СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2022 года по МПК A61K36/734 A61K135/00 B01D11/02 A61P7/02 A61P39/06 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа производства лекарственных препаратов из растительного сырья.

В настоящее время большое внимание уделяется использованию антиоксидантов для профилактики и лечения целого ряда заболеваний. Это обусловлено тем, что многие жизненно важные метаболические и физиологические процессы, протекающие в организме, тесно связаны со свободно-радикальным окислением. Снижение естественной антиоксидантной активности вызывает в организме значительные патологические изменения, которые являются причиной многих заболеваний, в том числе ишемических и гипоксических поражений сердечно-сосудистой системы (ССС) [Антиоксиданты - цитопротекторы в кардиологии / А.П. Голиков, В.Ю. Полумисков, В.П. Михин и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2004. - №6, Часть 2. - С. 45-49.].

Заболевания сердечно-сосудистой системы по данным Всемирной организации здравоохранения занимают одно из ведущих мест по распространенности и первое место по числу смертности среди населения [Профилактика хронических неинфекционных заболеваний: рекомендации / под. ред. С.А. Бойцова, А.Г. Чучалина. - М.: Государственный научно-исследовательский центр профилактической медицины, 2013. - 136 с.]. Имеющийся клинический опыт и результаты экспериментальных исследований свидетельствуют о важной роли оксидантного стресса в формировании и прогрессировании сердечно-сосудистой патологии, необходимости ранней, планомерной и комплексной антиоксидантной коррекции [Свободнорадикальное окисление и сердечно-сосудистая патология: коррекция антиоксидантами / А.П. Голиков, С.А. Бойцов, В.П. Михин и др. // Лечащий Врач. - 2003. - №4.- С. 23-27.]..

Также одним из направлений вторичной и первичной профилактики сердечно-сосудистых заболеваний является проведение антиагрегантной терапии, так как повышенная свертываемость крови является пусковым фактором развития инфарктов и инсультов.

В терапии сердечно-сосудистых заболеваний широко используются синтетические лекарственные средства. Однако, при выраженном терапевтическом эффекте, они имеют побочные действия, противопоказания и ограничения к применению, не всегда предотвращают развитие рецидива заболевания после их отмены.

Результаты отечественных и зарубежных научных работ доказывают целесообразность использования растительных антиоксидантных и антиагрегантных препаратов в комплексной терапии сердечно-сосудистых заболеваний.

Преимуществом использования растительных препаратов является их малая токсичность, возможность длительного применения без побочного действия, широкий спектр фармакологического действия.

Использование большого количества лекарственного растительного сырья в основном предполагает получение из него водного извлечения -настоя или отвара в зависимости от морфологической группы сырья. Однако данные водные извлечения изготавливаются самим пациентом в домашних условиях, и зачастую пациент не имеет возможности правильной дозировки растительного сырья для приготовления настоя или отвара. Кроме того, срок годности водных извлечений всего 2 суток.

В настоящее время хорошо себя зарекомендовали фитопрепараты на основе экстрактов. В процессе получения экстрактов обеспечивается максимальный выход биологически активных веществ (БАВ), экстракты можно использовать в виде самостоятельной лекарственной формы или в качестве субстанции для получения на их основе дозированных лекарственных форм (таблетки, гранулы, леденцы и т.д.), а также срок годности у экстрактов достаточно длительный от 6 месяцев до 3 лет.

Известен способ получения растительного экстракта, обладающего антиоксидантной активностью, на основе наземной части амаранта с использованием в качестве экстрагента спирта этилового 20-30% [RU 2608131, 2017]. Недостатком данного способа является получение жидкого экстракта и хранение его в холодильной камере.

Известен способ получения сухого экстракта из фукусовых водорослей, обладающего антиоксидантным действием [RU 2650808, 2018]. В качестве экстрагента используют смесь пролина, яблочной кислоты и воды (в молярном соотношении 1:1:3) 20% и воды 80%. Недостатком данного способа является достаточно сложная многоступенчатая технологическая схема получения заявленного экстракта.

Наиболее близким аналогом изобретения является способ получения средства, обладающего антиоксидантной активностью [RU 2342942, 2009]. Данный способ заключается в том, что в качестве источника сырья используют листья первоцвета весеннего. Растительное сырье заливают 70% раствором этилового спирта, настаивают трое суток при комнатной температуре в экстракторе, процесс мацерации повторяют трижды. Полученные водно-спиртовые настойки объединяют, испаряют на роторном испарителе под вакуумом. Далее доводят до состояния густого экстракта в выпарительных чашах в сушильном шкафу при температуре 60°С. К недостаткам данного способа относится то, что он не обеспечивает извлечение всего комплекса биологически активных веществ из растительного сырья, так как в данном способе не используется нагревание экстракта.

Задачей изобретения является разработка способа получения растительного средства, обладающего антиагрегантной и антиоксидантной активностью, обеспечивающего повышение выхода биологически активных веществ и расширение спектра фармакологического действия.

Техническим результатом предлагаемого способа является увеличение выхода экстрактивных веществ и других групп биологически активных соединений, расширение сырьевой базы и спектра фармакологического действия.

Предлагаемый способ получения средства, обладающего биологической активностью, осуществляется следующим образом. В качестве растительного сырья используют побеги различных видов боярышника, представляющие собой смесь листьев, цветков и зеленых стеблей. В качестве производящих растений предлагается использовать четыре вида боярышника: боярышник кроваво-красный БК (Crataegus sanguinea Pall.) или боярышник мягковатый БМ (Crataegus submollis Sarg.) или боярышник алма-атинский БА (Crataegus almaatensis Pojark.) или боярышник приречный БП (Crataegus rivularis Nutt. ex Torr. et A. Gray). Измельченные до размера 2 мм побеги боярышника экстрагируют водой при соотношении сырье-экстрагент 1:10 с обратным холодильником при кипении экстрагента в течение 2 часов. Полученное извлечение фильтруют, отжимая сырье. Полученный фильтрат помещают в ротационный испаритель и упаривают при температуре 55°С до получения густой массы. Густой остаток высушивают в вакуум-сушильном шкафу при температуре 50-60°С до постоянной массы и остаточной влажности сухого экстракта до 5%.

Оптимальные параметры экстракции были установлены экспериментально (табл. 1).

Для установления оптимального метода экстракции были получен настой с использованием воды очищенной согласно ОФС «Настои и отвары» и извлечение по методике ОФС «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье» ГФ XIV издания.

При сравнении полученных данных, видно, что при использовании методики ОФС «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье», наблюдается больший выход экстрактивных веществ, полифенольных соединений, аскорбиновой кислоты и водорастворимых флавоноидов (табл. 1). Содержание экстрактивных веществ при использовании известного метода 7,95-9,11%, по предлагаемому - 18,92-22,12%. Выход целевого продукта по известному способу - около 15%, по предлагаемому - 25-28%.

Пример 1.

100,0 г воздушно-сухих побегов боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea Pall.) или боярышника мягковатого (Crataegus submollis Sarg.) или боярышника алма-атинского (Crataegus almaatensis Pojark.) или боярышника приречного (Crataegus rivularis Nutt. ex Torr. et A. Gray) с размером частиц сырья 2 мм помещают в экстрактор и заливают 1000 мл воды очищенной. Оставляют на 1 час для смачивания сырья, потом кипятят с обратным холодильником - 2 часа. Полученное извлечение фильтруют, отжимая сырье. Полученный фильтрат помещают в ротационный испаритель и упаривают при температуре 55°С до получения густой массы. Густой остаток высушивают в вакуум-сушильном шкафу при температуре 50-60°С до постоянной массы и остаточной влажности сухого экстракта до 5%.

Выход сухого экстракта составляет 25-28% от массы воздушно-сухого сырья.

Экстракт сухой представляет собой порошок от светло-коричневого до темно-коричневого цвета со слабым запахом и горьковатым слегка вяжущим вкусом.

Пример 2.

Антиагрегантная активность

Для оценки антиагрегантной активности исследуемые сухие экстракты в виде водных растворов 1:10 вносили в плазму крови из расчета 5% от объема реакционной смеси. В качестве препарата сравнения использовали 2-ацетилоксибензойную кислоту («Ацетилсалициловая кислота», производитель - фармацевтическая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД, Китай). Антиагрегационная активность ацетилсалициловой кислоты представлена для концентрации 2×10^-3 [Ураков А.Л., Самородов А.В., Камилов Ф.Х., Халиуллин Ф.А. Полирегионарная агрегатометрия крови пациентов с острым тромбозом, как потенциальная модель доклинических исследований новых корректоров системы гемостаза ex vivo // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2017. - Т. 16, №1 (61). - С. 65-71.].

Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Выявлено, что вид распределения полученных данных отличается от нормального, поэтому при дальнейшей работе использовались непараметрические методы. Данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05.

О воздействии сухих экстрактов из исследуемых видов боярышников на процесс агрегации эритроцитов судили по влиянию на латентный период, максимальную амплитуду агрегации, скорость агрегации и время достижения максимальной амплитуды (табл. 2).

Согласно полученным данным все исследуемые виды боярышников уменьшают максимальную амплитуду, что говорит об их влиянии на агрегацию тромбоцитов, однако они увеличивают латентный период агрегации тромбоцитов в отличие от препарата сравнения.

В результате анализа влияния исследуемых экстрактов на максимальную амплитуду установлено, что экстракт побегов Crataegus almaatensis показал результат антиагрегантной активности, сопоставимый с препаратом сравнения, а экстракты побегов Crataegus submollis, Crataegus sanguinea и Crataegus rivularis превосходили показатели активности препарата сравнения на 41%, 27% и 23% соответственно.

Пример 3.

Антиоксидантная активность (метод 1)

Метод определения антиоксидантной активности основан на способности антиоксидантов ингибировать аутоокисление адреналина in vitro и тем самым предотвращать образование активных форм кислорода [Сирота, Т.В. Способ определения антиоксидантной активности супероксиддисмутазы и химических соединений / Т.В. Сирота. - Заявка №99103192 (003673), приоритет от 24.02.1999.].

В спектрофотометрическую кювету к 2 мл фосфатного буфера, рН 10,0, при комнатной температуре (не ниже 15°С), добавляют 100 мкл 0,1% раствора адреналина (230 мкМ). Происходит быстрое (в течение нескольких минут) аутоокисление адреналина, которое регистрируют не по образованию адренохрома, а по ранее появляющемуся продукту окисления адреналина, поглощающему при длине волны 347 нм. Далее в кюветы добавляется 0,01 мл исследуемого экстракта и через 10 мин наблюдается изменение оптической плотности. Для учета влияния собственной окраски экстрактов, которые поглощают определенную длину волны в видимой части спектра, в качестве контрольной пробы использовали буферированный раствор экстракта, без адреналина. Расчет антиоксидантной активности проводят по формуле:

где

До - оптическая плотность раствора без экстракта;

Д - оптическая плотность с экстрактом.

Величина более 10% свидетельствует об имеющейся антиоксидантной активности (табл. 3).

Исследуемые экстракты снижали аутокисление адреналина и образование свободных форм кислорода в исследуемых концентрациях от 31% до 49% (табл. 3), что свидетельствует об антиоксидантной активности предлагаемого средства.

Пример 4.

Антиоксидантная активность (метод 2)

Антиоксидантную активность определяли in vitro методом хемилюминесценции [Исследование антиоксидантной активности сбора «Кардиофит» хемилюминесцентным методом / А.П. Потанина, С.Р. Хасанова, Н.В. Кудашкина, P.P. Фархутдинов // Традиционная медицина. - 2013. - №5, Т. 8. - С. 75-77.]. В качестве препаратов сравнения использовали природные антиоксиданты - 0,05% раствор рутина и 0,05% раствор аскорбиновой кислоты.

Водные извлечения экстрактов (по 0,01; 0,1 и 0,5 мл) вносили в разные модельные системы, в которых генерировалось образование активных форм кислорода и протекали реакции перекисного окисления липидов - наиболее распространенные процессы свободно-радикального окисления. В качестве модельной системы использовали 20 мл фосфатного буфера с добавлением цитрата натрия и люминола (рН=7,5). В качестве инициатора окисления добавляли 1 мл 50 мМ раствора железа (II) сульфата. Окисление солей железа ведет к появлению кислородных радикалов и сопровождается хемилюминесценцией, усиливающейся в присутствии люминола. Регистрацию свечения проводили в течение 5 минут.

В качестве контроля использовали модельные системы без добавления исследуемого сырья. Регистрацию свечения проводили на приборе «ХЛМ-003». Антиокислительную активность оценивали по уменьшению интенсивности свечения.

Согласно полученным данным (табл. 4) все исследуемые образцы снижали светосумму свечения в дозе 0,01 мл - от 59,6% до 69,4%, в дозе 0,1 мл - от 77,9% до 88,1%, в дозе 0,5 мл - от 87,3% до 94,5%, что не уступает активности аскорбиновой кислоте (от 50,1% до 90,7%) и выше, чем у рутина (55,6% до 85,5%).

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего антиагрегантной и антиоксидантной активностью. Способ получения средства, обладающего антиагрегантной и антиоксидантной активностью, включающий измельчение растительного сырья, экстракцию методом мацерации, сгущение в роторном испарителе и высушивание в сушильном шкафу, причем в качестве растительного сырья используют побеги боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea Pall.), или боярышника мягковатого (Crataegus submollis Sarg.), или боярышника алма-атинского (Crataegus almaatensis Pojark.), или боярышника приречного (Crataegus rivularis Nutt. ex Torr. et A. Gray), проводят мацерацию измельченных воздушно-сухих побегов водой в соотношении сырье - экстрагент 1:10, для этого заливают измельченные до 2 мм побеги водой очищенной, оставляют на 1 час для смачивания сырья, потом кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов. Вышеописанный способ позволяет повысить выход экстрактивных веществ, средство, полученное данным способом, проявляет выраженную антиагрегантную и антиоксидантную активность. 4 табл., 4 пр.

Способ получения средства, обладающего антиагрегантной и антиоксидантной активностью, включающий измельчение растительного сырья, экстракцию методом мацерации, сгущение в роторном испарителе и высушивание в сушильном шкафу, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют побеги боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea Pall.), или боярышника мягковатого (Crataegus submollis Sarg.), или боярышника алма-атинского (Crataegus almaatensis Pojark.), или боярышника приречного (Crataegus rivularis Nutt. ex Torr. et A. Gray), проводят мацерацию измельченных воздушно-сухих побегов водой в соотношении сырье - экстрагент 1:10, для этого заливают измельченные до 2 мм побеги водой очищенной, оставляют на 1 час для смачивания сырья, потом кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов.