий собой ингибитор всасывания холестерина, в основном имеет такие проявления как головная боль и симптомы со стороны желудочно-кишечного тракта, и также может иметь побочные эффекты, такие как повышение уровня трансаминаз и миалгию, и иметь слабый эффект снижения уровня холестерина при применении в комбинации со статинами. При длительном применении статинов у большого числа пациентов возникла толерантность к лекарственному средству. Статистические данные показывают, что 60% пациентов с высоким риском все еще не могут в достаточной степени контролировать уровень LDL-C, принимая статины или другие гиполипидемические лекарственные средства, представленные на рынке, и доля пациентов с высоким риском достигает более чем 80%. В частности, пациенты с гетерозиготной наследственной гиперхолестеринемией (HeFH) или гомозиготной наследственной гиперхолестеринемией (HoFH) с высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний, пациенты с уровнем LDL-C, не соответствующим норме, которые имеют непереносимость статинов или подвергались лечению с применением гиполипидемических лекарственных средств первой линии или второй линии в максимальной переносимой дозе, по-прежнему имеют острую клиническую потребность в гипохолестеринемических лекарственных средствах, основанных на новом механизме.

PCSK9 (пропротеиновая конвертаза субтилин-кексинового типа 9) представляет собой 9-ый член семейства пропротеиновых конвертаз. PCSK9 экспрессируется преимущественно в печени, но также обнаруживается в других органах, включая кишечник, почки, поджелудочную железу и головной мозг. PCSK9, секретируемый печенью в кровоток, соединяется с LDLR на поверхности клеток печени, и образующееся соединение захватывается и способствует деградации LDLR в лизосомах, тем самым предотвращая рециркуляцию LDLR в клеточные мембраны, уменьшая повторное использование LDLR, снижая уровень LDLR в мембранах клеток печени, вызывая элиминацию и снижение LDL-C. PCSK9 играет ключевую роль в балансе холестерина, снижая концентрацию LDLR на поверхности печени. Опираясь на применение данного механизма, недавно был разработан класс новых лекарственных средств на основе моноклональных антител к PCSK9, которые могут снижать уровень циркуляции PCSK9, повышать экспрессию LDLR на клеточной поверхности и увеличивать клиренс LDL-C, и, таким образом, снижать уровень циркуляции LDL-C. Судя по механизму действия, эти лекарственные средства могут быть эффективными в снижении уровня LDL-C у всех пациентов, у которых наблюдается экспрессия LDLR на поверхности печени. Следовательно, данные лекарственные средства эффективны у значительной доли пациентов, особенно у пациентов с непереносимостью статинов или у которых не удалось эффективно контролировать уровни LDL-C после того, как их подвергали лечению статинами в максимальной дозе.

Моноклональные антитела к PCSK9, представленные в настоящее время на рынке, в основном представляют собой эволокумаб (Repatha), разработанный Amgen, и алирокумаб (Praluent), разработанный совместно Sanofi и Regeneron. Имеющиеся на рынке два вида моноклональных антител к PCSK9 снижают уровень LDL-C приблизительно на 50-60% при применении в комбинации со статинами. Большое количество экспериментов продемонстрировали безопасность, хорошую переносимость и эффективность моноклональных антител к PCSK9. Субъекты клинических испытаний включают субъектов с первичной гиперхолестеринемией (в том числе гетерозиготной наследственной и ненаследственной гиперхолестеринемией) и смешанной гиперхолестеринемией, в том числе пациентов с уровнем холестерина LDL-C, не соответствующим норме, которые не способны переносить лечение статинами, статины и/или другие гиполипидемические лекарственные средства для снижения уровня LDL-C; кроме того, также проводятся клинические испытания на пациентах с гомозиготной наследственной гиперхолестеринемией, и достигаются определенные терапевтические эффекты. Схема введения эволокумаба составляет 140 мг Q2W или 420 мг Q4W. Рекомендуемая доза схемы введения алирокумаба составляет 75 мг Q2W, при этом опциональная начальная доза также включает 300 мг Q4W, и вариабельная максимальная доза составляет 150 мг Q2W.

В WO 2017114230A, WO 2017118307A, WO 2018228406 и WO 2019001560 раскрыты новые антитела к PCSK9, отличные от эволокумаба и алирокумаба.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении предусмотрен способ снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента, или осуществления лечения и/или предупреждения гиперлипидемии у пациента, или осуществления лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с холестерином, который имеет простую схему, низкую частоту введения и небольшую дозировку введения и может эффективно уменьшить бремя лечения пациента, и улучшить соблюдение режима лечения пациентом.

В одном аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента, или осуществления лечения и/или предупреждения гиперлипидемии у пациента, или осуществления лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с холестерином, включающий введение пациенту по меньшей мере одного антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе до 600 мг за раз и с интервалом введения не менее 4 недель, при этом антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3 соответственно, и интервал введения предпочтительно составляет 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 недель.

Среди них последовательности CDR представлены в следующей таблице.

В вариантах осуществления настоящего изобретения величина снижения уровня холестерина LDL (LDL-C) в сыворотке крови у пациента, которого подвергали лечению способом по настоящему изобретению, выбрана из группы, состоящей из a) по меньшей мере 15%, b) по меньшей мере 20%, c) по меньшей мере 30%, d) по меньшей мере 40%, e) по меньшей мере 50%, f) по меньшей мере 55%, g) по меньшей мере 60%, h) по меньшей мере 65%, i) по меньшей мере 70%, j) по меньшей мере 75%, k) по меньшей мере 80%, l) по меньшей мере 85% и m) по меньшей мере 90%. В некоторых вариантах осуществления снижение уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента, которого подвергали лечению способом по настоящему изобретению, могло продолжаться в течение 7-84 дней, например, 7-14 дней, 14-21 дня, 21-28 дней, 28-35 дней, 35-42 дней, 42-49 дней, 49-56 дней, 56-63 дней, 63-70 дней, 70-77 дней или 77-84 дней.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой рекомбинантное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, выбранный из группы, состоящей из мышиного антитела, химерного антитела и гуманизированного антитела.

В альтернативных вариантах осуществления последовательности каркасных областей легкой и тяжелой цепи на вариабельных областях легкой и тяжелой цепи гуманизированного антитела представляют собой последовательности или их мутированные последовательности из каркасных областей легкой и тяжелой цепи человека.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, представленную под SEQ ID NO: 8, и вариабельную область тяжелой цепи, представленную под SEQ ID NO: 7 соответственно.

Вариабельная область тяжелой цепи

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT DYWMH WVRQAPGQGLEWMG YINPSSGFTKYHQNFKD RVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR QYDYDEDWYFDV WGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 7.

Вариабельная область легкой цепи

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KSSQSLLNSRTRKNFLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCKQSFNLFTFGQGTKLEIK

SEQ ID NO: 8.

В некоторых альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область тяжелой цепи из изотипов IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4 человека и предпочтительно содержит константную область тяжелой цепи изотипа IgG1.

В других альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область легкой цепи, которая представляет собой константную область легкой κ- или λ-цепи.

В некоторых альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь, имеющую последовательность, представленную под SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь, имеющую последовательность, представленную под SEQ ID NO: 9.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 представляет собой антитело h001-4-YTE. Антитело h001-4-YTE имеет последовательность легкой цепи, представленную под SEQ ID NO: 10, и последовательность тяжелой цепи, представленную под SEQ ID NO: 9.

Тяжелая цепь,

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYWMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSSGFTKYHQNFKDRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARQYDYDEDWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 9.

Легкая цепь,

DIVMSQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLNSRTRKNFLAWYQQKPGKSPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCKQSFNLFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 10.

Содержание WO 2019001560A включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе, выбранной из группы, состоящей из 70-200 мг, например, 70-150 мг; интервал введения выбирают из группы, состоящей из 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 недель, например, 4 или 8 недель.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе, выбранной из группы, состоящей из 100-300 мг, например, 150-300 мг; интервал введения не менее 6 недель, например, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель, например, 8 или 12 недель.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе, выбранной из группы, состоящей из 250-550 мг, например, 300-450 мг; интервал введения не менее 8 недель, например, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 недель, например, 8 или 12 недель.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе, выбранной из группы, состоящей из a) 60-550 мг, b) 70 мг, c) 75 мг, d) 100 мг, e) 120 мг, f) 130 мг, g) 140 мг, h) 150 мг, i) 210 мг, j) 280 мг, k) 300 мг, l) 350 мг, m) 400 мг, n) 450 мг, о) 500 мг и р) 550 мг.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят с интервалом, выбранным из группы, состоящей из 1, 2, 4, 8, 12 и 16 недель.

В альтернативных вариантах осуществления схему введения антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента выбирают из группы, состоящей из 75 мг Q4W, 150 мг Q8W, 300 мг Q12W, 150 мг Q4W, 300 мг Q8W и 450 мг Q12W.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят парентерально. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят внутривенно. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно. Например, инъекционная форма антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента представляет собой раствор для инъекций или лиофилизированный порошок для инъекций, содержащий антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент, буфер и стабилизатор, и необязательно дополнительно содержащий поверхностно-активное вещество. Буфер представляет собой систему на основе гистидина гидрохлорида; стабилизатор может быть выбран из группы, состоящей из сахаров и аминокислот, например дисахаридов, таких как сахароза, лактоза, трегалоза или мальтоза. Поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из полиоксиэтилен-гидрогенизированного касторового масла, сложного эфира жирной кислоты и глицерина и сложного эфира жирной кислоты и полиоксиэтиленсорбитана, например, сложный эфир жирной кислоты и полиоксиэтиленсорбитана представляет собой полисорбат 20, 40, 60 или 80, например, такой как полисорбат 20. Например, инъекционная форма антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента содержит антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент, буфер на основе гистидина гидрохлорида, сахарозу и полисорбат 80.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе от 30 мг до 70 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе 30 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе 35 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе 70 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе от 50 мг до 280 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 75 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 105 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 120 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 150 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 210 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 280 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе от 100 мг до 500 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту подкожно в дозе 150 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 300 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 450 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от 15% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту подкожно в дозе от 150 мг до 500 мг один раз в двенадцать недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 80-84 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 300 мг один раз в двенадцать недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 80-84 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 450 мг один раз в двенадцать недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 15% до по меньшей мере 50% в течение 80-84 дней.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе от 30 мг до 70 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе 30 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе 35 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в две недели в дозе 70 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 7-14 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе от 50 мг до 280 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 75 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 105 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 120 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 300 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 210 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту один раз в четыре недели в дозе 280 мг, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 21-31 дня; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе от 100 мг до 500 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту подкожно в дозе 300 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 300 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 450 мг один раз в восемь недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от 30% до по меньшей мере 50% в течение 50-56 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту подкожно в дозе от 300 мг до 500 мг один раз в двенадцать недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 80-84 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 300 мг один раз в двенадцать недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 80-84 дней; антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно пациенту в дозе 450 мг один раз в двенадцать недель, при этом уровень холестерина LDL в сыворотке крови пациента снижается на от по меньшей мере 30% до по меньшей мере 50% в течение 80-84 дней.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту, страдающему заболеванием, связанным с холестерином, в соответствии со схемой введения, выбранной из группы, состоящей из 75 мг Q4W, 150 мг Q8W, 300 мг Q12W, 150 мг каждые Q4W, 300 мг Q8W и 450 мг Q12W, которая может быть эффективной для лечения заболеваний, связанных с холестерином, и снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента. Величина снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента выбрана из группы, состоящей из а) по меньшей мере 15%, b) по меньшей мере 30%, c) по меньшей мере 40%, d) по меньшей мере 50% и e) по меньшей мере 60%.

В альтернативных вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят нуждающемуся в этом пациенту в соответствии со схемой введения, выбранной из группы, состоящей из 75 мг Q4W, 150 мг Q8W, 300 мг Q12W, 150 мг Q4W, 300 мг Q8W и 450 мг Q12W, которая эффективна для снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента, нуждающегося в этом. Величина снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента выбрана из группы, состоящей из а) по меньшей мере 15%, b) по меньшей мере 30%, c) по меньшей мере 40%, d) по меньшей мере 50% и e) по меньшей мере 60%.

В некоторых вариантах осуществления пациента ранее подвергали лечению по меньшей мере одним ингибитором синтеза холестерина и/или ингибитором абсорбции холестерина. В некоторых вариантах осуществления пациента ранее подвергали лечению по меньшей мере одним ингибитором синтеза холестерина или ингибитором абсорбции холестерина в течение по меньшей мере 4 недель.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор синтеза холестерина представляет собой статин. В некоторых вариантах осуществления ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб.

В альтернативных вариантах осуществления настоящего изобретения по меньшей мере одно антитело к PCSK9 вводят пациенту до, после или одновременно с введением по меньшей мере одного статина. Статины включают без ограничения аторвастатин, церивастатин, флувастатин, ловастатин, мевастатин, питавастатин, правастатин, розувастатин и симвастатин.

В настоящем изобретении гиперлипидемия относится к заболеванию или состоянию, при котором в крови присутствуют аномально высокие уровни липидов. Гиперлипидемия может проявляться в форме, выбранной из группы, состоящей из (1) гиперхолестеринемия, т.е. повышенный уровень холестерина; (2) гипертриглицеридемия, т.е. повышенный уровень триглицеридов; и (3) комбинированная гиперлипидемия, т е. сочетание гиперхолестеринемии и гипертриглицеридемии.

В настоящем изобретении значение гиперлипидемии также распространяется на связанные с гиперлипидемией заболевания, такие как атеросклероз, стенокардия, заболевание сонных артерий, церебральный артериосклероз, ксантома, ишемическая болезнь сердца, ишемический инсульт, рестеноз после ангиопластики, заболевание периферических сосудов, перемежающаяся хромота, уменьшение некроза после инфаркта миокарда, дислипидемия, постпрандиальная липемия и панкреатит.

Гиперлипидемию можно дополнительно разделить на первичную гиперлипидемию и вторичную гиперлипидемию. Иллюстративные первичные гиперлипидемии включают без ограничения 1) наследственную гиперхиломикронемию; 2) наследственную гиперхолестеринемию; 3) наследственную комбинированную гиперлипидемию; 4) наследственный дефицит аполипопротеина В-100; 5) наследственную дисбеталипопротеинемию; и 6) наследственную гипертриглицеридемию.

Иллюстративные вторичные гиперлипидемии имеют факторы риска, включая без ограничения 1) факторы риска, связанные с заболеваниями, такими как диабет 1 типа, диабет 2 типа, синдром Кушинга, гипотиреоз, холестаз и некоторые виды почечной недостаточности в анамнезе; 2) факторы риска, связанные с лекарственными средствами, в том числе противозачаточными таблетками, гормонами, такими как эстроген и кортикостероиды, некоторыми диуретиками и различными β-блокаторами; и 3) факторы риска, связанные с диетой, в том числе потребление пищевых жиров в объеме более чем 40% от общего количества калорий, соотношение потребления насыщенных жиров к общему количеству калорий более чем 10%, ежедневное потребление холестерина более чем 300 мг, привычное и чрезмерное употребление алкоголя, булимия, нервная анорексия и ожирение.

В настоящем изобретении заболевания, связанные с холестерином, в целом включают без ограничения гиперхолестеринемию, заболевание сердца, метаболический синдромом, диабет, ишемическую болезнь сердца, инсульт, сердечно-сосудистое заболевание, болезнь Альцгеймера и дислипидемию.

В некоторых вариантах осуществления заболевание, связанное с холестерином, представляет собой гиперхолестеринемию. В некоторых вариантах осуществления гиперхолестеринемию выбирают из группы, состоящей из первичной гиперхолестеринемии и вторичной гиперхолестеринемии. В некоторых вариантах осуществления первичную гиперхолестеринемию выбирают из группы, состоящей из гетерозиготной наследственной гиперхолестеринемии и гомозиготной наследственной гиперхолестеринемии.

В альтернативных вариантах осуществления введение антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента страдающему гиперлипидемией пациенту, подвергающемуся лечению статинами, может быть эффективным для снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента, нуждающегося в этом. Величина снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента выбрана из группы, состоящей из а) по меньшей мере 15%, b) по меньшей мере 30%, c) по меньшей мере 40%, d) по меньшей мере 50% и e) по меньшей мере 60%.

В настоящем изобретении предусмотрен способ снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента или осуществления лечения и/или предупреждения гиперлипидемии, или осуществления лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с холестерином, включающий введение пациенту по меньшей мере одного антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе не более чем 300 мг за раз и с интервалом введения не менее 4 недель, например, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 недель.

В некоторых вариантах осуществления вводимая доза составляет 70-250 мг, например, 75-150 мг; и/или интервал введения выбирают из группы, состоящей из 4 недель, 8 недель, 12 недель или 16 недель, например, 4 недель.

В некоторых вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе, выбранной из группы, состоящей из а) 75 мг, b) 100 мг, c) 150 мг, d) 200 мг и e) 250 мг, например, 150 мг.

В некоторых вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в соответствии со схемой введения, выбранной из группы, состоящей из 75 мг Q4W, 150 мг Q4W и 150 мг Q8W.

В настоящем изобретении предусмотрен способ снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови пациента или осуществления лечения и/или предупреждения гиперлипидемии у пациента, или осуществления лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с холестерином, включающий введение пациенту по меньшей мере одного антигена к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе 300-600 мг за раз и с интервалом введения более чем 4 недели.

В альтернативных вариантах осуществления вводимая доза выбрана из группы, состоящей из 300-500 мг, например, 300 мг или 450 мг.

В альтернативных вариантах осуществления интервал введения выбирают из группы, состоящей из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 и 16 недель.

В альтернативных вариантах осуществления интервал введения выбирают из группы, состоящей из 8, 12 и 16 недель.

В некоторых вариантах осуществления антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в соответствии со схемой введения, выбранной из группы, состоящей из 300 мг Q8W, 300 мг Q12W и 450 мг Q12W.

В некоторых вариантах осуществления цикл лечения составляет по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере 6 недель, по меньшей мере 8 недель, по меньшей мере 10 недель, по меньшей мере 12 недель, по меньшей мере 16 недель, по меньшей мере 20 недель, по меньшей мере 24 недели, по меньшей мере 28 недель, по меньшей мере 32 недели, по меньшей мере 36 недель, по меньшей мере 40 недель, по меньшей мере 44 недели, по меньшей мере 48 недель, по меньшей мере 52 недели, по меньшей мере 56 недель, по меньшей мере 1 год, по меньшей мере 2 года или больше.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На фиг. 1 показано среднее процентное изменение концентрации LDL-C на протяжении всего периода лечения.

На фиг. 2 показано среднее процентное изменение концентрации ТС на протяжении всего периода лечения.

На фиг. 3 показано среднее процентное изменение концентрации холестерина, отличного от HDL-C, на протяжении всего периода лечения.

На фиг. 4 показано среднее процентное изменение концентрации АроВ на протяжении всего периода лечения.

На фиг. 5 показано среднее процентное изменение концентрации Lp(a) на протяжении всего периода лечения.

На фиг. 6 показано среднее процентное изменение концентрации свободного PCSK9 на протяжении всего периода лечения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

1. Терминология

Трехбуквенные и однобуквенные коды аминокислот, применяемые в настоящем изобретении, описаны в J. Biol. Chem, 243, p3558 (1968).

Термин «антитело», описанный в настоящем изобретении, относится к иммуноглобулину, который имеет структуру тетрапептидной цепи, образованной соединением между двумя идентичными тяжелыми цепями и двумя идентичными легкими цепями посредством межцепочечных дисульфидных связей.

В настоящем изобретении легкая цепь антитела по настоящему изобретению может дополнительно содержать константную область легкой цепи, предусматривающую человеческие или мышиные κ- и λ-цепи или их варианты.

В настоящем изобретении тяжелые цепи антител по настоящему изобретению могут дополнительно содержать константную область тяжелой цепи, предусматривающую человеческий или мышиный IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 или их варианты.

В тяжелой и легкой цепях антитела последовательности приблизительно из 110 аминокислот вблизи N-конца значительно различаются и поэтому называются вариабельными областями (Fv-областями); остальные аминокислотные последовательности вблизи С-конца относительно стабильны и поэтому называются константными областями. Вариабельные области включают 3 гипервариабельные области (HVR) и 4 каркасные области (FR) с относительно консервативными последовательностями. 3 гипервариабельные области определяют специфичность антитела и поэтому также известны как области, определяющие комплементарность (CDR). Каждая вариабельная область легкой цепи (LCVR) или вариабельная область тяжелой цепи (HCVR) состоит из 3 CDR и 4 FR, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. 3 CDR легкой цепи относятся к LCDR1, LCDR2 и LCDR3, и 3 CDR тяжелой цепи относятся к HCDR1, HCDR2 и HCDR3. Аминокислотные остатки CDR в LCVR и HCVR антител или антигенсвязывающих фрагментах, описанных в настоящем изобретении, соответствуют известной схеме нумерации по Kabat (LCDR 1-3, HCDR 1-3) с точки зрения количества и положения.

Антитело по настоящему изобретению включает мышиное антитело, химерное антитело и гуманизированное антитело, и предпочтительно гуманизированное антитело.

Термин «мышиное антитело», применяемый в настоящем изобретении, относится к моноклональному антителу к PCSK9 человека, полученному в соответствии со знаниями и навыками в данной области техники. В ходе получения испытуемому субъекту вводят антиген PCSK9 и после чего выделяют гибридому, экспрессирующую антитела с требуемой последовательностью или функциональными свойствами.

Термин «химерное антитело» относится к антителу, полученному путем слияния вариабельной области мышиного антитела и константной области человеческого антитела, что может обеспечивать снижение иммунного ответа, вызываемого мышиным антителом. Химерное антитело получают, сначала создавая гибридому, секретирующую специфичные мышиные моноклональные антитела, затем клонируя ген вариабельной области из клеток гибридомы мыши, клонируя ген константной области человеческого антитела и, как требуется, соединяя ген вариабельной области мыши и ген константной области человека в химерный ген, обеспечивая вставку химерного гена в вектор экспрессии и, наконец, обеспечивая экспрессию химерных молекул антител в эукариотической системе или прокариотической системе. В альтернативном варианте осуществления настоящего изобретения легкая цепь химерного антитела к PCSK9 дополнительно содержит константную область легкой цепи человеческих κ- и λ-цепей или их варианты. Тяжелая цепь химерного антитела к PCSK9 дополнительно содержит константную область тяжелой цепи из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 человека или их варианты. Константная область человеческого антитела может быть выбрана из группы, состоящей из константных областей тяжелой цепи из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 человека или их вариантов, например, содержащих константные области тяжелой цепи из IgG2 или IgG4 человека, или IgG4, подвергнутый мутации по аминокислотам без токсичности ADCC (антителозависимой клеточной цитотоксичности).

Термин «гуманизированное антитело», также известное как CDR-привитое антитело, относится к антителу, полученному путем прививания последовательностей CDR мыши в каркасную область вариабельной области антитела человека, т.е. другого типа последовательности каркасной области антитела человека. Таким образом, может быть преодолена сильная реакция антитела с вариабельным антителом, вызванная большим количеством белковых компонентов мыши, содержащихся в химерном антителе. Такие последовательности каркасной области могут быть получены из общедоступных баз данных ДНК или опубликованных источников, которые включают последовательности генов антител зародышевого типа. Например, последовательности ДНК генов вариабельных областей тяжелой и легкой цепи зародышевой линии человека можно найти в базе данных последовательностей генов зародышевой линии человека «VBase» (доступна в Интернете по адресу www.mrccpe.com.ac.uk/vbase), а также в Kabat, E.A. et al., 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е издание. Чтобы избежать одновременного снижения иммуногенности и снижения активности последовательности каркасной области вариабельной области антитела человека могут быть подвергнуты минимальной реверсивной мутации или обратной мутации для сохранения активности. Гуманизированные антитела по настоящему изобретению также включают гуманизированные антитела, образованные после дальнейшего созревания аффинности CDR с помощью фагового дисплея.

«Антитело к PCSK9» представляет собой антитело, которое специфически связывается с PCSK9, в том числе без ограничения серию h001 гуманизированных антител к PCSK-9 из PCT/CN2016/111053. Серию h001 гуманизированных антител к PCSK-9 получают путем скрининга мышей, иммунизированных с помощью PCSK9 человека, и проведения преобразования путем гуманизации.

«Антигенсвязывающий фрагмент», описанный в настоящем изобретении, относится к Fab-фрагментам, Fab'-фрагментам, F(ab')₂-фрагментам и ScFv-фрагментам, которые связываются с PCSK9 человека, а также к другим фрагментам, которые могут связываться с PCSK9 человека с помощью областей VH и VL антител, которые могут связываться с PCSK9 человека; антигенсвязывающий фрагмент содержит одну или несколько CDR антитела по настоящему изобретению, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8. Fv-фрагмент содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела, но не константные области и представляет собой наименьший фрагмент антитела из всего антигенсвязывающего сайта. Как правило, Fv антитела также содержат полипептидный линкер между доменами VH и VL и способны образовывать структуру, необходимую для связывания антигена. Две вариабельные области антитела, которые также могут быть связаны в одну полипептидную цепь с применением разных линкеров, известны как одноцепочечное антитело (scFv) или одноцепочечное fv (sFv). Термин «связывание с PCSK9» в настоящем изобретении относится к способности взаимодействовать с PCSK9 человека. Термин «антигенсвязывающий сайт» в настоящем изобретении относится к непрерывному или прерывающемуся трехмерному пространственному сайту на антигене, который распознается антителом к PCSK9 или его антигенсвязывающим фрагментом.

«Осуществление лечения» или «лечение» относится к введению терапевтического средства, такого как композиция, содержащая любое из антител по настоящему изобретению, либо внутренне, либо наружно пациенту с одним или несколькими симптомами заболевания, в отношении которого известно, что терапевтическое средство обладает терапевтическим эффектом. Как правило, терапевтическое средство вводят в количестве, эффективном для облегчения одного или нескольких симптомов заболевания у пациента или популяции, подвергаемых лечению, для того, чтобы вызвать регрессию таких симптомов, или для подавления развития таких симптомов до любой клинически измеримой степени. Количество терапевтического средства, эффективное для облегчения симптомов любого конкретного заболевания (также называемое «терапевтически эффективным количеством»), может варьировать в зависимости от множества факторов, таких как стадия заболевания, возраст и вес пациента, и способность препарата оказывать требуемый терапевтический эффект на пациента. Насколько были ослаблены симптомы заболевания можно оценить с помощью любых способов клинических испытаний, обычно применяемых врачами или другими медицинскими работниками для оценки тяжести или прогрессирования симптома. Хотя варианты осуществления настоящего изобретения (например, способы лечения или продукты для лечения) могут быть неэффективны для облегчения всех целевых симптомов заболевания у каждого пациента, как определено в соответствии с любыми методами статистического анализа, известными в данной области техники, такими как t-критерий Стьюдента, критерий хи-квадрат, U-критерий Манна-Уитни, критерий Крускала-Уоллиса (H-критерий), критерий Джонкхира-Терпстры и критерий Уилкоксона, они должны уменьшать целевые симптомы заболевания у статистически значимого числа пациентов.

«Эффективное количество» включает количество, достаточное для обеспечения улучшения или предотвращения симптома или признака заболевания. Эффективное количество также относится к количеству, достаточному для того, чтобы обеспечивать или облегчать диагностику. Эффективное количество для конкретного пациента или ветеринарного субъекта может варьировать в зависимости от таких факторов, как состояние, подлежащее лечению, общее состояние здоровья пациента, способ, путь и дозировка введения, а также тяжесть побочных эффектов. Эффективное количество может представлять собой максимальную дозу или схему введения, позволяющую избежать значительных побочных эффектов или токсических эффектов.

Например, «Q4W» означает введение один раз в 4 недели, и «Q8W» означает введение один раз в 8 недель. «150 мг Q8W» означает дозу, составляющую 150 мг, вводимую один раз в 8 недель.

Наследственная гиперхиломикронемия представляет собой редкое генетическое нарушение, которое приводит к дефициту LP-липазы, представляющей собой фермент, расщепляющий молекулы жиров. Дефицит LP-липазы может привести к большому накоплению жиров или липопротеинов в крови.

Наследственная гиперхолестеринемия, представляющая собой относительно распространенное генетическое нарушение, характеризующееся потенциальным дефектом из-за ряда мутаций в гене рецептора LDL, что приводит к дисфункции и/или дефициту рецепторов LDL. Это приводит к неэффективному клиренсу LDL рецепторами LDL, что приводит к повышению уровней LDL и общего холестерина в плазме крови.

Наследственная комбинированная гиперлипидемия, также известная как комбинированная гиперлипидемия липопротеинового типа, представляет собой генетическое заболевание, при котором пациенты и их пораженные родственники первой линии могут иметь высокий уровень холестерина и высокий уровень триглицеридов в разное время. Уровни холестерина HDL часто умеренно снижены.

Наследственный дефицит аполипопротеина B-100 представляет собой относительно распространенную аутосомно-доминантную генетическую аномалию. Этот дефицит вызван мутацией одного нуклеотида, при которой аргинин заменяется глутамином, что приводит к снижению аффинности частиц LDL к рецепторам LDL. В результате возникают высокие уровни LDL и общего холестерина в плазме крови.

Наследственная дисбеталипопротеинемия, также известная как гиперлипопротеинемия III типа, представляет собой редкое генетическое заболевание, которое приводит к умеренному или выраженному повышению уровней TG и холестерина в сыворотке крови и аномальной функции аполипопротеина Е. Уровни HDL часто в норме.

Наследственная гипертриглицеридемия представляет собой распространенное генетическое заболевание, характеризующееся повышенной концентрацией VLDL в плазме крови. Это приводит к легкому или умеренному повышению уровня триглицеридов (уровень холестерина обычно не повышен) и часто сопровождается низким уровнем HDL в плазме крови.

Пример 1. Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое клиническое испытание фазы Ib/II с параллельными группами для изучения безопасности, переносимости и эффективности множественных подкожных инъекций h001-4-YTE у субъектов с гиперлипидемией

1. Тестируемое лекарственное средство

h001-4-YTE

2. Субъект, включенный в испытание

Для того, чтобы претендовать на участие в испытании, субъекты должны соответствовать всем следующим критериям включения:

(1) субъекты, которые получали лечение статинами или были допущены к лечению статинами во время скрининга, которые получали лечение статинами в стабильной дозе в течение 28 дней или более до рандомизации и которые были готовы поддерживать стабильное лечение статинами в исследование (виды статинов и дозы, разрешенные в исследовании: аторвастатин в дозе 10-40 мг/сутки) (Lipitor, Pfizer Pharmaceutical Co., Ltd.);

(2) субъекты, получающие лечение статинами и/или другими лекарственными средствами, регулирующими уровень липидов, во время скрининга, у которых уровень LDLC в сыворотке крови был больше или равен 2,6 ммоль/л, или субъекты, не получающие лечения лекарственными средствами, регулирующими уровень липидов, во время скрининга, у которых уровень LDL-C в сыворотке крови был больше или равен 3,4 ммоль/л, либо уровень LDL-C был все еще больше или равен 2,6 ммоль/л до рандомизации;

(3) субъекты, у которых концентрация триглицеридов меньше или равна 4,5 ммоль/л во время голодания; и

(4) субъекты с индексом массы тела (BMI) более или равным 18 кг/м² и менее или равным 35 кг/м².

3. Способ введения

В этом испытании планировалось выделить 6 групп, среди которых проводилось введение лекарственного средства подкожно по 75 мг Q4W (группа 1), по 150 мг Q8W (группа 2), по 300 мг Q12W (группа 3), по 150 мг Q4W (группа 4), по 300 мг Q8W (группа 5) и по 450 мг Q12W (группа 6), с применением схем Q4W и Q8W, согласно которым лекарственное средство вводили в течение 16 недель, и с применением схемы Q12W, согласно которой лекарственное средство вводили в течение 24 недель, соответственно.

4. Фармакодинамические данные

В клинических испытаниях приняли участие 110 субъектов, которые были случайным образом сгруппированы и которым вводили H001-4-YTE и плацебо в соотношении 5:1 соответственно. Все пациенты получали стабильный режим лечения аторвастатином (10-40 мг/сутки) в течение по меньшей мере 28 дней до рандомизации и на протяжении всего исследования. Все дозы и расписания в группах, получавших H001-4-YTE, приводили к значительному снижению LDL-C от исходного уровня до конца интервала введения по сравнению с группой, получавшей плацебо. Как видно из табл. 1, среднее процентное снижение LS LDL-C в схемах введения H001-4-YTE по 75 мг Q4W, 150 мг Q4W, 150 мг Q8W, 300 мг Q8W, 300 мг Q12W и 450 мг Q12W составило -48,63% (95% CI: -59,795, -37,455), -55,06% (-62,956, -47,172), -52,02% (-63,188, -40,859), -48,38% (-56,321, -40,440), -43,93% (-55,097, -32,769) и -52,77% (-60,487, -45,054) соответственно, в то время как в группе, получавшей плацебо, наблюдалось увеличение на 4,44% (-3,688, 12,570) (все значения p составляли менее 0,0001). Среднее процентное снижение LS LDL-C в каждой группе, получавшей H001-4-YTE, варьировало от -48,33% до -59,00% по сравнению с группой, получавшей плацебо. Среднее абсолютное снижение LS LDL-C в каждой группе, получавшей H001-4-YTE, варьировало от -1,59 ммоль/л до -1,92 ммоль/л по сравнению с группой, получавшей плацебо.

На фиг. 1 показано среднее процентное изменение концентрации LDL-C на протяжении всего периода лечения. После первого введения (неделя 0) концентрация LDL-C во всех группах, получавших H001-4-YTE, быстро снижалась. В первом цикле наибольшее снижение уровня LDL-C произошло на 3-й неделе приема 75 мг Q4W (-48,182%) и на 4-й неделе приема 150 мг Q4W (-56,744%); после этого процентное изменение LDL-C в группе, получавшей 75 мг H001-4-YTE Q4W, оставалось в пределах от -54,916% до -42,108%, и процентное изменение LDL-C в группе, получавшей 150 мг H001-4-YTE Q4W, оставалось в пределах от -64,527% до -54,579%. В первом цикле максимальное снижение LDL-C произошло на 4-й неделе приема 150 мг Q8W (-73,519%) и 300 мг Q8W (-59,274%) и на 3-й неделе приема 300 мг Q12W (-65,721%) и 450 мг Q12W (-65,522%); после этого при повторном введении произошло возвращение к исходному состоянию в небольшой мере; однако по-прежнему существовала тенденция к сильному снижению, процентное изменение LDL-C в группе, получавшей 150 мг Q8W, варьировало от -52,050% до -69,323%, процентное изменение LDL-C в группе, получавшей 300 мг Q8W, варьировало от -46,133% до -60,476%, процентное изменение LDL-C в группе, получавшей 300 мг Q12W, варьировало от -43,909% до -63,108%, и процентное изменение LDL-C в группе, получавшей 450 мг Q12W, варьировало от -44,491% до -59,556%.

В табл. 2 обобщено процентное снижение других показателей липидов и аполипопротеинов. Устойчивое быстрое снижение TC, холестерина, отличного от HDL-C, ApoB и Lp(a) наблюдалось во всех группах, получавших H001-4-YTE (фиг. 2-5). Процентное изменение ТС от исходного уровня до конца интервала введения варьировало от -31,263% до -37,760% в группах, получавших H001-4-YTE, и от 3,534% до -3,065% в группе, получавшей плацебо. Процентное изменение холестерина, отличного от HDL-C, от исходного уровня до конца интервала введения варьировало от -39,920% до -52,349% в группах, получавших H001-4-YTE, и от 7,412% до -5,957% в группе, получавшей плацебо. Процентное изменение ApoB от исходного уровня до конца интервала введения варьировало от -35,592% до -47,687% в группах, получавших H001-4-YTE, и от 12,565% до -6,623% в группе, получавшей плацебо. Процентное изменение Lp(a) от исходного уровня до конца интервала введения варьировало от -31,263% до -35,339% в группах, получавших H001-4-YTE, и от 1,578% до -3,065% в группе, получавшей плацебо.

Сразу после введения и лечения с помощью H001-4-YTE было обнаружено резкое снижение содержания свободного PCSK9 и его дозозависимое процентное снижение (фиг. 6). На 2-й день уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей 75 мг H001-4-YTE Q4W, снизился на -31,60% (SE, 7,462%), уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей 150 мг H001-4-YTE Q4W, снизился на -37,09% (5,645%), и в группе, получавшей плацебо Q4W, уровень свободного PCSK9 снизился на -9,44% (11,048%); уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей 150 мг H001-4-YTE Q8W, снизился на -39,12% (5,760%), и уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей 300 мг H001-4-YTE Q8W, снизился на -63,88% (4,079%), в то время как уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей плацебо Q8W, увеличился на 10,17% (8,691%); уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей 300 мг H001-4-YTE Q12W, снизился на -61,59% (4,507%), и уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей 450 мг H001-4-YTE Q12W, снизился на -68,56% (4,554%), в то время как уровень свободного PCSK9 в группе, получавшей плацебо Q12W, увеличился на 16,57% (28,585).

Кроме того, во время исследования ни у одного пациента не наблюдалось серьезных побочных явлений, возникающих после начала лечения (TEAE), ни одного TEAE, приведшего к прекращению лечения или смерти, и не сообщалось о реакциях в месте инъекции.

Таблица 2. Снижение уровня LDL-C по сравнению с исходным уровнем до 12 недель и снижение показателей липидов и аполипопротеинов по сравнению с исходным уровнем до конца интервала введения после лечения H001-4-YTE

LDL-C относится к холестерину липопротеинов низкой плотности; ТС относится к общему холестерину; АроВ относится к аполипопротеину В; холестерин, отличный от HDL-C, относится к холестерину липопротеинов низкой плотности; Lp(a) относится к липопротеину а.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ДЖИАНГСУ ХЕНГРУИ ФАРМАСЬЮТИКАЛС, ЭЛТИДИ

<120> СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С ХОЛЕСТЕРИНОМ

<130> P22415460RU

<150> CN202010194665.6

<151> 2020-03-19

<160> 10

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1

<400> 1

Asp Tyr Trp Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2

<400> 2

Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Phe Thr Lys Tyr His Gln Asn Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 3

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3

<400> 3

Gln Tyr Asp Tyr Asp Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 4

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1

<400> 4

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Phe Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 5

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR2

<400> 5

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 6

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3

<400> 6

Lys Gln Ser Phe Asn Leu Phe Thr

1 5

<210> 7

<211> 121

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VH

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Phe Thr Lys Tyr His Gln Asn Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Tyr Asp Tyr Asp Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> VL

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

35 40 45

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Phe Asn Leu Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 451

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HC

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Phe Thr Lys Tyr His Gln Asn Phe

50 55 60

Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Tyr Asp Tyr Asp Glu Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr

245 250 255

Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 10

<211> 219

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC

<400> 10

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Arg Thr Arg Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Phe Asn Leu Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<---

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента. Способ включает введение пациенту антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе от 60 до 550 мг за раз и с интервалом введения не менее 4 недель. Изобретение может найти применение в лечении или предупреждении заболеваний, связанных с холестерином. 13 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл., 1 пр.

1. Способ снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови у пациента, включающий введение пациенту по меньшей мере одного антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе от 60 до 550 мг за раз и с интервалом введения не менее 4 недель, при этом антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, представленные под SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6 соответственно, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3, представленные под SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3 соответственно.

2. Способ по п. 1, где интервал введения предпочтительно составляет 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 недель.

3. Способ по п. 1, где антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи, представленную под SEQ ID NO: 8, и вариабельную область тяжелой цепи, представленную под SEQ ID NO: 7 соответственно.

4. Способ по п. 1, где антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент содержит легкую цепь, имеющую последовательность, представленную под SEQ ID NO: 10, и тяжелую цепь, имеющую последовательность, представленную под SEQ ID NO: 9.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где вводимая доза выбрана из группы, состоящей из 70-200 мг, предпочтительно 70-150 мг; интервал введения выбран из группы, состоящей из 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 недель, предпочтительно 4 или 8 недель.

6. Способ по любому из пп. 1-4, где вводимая доза выбрана из группы, состоящей из 100-300 мг и предпочтительно 150-300 мг; интервал введения составляет не менее 6 недель, предпочтительно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель и более, предпочтительно 8 или 12 недель.

7. Способ по любому из пп. 1-4, где вводимая доза выбрана из группы, состоящей из 250-550 мг и предпочтительно 300-550 мг; интервал введения составляет не менее 8 недель, предпочтительно 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 недель и более, предпочтительно 8 или 12 недель.

8. Способ по любому из пп. 1-4, где антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозе, выбранной из группы, состоящей из a)70 мг, b) 75 мг, c) 100 мг, d) 120 мг, e) 130 мг, f) 140 мг, g) 150 мг, h) 210 мг, i) 280 мг, j) 300 мг, k) 350 мг, l) 400 мг, m) 450 мг, n) 500 мг и o) 550 мг.

9. Способ по любому из пп. 1-4, где антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят с интервалом, выбранным из группы, состоящей из 4, 8, 12 и 16 недель.

10. Способ по любому из пп. 1-4, где антитело к PCSK9 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в соответствии со схемой введения, выбранной из группы, состоящей из 75 мг Q4W, 150 мг Q8W, 300 мг Q12W, 150 мг Q4W, 300 мг Q8W и 450 мг Q12W.

11. Способ по любому из пп. 1-4, где величина снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови составляет по меньшей мере 10%.

12. Способ по любому из пп. 1-4, где величина снижения уровня холестерина LDL в сыворотке крови выбрана из группы, состоящей из а) по меньшей мере 15%, b) по меньшей мере 20%, c) по меньшей мере 30%, d) по меньшей мере 40%, e) по меньшей мере 50%, f) по меньшей мере 55%, g) по меньшей мере 60% и h) по меньшей мере 65%.

13. Способ по любому из пп. 1-4, где пациента ранее подвергали лечению по меньшей мере одним ингибитором синтеза холестерина и/или ингибитором абсорбции холестерина;

предпочтительно ингибитор синтеза холестерина представляет собой статин и более предпочтительно аторвастатин, церивастатин, флувастатин, ловастатин, мевастатин, питавастатин, правастатин, розувастатин или симвастатин;

предпочтительно ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб.

14. Способ по п. 13, где пациента ранее подвергали лечению по меньшей мере одним ингибитором синтеза холестерина или ингибитором абсорбции холестерина в течение по меньшей мере 4 недель.