ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к способу предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы. Кроме того, настоящее изобретение относится к диагностическому набору, к применению указанного диагностического набора в способе предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, к применению профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) и профиля экспрессии гена для DExH-бокс-геликазы 9 (DHX9) в предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, а также к соответствующему компьютерному программному продукту.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Рак представляет собой класс заболеваний, при которых группа клеток проявляет неконтролируемое размножение, инвазию и иногда метастазы. Эти три злокачественных свойства разных видов рака отличают их от доброкачественных опухолей, которые являются самоограниченными, не способны к инвазии или метастазированию. Рак предстательной железы (РПЖ) является наиболее часто встречающимся злокачественным новообразованием, не связанным с кожей, у мужчин, при этом в 2012 г. во всем мире было диагностировано около 1,1 миллиона новых случаев (см. Ferlay J. et al., GLOBOCAN 2012 v1.0, Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11 [Internet], Lyon, France, International Agency for Research on Cancer, 2013).

Из-за старения населения заболеваемость РПЖ будет и далее повышаться в ближайшие годы (см. Quon H. et al., «Dramatic increase in prostate cancer cases by 2021», BJU International, Vol. 108, No. 11, pages 1734-1738, 2011). Стандартная диагностика с помощью определения уровней простатоспецифического антигена (ПСА) в крови, пальцевого ректального исследования (DRE) и трансректального ультразвукового анализа (TRUS) приводит к значительной первичной сверхдиагностике нераковых доброкачественных состояний предстательной железы (см. Bangma C.H. et al., «Overdiagnosis and overtreatment of early detected prostate cancer», World Journal of Urology, Vol. 25, No. 1, pages 3-9, 2007, и Schröder F.H. et al., «Screening and Prostate-Cancer Mortality in a Randomized European Study», The New England Journal of Medicine, Vol. 360, No. 13, pages 1320-1328, 2009): из приблизительно 1 миллиона биопсий предстательной железы, выполняемых ежегодно только в США с выявлением примерно 250000 новых случаев, примерно 75% выполняются без необходимости, что вызывает у пациентов значительные осложнения (уросепсис, кровотечения, задержку мочи) и в целом стоит более 2 миллиардов долларов США (~2100 долларов США за процедуру биопсии). По меньшей мере 4 из 100 мужчин с отрицательным результатом биопсии, вероятно, будут госпитализированы из-за побочных эффектов, и 9 из 10000 пациентов, прошедших биопсию, подвержены риску смерти из-за применяемой в настоящее время процедуры (см. Nam R.K. et al., «Increasing hospital admission rates for urological complications after transrectal ultrasound guided biopsy», Journal of Urology, Vol. 183, No. 3, pages 963-968, 2010).

В США из приблизительно 250000 обнаруженных новых случаев РПЖ в год примерно 200000 первоначально характеризуются как локализованное заболевание (см. Snyder C.F. et al., «How does initial treatment choice affect short-term and long-term costs for clinically localized prostate cancer?», Cancer, Vol. 116, No. 23, pages 5391-5399, 2010, и Cooperberg M.R. et al., «Contemporary trends in low risk prostate cancer: risk assessment and treatment», Journal of Urology, Vol. 173, No. 3, Pt. 2, pages 14-19, 2007), то есть как рак, ограниченный органом предстательной железы. Это состояние в определенной степени излечимо с помощью подходов первичного лечения, таких как лучевая терапия или, в частности, частичное или полное удаление предстательной железы с помощью операции (простатэктомия). Однако эти вмешательства, как правило, сопровождаются серьезными побочными эффектами, в частности, недержанием мочи и/или эректильными дисфункциями, как очень частыми последствиями простатэктомии. До 50% мужчин, проходящих радикальную простатэктомию, страдают недержанием мочи. Исследования показали, что через год после операции от 15% до 50% мужчин по-прежнему сообщают о таких проблемах. Проблемы с эрекцией также являются серьезными побочными эффектами радикальной простатэктомии (RP). Только примерно половина прооперированных мужчин могут частично восстановить свою способность иметь эрекции. Кроме того, все применяемые в повседневной практике виды лечения локализованного РПЖ являются дорогостоящими (как правило, порядка 20-30000 долларов США) и в США приводят к общим прямым затратам в 5 миллиардов долларов США в год.

Среди ~200000 мужчин в Соединенных Штатах с клинически локализованным заболеванием на момент постановки диагноза до 50% имеют очень низкий или низкий риск развития рака (см. Bangma C.H. and Roobol M.J., «Defining and predicting indolent and low prostate cancer», Critical Reviews in Oncology/Hematology, Vol. 83, No. 2, pages 235-241, 2012). Соответственно, Национальная всеобщая онкологическая сеть США (National Comprehensive Cancer Network, NCCN) недавно пересмотрела свои рекомендации по лечению РПЖ, чтобы расширить активное наблюдение (AS) в качестве щадящей и удобной альтернативы лечения для пациентов, страдающих заболеванием с низким риском (см. www.nccn.org). Качество жизни таких пациентов значительно улучшается при направлении соответствующих пациентов на AS, по сравнению с мужчинами, прошедшими первичное лечение, и, как сообщается, 5-летние затраты на AS составляют менее 10000 долларов США на пациента (см. Snyder C.F. et al.).

Более того, в случае если в качестве предпочтительного лечения для конкретного пациента выбрана операция (в сравнении с AS), стратификация объема операции в соответствии с потенциальной агрессивностью опухоли пациента обеспечивает значительное преимущество. Например, методики нервосберегающих операций могут быть более широко применены для мужчин с прогнозируемым заболеванием с низким риском, чтобы минимизировать связанные с потенцией нежелательные эффекты радикальной простатэктомии. Аналогичным образом, в соответствии с самыми последними рекомендациями Европейской ассоциации урологов (EAU) по раку предстательной железы обширная диссекция лимфатических узлов рекомендуется в случае прогнозируемого высокого риска развития рака, несмотря на то, что процедура является сложной, требует много времени и ассоциирована с более высокой частотой осложнений по сравнению с более ограниченными процедурами (см. Heidenreich A. et al., «Guidelines on Prostate Cancer», European Association of Urology, 2012). Следовательно, в то время как менее ограниченная диссекция лимфатических узлов, как было показано, упускает примерно 50% метастазов в лимфатических узлах (см. Heidenreich A. et al., «Extended pelvic lymphadenectomy in patients undergoing radical prostatectomy: high incidence of lymph node metastasis», Journal of Urology, Vol. 167, No. 4, pages 1681-1686, 2002, и Bader P. et al, «Is a limited lymph node dissection and adequate staging procedure for prostate cancer?», Journal of Urology, Vo. 168, No. 2, pages 514-518, 2002), тактика лечения мужчин с локализованным раком предстательной железы требует высокоточных предоперационных прогнозов потенциальной агрессивности отдельной опухоли, чтобы обеспечить наиболее оптимальный уход для каждого пациента.

В WO 2014/028884 A2 раскрыты способы, системы и наборы для диагностики, прогноза и определения прогрессирования рака у субъекта. Кроме того, раскрыты способы, системы и наборы для определения способа лечения рака у субъекта. Способы, системы и наборы включают анализ биомаркеров на основании экспрессии. Кроме того, раскрыты наборы зондов для применения в оценке статуса рака у субъекта.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Цель настоящего изобретения заключается в обеспечении способа предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, который может обеспечить более точные предоперационные прогнозы потенциальной агрессивности отдельной опухоли. Еще одна цель настоящего изобретения заключается в обеспечении диагностического набора, применении указанного диагностического набора в способе предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, применении профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) и профиля экспрессии гена для DExH-бокс-геликазы 9 (DHX9) в предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, а также соответствующего компьютерного программного продукта.

Согласно первому аспекту настоящего изобретения предложен способ предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, включающий:

- определение профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) в биологическом образце, полученном от субъекта,

- определение профиля экспрессии гена для DExH-бокс-геликазы 9 (DHX9) в том же или другом биологическом образце, полученном от субъекта, и

- определение предоперационной прогностической оценки риска для субъекта на основании профиля экспрессии гена для PDE4D7 и профиля экспрессии гена для DHX9.

Известно, что сигнальный путь цАМФ играет важную роль как в развитии, так и в прогрессировании рака предстательной железы (см. Merkle D. and Hoffmann R., «Roles of cAMP and cAMP-dependent protein kinase in the progression of prostate cancer: Cross-talk with the androgen receptor», Cellular Signalling, Vol. 23, No. 3, pages 507-515, 2011). В то время как семейство аденилатциклаз отвечает за синтез цАМФ, фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов (PDE), по-видимому, представляют собой единственный клеточный механизм его разрушения. PDE обеспечивают завершение сигнала и, что важно, компартментализацию передачи сигнала цАМФ в трехмерном матриксе клеток. Это достигается посредством пространственно дискретного разрушения цАМФ за счет субпопуляций различных изоформ PDE, секвестрированных с помощью локализованных якорных белков/сигналосом (см., например, Conti M. and Beavo J., «Biochemistry and physiology of cyclic nucleotide phosphodiesterases: essential components in cyclic nucleotide signaling», Annual Review of Biochemistry, Vol. 76, pages 481-511, 2007). Таким образом, изменения экспрессии и/или активности различных изоформ PDE могут изменять нижележащие сигнальные пути во время развития и прогрессирования заболевания, обеспечивая потенциальные мишени для новых биомаркеров и для нацеленного терапевтического вмешательства. Действительно, изменения экспрессии членов семейства цАМФ-разлагающих PDE4, по-видимому, ассоциированы с рядом различных заболеваний, включая инсульт, акродизостоз, шизофрению и ХОБЛ. Недавно было показано, что отрицательная регуляция конкретной изоформы PDE4 (PDE4D7) может влиять на рак предстательной железы (см., например, Böttcher R. et al., «Human phosphodiesterase 4D7 (PDE4D7) expression is increased in TMPRSS2-ERG positive primary prostate cancer and independently adds to a reduced risk of post-surgical disease progression», British Journal of Cancer, Vol. 113, No. 10, pages 1502-1511, 2015). Изоформа PDE4D7 представляет собой так называемую длинную изоформу, поскольку она содержит оба регуляторных домена UCR1 и UCR2. UCR1 обнаружен в длинных, но не в коротких, изоформах PDE4 и обеспечивает регуляцию различными протеинкиназами, включая PKA и MK2, а также определяет функциональный результат фосфорилирования каталитической единицы под действием ERK. Функционально он обеспечивает часть клеточной системы десенсибилизации к цАМФ и обеспечивает перекрестную связь между сигнальными путями, которые приводят к активации ERK и AMPK, например.

Новые свидетельства демонстрируют, что человеческие геликазы, такие как DHX9, могут действовать как центры в клеточных сетях для координации клеточных ответов на стресс, чтобы поддерживать клеточный гомеостаз для выживания или инициировать гибель клеток. Интересно, что недавно было показано, что ряд линий человеческих раковых клеток чувствителен к подавлению активности геликазы DHX9 in vitro и in vivo. Профилирование экспрессии генов опухолевых клеток после подавления DHX9 выявило дерегуляцию ряда путей, вовлеченных в развитие или прогрессирование опухоли. Кроме того, DHX9 недавно был описан как главный игрок в устранении повреждения ДНК, ассоциированного с R-петлей, что подтверждает поддержание геномной стабильности. Нарушение этого процесса может привести к развитию и прогрессированию рака из-за перегруппировок на геномном уровне, феномен, который был продемонстрирован при многих видах рака. Эти недавние результаты во многом подтверждаются данными, полученными авторами настоящего изобретения, которые показывают значительную ассоциацию экспрессии гена DHX9 со временем до рецидива рака предстательной железы в когорте пациентов, страдающих клиническим раком предстательной железы, с проспективным наблюдением (неопубликованные данные).

Авторы настоящего изобретения идентифицировали и подтвердили взаимодействие между PDE4D7 и геликазой DHX9 в клетках рака предстательной железы. Кроме того, может быть показано, что N-концевой домен DHX9 фосфорилируется in vitro цАМФ-зависимой протеинкиназой A (PKA). В связи с этим возникает вопрос, оказывает ли эта посттрансляционная модификация под действием PKA какое-либо регуляторное влияние на активность или клеточную локализацию DHX9 и влияет ли взаимодействие с PDE4D7 на фосфорилирование путем регуляции циклического АМФ в микродомене DHX9. Таким образом, PDE4D7, как недавно идентифицированный партнер по взаимодействию с DHX9, может играть решающую роль в прямом или косвенном контроле функции DHX9 в развитии рака предстательной железы.

Дополнительную молекулярную информацию, разъясняющую биологию заболевания, получают путем определения предоперационной прогностической оценки риска для субъекта, страдающего раком предстательной железы, на основании профилей экспрессии генов как для PDE4D7, так и для DHX9. Прогностическая мощность PDE4D7 и DHX9 используется в предоперационной оценке риска пациента путем определения предоперационной прогностической оценки риска, которая основана на профилях экспрессии генов как для PDE4D7, так и для DHX9. Это может обеспечить улучшенную стратификацию субъекта в предоперационном условии, что может привести к более правильным решениям о первичном лечении. Например, предоперационная прогностическая оценка риска может позволить дать более правильные рекомендации относительно выбора активного наблюдения в сравнении с активным вмешательством, например, радикальной простатэктомией, для определенных субпопуляций пациентов, страдающих раком предстательной железы.

Термин «фосфодиэстераза 4D7» или «PDE4D7» относится к варианту сплайсинга 7 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D7, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001165899.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:19, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D7, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:20, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001159371.1, кодирующей полипептид PDE4D7. Термин «фосфодиэстераза 4D7» или «PDE4D7» также относится к ампликону, который может быть получен с помощью пары праймеров PDE4D7_forward (SEQ ID NO:21) и PDE4D7_reverse (SEQ ID NO:22) и может быть обнаружен с помощью зонда SEQ ID NO:23.

Полипептид PDE4D7 также может быть обнаружен с помощью пары праймеров PDE4D7-2_forward (SEQ ID NO:24) и PDE4D7_reverse (SEQ ID NO:25) и может быть обнаружен с помощью зонда SEQ ID NO:26.

Термин «PDE4D7» также включает нуклеотидные последовательности, показывающие высокую степень гомологии с PDE4D7, например, последовательности нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:19, или аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:20, или последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:20, или аминокислотные последовательности, кодируемые последовательностями нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:19.

Термин «DExH-бокс-геликаза 9» или «DHX9» относится к гену человеческой DExH-бокс-геликазы 9, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001357.4 (Ensembl: ENSG00000135829), в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:74, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта DHX9, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:75, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001348.2, кодирующей полипептид DHX9.

Термин «DHX9» также включает нуклеотидные последовательности, показывающие высокую степень гомологии с DHX9, например, последовательности нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:74, или аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:75, или последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:75, или аминокислотные последовательности, кодируемые последовательностями нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:74.

Термин «биологический образец» или «образец, полученный от субъекта» относится к любому биологическому материалу, полученному подходящими способами, известными специалисту в данной области техники, от субъекта, например, пациента, страдающего раком предстательной железы. Используемый биологический образец может быть собран клинически приемлемым способом, например, таким образом, что сохранены нуклеиновые кислоты (в частности, РНК) или белки.

Биологический (ие) образец (образцы) может (могут) включать ткань и/или жидкость организма, такую как, но не ограничиваясь ими, кровь, пот и моча. Кроме того, биологический образец может содержать экстракт клеток, полученный из популяции клеток, или популяцию клеток, включая эпителиальную клетку, такую как раковая эпителиальная клетка или эпителиальная клетка, полученная из ткани, которая, как подозревается, является раковой. Биологический образец может содержать популяцию клеток, полученную из железистой ткани, например, образец может быть получен из предстательной железы субъекта-мужчины. Кроме того, при необходимости клетки могут быть очищены из полученных тканей и жидкостей организма, а затем использованы в качестве биологического образца. Согласно некоторым вариантам реализации образец может представлять собой образец ткани, образец мочи, образец осадка мочи, образец крови, образец слюны, образец спермы, образец, включающий циркулирующие опухолевые клетки, внеклеточные везикулы, образец, содержащий экзосомы, секретируемые предстательной железой, или линии клеток, или линию раковых клеток.

Согласно одному конкретному варианту реализации могут быть получены и/или использованы образцы биопсии или резекций. Такие образцы могут включать клетки или лизаты клеток.

Также возможно, что содержимое биологического образца подвергается этапу обогащения. Например, образец может быть приведен в контакт с лигандами, специфическими для клеточной мембраны или органелл определенных типов клеток, например, клеток предстательной железы, функционализированными, например, магнитными частицами. Материал, сконцентрированный с помощью магнитных частиц, впоследствии может использоваться для этапов обнаружения и анализа, описанных в настоящей заявке выше или ниже.

Кроме того, клетки, например, опухолевые клетки, могут быть обогащены за счет способов фильтрации жидкости или жидких образцов, например, крови, мочи и т.д. Такие способы фильтрации также можно комбинировать с этапами обогащения, основанными на специфичных для лигандов взаимодействиях, как описано в настоящей заявке выше.

Термин «рак предстательной железы» относится к раку предстательной железы в мужской репродуктивной системе, который возникает, когда клетки предстательной железы мутируют и начинают бесконтрольно размножаться. Как правило, рак предстательной железы связан с повышенным уровнем простатоспецифического антигена (ПСА). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения термин «рак предстательной железы» относится к раку, показывающему уровни ПСА выше 4,0. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения термин относится к раку, показывающему уровни ПСА выше 2,0. Термин «уровень ПСА» относится к концентрации ПСА в крови в нг/мл.

Термин «непрогрессирующее состояние рака предстательной железы» означает, что образец индивидуума не показывает значения параметров, указывающие на «биохимический рецидив» и/или «клинический рецидив».

Термин «прогрессирующее состояние рака предстательной железы» означает, что образец индивидуума показывает значения параметров, указывающие на «биохимический рецидив» и/или «клинический рецидив».

Термин «биохимический рецидив» обычно относится к рецидивирующим биологическим значениям повышенного ПСА, указывающим на наличие клеток рака предстательной железы в образце. Однако также можно применять и другие маркеры, которые могут быть использованы для обнаружения наличия или которые вызывают подозрение на такое наличие.

Термин «клинический рецидив» относится к наличию клинических признаков, указывающих на наличие опухолевых клеток при измерении, например, с использованием визуализации in vivo.

В настоящей заявке термин «прогнозирование рака предстательной железы» относится к прогнозированию течения или исхода диагностированного или обнаруженного рака предстательной железы, например, в течение определенного периода времени, во время лечения или после лечения. Термин также относится к определению шанса на выживаемость или восстановление от заболевания, а также к прогнозированию ожидаемой продолжительности выживаемости субъекта. Прогноз может включать, в частности, установление вероятности выживаемости субъекта в течение некоторого периода времени в будущем, например, 6 месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет, 5 лет, 10 лет или любого другого периода времени.

Предпочтительно профиль экспрессии гена для PDE4D7 и профиль экспрессии гена для DHX9 комбинируют с функцией регрессии, которая была получена на основании популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы.

Регрессионный анализ помогает понять, как изменяется типичное значение зависимой переменной (или «критериальной переменной») при варьировании любой из независимых переменных, в то время как другие независимые переменные остаются фиксированными. Эта взаимосвязь между зависимой переменной и независимыми переменными фиксируется в функции регрессии, которую можно использовать для прогнозирования зависимой переменной с учетом значений независимых переменных. Зависимая переменная может представлять собой, например, бинарную переменную, такую как биохимический рецидив в течение 5 лет после операции. В этом случае регрессия представляет собой логистическую регрессию, основанную на логит-функции независимых переменных, которые в данном случае включают или состоят из профиля экспрессии гена для PDE4D7 и профиля экспрессии гена для DHX9. С помощью функции регрессии можно улучшить прогноз, например, риска биохимического рецидива в течение 5 лет после операции.

Предпочтительно способ дополнительно включает:

предложение первичного лечения для субъекта на основании предоперационной прогностической оценки риска, при этом указанное первичное лечение выбрано из группы, состоящей из: (i) по меньшей мере частичной простатэктомии; (ii) активной терапии, выбранной из лучевой терапии, гормональной терапии, химиотерапии и их комбинации; и (iii) активного наблюдения.

Различные национальные и международные руководства рекомендуют различные виды лечения для субъекта, страдающего раком предстательной железы, в зависимости от риска будущего прогрессирования заболевания и ожидаемой продолжительности жизни. Например, мужчинам с очень низким и низким риском развития рака предстательной железы обычно рекомендуется активное наблюдение (AS), в то время как при высоком риске развития рака может быть показана радикальная простатэктомия. Однако известные клинические показатели риска не позволяют эффективно определить интенсивность заболевания или его агрессивность для всех пациентов. Например, было обнаружено, что в группах очень низкого и низкого риска согласно Национальной всеобщей онкологической сети (NCCN) существует значительная подгруппа популяции пациентов с риском рецидива рака от 10 до 25% после первичного лечения. Также известно, что в группе промежуточного риска существует субпопуляция с низким риском биохимического прогрессирования. Для определенных субпопуляций пациентов, страдающих раком предстательной железы, более правильные рекомендации, например, о том, следует ли выбрать активное наблюдение или активное вмешательство, например, радикальную простатэктомию, могут быть сделаны, основывая предлагаемое субъекту первичное лечение на предоперационной прогностической оценке риска.

Кроме того, предпочтительно способ включает:

нормирование профиля экспрессии гена для PDE4D7 и/или профиля экспрессии гена для DHX9 по отношению к одному или более референсным генам, выбранным из группы, состоящей из: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 (HPRT1) Homo sapiens, тубулина-альфа-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio (PUM1) Homo sapiens и ТАТА-бокс-связывающего белка (ТВР) Homo sapiens, причем указанную предоперационную прогностическую оценку риска определяют на основании нормированного (ых) профиля (ей) экспрессии гена (ов).

Вариабельность определения предоперационной прогностической оценки риска может быть уменьшена путем нормирования профиля (ей) экспрессии гена (ов) по отношению к одному или более референсным генам и путем определения предоперационной прогностической оценки риска на основании нормированного (ых) профиля (ей) экспрессии гена (ов). Это позволяет дифференцировать фактические вариации профилей экспрессии генов и вариации из-за способов измерения. В этом отношении было обнаружено, что HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP особенно хорошо подходят в качестве референсных генов для нормирования профиля (ей) экспрессии гена (ов) PDE4D7 и/или DHX9.

Профиль (профили) экспрессии гена (ов) можно определить путем обнаружения экспрессии мРНК с использованием одного или более праймеров и/или зондов и/или одного или более их наборов. Более того, профиль (профили) экспрессии гена (ов) можно определить с помощью метода, основанного на амплификации, и/или анализа микрочипа, и/или секвенирования РНК. Определение профиля (ей) экспрессии гена (ов) может включать выполнение количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (RT-qPCR) на РНК, выделенной из биологического образца. Согласно другим вариантам реализации профиль (профили) экспрессии гена (ов) определяют с помощью секвенирования РНК, стандартной ПЦР (с использованием, например, анализа конечных точек с помощью гель-электрофореза) или мультиплексной ПЦР. В случае RT-qPCR определение профиля (ей) экспрессии гена (ов) может включать определение значения порогового цикла (Ct) для PDE4D7 и/или DHX9 и каждого из одного или более референсных генов. ПЦР может быть выполнена с использованием по меньшей мере одного праймера и/или зонда для измерения референсного гена, выбранного из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP.

Предпочтительно один или более референсных генов содержат по меньшей мере два или по меньшей мере три, или все из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP.

Другие референсные гены, которые могут быть дополнительно или альтернативно использованы для нормирования профиля (ей) экспрессии гена (ов) PDE4D7 и/или DHX9, включают: мРНК актина, бета, (ACTB) Homo sapiens; мРНК кислого рибосомного фосфопротеина P0 60S (RPLP0) Homo sapiens; полипептид А, 220 кДа, полимеразы (РНК) II (ДНК-направленной) (POLR2A); бета-2-микроглобулин (B2M); и аминолевулинат-дельта-синтазу (ALAS-1).

Согласно некоторым предпочтительным вариантам реализации нормированный (ые) профиль (профили) экспрессии гена (ов) для PDE4D7 и/или DHX9 преобразуют в заранее определенный диапазон значений, например, в диапазон от 1 до 5, с использованием подходящей (их) функции (функций) преобразования. Предпочтительно функция (функции) преобразования была (были) получена (ы) из профиля (ей) экспрессии гена (ов), нормированного (ых) соответствующего образом, например, профиля (ей) экспрессии гена (ов), нормированного (ых) по отношению ко всем из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP, для PDE4D7 и/или для DHX9, для биологических образцов, полученных из популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы (которая предпочтительно может представлять собой ту же популяцию, что и популяция, применявшаяся для получения функции регрессии). Согласно одному предпочтительному варианту реализации функция преобразования может представлять собой линейное преобразование, которое преобразует нормированный профиль экспрессии гена в заранее определенный диапазон значений. Такое преобразование может быть определено путем рассмотрения частотного распределения нормированных значений профиля экспрессии гена, например, для PDE4D7 (или для DHX9) для биологических образцов из популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы, и путем определения преобразования, которое преобразует частотное распределение в целевой диапазон. С помощью такой функции преобразования профиль экспрессии гена может быть выражен интуитивно понятным для пользователя способом, например, в небольшом диапазоне положительных значений. Это аналогично другим категориям, используемым в повседневной клинической практике, например, при гистопатологической классификации (Глисон) или многопараметрической радиологической оценке МРТ (PIRADS).

Согласно одному конкретному варианту реализации преобразованный нормированный профиль экспрессии гена определяют следующим образом:

TNGEP = (((GENE_norm + A)*B)+1), (1)

где «TNGEP» представляет собой преобразованный нормированный профиль экспрессии гена, «GENE_norm» представляет собой нормированное значение профиля экспрессии гена PDE4D7 или DHX9, а A и B представляют собой переменные и подходящим образом выбраны для отображения «GENE_norm» в целевом диапазоне значений.

Особенно предпочтительно определение профиля экспрессии гена для PDE4D7 и/или профиля экспрессии гена для DHX9 включает выполнение RT-qPCR на РНК, выделенной из биологического (их) образца (образцов), причем значение Cq определяют для PDE4D7 и/или DHX9 и для каждого из одного или более референсных генов, и при этом указанное определение предоперационной оценки риска включает нормирование значения Cq для PDE4D7 и/или DHX9 с использованием значения Cq для каждого из одного или более референсных генов и вычисление предоперационной оценки риска на основании нормированного (ых) значения (значений) Cq.

Например, нормированное значение Cq для PDE4D7 может быть получено путем применения следующего:

N(Cq_PDE4D7) = Mean(Cq_{ref_genes}) – (Cq_PDE4D7), (2)

где N(Cq_PDE4D7) представляет собой нормированное значение профиля экспрессии гена (цикл количественной оценки, Cq) PDE4D7, Mean(Cq_{ref_genes}) представляет собой среднее арифметическое значений Cq ПЦР одного или более референсных генов и Cq_PDE4D7 представляет собой значение Cq ПЦР для PDE4D7.

Аналогичным образом, нормированное значение Cq для DHX9 может быть получено путем применения следующего:

N(Cq_DHX9) = Mean(Cq_{ref_genes}) – (Cq_DHX9), (3)

где N(Cq_DHX9) представляет собой нормированное значение профиля экспрессии генов (цикл количественной оценки, Cq) DHX9, Mean(Cq_{ref_genes}) представляет собой среднее арифметическое значений Cq ПЦР одного или более референсных генов и Cq_DHX9 представляет собой значение Cq ПЦР для DHX9.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен диагностический набор, содержащий:

по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) в биологическом образце, полученном от субъекта, страдающего раком предстательной железы;

по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения профиля экспрессии гена для DExH-бокс-геликазы 9 (DHX9) в том же или другом биологическом образце, полученном от субъекта; и

необязательно по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения профиля экспрессии гена для одного или более референсных генов, выбранных из группы, состоящей из: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 (HPRT1) Homo sapiens, тубулина-альфа-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio (PUM1) Homo sapiens и ТАТА-бокс-связывающего белка (ТВР) Homo sapiens;

причем указанный диагностический набор дополнительно содержит инструкции по вычислению предоперационной прогностической оценки риска на основании профиля экспрессии гена для PDE4D7 и профиля экспрессии гена для DHX9, при этом указанные инструкции хранятся в компьютерном программном продукте, который, при выполнении компьютером, выполняет способ, включающий:

определение предоперационной прогностической оценки риска для субъекта на основании профиля экспрессии гена для PDE4D7 и профиля экспрессии гена для DHX9, при этом необязательно указанный способ включает:

нормирование профиля экспрессии гена для PDE4D7 и/или профиля экспрессии гена для DHX9 по отношению к одному или более референсным генам,

при этом указанную предоперационную прогностическую оценку риска определяют на основании нормированного (ых) профиля (ей) экспрессии гена (ов).

Предпочтительно инструкции по вычислению предоперационной прогностической оценки риска включают инструкции по комбинированию профиля экспрессии гена для PDE4D7 и профиля экспрессии гена для DHX9 с функцией регрессии, которая была получена на основании популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено применение диагностического набора, определенного в п. 7 или 8, в способе предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложено применение профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) и профиля экспрессии гена для DExH-бокс-геликазы 9 (DHX9) в предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, включающее:

определение профиля экспрессии гена для PDE4D7 в биологическом образце, полученном от субъекта,

определение профиля экспрессии гена для DHX9 в том же или другом биологическом образце, полученном от субъекта, и

определение предоперационной прогностической оценки риска для субъекта на основании профиля экспрессии гена для PDE4D7 и профиля экспрессии гена для DHX9.

Предпочтительно профиль экспрессии гена для PDE4D7 и профиль экспрессии гена для DHX9 комбинируют с функцией регрессии, которая была получена на основании популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы.

Согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения предложен компьютерный программный продукт, содержащий инструкции, которые, при выполнении программы компьютером, приводят к осуществлению компьютером способа, включающего:

определение предоперационной прогностической оценки риска для субъекта, страдающего раком предстательной железы, на основании профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) и профиля экспрессии гена для DExH-бокс-геликазы 9 (DHX9),

причем указанный профиль экспрессии гена для PDE4D7 был определен в биологическом образце, полученном от субъекта, и профиль экспрессии гена для DHX9 был определен в том же или другом биологическом образце, полученном от субъекта.

Предпочтительно профиль экспрессии гена для PDE4D7 и профиль экспрессии гена для DHX9 комбинируют с функцией регрессии, которая была получена на основании популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы.

Согласно дополнительным предпочтительным вариантам реализации послеоперационную прогностическую оценку риска для субъекта определяют на основании предоперационной прогностической оценки риска и послеоперационной клинической оценки риска CAPRA-S.

Предпочтительно предоперационную прогностическую оценку риска и послеоперационную клиническую оценку риска CAPRA-S комбинируют с функцией регрессии, которая была получена на основании популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы.

Указанные дополнительные предпочтительные варианты реализации можно осуществлять с помощью способа по п. 1, диагностического набора по п. 7, применения указанного диагностического набора по п. 9, применения профиля экспрессии гена по п. 10 и компьютерной программы по п. 12.

Следует понимать, что способ по п. 1, диагностический набор по п. 7, применение указанного диагностического набора по п. 9, применение профиля экспрессии гена по п. 10 и компьютерная программа по п. 12 имеют сходные и/или идентичные предпочтительные варианты реализации, в частности, определенные в зависимых пунктах формулы изобретения.

Следует понимать, что предпочтительный вариант реализации настоящего изобретения также может представлять собой любую комбинацию зависимых пунктов формулы изобретения или приведенных выше вариантов реализации с соответствующим независимым пунктом формулы изобретения.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения будут понятны на основании и пояснены со ссылкой на варианты реализации, описанные в настоящей заявке ниже.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На следующих чертежах:

На Фиг. 1 схематично и в качестве примера показана блок-схема варианта реализации способа предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы,

На Фиг. 2 показаны результаты анализа ROC-кривой биохимического рецидива (BCR) в течение 5 лет после операции по поводу рака предстательной железы в когорте пациентов с RP.

На Фиг. 3 показаны результаты анализа ROC-кривой клинического рецидива (CR) в течение 10 лет после операции по поводу рака предстательной железы в когорте пациентов с RP.

На Фиг. 4 показаны результаты анализа ROC-кривой специфической смерти от рака предстательной железы в течение 10 лет после операции по поводу рака предстательной железы в когорте пациентов с RP.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Обзор предоперационной стратификации риска

На Фиг. 1 схематично и в качестве примера показана блок-схема варианта реализации способа предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы.

Способ начинается на этапе S100.

На этапе S102 один или более биологических образцов получают от каждого из первой группы пациентов (субъектов), у которых диагностирован рак предстательной железы. Предпочтительно мониторинг рака предстательной железы для этих пациентов, страдающих раком предстательной железы, выполняли в течение периода времени, такого как по меньшей мере один год или по меньшей мере два года, или примерно пять лет, после получения биологического образца.

На этапе S104 профили экспрессии генов для PDE4D7 и для DHX9 получают для одного и того же или разных биологических образцов, полученных от каждого из первой группы пациентов, например, путем выполнения RT-qPCR (количественная ПЦР в режиме реального времени) на РНК, выделенной из каждого биологического образца. Примерные профили экспрессии генов включают уровень экспрессии (например, значение) для PDE4D7 и для DHX9, который может быть нормирован с использованием значения (значений) для каждого из набора референсных генов, таких как HPRT1, TUBA1B, PUM1 и/или TBP. Согласно одному варианту реализации значение профиля экспрессии гена PDE4D7 и DHX9 нормировано по отношению к одному или более референсным генам, выбранным из группы, состоящей из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP, например, по меньшей мере одному или по меньшей мере двум, или по меньшей мере трем, или предпочтительно всем указанным референсным генам.

На этапе S106 определяют функцию регрессии для присвоения предоперационной прогностической оценки риска на основании профилей экспрессии генов для PDE4D7 и для DHX9, полученных по меньшей мере для некоторых из биологических образцов, полученных для первой группы пациентов, и соответствующих результатов, полученных в результате мониторинга. Согласно одному возможному варианту реализации нормированный (ые) профиль (профили) экспрессии гена (ов) для PDE4D7 и/или DHX9 сначала преобразуют в заранее определенный диапазон значений, такой как упомянутый выше диапазон от 1 до 5, с использованием подходящей (их) функции (функций) преобразования. Как упоминалось выше, такое преобразование может быть определено путем рассмотрения частотного распределения нормированных значений профиля экспрессии гена, например, для PDE4D7 (или для DHX9) для биологических образцов из популяции субъектов, страдающих раком предстательной железы, (в настоящей заявке первая группа пациентов) и путем определения преобразования, которое преобразует частотное распределение в целевой диапазон. Согласно одному конкретному варианту реализации нормированное (ые) преобразованное (ые) значение (значения) профиля экспрессии гена определяют, как указано в уравнении (1) выше.

На этапе S108 один или более биологических образцов получают от пациента (субъекта или индивидуума). Пациент может представлять собой нового пациента или одного из первой группы.

На этапе S110 получают профили экспрессии генов для PDE4D7 и DHX9, например, путем выполнения ПЦР на биологическом образце. Согласно одному варианту реализации значения профилей экспрессии генов PDE4D7 и DHX9 нормируют по отношению к одному или более референсным генам, выбранным из группы, состоящей из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP, например, по меньшей мере одному или по меньшей мере двум, или по меньшей мере трем, или предпочтительно всем указанным референсным генам. По существу этот этап аналогичен этапу S104. Более того, нормированный (ые) профиль (профили) экспрессии гена (ов) для PDE4D7 и/или DHX9 можно предварительно преобразовать, как описано в отношении этапа S106.

Другие референсные гены, которые могут быть дополнительно или альтернативно использованы на этапах S104 и S110, включают: мРНК актина, бета, (ACTB) Homo sapiens; мРНК кислого рибосомного фосфопротеина P0 60S (RPLP0) Homo sapiens; полипептид А, 220 кДа, полимеразы (РНК) II (ДНК-направленной) (POLR2A); бета-2-микроглобулин (B2M); и аминолевулинат-дельта-синтазу (ALAS-1).

На этапе S112 предоперационную прогностическую оценку риска для пациента определяют с использованием функции регрессии на основании профилей экспрессии генов для PDE4D7 и DHX9. Это будет описано более подробно ниже в описании. Чтобы сделать предоперационную прогностическую оценку интуитивно понятной для пользователя, она также может быть определена так, чтобы ее значения попадали в заранее определенный диапазон значений, например, диапазон от 1 до 5. Это может быть достигнуто как уже с помощью самой функции регрессии, так и с помощью подходящего последующего преобразования, которое преобразует выходные значения функции регрессии в целевой диапазон значений. Как уже упоминалось, это аналогично другим категориям, используемым в повседневной клинической практике, например, при гистопатологической классификации (Глисон) или многопараметрической радиологической оценке МРТ (PIRADS).

На S114 может быть предоставлена рекомендация по терапии, например, пациенту или его или ее опекуну, врачу или другому медицинскому работнику, на основании предоперационной прогностической оценки риска. С этой целью предоперационная прогностическая оценка риска может быть отнесена к одной группе из заранее определенного набора групп риска на основании значения предоперационной прогностической оценки риска. Предоставление рекомендации по терапии может включать одно или более из указанных далее: a) предложение терапии для пациента на основании назначенной группы риска, при этом по меньшей мере две из групп риска ассоциированы с разными видами терапии, b) вычисление прогноза риска прогрессирования заболевания у пациента до или после операции на предстательной железе; и c) вычисление прогноза ответа на терапию для пациента до или после операции на предстательной железе. Примерные виды терапии включают по меньшей мере частичную простатэктомию, активную терапию, выбранную из лучевой терапии, химиотерапии и их комбинации, и только наблюдение, т. е. без выполнения простатэктомии или активной терапии (т. е. активное наблюдение).

Способ заканчивается на S116.

Каждая из групп риска может быть ассоциирована с соответствующей предлагаемой терапией, которая отличается своей агрессивностью. Каждая предлагаемая терапия может быть основана на результатах пациентов из первой группы, которые были отнесены к этой группе риска, и представляет собой терапию, которая, как прогнозируется, обеспечит наименее агрессивную терапию, которая не превышает пороговый клинический риск для развития рака предстательной железы. В некоторых случаях это позволяет отнести нового пациента к группе риска, ассоциированной с менее агрессивной предлагаемой терапией, чем может быть в случае других способов профилирования рисков, таких как использование оценки по шкале Глисона, категорий риска NCCN или предоперационной оценки CAPRA.

Согласно одному варианту реализации профили экспрессии генов на этапах S104 и S110 определяют путем обнаружения экспрессии мРНК с использованием одного или более праймеров и/или зондов и/или одного или более их наборов.

Подробное описание PDE4D7, DHX9 и одного или более референсных генов, включая их идентификатор транскрипта (NCBI RefSeq) и соответствующие аминокислотные последовательности для пары праймеров и зонда, показаны в ТАБЛИЦЕ 1. В этой таблице для каждого гена также показан смысловой праймер и антисмысловой праймер, а также последовательность зонда, которая специфично связывается с ампликоном.

ТАБЛИЦА 1: Примерные последовательности нуклеиновых кислот праймеров и зонда

Название гена Референ. послед. NCBI примерного белка Номер доступа примерного белка Смысловой праймер Антисмысловой праймер Последовательность зонда PDE4D7 NM_001165899.1 (SEQ ID NO:19) NP_001159371.1 (SEQ ID NO:20) GAACATTCAACGACCAACCA (SEQ ID NO:21) TGCCATTGTCCACATCAAAA (SEQ ID NO:22) CTGCCGCTGATTGCTATCACTTCTGCA (SEQ ID NO:23) CGCTGATTGCTATCACTTCTGC (SEQ ID NO:24) GTCGTTGACTGTGGACAAAATTTG (SEQ ID NO:25) TTCCCTTGGATCCCATGACCAGCCCATAAGGGAA (SEQ ID NO:26) DHX9 NM_00135
7.4 (SEQ ID NO:74) NP_00134 8.2 (SEQ ID NO:75) Должен быть сконструирован индивидуально Должен быть сконструирован индивидуально Должен быть сконструирован индивидуально

HPRT1 NM_00019
4.2 (SEQ ID NO:34) NP_000185.1 (SEQ ID NO:35) GAGGATTTGGAAAGGGTGTTTATT
(SEQ ID NO:36) ACAGAGGGCTACAATGTGATG
(SEQ ID NO:37) ACGTCTTGCTCGAGATGTGATGAAGG
(SEQ ID NO:38) TUBA1B NM_00608
2.2 (SEQ ID NO:39) NP_006073.2 (SEQ ID NO:40) TGACTCCTTCAACACCTTCTTC (SEQ ID NO:41) TGCCAGTGCGAACTTCAT (SEQ ID NO:42) CCGGGCTGTGTTTGTAGACTTGGA (SEQ ID NO:43) PUM1 NM_001020658.1 (SEQ ID NO:44); NM_01467
6.2 (SEQ ID NO:45) NP_001018494.1 (SEQ ID NO:46); NP_05549
1.1 (SEQ ID NO:47) GCCAGCTTGTCTTCAATGAAAT (SEQ ID NO:48) CAAAGCCAGCTTCTGTTCAAG (SEQ ID NO:49) ATCCACCATGAGTTGGTAGGCAGC (SEQ ID NO:50) TBP NM_00319
4.4 (SEQ ID NO:51) NP_00318
5.1 (SEQ ID NO:52) GCCAAGAAGAAAGTGAACATCAT
(SEQ ID NO:53) ATAGGGATTCCGGGAGTCAT (SEQ ID NO:54) TCAGAACAACAGCCTGCCACCTTA (SEQ ID NO:55) ACTB NM_00110
1.3 SEQ ID NO:56) NP_00109
2.1 (SEQ ID NO:57) CCAACCGCGAGAAGATGA (SEQ ID NO:58) CCAGAGGCGTACAGGGATAG (SEQ ID NO:59) CCATGTACGTTGCTATCCAGGCT (SEQ ID NO:60) RPLP0 NM_00100
2.3 (SEQ ID NO:61) NP_44450
5.1/NP_000993.1 (SEQ ID NO:62/63) TAAACCCTGCGTGGCAAT (SEQ ID NO:64) ACATTTCGGATAATCATCCAATAGTTG (SEQ ID NO:65) AAGTAGTTGGACTTCCAGGTCGCC (SEQ ID NO:66) ALAS-1 NM_00068
8.5/NM_199166.2 (SEQ ID NO:67/68) NP_00067
9.1/NP_954635.1 (SEQ ID NO:69/70) AGCCACATCATCCCTGT SEQ ID NO:71) CGTAGATGTTATGTCTGCTCAT (SEQ ID NO:72) TTTAGCAGCATCTGCAACCCGC (SEQ ID NO:73)

Вместо использования RT-qPCR профили экспрессии генов для PDE4D7 и/или DHX9 на этапах S104 и S110 могут быть определены в других вариантах реализации с помощью других способов, например, путем выполнения секвенирования РНК следующего поколения (NGS RNAseq) в соответствии со стандартными методами (Illumina, Inc.). В этом случае описанные преобразования в заранее определенный диапазон значений также могут быть выполнены на профиле (ях) экспрессии гена (ов), предоставленном (ых) NGS RNAseq.

Чтобы исследовать прогностическую мощность PDE4D7 и DHX9 в предоперационной оценке риска пациента, изучали корреляцию с рецидивом заболевания.

Комбинированная модель, основанная на профилях экспрессии генов PDE4D7 и DHX9, была разработана в хирургической когорте, и указанная модель была проверена для различных проспективных клинических исходов. Результаты показывают, что комбинация профилей экспрессии генов как для PDE4D7, так и для DHX9 в улучшенной предоперационной прогностической оценке риска может обеспечить улучшение стратификации пациентов для оптимизации решений о первичном лечении.

ПРИМЕРЫ

Когорта пациентов и образцы

Применяли когорту пациентов с радикальной простатэктомией (RP), демографические характеристики которых показаны в ТАБЛИЦЕ 2. Для когорты пациентов с RP небольшой щипковый биоптат ткани (приблизительно 1 миллиметр на 2 миллиметра) собирали из репрезентативной области опухоли из удаленной хирургическим путем предстательной железы у 575 пациентов, которые были последовательно прооперированы в период с 2000 по 2004 год в одном крупном клиническом центре в Германии.

ТАБЛИЦА 2: Демографические характеристики когорты пациентов с радикальной простатэктомией (RP)

Операция: 2000-2004 Параметр Когорта RP (#575) Демографические и клинические характеристики
Диапазон (медиана) Возраст (при RP) 41,3-79,2 (62,7) Предоперационный ПСА 0,18-120,0 (7,1) Процентная доля опухоли при биопсии 0,2-80,0 (10,3) Объем предстательной железы 9-244 (42) Плотность ПСА 0,01-24,0 (0,18) Категория риска по CAPRA-S
Кол-во пациентов
(процентная доля) Низкий риск (CAPRA-S 0-2) 275 (47,8%) Промежуточный риск (CAPRA-S 3-5) 220 (38,3%) Высокий риск (CAPRA-S >5) 80 (13,9%) Послеоперационная патология
Кол-во пациентов
(процентная доля) Патология по шкале Глисона 3 + 3 (GG1) 190 (33%) Патология по шкале Глисона 3 + 4 (GG2) 288 (50,1%) Патология по шкале Глисона 4 + 3 (GG3) 73 (12,7%) Патология по шкале Глисона > = 4 + 4 (≥GG4) 24 (4,2%) pT2 331 (57,6%) pT3 244 (42,4%)

pT4 0 (0%) Положительные хирургические поля 211 (36,7%) Проникновение за пределы капсулы(= T3a) 151 (26,3%) Положительная инвазия семенных пузырьков 95 (16,5%) Положительная инвазия лимфатических узлов 20 (3,5%) Наблюдение
Месяцы Среднее 104,3 Медиана IQR 120 Исход
Кол-во явлений/
общее количество пациентов
(процентная доля) <5 лет BCR 184/512 (35,9%) <10 лет BCR 228/428 (53,3%) <5 лет CR 49/503 (9,7%) <10 лет CR 64/356 (18,0%) Терапия спасения
Кол-во явлений/
общее количество пациентов
(процентная доля) <5 лет SRT 141/506 (27,9%) <10 лет SRT 178/405 (44,0%) <5 лет SADT 79/498 (15,9%) <10 лет SADT 118/370 (31,9%) Смертность
Кол-во явлений/
общее количество пациентов
(процентная доля) <5 лет PCSS 14/483 (2,9%) <10 лет PCSS 26/321 (8,1%) <5 лет OS 27/496 (5,4%) <10 лет OS 54/349 (15,5%)

Для возраста пациента, предоперационного ПСА, процентной доли опухоли при биопсии, объема предстательной железы и плотности ПСА показаны минимальные и максимальные значения в когорте, в то время как медианные значения указаны в скобках. Для категорий риска по CAPRA-S показано количество пациентов и процентная доля в группе риска. Послеоперационная патология представлена оценками патологии по шкале Глисона и группами, классифицированными по шкале Глисона, стадиями патологии, статусом хирургического края после простатэктомии, статусом опухолевой инвазии семенных пузырьков и тазовых лимфатических узлов (по количеству и процентной доле пациентов). В этом отношении следует отметить, что проникновение за пределы капсулы не было представлено в качестве основного параметра, а было получено на основании стадии патологии pT3a. Наблюдение демонстрирует средний и медианный периоды наблюдения в месяцах после операции для всех пациентов. Категория исхода иллюстрирует совокупные данные по биохимическому рецидиву (BCR) в течение 5 и 10 лет и клиническому рецидиву до образования метастазов (CR) после первичного хирургического лечения. В категории лечения перечисляются совокупные данные по началу спасательной лучевой терапии (SRT) или спасательной терапии путем истощения андрогенов (SADT) в течение 5 и 10 лет после операции. Смертность показана как специфическая выживаемость при раке предстательной железы (PCSS), а также общая выживаемость (OS). Для всех исходов показано количество мужчин, перенесших исход, на общее количество мужчин с соответствующими 5- или 10-летними периодами наблюдения, при этом процентная доля явлений указана в скобках.

Лабораторные методы

Все используемые лабораторные методы, включая олигонуклеотидные праймеры и зонды для RT-qPCR (количественной ПЦР в режиме реального времени), экстракция РНК и контроль качества, а также процедуры включения/исключения образцов из статистического анализа были аналогичны тем, которые описаны ранее в Böttcher R. et al. или, в случае DHX9, были основаны на секвенировании РНК следующего поколения (NGS RNAseq) в соответствии со стандартными методами (Illumina, Inc.). Праймеры и зонды, использованные для RT-qPCR, для измерения интересующих генов, а также референсных генов, также приведены в ТАБЛИЦЕ 1. В случае NGS RNAseq полученные файлы FastQ сопоставляли с человеческим геномом и обрабатывали в соответствии со стандартными методами. Для каждого гена получали значение экспрессии гена в виде TPM (транскрипт на миллион тыс.п.о.; см. http://www.rna-seqblog.com/rpkm-fpkm-and-tpm-clearly-explained (получено 7 октября 2018 г.).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Моделирование экспрессии PDE4D7 и DHX9 с использованием логистической регрессии

Значения экспрессии для PDE4D7 и DHX9 использовали при моделировании с использованием логистической регрессии для создания комбинированной модели. Как показано в ТАБЛИЦЕ 1 ниже, в качестве зависимой переменной приняли биохимический рецидив (BCR) в течение 5 лет после операции по поводу рака предстательной железы в подкогорте из 481 пациента (169 явлений; 35,14%) когорты пациентов с RP с полными 5-летними историями исходов. Функцию регрессии logit(p) преобразовали в p=1/(1+e^(-logit(p)), чтобы рассчитать вероятность p, с которой отдельный пациент испытает биохимический рецидив в течение 5 лет после операции. В ТАБЛИЦАХ 2-6 показаны результаты моделирования с использованием логистической регрессии для комбинирования значений экспрессии PDE4D7 и DHX9. В ТАБЛИЦЕ 1 описаны входные данные для моделирования с использованием логистической регрессии в отношении размера когорты (#481) и количества положительных случаев с биохимическим рецидивом (BCR) в течение 5 лет и отрицательных случаев без BCR в течение 5 лет. В ТАБЛИЦЕ 2 представлена информация об аппроксимации модели, а в ТАБЛИЦЕ 3 представлены коэффициенты (или веса) регрессионной модели с соответствующими статистическими данными. В ТАБЛИЦЕ 4 дан обзор отношений шансов для PDE4D7 и DHX9, а в ТАБЛИЦАХ 5 и 6 представлены данные классификационной таблицы и анализа ROC-кривой для регрессионной модели «PDE4D7 и DHX9».

ТАБЛИЦА 1: Входные данные моделирования с использованием логистической регрессии.

Зависимая переменная Y Биохимический рецидив (BCR) в течение 5 лет Метод Ввод Размер выборки 481 Положительные случаи^а 169 (35,14%) Отрицательные случаи^b 312 (64,86%)

^a BCR в течение 5 лет = 1

^b BCR в течение 5 лет = 0

ТАБЛИЦА 2: Общая аппроксимация модели.

Нулевая модель - 2 Log Правдоподобие 623,645 Полная модель - 2 Log Правдоподобие 557,901 Хи-квадрат 65,744 DF 2 Уровень значимости P<0,0001 R² по Коксу и Снеллу 0,1278 R²поНагелькерке 0,1758

ТАБЛИЦА 3: Коэффициенты и стандартные ошибки.

Переменная Коэффициент Стандартная ошибка Вальд (Wald) P PDE4D7 -0,98799 0,17158 33,1574 < 0,0001 DHX9 -0,75891 0,17095 19,7082 < 0,0001 Константа 7,96032 1,38277 33,1409 < 0,0001

ТАБЛИЦА 4: Отношения шансов и 95% доверительные интервалы.

Переменная Отношение шансов 95% ДИ PDE4D7 0,3723 0,2660-0,5212 DHX9 0,4682 0,3349-0,6545

ТАБЛИЦА 5: Классификационная таблица (значение отсечения p = 0,5).

Фактическая группа Прогнозируемая группа Корректный процент 0 1 Y = 0 277 35 88,78% Y = 1 116 53 31,36% Процентная доля корректно классифицированных случаев 68,61%

ТАБЛИЦА 6: Анализ ROC-кривой.

Площадь под ROC-кривой (AUC) 0,713 Стандартная ошибка 0,0241 95% доверительный интервал 0,670-0,753

Подтверждение комбинированной модели для различных проспективных клинических исходов

Комбинированную модель тестировали для прогнозирования различных клинически значимых конечных точек после операции, таких как биохимический рецидив (BCR), клинический рецидив (прогрессирование до локальных и/или отдаленных метастазов) (CR) и специфическая смерть от рака предстательной железы. Прогностическую мощность комбинированной модели сравнивали с прогностической мощностью только PDE4D7 или DHX9 для тех же различных клинически значимых конечных точек.

На Фиг. 2 показаны результаты анализа ROC-кривой биохимического рецидива (BCR) в течение 5 лет после операции по поводу рака предстательной железы для подкогорты (#481) пациентов из когорты пациентов с RP с полным 5-летним наблюдением (см. также ТАБЛИЦУ 7). Как подробно описано в ТАБЛИЦЕ 8, рассчитанные 5-летние AUC (площадь под кривой) составили 0,659 для PDE4D7 по отдельности, 0,624 для DHX9 по отдельности и 0,713 для комбинированной модели (обозначена как «PDE4D7 и DHX9» на Фиг. 2 и в ТАБЛИЦЕ 8). Стандартная ошибка составила 0,0254 (PDE4D7), 0,0280 (DHX9) и 0,0242 (PDE4D7 и DHX9), соответственно, 95% доверительный интервал составил от 0,615 до 0,702 (PDE4D7), от 0,579 до 0,667 (DHX9) и от 0,670 до 0,753 (PDE4D7 и DHX9), соответственно. В ТАБЛИЦЕ 9 показано попарное сравнение ROC-кривых. Как можно видеть, согласно тестам AUC PDE4D7 по отдельности и комбинированной модели PDE4D7 и DHX9 значительно различаются (p = 0,0022). То же самое справедливо даже в несколько более значительной степени для AUC DHX9 по отдельности и комбинированной модели PDE4D7 и DHX9 (p = 0,0008).

ТАБЛИЦА 7: Подкогорта.

Переменная 1 PDE4D7 Переменная 2 DHX9 Переменная 3 PDE4D7 и DHX9 Классификационная переменная BCR в течение 5 лет Размер выборки 481 Положительные случаи^а 169 (35,14%) Отрицательные случаи^b 312 (64,86%)

^a BCR в течение 5 лет = 1

^b BCR в течение 5 лет = 0

ТАБЛИЦА 8: Анализ ROC-кривой.

Переменная AUC Стандартная ошибка^с 95% ДИ^d PDE4D7 0,659 0,0254 0,615-0,702 DHX9 0,624 0,0280 0,579-0,667 PDE4D7 и DHX9 0,713 0,0242 0,670-0,753

^c DeLong E.R. et al., «Comparing the areas under two or more correlated receiver operating characteristic curves: a nonparameteric approach», Biometrics, Vol. 44, No. 3, pages 837-845, 1988.

^b Бином

иальный точный ДИ

ТАБЛИЦА 9: Попарное сравнение ROC-кривых.

PDE4D7 ~ DHX9 Различие между площадями 0,0352 Стандартная ошибка^с 0,0392 95% доверительный интервал -0,0416-0,112 Z-оценка 0,899 Уровень значимости p = 0,3687 PDE4D7 ~ PDE4D7 и DHX9 Различие между площадями 0,0538 Стандартная ошибка^с 0,0176 95% доверительный интервал 0,0193-0,0883 Z-оценка 3,058 Уровень значимости p = 0,0022 DHX9 ~ PDE4D7 и DHX9 Различие между площадями 0,0890 Стандартная ошибка^с 0,0265 95% доверительный интервал 0,0372-0,141 Z-оценка 3,365 Уровень значимости p = 0,0008

^cDeLong E.R. et al.

На Фиг. 3 показаны результаты анализа ROC-кривой клинического рецидива (CR) в течение 10 лет после операции по поводу рака предстательной железы для подкогорты (#335) пациентов из когорты пациентов с RP с полным 10-летним наблюдением (см. также ТАБЛИЦУ 10). Как подробно описано в ТАБЛИЦЕ 11, рассчитанные 10-летние AUC (площадь под кривой) составили 0,666 для PDE4D7 по отдельности, 0,691 для DHX9 по отдельности и 0,748 для комбинированной модели (обозначена как «PDE4D7 и DHX9» на Фиг. 3 и в ТАБЛИЦЕ 11). Стандартная ошибка составила 0,0364 (PDE4D7), 0,0384 (DHX9) и 0,0314 (PDE4D7 и DHX9), соответственно, 95% доверительный интервал составил от 0,613 до 0,717 (PDE4D7), от 0,639 до 0,740 (DHX9) и от 0,698 до 0,794 (PDE4D7 и DHX9), соответственно. В ТАБЛИЦЕ 12 показано попарное сравнение ROC-кривых. Как можно видеть, согласно тестам AUC PDE4D7 по отдельности и комбинированной модели PDE4D7 и DHX9 значительно различаются (p = 0,0039).

ТАБЛИЦА 10: Подкогорта.

Переменная 1 PDE4D7 Переменная 2 DHX9 Переменная 3 PDE4D7 и DHX9 Классификационная переменная Клинический рецидив (CR) в течение 10 лет Размер выборки 335 Положительные случаи^а 61 (18,21%) Отрицательные случаи^b 274 (81,79%)

^a CR в течение 10 лет = 1

^b CR в течение 10 лет = 0

ТАБЛИЦА 11: Анализ ROC-кривой.

Переменная AUC Стандартная ошибка^с 95% ДИ^d PDE4D7 0,666 0,0364 0,613-0,717 DHX9 0,691 0,0384 0,639-0,740 PDE4D7 и DHX9 0,748 0,0314 0,698-0,794

^cDeLong E.R. et al.

^dБиномиальный точный ДИ

ТАБЛИЦА 12: Попарное сравнение ROC-кривых.

PDE4D7 ~ DHX9 Различие между площадями 0,0249 Стандартная ошибка^с 0,0573 95% доверительный интервал -0,0873-0,137 Z-оценка 0,435 Уровень значимости p = 0,6635 PDE4D7 ~ PDE4D7 и DHX9 Различие между площадями 0,0816 Стандартная ошибка^с 0,0283 95% доверительный интервал 0,0262-0,137 Z-оценка 2,888 Уровень значимости p = 0,0039 DHX9 ~ PDE4D7 и DHX9 Различие между площадями 0,0567 Стандартная ошибка^с 0,0361 95% доверительный интервал -0,0141-0,128 Z-оценка 1,569 Уровень значимости p = 0,1166

^cDeLong E.R. et al.

На Фиг. 4 показаны результаты анализа ROC-кривой специфической смерти от рака предстательной железы в течение 10 лет после операции по поводу рака предстательной железы для подкогорты (#302) пациентов из когорты пациентов с RP с полным 10-летним наблюдением (см. также ТАБЛИЦУ 13). Как подробно описано в ТАБЛИЦЕ 14, рассчитанные 10-летние AUC (площадь под кривой) составили 0,729 для PDE4D7 по отдельности, 0,622 для DHX9 по отдельности и 0,754 для комбинированной модели (обозначена как «PDE4D7 и DHX9» на Фиг. 4 и в ТАБЛИЦЕ 14). Стандартная ошибка составила 0,0588 (PDE4D7), 0,0593 (DHX9) и 0,0481 (PDE4D7 и DHX9), соответственно, 95% доверительный интервал составил от 0,676 до 0,779 (PDE4D7), от 0,564 до 0,676 (DHX9) и от 0,702 до 0,802 (PDE4D7 и DHX9), соответственно. В ТАБЛИЦЕ 15 показано попарное сравнение ROC-кривых. Как можно видеть, согласно тестам AUC DHX9 по отдельности и комбинированной модели PDE4D7 и DHX9 значительно различаются (p = 0,0403).

ТАБЛИЦА 13: Подкогорта.

Переменная 1 PDE4D7 Переменная 2 DHX9 Переменная 3 PDE4D7 и DHX9 Классификационная переменная Специфическая смерть от рака предстательной железы в течение 10 лет Размер выборки 302 Положительные случаи^а 25 (8,28%) Отрицательные случаи^b 277 (91,72%)

^aPCSS в течение 10 лет = 1

^bPCSS в течение 10 лет = 0

ТАБЛИЦА 14: Анализ ROC-кривой.

Переменная AUC Стандартная ошибка^с 95% ДИ^d PDE4D7 0,729 0,0588 0,676-0,779 DHX9 0,622 0,0593 0,564-0,676 PDE4D7 и DHX9 0,754 0,0481 0,702-0,802

^cDeLong E.R. et al.

^dБиномиальный точный ДИ

ТАБЛИЦА 15: Попарное сравнение ROC-кривых.

PDE4D7 ~ DHX9 Различие между площадями 0,108 Стандартная ошибка^с 0,0909 95% доверительный интервал -0,0702-0,286 Z-оценка 1,188 Уровень значимости p = 0,2349 PDE4D7 ~ PDE4D7 и DHX9 Различие между площадями 0,0249 Стандартная ошибка^с 0,0356 95% доверительный интервал -0,0448-0,0946 Z-оценка 0,700 Уровень значимости p = 0,4836 DHX9 ~ PDE4D7 и DHX9 Различие между площадями 0,133 Стандартная ошибка^с 0,0648 95% доверительный интервал 0,00585-0,260 Z-оценка 2,050 Уровень значимости p = 0,0403

^cDeLong E.R. et al.

Представленные результаты демонстрируют, что применение комбинированной модели логистической регрессии PDE4D7 со значениями экспрессии гена DHX9 для прогнозирования биохимического рецидива в течение 5 лет после операции улучшает площадь под кривой (AUC) в ROC-анализе на величину от 2,5% (для специфической смерти от рака предстательной железы в качестве конечной точки) до 8% (для клинического рецидива в качестве конечной точки) по сравнению с применением PDE4D7 по отдельности в качестве прогностического маркера.

Независимое тестирование комбинированной модели для прогнозирования метастазов после операции по поводу рака предстательной железы в независимом наборе данных

На Фиг. 5 показано независимое тестирование комбинированной модели (обозначенной как «PDE4D7 и DHX9» в ТАБЛИЦЕ 16) для прогнозирования метастазов после операции по поводу рака предстательной железы в независимом наборе данных (данные из Taylor B.S. et al., «Integrative genomic profiling of human prostate cancer», Cancer Cell, Vol. 18, No. 1, pages 11-22, 2010). Как подробно описано в ТАБЛИЦЕ 16, рассчитанная AUC (площадь под кривой) класса метастазов составила 0,736 для PDE4D7 и DHX9. Стандартная ошибка составила 0,0777, 95% доверительный интервал составил от 0,651 до 0,809.

ТАБЛИЦА 16: Независимый набор данных.

Переменная PDE4D7 и DHX9 Классификационная переменная Класс метастазов Размер выборки 129 Положительные случаи^а 8 (6,20%) Отрицательные случаи^b 121 (93,8%) Распространенность заболевания (%) Неизвестно

^aКласс метастазов = 1

^bКласс метастазов = 0

ТАБЛИЦА 17: Анализ ROC-кривой.

AUC 0,736 Стандартная ошибка^с 0,0777 95% доверительный интервал^d 0,651-0,809 Z-оценка 3,029 Уровень значимости p = 0,024

^cDeLong E.R. et al.

^dБиномиальный точный ДИ

ТАБЛИЦА 18: Индекс Юдена.

Индекс Юдена J 0,4194 Ассоциированный критерий > -1,16 Чувствительность 75,00 Специфичность 66,94

Моделирование с использованием логистической регрессии комбинированной модели PDE4D7 и DHX9 с послеоперационной клинической оценкой риска CAPRA-S для прогнозирования послеоперационных метастазов

Комбинированную модель PDE4D7 и DHX9 и послеоперационную клиническую оценку риска CAPRA-S использовали в дополнительном моделировании с использованием логистической регрессии для создания дополнительной комбинированной модели (обозначенной ниже как «PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S»). Как показано в ТАБЛИЦЕ 19 ниже, в качестве зависимой переменной приняли класс метастазов после операции по поводу рака предстательной железы в независимых данных из Tayler B.S. et al. (см. выше). Функцию регрессии logit(p) преобразовали в p=1/(1+e^(-logit(p)), чтобы рассчитать вероятность p, с которой у отдельного пациента после операции возникнут метастазы. В ТАБЛИЦАХ 20-26 показаны результаты моделирования с использованием логистической регрессии для комбинирования PDE4D7 и DHX9 и оценки CAPRA-S. В ТАБЛИЦЕ 19 описаны входные данные для моделирования с использованием логистической регрессии в отношении размера выборки (#129) и количества положительных случаев с метастазами и отрицательных случаев без метастазов. В ТАБЛИЦЕ 20 представлена информация об аппроксимации модели, а в ТАБЛИЦЕ 21 описаны коэффициенты (или веса) регрессионной модели с соответствующими статистическими данными. В ТАБЛИЦЕ 22 дан обзор отношений шансов для PDE4D7 и DHX9 и оценка CAPRA-S, в то время как в ТАБЛИЦАХ 23 и 24 показаны результаты калибровочного тестирования регрессионной модели (в соответствии с тестом Хосмера и Лемешоу). Наконец, в ТАБЛИЦАХ 25 и 26 представлены данные классификационной таблицы и анализа ROC-кривой для регрессионной модели «PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S».

ТАБЛИЦА 19: Входные данные моделирования с использованием логистической регрессии.

Зависимая переменная Y Класс метастазов Метод Ввод Размер выборки 129 Положительные случаи^а 8 (6,20%) Отрицательные случаи^b 121 (93,8%)

^aКласс метастазов = 1

^bКласс метастазов = 0

ТАБЛИЦА 20: Общая аппроксимация модели.

Нулевая модель - 2 Log Правдоподобие 59,979 Полная модель - 2 Log Правдоподобие 49,989 Хи-квадрат 9,990 DF 2 Уровень значимости p = 0,0068 R² по Коксу и Снеллу 0,0745 R²поНагелькерке 0,2004

ТАБЛИЦА 21: Коэффициенты и стандартные ошибки.

Переменная Коэффициент Стандартная ошибка Вальд P PDE4D7 и DHX9 0,77252 0,42392 3,3208 0,0684 Оценка CAPRA-S 0,25375 0,12488 4,1290 0,0422 Константа -2,80880 0,87165 10,3837 0,0013

ТАБЛИЦА 22: Отношения шансов и 95% доверительные интервалы.

Переменная Отношение шансов 95% ДИ PDE4D7 и DHX9 2,1652 0,9433-4,9699 Оценка CAPRA-S 1,2888 1,0090-1,6463

ТАБЛИЦА 23: Тест Хосмера и Лемешоу.

Хи-квадрат 2,9654 DF 8 Уровень значимости p = 0,9365

ТАБЛИЦА 24: Таблица сопряженности для теста Хосмера и Лемешоу.

Группа Y = 0 Y = 1 Всего Наблюдаемое Ожидаемое Наблюдаемое Ожидаемое 1 13 12,928 0 0,072 13 2 13 12,863 0 0,137 13 3 13 12,776 0 0,224 13 4 13 12,696 0 0,304 13 5 12 12,615 1 0,385 13 6 13 12,499 0 0,501 13 7 12 12,292 1 0,708 13 8 12 12,040 1 0,960 13 9 12 11,433 1 1,567 13 10 8 8,857 4 3,143 12

ТАБЛИЦА 25: Классификационная таблица (значение отсечения p = 0,5).

Фактическая группа Прогнозируемая группа Корректный процент 0 1 Y = 0 120 1 99,17% Y = 1 8 0 0,00% Процентная доля корректно классифицированных случаев 93,02%

ТАБЛИЦА 26: Анализ ROC-кривой.

AUC 0,713 Стандартная ошибка^с 0,0241 95% доверительный интервал^d 0,670-0,753

На Фиг. 6 показан ROC-анализ комбинированных моделей PDE4D7 и DHX9, а также PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S для прогнозирования метастазов после операции по поводу рака предстательной железы (данные из Taylor B.S. et al., “Integrative genomic profiling of human prostate cancer”, Cancer Cell, Vol. 18, No. 1, pages 11-22, 2010). Как подробно описано в ТАБЛИЦЕ 28, рассчитанные AUC (площадь под кривой) класса метастазов составили 0,736 для PDE4D7 и DHX9 по отдельности и 0,840 для PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S. Стандартная ошибка составила 0,0777 (PDE4D7 и DHX9) и 0,0636 (PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S), соответственно, 95% доверительный интервал составил от 0,651 до 0,809 (PDE4D7 и DHX9) и от 0,765 до 0,899 (PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S), соответственно. В ТАБЛИЦЕ 29 показано попарное сравнение ROC-кривых. Как можно видеть, согласно тестам AUC PDE4D7 и DHX9 по отдельности и комбинированной модели PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S значительно различались (p = 0,0323), при этом различие в AUC составило 0,104 (или 10,4%).

ТАБЛИЦА 27: Независимый набор данных.

Переменная 1 PDE4D7 и DHX9 Переменная 2 PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S Классификационная переменная Класс метастазов Размер выборки 129 Положительные случаи^а 8 (6,20%) Отрицательные случаи^b 121 (93,8%) Распространенность заболевания (%) Неизвестно

^aКласс метастазов = 1

^bКласс метастазов = 0

ТАБЛИЦА 28: Анализ ROC-кривой.

Переменная AUC Стандартная ошибка^с 95% ДИ^d PDE4D7 и DHX9 0,736 0,0777 0,651-0,809 PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S 0,840 0,0636 0,765-0,899

^cDeLong E.R. et al.

^dБиномиальный точный ДИ

ТАБЛИЦА 29: Попарное сравнение ROC-кривых.

PDE4D7 и DHX9 ~ PDE4D7 и DHX9 и CAPRA-S Различие между площадями 0,104 Стандартная ошибка^с 0,0487 95% доверительный интервал 0,00881-0,200 Z-оценка 2,141 Уровень значимости p = 0,0323

^cDeLong E.R. et al.

Обсуждение

Решения о лечении при первичном локализованном раке предстательной железы в значительной степени зависят от комбинации риска будущего прогрессирования заболевания и ожидаемой продолжительности жизни. Приведенные данные иллюстрируют, что применение комбинации PDE4D7 и DHX9 в предоперационной оценке риска повышает эффективность по сравнению с применением только PDE4D7 в качестве прогностического маркера. Таким образом, DHX9 может повышать прогностическую значимость PDE4D7 в клинических прогностических моделях для исходов, специфических для заболевания, таких как послеоперационное прогрессирование до биохимического рецидива или клинический рецидив до образования метастазов, а также для прогнозирования специфической выживаемости при раке, чтобы поддержать принятие решения о лечении.

Другие вариации раскрытых вариантов реализации могут быть поняты и осуществлены специалистами в данной области техники при практическом применении заявленного изобретения, на основании изучения чертежей, раскрытия и прилагаемой формулы изобретения.

В формуле изобретения слово «содержащий» не исключает другие элементы или этапы, а неопределенный артикль («а» или «an» в исходном тексте на английском языке) не исключает множественность.

Один или более этапов способа, проиллюстрированного на Фиг. 1, могут быть реализованы в компьютерном программном продукте, который может быть выполнен на компьютере. Компьютерный программный продукт может содержать энергонезависимый машиночитаемый носитель записи, на котором записана (хранится) управляющая программа, такой как диск, жесткий диск и т.п. Обычные формы энергонезависимых машиночитаемых носителей включают, например, дискеты, гибкие диски, жесткие диски, магнитную ленту или любой другой магнитный носитель для хранения данных, CD-ROM, DVD или любой другой оптический носитель, RAM, PROM, EPROM, FLASH-EPROM или другой чип или картридж памяти или любой другой энергонезависимый носитель, который компьютер может читать и использовать.

В качестве альтернативы, один или более этапов способа могут быть реализованы в энергозависимых носителях, таких как передаваемая несущая волна, в которой управляющая программа реализована в виде сигнала данных с использованием среды передачи, такой как акустические или световые волны, такие как те, которые генерируются во время радиоволновых и инфракрасных передач данных и т.п.

Примерный способ может быть реализован на одном или более компьютерах общего назначения, компьютере (ах) специального назначения, запрограммированном микропроцессоре или микроконтроллере и периферийных элементах интегральной схемы, ASIC или другой интегральной схеме, цифровом сигнальном процессоре, проводной электронной или логической схеме, такой как схема с дискретными элементами, программируемом логическом устройстве, таком как PLD, PLA, FPGA, ЦП графической карты (GPU) или PAL, или т.п. В целом любое устройство, способное реализовать конечный автомат, который, в свою очередь, способен реализовать блок-схему, показанную на Фиг. 1, может применяться для реализации одного или более этапов способа стратификации риска для выбора терапии у пациента, страдающего раком предстательной железы, как проиллюстрировано. Будет понятно, что, несмотря на то, что все этапы способа могут быть реализованы на компьютере, в некоторых вариантах реализации один или более этапов могут быть выполнены, по меньшей мере частично, вручную.

Инструкции компьютерной программы также могут быть загружены в компьютер, другой программируемый аппарат обработки данных или другие устройства, чтобы вызвать выполнение ряда операционных этапов на компьютере, другом программируемом аппарате или других устройствах для получения способа, реализуемого компьютером, так, что инструкции, которые выполняются на компьютере или другом программируемом аппарате, обеспечивают способы для реализации функций/действий, указанных в настоящей заявке.

Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано выше на основании профиля экспрессии гена для PDE4D7, который может включать уровень экспрессии (например, значение) для PDE4D7, который может быть нормирован с использованием значения (значений) для каждого из набора референсных генов, профиль экспрессии гена может дополнительно включать информацию об экспрессии других вариантов PDE4D. Например, другой (другие) вариант (ы) PDE4D может (могут) включать один или более из PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D8 и PDE4D9. Таким образом, диагностический набор может дополнительно содержать по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения профиля экспрессии гена для каждого из других вариантов PDE4D в биологическом образце, полученном от субъекта, страдающего раком предстательной железы. Однако предпочтительно применяется только профиль экспрессии гена для PDE4D7, в частности, уровень экспрессии (например, значение) для PDE4D7, который может быть нормирован с использованием значения (значений) для каждого из набора референсных генов.

Термин «фосфодиэстераза 4D1» или «PDE4D1» относится к варианту сплайсинга 1 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D1, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001197222.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:1, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D1, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:2, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001184151.1, кодирующей полипептид PDE4D1. Термин «фосфодиэстераза 4D1» или «PDE4D1» также относится к ампликону, который может быть получен с помощью пары праймеров PDE1D1D2_forward (SEQ ID NO:3) и PDE1D1D2_reverse (SEQ ID NO:4) и может быть обнаружен с помощью зонда SEQ ID NO:5.

Термин «фосфодиэстераза 4D2» или «PDE4D2» относится к варианту сплайсинга 2 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D2, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001197221.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:6, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D2, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:7, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001184150.1, кодирующей полипептид PDE4D2.

Термин «фосфодиэстераза 4D3» или «PDE4D3» относится к варианту сплайсинга 3 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D3, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_006203.4, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:8, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D3, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:9, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_006194.2, кодирующей полипептид PDE4D3.

Термин «фосфодиэстераза 4D4» или «PDE4D4» относится к варианту сплайсинга 4 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D4, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001104631.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:10, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D4, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:11, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001098101.1, кодирующей полипептид PDE4D4.

Термин «фосфодиэстераза 4D5» или «PDE4D5» относится к варианту сплайсинга 5 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D5, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001197218.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:12, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D5, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:13, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001184147.1, кодирующей полипептид PDE4D5. Термин «фосфодиэстераза 4D5» или «PDE4D5» также относится к ампликону, который может быть получен с помощью пары праймеров PDE4D5_forward (SEQ ID NO:14) и PDE4D5_reverse (SEQ ID NO:15) и может быть обнаружен с помощью зонда SEQ ID NO:16.

Термин «фосфодиэстераза 4D6» или «PDE4D6» относится к варианту сплайсинга 6 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D6, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001197223.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:17, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D6, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:18, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001184152.1, кодирующей полипептид PDE4D6.

Термин «фосфодиэстераза 4D8» или «PDE4D8» относится к варианту сплайсинга 8 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D8, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001197219.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:27, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D8, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:28, которая соответствует белковой последовательности, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001184148.1, кодирующей полипептид PDE4D8.

Термин «фосфодиэстераза 4D9» или «PDE4D9» относится к варианту сплайсинга 9 человеческой фосфодиэстеразы PDE4D, то есть к гену человеческой фосфодиэстеразы PDE4D9, например, к последовательности, определенной в референсной последовательности NCBI: NM_001197220.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, указанной в SEQ ID NO:29, которая соответствует последовательности указанной выше референсной последовательности NCBI транскрипта PDE4D9, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, указанной в SEQ ID NO:30, которая соответствует последовательности белка, определенной в референсной последовательности белка под номером доступа NCBI NP_001184149.1, кодирующей полипептид PDE4D9. Термин «фосфодиэстераза 4D9» или «PDE4D9» также относится к ампликону, который может быть получен с помощью пары праймеров PDE4D9_forward (SEQ ID NO:31) и PDE4D9_reverse (SEQ ID NO:32) и может быть обнаружен с помощью зонда SEQ ID NO:33.

Термины «PDE4D1», «PDE4D2», «PDE4D3», «PDE4D4», «PDE4D5», «PDE4D6», «PDE4D8» и «PDE4D9» также включают нуклеотидные последовательности, показывающие высокую степень гомологии с PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D8 и PDE4D9, соответственно, например, последовательности нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:1, 6, 8, 10, 12, 17, 27 или 29, соответственно, или аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:2, 7, 9, 11, 13, 18, 28 или 30, соответственно, или последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие аминокислотные последовательности, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:2, 7, 9, 11, 13, 18, 28 или 30, или аминокислотные последовательности, кодируемые последовательностями нуклеиновой кислоты, которые по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичны последовательности, указанной в SEQ ID NO:1, 6, 8, 10, 12, 17, 27 или 29.

Любые ссылочные позиции в формуле изобретения не должны быть истолкованы как ограничивающие объем.

Настоящее изобретение относится к способу предоперационной стратификации риска у субъекта, страдающего раком предстательной железы, включающему определение профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) в биологическом образце, полученном от субъекта, определение профиля экспрессии гена для DExH-бокс-геликазы 9 (DHX9) в том же или другом биологическом образце, полученном от субъекта, и определение предоперационной прогностической оценки риска для субъекта на основании профиля экспрессии гена PDE4D7 и профиля экспрессии гена DHX9. Это может обеспечить улучшенную стратификацию субъекта в предоперационном условии, что может привести к более правильным решениям о первичном лечении. Например, предоперационная прогностическая оценка риска может позволить дать более правильные рекомендации относительно выбора активного наблюдения в сравнении с активным вмешательством, например, радикальной простатэктомией, для определенных субпопуляций пациентов, страдающих раком предстательной железы.

Прилагаемый перечень последовательностей, озаглавленный 2018PF00399_Sequence Listing_ST25, полностью включен в настоящую заявку посредством ссылки.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Koninklijke Philips N.V.

<120> ПРЕДОПЕРАЦИОННАЯ СТРАТИФИКАЦИЯ РИСКА НА ОСНОВАНИИ ЭКСПРЕССИИ PDE4D7 И DHX9

<130> 2018PF00399

<160> 75

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 7801

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

gtggtggccg cgcacccggc cgcggctgat tcattcactt caagtgccgt gcagaaggct 60

cggcaggcgg ggcgggcgtg gggccgcggc tccgggttgg ggaccgagga gatccggctg 120

tggaccagac gctcctctgc ggggcgggca cccaagcgcg ctcgccaccc cctcgccatc 180

cgctagagcc gggctcctgg actgggactc gggcccgccg cacagttgaa aagtcgcata 240

gtggtttttc cgctcgcgtc gctgtgtgaa agttggctcg ccgctctttg cacgccctcc 300

ctggaggccg acccgagacg ccaagctgga gagaccgtgc ctccccgagg ccggccgccc 360

cgcgagcaca gcctccgccc ccgttgcact gccgggctgg gcaatatgaa ggagcagccc 420

tcatgtgccg gcaccgggca tccgagcatg gcggggtatg gcaggatggc cccctttgaa 480

ctcgctagcg gacccgtgaa gcgcttgaga actgagtccc cctttccctg tctcttcgca 540

gaggaggcct accagaaact ggccagcgag accctggagg agctggactg gtgtctggac 600

cagctagaga ccctacagac caggcactcc gtcagtgaga tggcctccaa caagtttaaa 660

aggatgctta atcgggagct cacccatctc tctgaaatga gtcggtctgg aaatcaagtg 720

tcagagttta tatcaaacac attcttagat aagcaacatg aagtggaaat tccttctcca 780

actcagaagg aaaaggagaa aaagaaaaga ccaatgtctc agatcagtgg agtcaagaaa 840

ttgatgcaca gctctagtct gactaattca agtatcccaa ggtttggagt taaaactgaa 900

caagaagatg tccttgccaa ggaactagaa gatgtgaaca aatggggtct tcatgttttc 960

agaatagcag agttgtctgg taaccggccc ttgactgtta tcatgcacac catttttcag 1020

gaacgggatt tattaaaaac atttaaaatt ccagtagata ctttaattac atatcttatg 1080

actctcgaag accattacca tgctgatgtg gcctatcaca acaatatcca tgctgcagat 1140

gttgtccagt ctactcatgt gctattatct acacctgctt tggaggctgt gtttacagat 1200

ttggagattc ttgcagcaat ttttgccagt gcaatacatg atgtagatca tcctggtgtg 1260

tccaatcaat ttctgatcaa tacaaactct gaacttgcct tgatgtacaa tgattcctca 1320

gtcttagaga accatcattt ggctgtgggc tttaaattgc ttcaggaaga aaactgtgac 1380

attttccaga atttgaccaa aaaacaaaga caatctttaa ggaaaatggt cattgacatc 1440

gtacttgcaa cagatatgtc aaaacacatg aatctactgg ctgatttgaa gactatggtt 1500

gaaactaaga aagtgacaag ctctggagtt cttcttcttg ataattattc cgataggatt 1560

caggttcttc agaatatggt gcactgtgca gatctgagca acccaacaaa gcctctccag 1620

ctgtaccgcc agtggacgga ccggataatg gaggagttct tccgccaagg agaccgagag 1680

agggaacgtg gcatggagat aagccccatg tgtgacaagc acaatgcttc cgtggaaaaa 1740

tcacaggtgg gcttcataga ctatattgtt catcccctct gggagacatg ggcagacctc 1800

gtccaccctg acgcccagga tattttggac actttggagg acaatcgtga atggtaccag 1860

agcacaatcc ctcagagccc ctctcctgca cctgatgacc cagaggaggg ccggcagggt 1920

caaactgaga aattccagtt tgaactaact ttagaggaag atggtgagtc agacacggaa 1980

aaggacagtg gcagtcaagt ggaagaagac actagctgca gtgactccaa gactctttgt 2040

actcaagact cagagtctac tgaaattccc cttgatgaac aggttgaaga ggaggcagta 2100

ggggaagaag aggaaagcca gcctgaagcc tgtgtcatag atgatcgttc tcctgacacg 2160

taacagtgca aaaactttca tgcctttttt ttttttaagt agaaaaattg tttccaaagt 2220

gcatgtcaca tgccacaacc acggtcacac ctcactgtca tctgccagga cgtttgttga 2280

acaaaactga ccttgactac tcagtccagc gctcaggaat atcgtaacca gttttttcac 2340

ctccatgtca tccgagcaag gtggacatct tcacgaacag cgtttttaac aagatttcag 2400

cttggtagag ctgacaaagc agataaaatc tactccaaat tattttcaag agagtgtgac 2460

tcatcaggca gcccaaaagt ttattggact tggggtttct attccttttt atttgtttgc 2520

aatattttca gaagaaaggc attgcacaga gtgaacttaa tggacgaagc aacaaatatg 2580

tcaagaacag gacatagcac gaatctgtta ccagtaggag gaggatgagc cacagaaatt 2640

gcataatttt ctaatttcaa gtcttcctga tacatgactg aatagtgtgg ttcagtgagc 2700

tgcactgacc tctacatttt gtatgatatg taaaacagat tttttgtaga gcttactttt 2760

attattaaat gtattgaggt attatattta aaaaaaacta tgttcagaac ttcatctgcc 2820

actggttatt tttttctaag gagtaacttg caagttttca gtacaaatct gtgctacact 2880

ggataaaaat ctaatttatg aattttactt gcaccttata gttcatagca attaactgat 2940

ttgtagtgat tcattgtttg ttttatatac caatgacttc catattttaa aagagaaaaa 3000

caactttatg ttgcaggaaa ccctttttgt aagtctttat tatttacttt gcattttgtt 3060

tcactctttc cagataagca gagttgctct tcaccagtgt ttttcttcat gtgcaaagtg 3120

actatttgtt ctataatact tttatgtgtg ttatatcaaa tgtgtcttaa gcttcatgca 3180

aactcagtca tcagttcgtg ttgtctgaag caagtgggag atatataaat acccagtagc 3240

taaaatggtc agtctttttt agatgttttc ctacttagta tctcctaata acgttttgct 3300

gtgtcactag atgttcattt cacaagtgca tgtctttcta ataatccaca catttcatgc 3360

tctaataatc cacacatttc atgctcattt ttattgtttt tacagccagt tatagtaaga 3420

aaaaggtttt tccccttgtg ctgctttata atttagcgtg tgtctgaacc ttatccatgt 3480

ttgctagatg aggtcttgtc aaatatatca ctaccattgt caccggtgaa aagaaacagg 3540

tagttaagtt agggttaaca ttcatttcaa ccacgaggtt gtatatcatg actagctttt 3600

actcttggtt tacagagaaa agttaaacag ccaactaggc agtttttaag aatattaaca 3660

atatattaac aaacaccaat acaactaatc ctatttggtt ttaatgattt caccatggga 3720

ttaagaacta tatcaggaac atccctgaga aacggtttta agtgtagcaa ctactcttcc 3780

ttaatggaca gccacataac gtgtaggaag tcctttatca cttatcctcg atccataagc 3840

atatcttgca gaggggaact acttctttaa acacatggag ggaaagaaga tgatgccact 3900

ggcaccagag ggttagtact gtgatgcatc ctaaaatatt tattatattg gtaaaaattc 3960

tggttaaata aaaaattaga gatcactctt ggctgatttc agcaccagga actgtattac 4020

agttttagag attaattcct agtgtttacc tgattatagc agttggcatc atggggcatt 4080

taattctgac tttatcccca cgtcagcctt aataaagtct tctttacctt ctctatgaag 4140

actttaaagc ccaaataatc atttttcaca ttgatattca agaattgaga tagatagaag 4200

ccaaagtggg tatctgacaa gtggaaaatc aaacgtttaa gaagaattac aactctgaaa 4260

agcatttata tgtggaactt ctcaaggagc ctcctgggga ctggaaagta agtcatcagc 4320

caggcaaatg actcatgctg aagagagtcc ccatttcagt cccctgagat ctagctgatg 4380

cttagatcct ttgaaataaa aattatgtct ttataactct gatcttttac ataaagcaga 4440

agaggaatca actagttaat tgcaaggttt ctactctgtt tcctctgtaa agatcagatg 4500

gtaatctttc aaataagaaa aaaataaaga cgtatgtttg accaagtagt ttcacaagaa 4560

tatttgggaa cttgtttctt ttaattttat ttgtccctga gtgaagtcta gaaagaaagg 4620

taaagagtct agagtttatt cctctttcca aaacattctc attcctctcc tccctacact 4680

tagtatttcc cccacagagt gcctagaatc ttaataatga ataaaataaa aagcagcaat 4740

atgtcattaa caaatccaga cctgaaaggg taaagggttt ataactgcac taataaagag 4800

aggctctttt tttttcttcc agtttgttgg tttttaatgg taccgtgttg taaagatacc 4860

cactaatgga caatcaaatt gcagaaaagg ctcaatatcc aagagacagg gactaatgca 4920

ctgtacaatc tgcttatcct tgcccttctc tcttgccaaa gtgtgcttca gaaatatata 4980

ctgctttaaa aaagaataaa agaatatcct tttacaagtg gctttacatt tcctaaaatg 5040

ccataagaaa atgcaatatc tgggtactgt atggggaaaa aaatgtccaa gtttgtgtaa 5100

aaccagtgca tttcagcttg caagttactg aacacaataa tgctgtttta attttgtttt 5160

atatcagtta aaattcacaa taatgtagat agaacaaatt acagacaagg aaagaaaaaa 5220

cttgaatgaa atggatttta cagaaagctt tatgataatt tttgaatgca ttatttattt 5280

tttgtgccat gcattttttt tctcaccaaa tgaccttacc tgtaatacag tcttgtttgt 5340

ctgtttacaa ccatgtattt attgcaatgt acatactgta atgttaattg taaattatct 5400

gttcttatta aaacatcatc ccatgatggg atggtgttga tatatttgga aactcttggt 5460

gagagaatga atggtgtgta tacatactct gtacattttt cttttctcct gtaatatagt 5520

cttgtcacct tagagcttgt ttatggaaga ttcaagaaaa ctataaaata cttaaagata 5580

tataaattta aaaaaacata gctgcaggtc tttggtccca gggctgtgcc ttaactttaa 5640

ccaatatttt cttctgtttt gctgcatttg aaaggtaaca gtggagctag ggctgggcat 5700

tttacatcca ggcttttaat tgattagaat tctgccaata ggtggatttt acaaaaccac 5760

agacaacctc tgaaagattc tgagaccctt ttgagacaga agctcttaag tacttcttgc 5820

cagggagcag cactgcatgt gtgatggttg tttgccatct gttgatcagg aactacttca 5880

gctacttgca tttgattatt tccttttttt ttttttttaa ctcggaaaca caactgggga 5940

aatatattct ttcccagtga ttataaacaa tctttttctt ttttttaagt ccttttggct 6000

tctagagctc ataggaaaat ggacttgatt tgaaattgga gccagagttt actcgtgttg 6060

gttatctatt catcagcttc ctgacatgtt aagagaatac attaaagaga aaatactgtt 6120

ttttaatcct aaaatttttc ttccactaag ataaaccaaa tgtccttaca tatatgtaaa 6180

cccatctatt taaacgcaaa ggtgggttga tgtcagttta catagcagaa agcattcact 6240

atcctctaag atttgtttct gcaaaacttt cattgcttta gaattttaaa atttcacctt 6300

gtacaatggc cagcccctaa agcaggaaac atttataatg gattatatgg aaacatcctc 6360

ccagtacttg cccagccctt gaatcatgtg gcttttcagt gaaaggaaag attctttttc 6420

taggaaaaat gagcctattt tattttattt tattttattt tttgacacaa actgtagatt 6480

ttagcagccc tggcccaaag gaatttgatt acttttgttt taaacagtac aaaggggaca 6540

ctataattac aaaaacatcc ttaactgatt tgagttgttt ttatttcttt ggatatattt 6600

tcagagtggt aaattgtgtg tgagaattac aaatgattat tcttttagtg gtttcttagc 6660

ctctcttaca gcccacgggg atagtactgt acatcaatac cttcatatga aatttttata 6720

tgcaatgaaa ataaaagcat gggttgattc tgcctattta tgactcaatc ttttacaaat 6780

aaaagattat tcattttaaa ttatagttca atcagcatgt ctcttaggat actgaacgtg 6840

gttgaaatga aaggatagtg acatcataag ttagtactga tattcataac caaataaagc 6900

caacttgagt aattttgcta cattaaaaat taccaaaatt acttagatgg cctataagat 6960

taagcatggt gttttctaag caagctttga aaggggcctt ccatacttac ttaattgaat 7020

attctgggat attgaaaatt attcagatac ttgacaatta tttttggtta cctactccgc 7080

aaactacaaa gttttaagga ctcaacaata agttaatgag acacagtgtt tgctttcatg 7140

gagcttacag tctggagggg acaaaggctt aaacaatact catataatta tatatgtgat 7200

cagtacaatg aaggagctca gtggggtaaa taagcaggaa cctgaacttg atctgttccg 7260

gagggccaca gaaggcttcc ttgaggcctt gagaaagtga tttgcatctg agttctgaag 7320

gattgtaaga ggtaactagg gaaaaagttg acaggaagag gaaggggatc cagacaagaa 7380

acatttgcaa agatcttgag gcataaatga gcttgagaca tctggagaaa ctgaggaaaa 7440

gtgagagagt aggcagggcc tggagccgca gagccattgc taaccatcct gtgtgagata 7500

tcccccattc tgtagcttta ttctcataac cctgctcaat tttctttata acacttctca 7560

cagatttata tacgtgtttg tttttgttat ctgtctctcc caccagacca cagctccatg 7620

agagcaaggt ctttgcttac caatatatca ctagcactta aaactatgcc tggtacacag 7680

taggttctta atatgtgttg aatatagcca tcaaattgat attggatata attcaatctg 7740

ataagatatt ttgagatatt aaagagtttt taacttgata ccataaaaaa aaaaaaaaaa 7800

a 7801

<210> 2

<211> 585

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 2

Met Lys Glu Gln Pro Ser Cys Ala Gly Thr Gly His Pro Ser Met Ala

1 5 10 15

Gly Tyr Gly Arg Met Ala Pro Phe Glu Leu Ala Ser Gly Pro Val Lys

20 25 30

Arg Leu Arg Thr Glu Ser Pro Phe Pro Cys Leu Phe Ala Glu Glu Ala

35 40 45

Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu

50 55 60

Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala

65 70 75 80

Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser

85 90 95

Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr

100 105 110

Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys

115 120 125

Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys

130 135 140

Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe

145 150 155 160

Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp

165 170 175

Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly

180 185 190

Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp

195 200 205

Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu

210 215 220

Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn

225 230 235 240

Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr

245 250 255

Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile

260 265 270

Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln

275 280 285

Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser

290 295 300

Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln

305 310 315 320

Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln

325 330 335

Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser

340 345 350

Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys

355 360 365

Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg

370 375 380

Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro

385 390 395 400

Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu

405 410 415

Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile

420 425 430

Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val

435 440 445

Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp

450 455 460

Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn

465 470 475 480

Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro

485 490 495

Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe

500 505 510

Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser

515 520 525

Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu

530 535 540

Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val

545 550 555 560

Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys

565 570 575

Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr

580 585

<210> 3

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D1D2_прямой праймер

<400> 3

aatatgaagg agcagccctc a 21

<210> 4

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D1D2_обратный праймер

<400> 4

gtctcgctgg ccagtttc 18

<210> 5

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D1D2 probe

<400> 5

catccgagca tggcggga 18

<210> 6

<211> 7715

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 6

gtggtggccg cgcacccggc cgcggctgat tcattcactt caagtgccgt gcagaaggct 60

cggcaggcgg ggcgggcgtg gggccgcggc tccgggttgg ggaccgagga gatccggctg 120

tggaccagac gctcctctgc ggggcgggca cccaagcgcg ctcgccaccc cctcgccatc 180

cgctagagcc gggctcctgg actgggactc gggcccgccg cacagttgaa aagtcgcata 240

gtggtttttc cgctcgcgtc gctgtgtgaa agttggctcg ccgctctttg cacgccctcc 300

ctggaggccg acccgagacg ccaagctgga gagaccgtgc ctccccgagg ccggccgccc 360

cgcgagcaca gcctccgccc ccgttgcact gccgggctgg gcaatatgaa ggagcagccc 420

tcatgtgccg gcaccgggca tccgagcatg gcgggaggag gcctaccaga aactggccag 480

cgagaccctg gaggagctgg actggtgtct ggaccagcta gagaccctac agaccaggca 540

ctccgtcagt gagatggcct ccaacaagtt taaaaggatg cttaatcggg agctcaccca 600

tctctctgaa atgagtcggt ctggaaatca agtgtcagag tttatatcaa acacattctt 660

agataagcaa catgaagtgg aaattccttc tccaactcag aaggaaaagg agaaaaagaa 720

aagaccaatg tctcagatca gtggagtcaa gaaattgatg cacagctcta gtctgactaa 780

ttcaagtatc ccaaggtttg gagttaaaac tgaacaagaa gatgtccttg ccaaggaact 840

agaagatgtg aacaaatggg gtcttcatgt tttcagaata gcagagttgt ctggtaaccg 900

gcccttgact gttatcatgc acaccatttt tcaggaacgg gatttattaa aaacatttaa 960

aattccagta gatactttaa ttacatatct tatgactctc gaagaccatt accatgctga 1020

tgtggcctat cacaacaata tccatgctgc agatgttgtc cagtctactc atgtgctatt 1080

atctacacct gctttggagg ctgtgtttac agatttggag attcttgcag caatttttgc 1140

cagtgcaata catgatgtag atcatcctgg tgtgtccaat caatttctga tcaatacaaa 1200

ctctgaactt gccttgatgt acaatgattc ctcagtctta gagaaccatc atttggctgt 1260

gggctttaaa ttgcttcagg aagaaaactg tgacattttc cagaatttga ccaaaaaaca 1320

aagacaatct ttaaggaaaa tggtcattga catcgtactt gcaacagata tgtcaaaaca 1380

catgaatcta ctggctgatt tgaagactat ggttgaaact aagaaagtga caagctctgg 1440

agttcttctt cttgataatt attccgatag gattcaggtt cttcagaata tggtgcactg 1500

tgcagatctg agcaacccaa caaagcctct ccagctgtac cgccagtgga cggaccggat 1560

aatggaggag ttcttccgcc aaggagaccg agagagggaa cgtggcatgg agataagccc 1620

catgtgtgac aagcacaatg cttccgtgga aaaatcacag gtgggcttca tagactatat 1680

tgttcatccc ctctgggaga catgggcaga cctcgtccac cctgacgccc aggatatttt 1740

ggacactttg gaggacaatc gtgaatggta ccagagcaca atccctcaga gcccctctcc 1800

tgcacctgat gacccagagg agggccggca gggtcaaact gagaaattcc agtttgaact 1860

aactttagag gaagatggtg agtcagacac ggaaaaggac agtggcagtc aagtggaaga 1920

agacactagc tgcagtgact ccaagactct ttgtactcaa gactcagagt ctactgaaat 1980

tccccttgat gaacaggttg aagaggaggc agtaggggaa gaagaggaaa gccagcctga 2040

agcctgtgtc atagatgatc gttctcctga cacgtaacag tgcaaaaact ttcatgcctt 2100

tttttttttt aagtagaaaa attgtttcca aagtgcatgt cacatgccac aaccacggtc 2160

acacctcact gtcatctgcc aggacgtttg ttgaacaaaa ctgaccttga ctactcagtc 2220

cagcgctcag gaatatcgta accagttttt tcacctccat gtcatccgag caaggtggac 2280

atcttcacga acagcgtttt taacaagatt tcagcttggt agagctgaca aagcagataa 2340

aatctactcc aaattatttt caagagagtg tgactcatca ggcagcccaa aagtttattg 2400

gacttggggt ttctattcct ttttatttgt ttgcaatatt ttcagaagaa aggcattgca 2460

cagagtgaac ttaatggacg aagcaacaaa tatgtcaaga acaggacata gcacgaatct 2520

gttaccagta ggaggaggat gagccacaga aattgcataa ttttctaatt tcaagtcttc 2580

ctgatacatg actgaatagt gtggttcagt gagctgcact gacctctaca ttttgtatga 2640

tatgtaaaac agattttttg tagagcttac ttttattatt aaatgtattg aggtattata 2700

tttaaaaaaa actatgttca gaacttcatc tgccactggt tatttttttc taaggagtaa 2760

cttgcaagtt ttcagtacaa atctgtgcta cactggataa aaatctaatt tatgaatttt 2820

acttgcacct tatagttcat agcaattaac tgatttgtag tgattcattg tttgttttat 2880

ataccaatga cttccatatt ttaaaagaga aaaacaactt tatgttgcag gaaacccttt 2940

ttgtaagtct ttattattta ctttgcattt tgtttcactc tttccagata agcagagttg 3000

ctcttcacca gtgtttttct tcatgtgcaa agtgactatt tgttctataa tacttttatg 3060

tgtgttatat caaatgtgtc ttaagcttca tgcaaactca gtcatcagtt cgtgttgtct 3120

gaagcaagtg ggagatatat aaatacccag tagctaaaat ggtcagtctt ttttagatgt 3180

tttcctactt agtatctcct aataacgttt tgctgtgtca ctagatgttc atttcacaag 3240

tgcatgtctt tctaataatc cacacatttc atgctctaat aatccacaca tttcatgctc 3300

atttttattg tttttacagc cagttatagt aagaaaaagg tttttcccct tgtgctgctt 3360

tataatttag cgtgtgtctg aaccttatcc atgtttgcta gatgaggtct tgtcaaatat 3420

atcactacca ttgtcaccgg tgaaaagaaa caggtagtta agttagggtt aacattcatt 3480

tcaaccacga ggttgtatat catgactagc ttttactctt ggtttacaga gaaaagttaa 3540

acagccaact aggcagtttt taagaatatt aacaatatat taacaaacac caatacaact 3600

aatcctattt ggttttaatg atttcaccat gggattaaga actatatcag gaacatccct 3660

gagaaacggt tttaagtgta gcaactactc ttccttaatg gacagccaca taacgtgtag 3720

gaagtccttt atcacttatc ctcgatccat aagcatatct tgcagagggg aactacttct 3780

ttaaacacat ggagggaaag aagatgatgc cactggcacc agagggttag tactgtgatg 3840

catcctaaaa tatttattat attggtaaaa attctggtta aataaaaaat tagagatcac 3900

tcttggctga tttcagcacc aggaactgta ttacagtttt agagattaat tcctagtgtt 3960

tacctgatta tagcagttgg catcatgggg catttaattc tgactttatc cccacgtcag 4020

ccttaataaa gtcttcttta ccttctctat gaagacttta aagcccaaat aatcattttt 4080

cacattgata ttcaagaatt gagatagata gaagccaaag tgggtatctg acaagtggaa 4140

aatcaaacgt ttaagaagaa ttacaactct gaaaagcatt tatatgtgga acttctcaag 4200

gagcctcctg gggactggaa agtaagtcat cagccaggca aatgactcat gctgaagaga 4260

gtccccattt cagtcccctg agatctagct gatgcttaga tcctttgaaa taaaaattat 4320

gtctttataa ctctgatctt ttacataaag cagaagagga atcaactagt taattgcaag 4380

gtttctactc tgtttcctct gtaaagatca gatggtaatc tttcaaataa gaaaaaaata 4440

aagacgtatg tttgaccaag tagtttcaca agaatatttg ggaacttgtt tcttttaatt 4500

ttatttgtcc ctgagtgaag tctagaaaga aaggtaaaga gtctagagtt tattcctctt 4560

tccaaaacat tctcattcct ctcctcccta cacttagtat ttcccccaca gagtgcctag 4620

aatcttaata atgaataaaa taaaaagcag caatatgtca ttaacaaatc cagacctgaa 4680

agggtaaagg gtttataact gcactaataa agagaggctc tttttttttc ttccagtttg 4740

ttggttttta atggtaccgt gttgtaaaga tacccactaa tggacaatca aattgcagaa 4800

aaggctcaat atccaagaga cagggactaa tgcactgtac aatctgctta tccttgccct 4860

tctctcttgc caaagtgtgc ttcagaaata tatactgctt taaaaaagaa taaaagaata 4920

tccttttaca agtggcttta catttcctaa aatgccataa gaaaatgcaa tatctgggta 4980

ctgtatgggg aaaaaaatgt ccaagtttgt gtaaaaccag tgcatttcag cttgcaagtt 5040

actgaacaca ataatgctgt tttaattttg ttttatatca gttaaaattc acaataatgt 5100

agatagaaca aattacagac aaggaaagaa aaaacttgaa tgaaatggat tttacagaaa 5160

gctttatgat aatttttgaa tgcattattt attttttgtg ccatgcattt tttttctcac 5220

caaatgacct tacctgtaat acagtcttgt ttgtctgttt acaaccatgt atttattgca 5280

atgtacatac tgtaatgtta attgtaaatt atctgttctt attaaaacat catcccatga 5340

tgggatggtg ttgatatatt tggaaactct tggtgagaga atgaatggtg tgtatacata 5400

ctctgtacat ttttcttttc tcctgtaata tagtcttgtc accttagagc ttgtttatgg 5460

aagattcaag aaaactataa aatacttaaa gatatataaa tttaaaaaaa catagctgca 5520

ggtctttggt cccagggctg tgccttaact ttaaccaata ttttcttctg ttttgctgca 5580

tttgaaaggt aacagtggag ctagggctgg gcattttaca tccaggcttt taattgatta 5640

gaattctgcc aataggtgga ttttacaaaa ccacagacaa cctctgaaag attctgagac 5700

ccttttgaga cagaagctct taagtacttc ttgccaggga gcagcactgc atgtgtgatg 5760

gttgtttgcc atctgttgat caggaactac ttcagctact tgcatttgat tatttccttt 5820

tttttttttt ttaactcgga aacacaactg gggaaatata ttctttccca gtgattataa 5880

acaatctttt tctttttttt aagtcctttt ggcttctaga gctcatagga aaatggactt 5940

gatttgaaat tggagccaga gtttactcgt gttggttatc tattcatcag cttcctgaca 6000

tgttaagaga atacattaaa gagaaaatac tgttttttaa tcctaaaatt tttcttccac 6060

taagataaac caaatgtcct tacatatatg taaacccatc tatttaaacg caaaggtggg 6120

ttgatgtcag tttacatagc agaaagcatt cactatcctc taagatttgt ttctgcaaaa 6180

ctttcattgc tttagaattt taaaatttca ccttgtacaa tggccagccc ctaaagcagg 6240

aaacatttat aatggattat atggaaacat cctcccagta cttgcccagc ccttgaatca 6300

tgtggctttt cagtgaaagg aaagattctt tttctaggaa aaatgagcct attttatttt 6360

attttatttt attttttgac acaaactgta gattttagca gccctggccc aaaggaattt 6420

gattactttt gttttaaaca gtacaaaggg gacactataa ttacaaaaac atccttaact 6480

gatttgagtt gtttttattt ctttggatat attttcagag tggtaaattg tgtgtgagaa 6540

ttacaaatga ttattctttt agtggtttct tagcctctct tacagcccac ggggatagta 6600

ctgtacatca ataccttcat atgaaatttt tatatgcaat gaaaataaaa gcatgggttg 6660

attctgccta tttatgactc aatcttttac aaataaaaga ttattcattt taaattatag 6720

ttcaatcagc atgtctctta ggatactgaa cgtggttgaa atgaaaggat agtgacatca 6780

taagttagta ctgatattca taaccaaata aagccaactt gagtaatttt gctacattaa 6840

aaattaccaa aattacttag atggcctata agattaagca tggtgttttc taagcaagct 6900

ttgaaagggg ccttccatac ttacttaatt gaatattctg ggatattgaa aattattcag 6960

atacttgaca attatttttg gttacctact ccgcaaacta caaagtttta aggactcaac 7020

aataagttaa tgagacacag tgtttgcttt catggagctt acagtctgga ggggacaaag 7080

gcttaaacaa tactcatata attatatatg tgatcagtac aatgaaggag ctcagtgggg 7140

taaataagca ggaacctgaa cttgatctgt tccggagggc cacagaaggc ttccttgagg 7200

ccttgagaaa gtgatttgca tctgagttct gaaggattgt aagaggtaac tagggaaaaa 7260

gttgacagga agaggaaggg gatccagaca agaaacattt gcaaagatct tgaggcataa 7320

atgagcttga gacatctgga gaaactgagg aaaagtgaga gagtaggcag ggcctggagc 7380

cgcagagcca ttgctaacca tcctgtgtga gatatccccc attctgtagc tttattctca 7440

taaccctgct caattttctt tataacactt ctcacagatt tatatacgtg tttgtttttg 7500

ttatctgtct ctcccaccag accacagctc catgagagca aggtctttgc ttaccaatat 7560

atcactagca cttaaaacta tgcctggtac acagtaggtt cttaatatgt gttgaatata 7620

gccatcaaat tgatattgga tataattcaa tctgataaga tattttgaga tattaaagag 7680

tttttaactt gataccataa aaaaaaaaaa aaaaa 7715

<210> 7

<211> 507

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 7

Met Ala Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His

1 5 10 15

Leu Ser Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser

20 25 30

Asn Thr Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr

35 40 45

Gln Lys Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly

50 55 60

Val Lys Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro

65 70 75 80

Arg Phe Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu

85 90 95

Glu Asp Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu

100 105 110

Ser Gly Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu

115 120 125

Arg Asp Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr

130 135 140

Tyr Leu Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His

145 150 155 160

Asn Asn Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu

165 170 175

Ser Thr Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala

180 185 190

Ala Ile Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser

195 200 205

Asn Gln Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn

210 215 220

Asp Ser Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu

225 230 235 240

Leu Gln Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln

245 250 255

Arg Gln Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp

260 265 270

Met Ser Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu

275 280 285

Thr Lys Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser

290 295 300

Asp Arg Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser

305 310 315 320

Asn Pro Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile

325 330 335

Met Glu Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met

340 345 350

Glu Ile Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser

355 360 365

Gln Val Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp

370 375 380

Ala Asp Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu

385 390 395 400

Asp Asn Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro

405 410 415

Ala Pro Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe

420 425 430

Gln Phe Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys

435 440 445

Asp Ser Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys

450 455 460

Thr Leu Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu

465 470 475 480

Gln Val Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu

485 490 495

Ala Cys Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr

500 505

<210> 8

<211> 7783

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 8

aatacttgtt gcaataattg cccacgatag ctgctcaaac aagagagttg gaattcatct 60

gtaaaaatca ctacatgtaa cgtaggagac aagaaaaata ttaatgacag aagatctgcg 120

aacatgatgc acgtgaataa ttttcccttt agaaggcatt cctggatatg ttttgatgtg 180

gacaatggca catctgcggg acggagtccc ttggatccca tgaccagccc aggatccggg 240

ctaattctcc aagcaaattt tgtccacagt caacgacggg agtccttcct gtatcgatcc 300

gacagcgatt atgacctctc tccaaagtct atgtcccgga actcctccat tgccagtgat 360

atacacggag atgacttgat tgtgactcca tttgctcagg tcttggccag tctgcgaact 420

gtacgaaaca actttgctgc attaactaat ttgcaagatc gagcacctag caaaagatca 480

cccatgtgca accaaccatc catcaacaaa gccaccataa cagaggaggc ctaccagaaa 540

ctggccagcg agaccctgga ggagctggac tggtgtctgg accagctaga gaccctacag 600

accaggcact ccgtcagtga gatggcctcc aacaagttta aaaggatgct taatcgggag 660

ctcacccatc tctctgaaat gagtcggtct ggaaatcaag tgtcagagtt tatatcaaac 720

acattcttag ataagcaaca tgaagtggaa attccttctc caactcagaa ggaaaaggag 780

aaaaagaaaa gaccaatgtc tcagatcagt ggagtcaaga aattgatgca cagctctagt 840

ctgactaatt caagtatccc aaggtttgga gttaaaactg aacaagaaga tgtccttgcc 900

aaggaactag aagatgtgaa caaatggggt cttcatgttt tcagaatagc agagttgtct 960

ggtaaccggc ccttgactgt tatcatgcac accatttttc aggaacggga tttattaaaa 1020

acatttaaaa ttccagtaga tactttaatt acatatctta tgactctcga agaccattac 1080

catgctgatg tggcctatca caacaatatc catgctgcag atgttgtcca gtctactcat 1140

gtgctattat ctacacctgc tttggaggct gtgtttacag atttggagat tcttgcagca 1200

atttttgcca gtgcaataca tgatgtagat catcctggtg tgtccaatca atttctgatc 1260

aatacaaact ctgaacttgc cttgatgtac aatgattcct cagtcttaga gaaccatcat 1320

ttggctgtgg gctttaaatt gcttcaggaa gaaaactgtg acattttcca gaatttgacc 1380

aaaaaacaaa gacaatcttt aaggaaaatg gtcattgaca tcgtacttgc aacagatatg 1440

tcaaaacaca tgaatctact ggctgatttg aagactatgg ttgaaactaa gaaagtgaca 1500

agctctggag ttcttcttct tgataattat tccgatagga ttcaggttct tcagaatatg 1560

gtgcactgtg cagatctgag caacccaaca aagcctctcc agctgtaccg ccagtggacg 1620

gaccggataa tggaggagtt cttccgccaa ggagaccgag agagggaacg tggcatggag 1680

ataagcccca tgtgtgacaa gcacaatgct tccgtggaaa aatcacaggt gggcttcata 1740

gactatattg ttcatcccct ctgggagaca tgggcagacc tcgtccaccc tgacgcccag 1800

gatattttgg acactttgga ggacaatcgt gaatggtacc agagcacaat ccctcagagc 1860

ccctctcctg cacctgatga cccagaggag ggccggcagg gtcaaactga gaaattccag 1920

tttgaactaa ctttagagga agatggtgag tcagacacgg aaaaggacag tggcagtcaa 1980

gtggaagaag acactagctg cagtgactcc aagactcttt gtactcaaga ctcagagtct 2040

actgaaattc cccttgatga acaggttgaa gaggaggcag taggggaaga agaggaaagc 2100

cagcctgaag cctgtgtcat agatgatcgt tctcctgaca cgtaacagtg caaaaacttt 2160

catgcctttt ttttttttaa gtagaaaaat tgtttccaaa gtgcatgtca catgccacaa 2220

ccacggtcac acctcactgt catctgccag gacgtttgtt gaacaaaact gaccttgact 2280

actcagtcca gcgctcagga atatcgtaac cagttttttc acctccatgt catccgagca 2340

aggtggacat cttcacgaac agcgttttta acaagatttc agcttggtag agctgacaaa 2400

gcagataaaa tctactccaa attattttca agagagtgtg actcatcagg cagcccaaaa 2460

gtttattgga cttggggttt ctattccttt ttatttgttt gcaatatttt cagaagaaag 2520

gcattgcaca gagtgaactt aatggacgaa gcaacaaata tgtcaagaac aggacatagc 2580

acgaatctgt taccagtagg aggaggatga gccacagaaa ttgcataatt ttctaatttc 2640

aagtcttcct gatacatgac tgaatagtgt ggttcagtga gctgcactga cctctacatt 2700

ttgtatgata tgtaaaacag attttttgta gagcttactt ttattattaa atgtattgag 2760

gtattatatt taaaaaaaac tatgttcaga acttcatctg ccactggtta tttttttcta 2820

aggagtaact tgcaagtttt cagtacaaat ctgtgctaca ctggataaaa atctaattta 2880

tgaattttac ttgcacctta tagttcatag caattaactg atttgtagtg attcattgtt 2940

tgttttatat accaatgact tccatatttt aaaagagaaa aacaacttta tgttgcagga 3000

aacccttttt gtaagtcttt attatttact ttgcattttg tttcactctt tccagataag 3060

cagagttgct cttcaccagt gtttttcttc atgtgcaaag tgactatttg ttctataata 3120

cttttatgtg tgttatatca aatgtgtctt aagcttcatg caaactcagt catcagttcg 3180

tgttgtctga agcaagtggg agatatataa atacccagta gctaaaatgg tcagtctttt 3240

ttagatgttt tcctacttag tatctcctaa taacgttttg ctgtgtcact agatgttcat 3300

ttcacaagtg catgtctttc taataatcca cacatttcat gctctaataa tccacacatt 3360

tcatgctcat ttttattgtt tttacagcca gttatagtaa gaaaaaggtt tttccccttg 3420

tgctgcttta taatttagcg tgtgtctgaa ccttatccat gtttgctaga tgaggtcttg 3480

tcaaatatat cactaccatt gtcaccggtg aaaagaaaca ggtagttaag ttagggttaa 3540

cattcatttc aaccacgagg ttgtatatca tgactagctt ttactcttgg tttacagaga 3600

aaagttaaac agccaactag gcagttttta agaatattaa caatatatta acaaacacca 3660

atacaactaa tcctatttgg ttttaatgat ttcaccatgg gattaagaac tatatcagga 3720

acatccctga gaaacggttt taagtgtagc aactactctt ccttaatgga cagccacata 3780

acgtgtagga agtcctttat cacttatcct cgatccataa gcatatcttg cagaggggaa 3840

ctacttcttt aaacacatgg agggaaagaa gatgatgcca ctggcaccag agggttagta 3900

ctgtgatgca tcctaaaata tttattatat tggtaaaaat tctggttaaa taaaaaatta 3960

gagatcactc ttggctgatt tcagcaccag gaactgtatt acagttttag agattaattc 4020

ctagtgttta cctgattata gcagttggca tcatggggca tttaattctg actttatccc 4080

cacgtcagcc ttaataaagt cttctttacc ttctctatga agactttaaa gcccaaataa 4140

tcatttttca cattgatatt caagaattga gatagataga agccaaagtg ggtatctgac 4200

aagtggaaaa tcaaacgttt aagaagaatt acaactctga aaagcattta tatgtggaac 4260

ttctcaagga gcctcctggg gactggaaag taagtcatca gccaggcaaa tgactcatgc 4320

tgaagagagt ccccatttca gtcccctgag atctagctga tgcttagatc ctttgaaata 4380

aaaattatgt ctttataact ctgatctttt acataaagca gaagaggaat caactagtta 4440

attgcaaggt ttctactctg tttcctctgt aaagatcaga tggtaatctt tcaaataaga 4500

aaaaaataaa gacgtatgtt tgaccaagta gtttcacaag aatatttggg aacttgtttc 4560

ttttaatttt atttgtccct gagtgaagtc tagaaagaaa ggtaaagagt ctagagttta 4620

ttcctctttc caaaacattc tcattcctct cctccctaca cttagtattt cccccacaga 4680

gtgcctagaa tcttaataat gaataaaata aaaagcagca atatgtcatt aacaaatcca 4740

gacctgaaag ggtaaagggt ttataactgc actaataaag agaggctctt tttttttctt 4800

ccagtttgtt ggtttttaat ggtaccgtgt tgtaaagata cccactaatg gacaatcaaa 4860

ttgcagaaaa ggctcaatat ccaagagaca gggactaatg cactgtacaa tctgcttatc 4920

cttgcccttc tctcttgcca aagtgtgctt cagaaatata tactgcttta aaaaagaata 4980

aaagaatatc cttttacaag tggctttaca tttcctaaaa tgccataaga aaatgcaata 5040

tctgggtact gtatggggaa aaaaatgtcc aagtttgtgt aaaaccagtg catttcagct 5100

tgcaagttac tgaacacaat aatgctgttt taattttgtt ttatatcagt taaaattcac 5160

aataatgtag atagaacaaa ttacagacaa ggaaagaaaa aacttgaatg aaatggattt 5220

tacagaaagc tttatgataa tttttgaatg cattatttat tttttgtgcc atgcattttt 5280

tttctcacca aatgacctta cctgtaatac agtcttgttt gtctgtttac aaccatgtat 5340

ttattgcaat gtacatactg taatgttaat tgtaaattat ctgttcttat taaaacatca 5400

tcccatgatg ggatggtgtt gatatatttg gaaactcttg gtgagagaat gaatggtgtg 5460

tatacatact ctgtacattt ttcttttctc ctgtaatata gtcttgtcac cttagagctt 5520

gtttatggaa gattcaagaa aactataaaa tacttaaaga tatataaatt taaaaaaaca 5580

tagctgcagg tctttggtcc cagggctgtg ccttaacttt aaccaatatt ttcttctgtt 5640

ttgctgcatt tgaaaggtaa cagtggagct agggctgggc attttacatc caggctttta 5700

attgattaga attctgccaa taggtggatt ttacaaaacc acagacaacc tctgaaagat 5760

tctgagaccc ttttgagaca gaagctctta agtacttctt gccagggagc agcactgcat 5820

gtgtgatggt tgtttgccat ctgttgatca ggaactactt cagctacttg catttgatta 5880

tttccttttt tttttttttt aactcggaaa cacaactggg gaaatatatt ctttcccagt 5940

gattataaac aatctttttc ttttttttaa gtccttttgg cttctagagc tcataggaaa 6000

atggacttga tttgaaattg gagccagagt ttactcgtgt tggttatcta ttcatcagct 6060

tcctgacatg ttaagagaat acattaaaga gaaaatactg ttttttaatc ctaaaatttt 6120

tcttccacta agataaacca aatgtcctta catatatgta aacccatcta tttaaacgca 6180

aaggtgggtt gatgtcagtt tacatagcag aaagcattca ctatcctcta agatttgttt 6240

ctgcaaaact ttcattgctt tagaatttta aaatttcacc ttgtacaatg gccagcccct 6300

aaagcaggaa acatttataa tggattatat ggaaacatcc tcccagtact tgcccagccc 6360

ttgaatcatg tggcttttca gtgaaaggaa agattctttt tctaggaaaa atgagcctat 6420

tttattttat tttattttat tttttgacac aaactgtaga ttttagcagc cctggcccaa 6480

aggaatttga ttacttttgt tttaaacagt acaaagggga cactataatt acaaaaacat 6540

ccttaactga tttgagttgt ttttatttct ttggatatat tttcagagtg gtaaattgtg 6600

tgtgagaatt acaaatgatt attcttttag tggtttctta gcctctctta cagcccacgg 6660

ggatagtact gtacatcaat accttcatat gaaattttta tatgcaatga aaataaaagc 6720

atgggttgat tctgcctatt tatgactcaa tcttttacaa ataaaagatt attcatttta 6780

aattatagtt caatcagcat gtctcttagg atactgaacg tggttgaaat gaaaggatag 6840

tgacatcata agttagtact gatattcata accaaataaa gccaacttga gtaattttgc 6900

tacattaaaa attaccaaaa ttacttagat ggcctataag attaagcatg gtgttttcta 6960

agcaagcttt gaaaggggcc ttccatactt acttaattga atattctggg atattgaaaa 7020

ttattcagat acttgacaat tatttttggt tacctactcc gcaaactaca aagttttaag 7080

gactcaacaa taagttaatg agacacagtg tttgctttca tggagcttac agtctggagg 7140

ggacaaaggc ttaaacaata ctcatataat tatatatgtg atcagtacaa tgaaggagct 7200

cagtggggta aataagcagg aacctgaact tgatctgttc cggagggcca cagaaggctt 7260

ccttgaggcc ttgagaaagt gatttgcatc tgagttctga aggattgtaa gaggtaacta 7320

gggaaaaagt tgacaggaag aggaagggga tccagacaag aaacatttgc aaagatcttg 7380

aggcataaat gagcttgaga catctggaga aactgaggaa aagtgagaga gtaggcaggg 7440

cctggagccg cagagccatt gctaaccatc ctgtgtgaga tatcccccat tctgtagctt 7500

tattctcata accctgctca attttcttta taacacttct cacagattta tatacgtgtt 7560

tgtttttgtt atctgtctct cccaccagac cacagctcca tgagagcaag gtctttgctt 7620

accaatatat cactagcact taaaactatg cctggtacac agtaggttct taatatgtgt 7680

tgaatatagc catcaaattg atattggata taattcaatc tgataagata ttttgagata 7740

ttaaagagtt tttaacttga taccataaaa aaaaaaaaaa aaa 7783

<210> 9

<211> 673

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 9

Met Met His Val Asn Asn Phe Pro Phe Arg Arg His Ser Trp Ile Cys

1 5 10 15

Phe Asp Val Asp Asn Gly Thr Ser Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro

20 25 30

Met Thr Ser Pro Gly Ser Gly Leu Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His

35 40 45

Ser Gln Arg Arg Glu Ser Phe Leu Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp

50 55 60

Leu Ser Pro Lys Ser Met Ser Arg Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile

65 70 75 80

His Gly Asp Asp Leu Ile Val Thr Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser

85 90 95

Leu Arg Thr Val Arg Asn Asn Phe Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp

100 105 110

Arg Ala Pro Ser Lys Arg Ser Pro Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn

115 120 125

Lys Ala Thr Ile Thr Glu Glu Ala Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr

130 135 140

Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr

145 150 155 160

Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu

165 170 175

Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln

180 185 190

Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val

195 200 205

Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro

210 215 220

Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu

225 230 235 240

Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp

245 250 255

Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val

260 265 270

Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met

275 280 285

His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro

290 295 300

Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His

305 310 315 320

Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln

325 330 335

Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr

340 345 350

Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val

355 360 365

Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu

370 375 380

Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser Ser Val Leu Glu Asn His His Leu

385 390 395 400

Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln

405 410 415

Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp

420 425 430

Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp

435 440 445

Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu

450 455 460

Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val

465 470 475 480

His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg

485 490 495

Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg

500 505 510

Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn

515 520 525

Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His

530 535 540

Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp

545 550 555 560

Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile

565 570 575

Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln

580 585 590

Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly

595 600 605

Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr

610 615 620

Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr

625 630 635 640

Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu

645 650 655

Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp

660 665 670

Thr

<210> 10

<211> 8240

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 10

cccctctcgg tagccctgag gctctggcgc cttcaagtga gaagctaagc accagcctct 60

gctgggctgc agaagcggcg gcggcggcag cagcagcagc agcatcagga aggcgctcgg 120

gccagcgcgg tgaacccggg ctgggcagca ggtcgcggag ccgcgagcca ggatggaggc 180

agagggcagc agcgcgccgg cccgggcggg cagcggagag ggcagcgaca gcgccggcgg 240

ggccacgctc aaagccccca agcatctctg gaggcacgag cagcaccacc agtacccgct 300

ccggcagccc cagttccgcc tcctgcatcc ccatcaccac ctgcccccgc cgccgccacc 360

ctcgccccag ccccagcccc agtgtccgct acagccgccg ccgccgcccc ccctgccgcc 420

gcccccgccg ccgcccgggg ctgcccgcgg ccgctacgcc tcgagcgggg ccaccggccg 480

cgtccggcat cgcggctact cggacaccga gcgctacctg tactgtcgcg ccatggaccg 540

cacctcctac gcggtggaga ccggccaccg gcccggcctg aagaaatcca ggatgtcctg 600

gccctcctcg ttccagggac tcaggcgttt tgatgtggac aatggcacat ctgcgggacg 660

gagtcccttg gatcccatga ccagcccagg atccgggcta attctccaag caaattttgt 720

ccacagtcaa cgacgggagt ccttcctgta tcgatccgac agcgattatg acctctctcc 780

aaagtctatg tcccggaact cctccattgc cagtgatata cacggagatg acttgattgt 840

gactccattt gctcaggtct tggccagtct gcgaactgta cgaaacaact ttgctgcatt 900

aactaatttg caagatcgag cacctagcaa aagatcaccc atgtgcaacc aaccatccat 960

caacaaagcc accataacag aggaggccta ccagaaactg gccagcgaga ccctggagga 1020

gctggactgg tgtctggacc agctagagac cctacagacc aggcactccg tcagtgagat 1080

ggcctccaac aagtttaaaa ggatgcttaa tcgggagctc acccatctct ctgaaatgag 1140

tcggtctgga aatcaagtgt cagagtttat atcaaacaca ttcttagata agcaacatga 1200

agtggaaatt ccttctccaa ctcagaagga aaaggagaaa aagaaaagac caatgtctca 1260

gatcagtgga gtcaagaaat tgatgcacag ctctagtctg actaattcaa gtatcccaag 1320

gtttggagtt aaaactgaac aagaagatgt ccttgccaag gaactagaag atgtgaacaa 1380

atggggtctt catgttttca gaatagcaga gttgtctggt aaccggccct tgactgttat 1440

catgcacacc atttttcagg aacgggattt attaaaaaca tttaaaattc cagtagatac 1500

tttaattaca tatcttatga ctctcgaaga ccattaccat gctgatgtgg cctatcacaa 1560

caatatccat gctgcagatg ttgtccagtc tactcatgtg ctattatcta cacctgcttt 1620

ggaggctgtg tttacagatt tggagattct tgcagcaatt tttgccagtg caatacatga 1680

tgtagatcat cctggtgtgt ccaatcaatt tctgatcaat acaaactctg aacttgcctt 1740

gatgtacaat gattcctcag tcttagagaa ccatcatttg gctgtgggct ttaaattgct 1800

tcaggaagaa aactgtgaca ttttccagaa tttgaccaaa aaacaaagac aatctttaag 1860

gaaaatggtc attgacatcg tacttgcaac agatatgtca aaacacatga atctactggc 1920

tgatttgaag actatggttg aaactaagaa agtgacaagc tctggagttc ttcttcttga 1980

taattattcc gataggattc aggttcttca gaatatggtg cactgtgcag atctgagcaa 2040

cccaacaaag cctctccagc tgtaccgcca gtggacggac cggataatgg aggagttctt 2100

ccgccaagga gaccgagaga gggaacgtgg catggagata agccccatgt gtgacaagca 2160

caatgcttcc gtggaaaaat cacaggtggg cttcatagac tatattgttc atcccctctg 2220

ggagacatgg gcagacctcg tccaccctga cgcccaggat attttggaca ctttggagga 2280

caatcgtgaa tggtaccaga gcacaatccc tcagagcccc tctcctgcac ctgatgaccc 2340

agaggagggc cggcagggtc aaactgagaa attccagttt gaactaactt tagaggaaga 2400

tggtgagtca gacacggaaa aggacagtgg cagtcaagtg gaagaagaca ctagctgcag 2460

tgactccaag actctttgta ctcaagactc agagtctact gaaattcccc ttgatgaaca 2520

ggttgaagag gaggcagtag gggaagaaga ggaaagccag cctgaagcct gtgtcataga 2580

tgatcgttct cctgacacgt aacagtgcaa aaactttcat gccttttttt tttttaagta 2640

gaaaaattgt ttccaaagtg catgtcacat gccacaacca cggtcacacc tcactgtcat 2700

ctgccaggac gtttgttgaa caaaactgac cttgactact cagtccagcg ctcaggaata 2760

tcgtaaccag ttttttcacc tccatgtcat ccgagcaagg tggacatctt cacgaacagc 2820

gtttttaaca agatttcagc ttggtagagc tgacaaagca gataaaatct actccaaatt 2880

attttcaaga gagtgtgact catcaggcag cccaaaagtt tattggactt ggggtttcta 2940

ttccttttta tttgtttgca atattttcag aagaaaggca ttgcacagag tgaacttaat 3000

ggacgaagca acaaatatgt caagaacagg acatagcacg aatctgttac cagtaggagg 3060

aggatgagcc acagaaattg cataattttc taatttcaag tcttcctgat acatgactga 3120

atagtgtggt tcagtgagct gcactgacct ctacattttg tatgatatgt aaaacagatt 3180

ttttgtagag cttactttta ttattaaatg tattgaggta ttatatttaa aaaaaactat 3240

gttcagaact tcatctgcca ctggttattt ttttctaagg agtaacttgc aagttttcag 3300

tacaaatctg tgctacactg gataaaaatc taatttatga attttacttg caccttatag 3360

ttcatagcaa ttaactgatt tgtagtgatt cattgtttgt tttatatacc aatgacttcc 3420

atattttaaa agagaaaaac aactttatgt tgcaggaaac cctttttgta agtctttatt 3480

atttactttg cattttgttt cactctttcc agataagcag agttgctctt caccagtgtt 3540

tttcttcatg tgcaaagtga ctatttgttc tataatactt ttatgtgtgt tatatcaaat 3600

gtgtcttaag cttcatgcaa actcagtcat cagttcgtgt tgtctgaagc aagtgggaga 3660

tatataaata cccagtagct aaaatggtca gtctttttta gatgttttcc tacttagtat 3720

ctcctaataa cgttttgctg tgtcactaga tgttcatttc acaagtgcat gtctttctaa 3780

taatccacac atttcatgct ctaataatcc acacatttca tgctcatttt tattgttttt 3840

acagccagtt atagtaagaa aaaggttttt ccccttgtgc tgctttataa tttagcgtgt 3900

gtctgaacct tatccatgtt tgctagatga ggtcttgtca aatatatcac taccattgtc 3960

accggtgaaa agaaacaggt agttaagtta gggttaacat tcatttcaac cacgaggttg 4020

tatatcatga ctagctttta ctcttggttt acagagaaaa gttaaacagc caactaggca 4080

gtttttaaga atattaacaa tatattaaca aacaccaata caactaatcc tatttggttt 4140

taatgatttc accatgggat taagaactat atcaggaaca tccctgagaa acggttttaa 4200

gtgtagcaac tactcttcct taatggacag ccacataacg tgtaggaagt cctttatcac 4260

ttatcctcga tccataagca tatcttgcag aggggaacta cttctttaaa cacatggagg 4320

gaaagaagat gatgccactg gcaccagagg gttagtactg tgatgcatcc taaaatattt 4380

attatattgg taaaaattct ggttaaataa aaaattagag atcactcttg gctgatttca 4440

gcaccaggaa ctgtattaca gttttagaga ttaattccta gtgtttacct gattatagca 4500

gttggcatca tggggcattt aattctgact ttatccccac gtcagcctta ataaagtctt 4560

ctttaccttc tctatgaaga ctttaaagcc caaataatca tttttcacat tgatattcaa 4620

gaattgagat agatagaagc caaagtgggt atctgacaag tggaaaatca aacgtttaag 4680

aagaattaca actctgaaaa gcatttatat gtggaacttc tcaaggagcc tcctggggac 4740

tggaaagtaa gtcatcagcc aggcaaatga ctcatgctga agagagtccc catttcagtc 4800

ccctgagatc tagctgatgc ttagatcctt tgaaataaaa attatgtctt tataactctg 4860

atcttttaca taaagcagaa gaggaatcaa ctagttaatt gcaaggtttc tactctgttt 4920

cctctgtaaa gatcagatgg taatctttca aataagaaaa aaataaagac gtatgtttga 4980

ccaagtagtt tcacaagaat atttgggaac ttgtttcttt taattttatt tgtccctgag 5040

tgaagtctag aaagaaaggt aaagagtcta gagtttattc ctctttccaa aacattctca 5100

ttcctctcct ccctacactt agtatttccc ccacagagtg cctagaatct taataatgaa 5160

taaaataaaa agcagcaata tgtcattaac aaatccagac ctgaaagggt aaagggttta 5220

taactgcact aataaagaga ggctcttttt ttttcttcca gtttgttggt ttttaatggt 5280

accgtgttgt aaagataccc actaatggac aatcaaattg cagaaaaggc tcaatatcca 5340

agagacaggg actaatgcac tgtacaatct gcttatcctt gcccttctct cttgccaaag 5400

tgtgcttcag aaatatatac tgctttaaaa aagaataaaa gaatatcctt ttacaagtgg 5460

ctttacattt cctaaaatgc cataagaaaa tgcaatatct gggtactgta tggggaaaaa 5520

aatgtccaag tttgtgtaaa accagtgcat ttcagcttgc aagttactga acacaataat 5580

gctgttttaa ttttgtttta tatcagttaa aattcacaat aatgtagata gaacaaatta 5640

cagacaagga aagaaaaaac ttgaatgaaa tggattttac agaaagcttt atgataattt 5700

ttgaatgcat tatttatttt ttgtgccatg catttttttt ctcaccaaat gaccttacct 5760

gtaatacagt cttgtttgtc tgtttacaac catgtattta ttgcaatgta catactgtaa 5820

tgttaattgt aaattatctg ttcttattaa aacatcatcc catgatggga tggtgttgat 5880

atatttggaa actcttggtg agagaatgaa tggtgtgtat acatactctg tacatttttc 5940

ttttctcctg taatatagtc ttgtcacctt agagcttgtt tatggaagat tcaagaaaac 6000

tataaaatac ttaaagatat ataaatttaa aaaaacatag ctgcaggtct ttggtcccag 6060

ggctgtgcct taactttaac caatattttc ttctgttttg ctgcatttga aaggtaacag 6120

tggagctagg gctgggcatt ttacatccag gcttttaatt gattagaatt ctgccaatag 6180

gtggatttta caaaaccaca gacaacctct gaaagattct gagacccttt tgagacagaa 6240

gctcttaagt acttcttgcc agggagcagc actgcatgtg tgatggttgt ttgccatctg 6300

ttgatcagga actacttcag ctacttgcat ttgattattt cctttttttt tttttttaac 6360

tcggaaacac aactggggaa atatattctt tcccagtgat tataaacaat ctttttcttt 6420

tttttaagtc cttttggctt ctagagctca taggaaaatg gacttgattt gaaattggag 6480

ccagagttta ctcgtgttgg ttatctattc atcagcttcc tgacatgtta agagaataca 6540

ttaaagagaa aatactgttt tttaatccta aaatttttct tccactaaga taaaccaaat 6600

gtccttacat atatgtaaac ccatctattt aaacgcaaag gtgggttgat gtcagtttac 6660

atagcagaaa gcattcacta tcctctaaga tttgtttctg caaaactttc attgctttag 6720

aattttaaaa tttcaccttg tacaatggcc agcccctaaa gcaggaaaca tttataatgg 6780

attatatgga aacatcctcc cagtacttgc ccagcccttg aatcatgtgg cttttcagtg 6840

aaaggaaaga ttctttttct aggaaaaatg agcctatttt attttatttt attttatttt 6900

ttgacacaaa ctgtagattt tagcagccct ggcccaaagg aatttgatta cttttgtttt 6960

aaacagtaca aaggggacac tataattaca aaaacatcct taactgattt gagttgtttt 7020

tatttctttg gatatatttt cagagtggta aattgtgtgt gagaattaca aatgattatt 7080

cttttagtgg tttcttagcc tctcttacag cccacgggga tagtactgta catcaatacc 7140

ttcatatgaa atttttatat gcaatgaaaa taaaagcatg ggttgattct gcctatttat 7200

gactcaatct tttacaaata aaagattatt cattttaaat tatagttcaa tcagcatgtc 7260

tcttaggata ctgaacgtgg ttgaaatgaa aggatagtga catcataagt tagtactgat 7320

attcataacc aaataaagcc aacttgagta attttgctac attaaaaatt accaaaatta 7380

cttagatggc ctataagatt aagcatggtg ttttctaagc aagctttgaa aggggccttc 7440

catacttact taattgaata ttctgggata ttgaaaatta ttcagatact tgacaattat 7500

ttttggttac ctactccgca aactacaaag ttttaaggac tcaacaataa gttaatgaga 7560

cacagtgttt gctttcatgg agcttacagt ctggagggga caaaggctta aacaatactc 7620

atataattat atatgtgatc agtacaatga aggagctcag tggggtaaat aagcaggaac 7680

ctgaacttga tctgttccgg agggccacag aaggcttcct tgaggccttg agaaagtgat 7740

ttgcatctga gttctgaagg attgtaagag gtaactaggg aaaaagttga caggaagagg 7800

aaggggatcc agacaagaaa catttgcaaa gatcttgagg cataaatgag cttgagacat 7860

ctggagaaac tgaggaaaag tgagagagta ggcagggcct ggagccgcag agccattgct 7920

aaccatcctg tgtgagatat cccccattct gtagctttat tctcataacc ctgctcaatt 7980

ttctttataa cacttctcac agatttatat acgtgtttgt ttttgttatc tgtctctccc 8040

accagaccac agctccatga gagcaaggtc tttgcttacc aatatatcac tagcacttaa 8100

aactatgcct ggtacacagt aggttcttaa tatgtgttga atatagccat caaattgata 8160

ttggatataa ttcaatctga taagatattt tgagatatta aagagttttt aacttgatac 8220

cataaaaaaa aaaaaaaaaa 8240

<210> 11

<211> 809

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 11

Met Glu Ala Glu Gly Ser Ser Ala Pro Ala Arg Ala Gly Ser Gly Glu

1 5 10 15

Gly Ser Asp Ser Ala Gly Gly Ala Thr Leu Lys Ala Pro Lys His Leu

20 25 30

Trp Arg His Glu Gln His His Gln Tyr Pro Leu Arg Gln Pro Gln Phe

35 40 45

Arg Leu Leu His Pro His His His Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser

50 55 60

Pro Gln Pro Gln Pro Gln Cys Pro Leu Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro

65 70 75 80

Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Ala Ala Arg Gly Arg Tyr Ala

85 90 95

Ser Ser Gly Ala Thr Gly Arg Val Arg His Arg Gly Tyr Ser Asp Thr

100 105 110

Glu Arg Tyr Leu Tyr Cys Arg Ala Met Asp Arg Thr Ser Tyr Ala Val

115 120 125

Glu Thr Gly His Arg Pro Gly Leu Lys Lys Ser Arg Met Ser Trp Pro

130 135 140

Ser Ser Phe Gln Gly Leu Arg Arg Phe Asp Val Asp Asn Gly Thr Ser

145 150 155 160

Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr Ser Pro Gly Ser Gly Leu

165 170 175

Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln Arg Arg Glu Ser Phe Leu

180 185 190

Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser Pro Lys Ser Met Ser Arg

195 200 205

Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly Asp Asp Leu Ile Val Thr

210 215 220

Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg Thr Val Arg Asn Asn Phe

225 230 235 240

Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala Pro Ser Lys Arg Ser Pro

245 250 255

Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala Thr Ile Thr Glu Glu Ala

260 265 270

Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu

275 280 285

Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala

290 295 300

Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser

305 310 315 320

Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr

325 330 335

Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys

340 345 350

Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys

355 360 365

Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe

370 375 380

Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp

385 390 395 400

Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly

405 410 415

Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp

420 425 430

Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu

435 440 445

Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn

450 455 460

Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr

465 470 475 480

Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile

485 490 495

Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln

500 505 510

Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser

515 520 525

Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln

530 535 540

Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln

545 550 555 560

Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser

565 570 575

Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys

580 585 590

Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg

595 600 605

Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro

610 615 620

Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu

625 630 635 640

Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile

645 650 655

Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val

660 665 670

Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp

675 680 685

Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn

690 695 700

Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro

705 710 715 720

Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe

725 730 735

Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser

740 745 750

Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu

755 760 765

Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val

770 775 780

Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys

785 790 795 800

Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr

805

<210> 12

<211> 7979

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 12

cagcagcagg ctcagacctg cttccctgga catttccggg accgtgagcg agggaaccac 60

gttgccctgg attcttgcca gctgtacaaa gttgaccagg aaaatggctc agcagacaag 120

cccggacact ttaacagtac ctgaagtgga taatccgcat tgtccaaacc cgtggctgaa 180

cgaagacctt gtgaaatcct tgcgagaaaa cctgttgcag catgagaagt ccaagacagc 240

gaggaaatcg gtttctccca agctctctcc agtgatctct ccgagaaatt cccccaggct 300

tctgcgcaga atgcttctca gcagcaacat ccccaaacag cggcgtttca cggtggcaca 360

tacatgtttt gatgtggaca atggcacatc tgcgggacgg agtcccttgg atcccatgac 420

cagcccagga tccgggctaa ttctccaagc aaattttgtc cacagtcaac gacgggagtc 480

cttcctgtat cgatccgaca gcgattatga cctctctcca aagtctatgt cccggaactc 540

ctccattgcc agtgatatac acggagatga cttgattgtg actccatttg ctcaggtctt 600

ggccagtctg cgaactgtac gaaacaactt tgctgcatta actaatttgc aagatcgagc 660

acctagcaaa agatcaccca tgtgcaacca accatccatc aacaaagcca ccataacaga 720

ggaggcctac cagaaactgg ccagcgagac cctggaggag ctggactggt gtctggacca 780

gctagagacc ctacagacca ggcactccgt cagtgagatg gcctccaaca agtttaaaag 840

gatgcttaat cgggagctca cccatctctc tgaaatgagt cggtctggaa atcaagtgtc 900

agagtttata tcaaacacat tcttagataa gcaacatgaa gtggaaattc cttctccaac 960

tcagaaggaa aaggagaaaa agaaaagacc aatgtctcag atcagtggag tcaagaaatt 1020

gatgcacagc tctagtctga ctaattcaag tatcccaagg tttggagtta aaactgaaca 1080

agaagatgtc cttgccaagg aactagaaga tgtgaacaaa tggggtcttc atgttttcag 1140

aatagcagag ttgtctggta accggccctt gactgttatc atgcacacca tttttcagga 1200

acgggattta ttaaaaacat ttaaaattcc agtagatact ttaattacat atcttatgac 1260

tctcgaagac cattaccatg ctgatgtggc ctatcacaac aatatccatg ctgcagatgt 1320

tgtccagtct actcatgtgc tattatctac acctgctttg gaggctgtgt ttacagattt 1380

ggagattctt gcagcaattt ttgccagtgc aatacatgat gtagatcatc ctggtgtgtc 1440

caatcaattt ctgatcaata caaactctga acttgccttg atgtacaatg attcctcagt 1500

cttagagaac catcatttgg ctgtgggctt taaattgctt caggaagaaa actgtgacat 1560

tttccagaat ttgaccaaaa aacaaagaca atctttaagg aaaatggtca ttgacatcgt 1620

acttgcaaca gatatgtcaa aacacatgaa tctactggct gatttgaaga ctatggttga 1680

aactaagaaa gtgacaagct ctggagttct tcttcttgat aattattccg ataggattca 1740

ggttcttcag aatatggtgc actgtgcaga tctgagcaac ccaacaaagc ctctccagct 1800

gtaccgccag tggacggacc ggataatgga ggagttcttc cgccaaggag accgagagag 1860

ggaacgtggc atggagataa gccccatgtg tgacaagcac aatgcttccg tggaaaaatc 1920

acaggtgggc ttcatagact atattgttca tcccctctgg gagacatggg cagacctcgt 1980

ccaccctgac gcccaggata ttttggacac tttggaggac aatcgtgaat ggtaccagag 2040

cacaatccct cagagcccct ctcctgcacc tgatgaccca gaggagggcc ggcagggtca 2100

aactgagaaa ttccagtttg aactaacttt agaggaagat ggtgagtcag acacggaaaa 2160

ggacagtggc agtcaagtgg aagaagacac tagctgcagt gactccaaga ctctttgtac 2220

tcaagactca gagtctactg aaattcccct tgatgaacag gttgaagagg aggcagtagg 2280

ggaagaagag gaaagccagc ctgaagcctg tgtcatagat gatcgttctc ctgacacgta 2340

acagtgcaaa aactttcatg cctttttttt ttttaagtag aaaaattgtt tccaaagtgc 2400

atgtcacatg ccacaaccac ggtcacacct cactgtcatc tgccaggacg tttgttgaac 2460

aaaactgacc ttgactactc agtccagcgc tcaggaatat cgtaaccagt tttttcacct 2520

ccatgtcatc cgagcaaggt ggacatcttc acgaacagcg tttttaacaa gatttcagct 2580

tggtagagct gacaaagcag ataaaatcta ctccaaatta ttttcaagag agtgtgactc 2640

atcaggcagc ccaaaagttt attggacttg gggtttctat tcctttttat ttgtttgcaa 2700

tattttcaga agaaaggcat tgcacagagt gaacttaatg gacgaagcaa caaatatgtc 2760

aagaacagga catagcacga atctgttacc agtaggagga ggatgagcca cagaaattgc 2820

ataattttct aatttcaagt cttcctgata catgactgaa tagtgtggtt cagtgagctg 2880

cactgacctc tacattttgt atgatatgta aaacagattt tttgtagagc ttacttttat 2940

tattaaatgt attgaggtat tatatttaaa aaaaactatg ttcagaactt catctgccac 3000

tggttatttt tttctaagga gtaacttgca agttttcagt acaaatctgt gctacactgg 3060

ataaaaatct aatttatgaa ttttacttgc accttatagt tcatagcaat taactgattt 3120

gtagtgattc attgtttgtt ttatatacca atgacttcca tattttaaaa gagaaaaaca 3180

actttatgtt gcaggaaacc ctttttgtaa gtctttatta tttactttgc attttgtttc 3240

actctttcca gataagcaga gttgctcttc accagtgttt ttcttcatgt gcaaagtgac 3300

tatttgttct ataatacttt tatgtgtgtt atatcaaatg tgtcttaagc ttcatgcaaa 3360

ctcagtcatc agttcgtgtt gtctgaagca agtgggagat atataaatac ccagtagcta 3420

aaatggtcag tcttttttag atgttttcct acttagtatc tcctaataac gttttgctgt 3480

gtcactagat gttcatttca caagtgcatg tctttctaat aatccacaca tttcatgctc 3540

taataatcca cacatttcat gctcattttt attgttttta cagccagtta tagtaagaaa 3600

aaggtttttc cccttgtgct gctttataat ttagcgtgtg tctgaacctt atccatgttt 3660

gctagatgag gtcttgtcaa atatatcact accattgtca ccggtgaaaa gaaacaggta 3720

gttaagttag ggttaacatt catttcaacc acgaggttgt atatcatgac tagcttttac 3780

tcttggttta cagagaaaag ttaaacagcc aactaggcag tttttaagaa tattaacaat 3840

atattaacaa acaccaatac aactaatcct atttggtttt aatgatttca ccatgggatt 3900

aagaactata tcaggaacat ccctgagaaa cggttttaag tgtagcaact actcttcctt 3960

aatggacagc cacataacgt gtaggaagtc ctttatcact tatcctcgat ccataagcat 4020

atcttgcaga ggggaactac ttctttaaac acatggaggg aaagaagatg atgccactgg 4080

caccagaggg ttagtactgt gatgcatcct aaaatattta ttatattggt aaaaattctg 4140

gttaaataaa aaattagaga tcactcttgg ctgatttcag caccaggaac tgtattacag 4200

ttttagagat taattcctag tgtttacctg attatagcag ttggcatcat ggggcattta 4260

attctgactt tatccccacg tcagccttaa taaagtcttc tttaccttct ctatgaagac 4320

tttaaagccc aaataatcat ttttcacatt gatattcaag aattgagata gatagaagcc 4380

aaagtgggta tctgacaagt ggaaaatcaa acgtttaaga agaattacaa ctctgaaaag 4440

catttatatg tggaacttct caaggagcct cctggggact ggaaagtaag tcatcagcca 4500

ggcaaatgac tcatgctgaa gagagtcccc atttcagtcc cctgagatct agctgatgct 4560

tagatccttt gaaataaaaa ttatgtcttt ataactctga tcttttacat aaagcagaag 4620

aggaatcaac tagttaattg caaggtttct actctgtttc ctctgtaaag atcagatggt 4680

aatctttcaa ataagaaaaa aataaagacg tatgtttgac caagtagttt cacaagaata 4740

tttgggaact tgtttctttt aattttattt gtccctgagt gaagtctaga aagaaaggta 4800

aagagtctag agtttattcc tctttccaaa acattctcat tcctctcctc cctacactta 4860

gtatttcccc cacagagtgc ctagaatctt aataatgaat aaaataaaaa gcagcaatat 4920

gtcattaaca aatccagacc tgaaagggta aagggtttat aactgcacta ataaagagag 4980

gctctttttt tttcttccag tttgttggtt tttaatggta ccgtgttgta aagataccca 5040

ctaatggaca atcaaattgc agaaaaggct caatatccaa gagacaggga ctaatgcact 5100

gtacaatctg cttatccttg cccttctctc ttgccaaagt gtgcttcaga aatatatact 5160

gctttaaaaa agaataaaag aatatccttt tacaagtggc tttacatttc ctaaaatgcc 5220

ataagaaaat gcaatatctg ggtactgtat ggggaaaaaa atgtccaagt ttgtgtaaaa 5280

ccagtgcatt tcagcttgca agttactgaa cacaataatg ctgttttaat tttgttttat 5340

atcagttaaa attcacaata atgtagatag aacaaattac agacaaggaa agaaaaaact 5400

tgaatgaaat ggattttaca gaaagcttta tgataatttt tgaatgcatt atttattttt 5460

tgtgccatgc attttttttc tcaccaaatg accttacctg taatacagtc ttgtttgtct 5520

gtttacaacc atgtatttat tgcaatgtac atactgtaat gttaattgta aattatctgt 5580

tcttattaaa acatcatccc atgatgggat ggtgttgata tatttggaaa ctcttggtga 5640

gagaatgaat ggtgtgtata catactctgt acatttttct tttctcctgt aatatagtct 5700

tgtcacctta gagcttgttt atggaagatt caagaaaact ataaaatact taaagatata 5760

taaatttaaa aaaacatagc tgcaggtctt tggtcccagg gctgtgcctt aactttaacc 5820

aatattttct tctgttttgc tgcatttgaa aggtaacagt ggagctaggg ctgggcattt 5880

tacatccagg cttttaattg attagaattc tgccaatagg tggattttac aaaaccacag 5940

acaacctctg aaagattctg agaccctttt gagacagaag ctcttaagta cttcttgcca 6000

gggagcagca ctgcatgtgt gatggttgtt tgccatctgt tgatcaggaa ctacttcagc 6060

tacttgcatt tgattatttc cttttttttt ttttttaact cggaaacaca actggggaaa 6120

tatattcttt cccagtgatt ataaacaatc tttttctttt ttttaagtcc ttttggcttc 6180

tagagctcat aggaaaatgg acttgatttg aaattggagc cagagtttac tcgtgttggt 6240

tatctattca tcagcttcct gacatgttaa gagaatacat taaagagaaa atactgtttt 6300

ttaatcctaa aatttttctt ccactaagat aaaccaaatg tccttacata tatgtaaacc 6360

catctattta aacgcaaagg tgggttgatg tcagtttaca tagcagaaag cattcactat 6420

cctctaagat ttgtttctgc aaaactttca ttgctttaga attttaaaat ttcaccttgt 6480

acaatggcca gcccctaaag caggaaacat ttataatgga ttatatggaa acatcctccc 6540

agtacttgcc cagcccttga atcatgtggc ttttcagtga aaggaaagat tctttttcta 6600

ggaaaaatga gcctatttta ttttatttta ttttattttt tgacacaaac tgtagatttt 6660

agcagccctg gcccaaagga atttgattac ttttgtttta aacagtacaa aggggacact 6720

ataattacaa aaacatcctt aactgatttg agttgttttt atttctttgg atatattttc 6780

agagtggtaa attgtgtgtg agaattacaa atgattattc ttttagtggt ttcttagcct 6840

ctcttacagc ccacggggat agtactgtac atcaatacct tcatatgaaa tttttatatg 6900

caatgaaaat aaaagcatgg gttgattctg cctatttatg actcaatctt ttacaaataa 6960

aagattattc attttaaatt atagttcaat cagcatgtct cttaggatac tgaacgtggt 7020

tgaaatgaaa ggatagtgac atcataagtt agtactgata ttcataacca aataaagcca 7080

acttgagtaa ttttgctaca ttaaaaatta ccaaaattac ttagatggcc tataagatta 7140

agcatggtgt tttctaagca agctttgaaa ggggccttcc atacttactt aattgaatat 7200

tctgggatat tgaaaattat tcagatactt gacaattatt tttggttacc tactccgcaa 7260

actacaaagt tttaaggact caacaataag ttaatgagac acagtgtttg ctttcatgga 7320

gcttacagtc tggaggggac aaaggcttaa acaatactca tataattata tatgtgatca 7380

gtacaatgaa ggagctcagt ggggtaaata agcaggaacc tgaacttgat ctgttccgga 7440

gggccacaga aggcttcctt gaggccttga gaaagtgatt tgcatctgag ttctgaagga 7500

ttgtaagagg taactaggga aaaagttgac aggaagagga aggggatcca gacaagaaac 7560

atttgcaaag atcttgaggc ataaatgagc ttgagacatc tggagaaact gaggaaaagt 7620

gagagagtag gcagggcctg gagccgcaga gccattgcta accatcctgt gtgagatatc 7680

ccccattctg tagctttatt ctcataaccc tgctcaattt tctttataac acttctcaca 7740

gatttatata cgtgtttgtt tttgttatct gtctctccca ccagaccaca gctccatgag 7800

agcaaggtct ttgcttacca atatatcact agcacttaaa actatgcctg gtacacagta 7860

ggttcttaat atgtgttgaa tatagccatc aaattgatat tggatataat tcaatctgat 7920

aagatatttt gagatattaa agagttttta acttgatacc ataaaaaaaa aaaaaaaaa 7979

<210> 13

<211> 745

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 13

Met Ala Gln Gln Thr Ser Pro Asp Thr Leu Thr Val Pro Glu Val Asp

1 5 10 15

Asn Pro His Cys Pro Asn Pro Trp Leu Asn Glu Asp Leu Val Lys Ser

20 25 30

Leu Arg Glu Asn Leu Leu Gln His Glu Lys Ser Lys Thr Ala Arg Lys

35 40 45

Ser Val Ser Pro Lys Leu Ser Pro Val Ile Ser Pro Arg Asn Ser Pro

50 55 60

Arg Leu Leu Arg Arg Met Leu Leu Ser Ser Asn Ile Pro Lys Gln Arg

65 70 75 80

Arg Phe Thr Val Ala His Thr Cys Phe Asp Val Asp Asn Gly Thr Ser

85 90 95

Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr Ser Pro Gly Ser Gly Leu

100 105 110

Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln Arg Arg Glu Ser Phe Leu

115 120 125

Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser Pro Lys Ser Met Ser Arg

130 135 140

Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly Asp Asp Leu Ile Val Thr

145 150 155 160

Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg Thr Val Arg Asn Asn Phe

165 170 175

Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala Pro Ser Lys Arg Ser Pro

180 185 190

Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala Thr Ile Thr Glu Glu Ala

195 200 205

Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu

210 215 220

Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala

225 230 235 240

Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser

245 250 255

Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr

260 265 270

Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys

275 280 285

Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys

290 295 300

Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe

305 310 315 320

Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp

325 330 335

Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly

340 345 350

Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp

355 360 365

Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu

370 375 380

Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn

385 390 395 400

Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr

405 410 415

Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile

420 425 430

Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln

435 440 445

Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser

450 455 460

Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln

465 470 475 480

Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln

485 490 495

Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser

500 505 510

Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys

515 520 525

Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg

530 535 540

Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro

545 550 555 560

Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu

565 570 575

Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile

580 585 590

Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val

595 600 605

Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp

610 615 620

Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn

625 630 635 640

Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro

645 650 655

Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe

660 665 670

Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser

675 680 685

Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu

690 695 700

Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val

705 710 715 720

Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys

725 730 735

Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr

740 745

<210> 14

<211> 19

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D5_прямой праймер

<400> 14

gcttctcagc agcaacatc 19

<210> 15

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D5_обратный праймер

<400> 15

tgccattgtc cacatcaaaa 20

<210> 16

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D5 зонд

<400> 16

acagcggcgt ttcacggtgg caca 24

<210> 17

<211> 7591

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 17

agttccttat ttggtagctt ttgacaggac tagcctttct tgcaactaag catcttgaca 60

tacattattc attaagccct ggagctcggg agagaaagat gcagaccctt agatctttag 120

atattccttt atcacgtgga ttttctttat tcagaatagt tgctgaattt tgtgccattc 180

tggagtctta caaatggcat gtattcgatg ggaagacggc tggatgggat ttaatgcgag 240

gctttcttat gtatacttaa ttaccaaaaa tctttaaaaa ctcatactct gcgtggcttg 300

tggaggttgt taaagtgtcg agattttgaa gctaaataca ttttagagct tactatatat 360

atacatatat atatatatac atataatcaa tcaaaaatgc ctgaagcaaa ctatttactg 420

tcagtgtctt ggggctacat aaagtttaaa aggatgctta atcgggagct cacccatctc 480

tctgaaatga gtcggtctgg aaatcaagtg tcagagttta tatcaaacac attcttagat 540

aagcaacatg aagtggaaat tccttctcca actcagaagg aaaaggagaa aaagaaaaga 600

ccaatgtctc agatcagtgg agtcaagaaa ttgatgcaca gctctagtct gactaattca 660

agtatcccaa ggtttggagt taaaactgaa caagaagatg tccttgccaa ggaactagaa 720

gatgtgaaca aatggggtct tcatgttttc agaatagcag agttgtctgg taaccggccc 780

ttgactgtta tcatgcacac catttttcag gaacgggatt tattaaaaac atttaaaatt 840

ccagtagata ctttaattac atatcttatg actctcgaag accattacca tgctgatgtg 900

gcctatcaca acaatatcca tgctgcagat gttgtccagt ctactcatgt gctattatct 960

acacctgctt tggaggctgt gtttacagat ttggagattc ttgcagcaat ttttgccagt 1020

gcaatacatg atgtagatca tcctggtgtg tccaatcaat ttctgatcaa tacaaactct 1080

gaacttgcct tgatgtacaa tgattcctca gtcttagaga accatcattt ggctgtgggc 1140

tttaaattgc ttcaggaaga aaactgtgac attttccaga atttgaccaa aaaacaaaga 1200

caatctttaa ggaaaatggt cattgacatc gtacttgcaa cagatatgtc aaaacacatg 1260

aatctactgg ctgatttgaa gactatggtt gaaactaaga aagtgacaag ctctggagtt 1320

cttcttcttg ataattattc cgataggatt caggttcttc agaatatggt gcactgtgca 1380

gatctgagca acccaacaaa gcctctccag ctgtaccgcc agtggacgga ccggataatg 1440

gaggagttct tccgccaagg agaccgagag agggaacgtg gcatggagat aagccccatg 1500

tgtgacaagc acaatgcttc cgtggaaaaa tcacaggtgg gcttcataga ctatattgtt 1560

catcccctct gggagacatg ggcagacctc gtccaccctg acgcccagga tattttggac 1620

actttggagg acaatcgtga atggtaccag agcacaatcc ctcagagccc ctctcctgca 1680

cctgatgacc cagaggaggg ccggcagggt caaactgaga aattccagtt tgaactaact 1740

ttagaggaag atggtgagtc agacacggaa aaggacagtg gcagtcaagt ggaagaagac 1800

actagctgca gtgactccaa gactctttgt actcaagact cagagtctac tgaaattccc 1860

cttgatgaac aggttgaaga ggaggcagta ggggaagaag aggaaagcca gcctgaagcc 1920

tgtgtcatag atgatcgttc tcctgacacg taacagtgca aaaactttca tgcctttttt 1980

ttttttaagt agaaaaattg tttccaaagt gcatgtcaca tgccacaacc acggtcacac 2040

ctcactgtca tctgccagga cgtttgttga acaaaactga ccttgactac tcagtccagc 2100

gctcaggaat atcgtaacca gttttttcac ctccatgtca tccgagcaag gtggacatct 2160

tcacgaacag cgtttttaac aagatttcag cttggtagag ctgacaaagc agataaaatc 2220

tactccaaat tattttcaag agagtgtgac tcatcaggca gcccaaaagt ttattggact 2280

tggggtttct attccttttt atttgtttgc aatattttca gaagaaaggc attgcacaga 2340

gtgaacttaa tggacgaagc aacaaatatg tcaagaacag gacatagcac gaatctgtta 2400

ccagtaggag gaggatgagc cacagaaatt gcataatttt ctaatttcaa gtcttcctga 2460

tacatgactg aatagtgtgg ttcagtgagc tgcactgacc tctacatttt gtatgatatg 2520

taaaacagat tttttgtaga gcttactttt attattaaat gtattgaggt attatattta 2580

aaaaaaacta tgttcagaac ttcatctgcc actggttatt tttttctaag gagtaacttg 2640

caagttttca gtacaaatct gtgctacact ggataaaaat ctaatttatg aattttactt 2700

gcaccttata gttcatagca attaactgat ttgtagtgat tcattgtttg ttttatatac 2760

caatgacttc catattttaa aagagaaaaa caactttatg ttgcaggaaa ccctttttgt 2820

aagtctttat tatttacttt gcattttgtt tcactctttc cagataagca gagttgctct 2880

tcaccagtgt ttttcttcat gtgcaaagtg actatttgtt ctataatact tttatgtgtg 2940

ttatatcaaa tgtgtcttaa gcttcatgca aactcagtca tcagttcgtg ttgtctgaag 3000

caagtgggag atatataaat acccagtagc taaaatggtc agtctttttt agatgttttc 3060

ctacttagta tctcctaata acgttttgct gtgtcactag atgttcattt cacaagtgca 3120

tgtctttcta ataatccaca catttcatgc tctaataatc cacacatttc atgctcattt 3180

ttattgtttt tacagccagt tatagtaaga aaaaggtttt tccccttgtg ctgctttata 3240

atttagcgtg tgtctgaacc ttatccatgt ttgctagatg aggtcttgtc aaatatatca 3300

ctaccattgt caccggtgaa aagaaacagg tagttaagtt agggttaaca ttcatttcaa 3360

ccacgaggtt gtatatcatg actagctttt actcttggtt tacagagaaa agttaaacag 3420

ccaactaggc agtttttaag aatattaaca atatattaac aaacaccaat acaactaatc 3480

ctatttggtt ttaatgattt caccatggga ttaagaacta tatcaggaac atccctgaga 3540

aacggtttta agtgtagcaa ctactcttcc ttaatggaca gccacataac gtgtaggaag 3600

tcctttatca cttatcctcg atccataagc atatcttgca gaggggaact acttctttaa 3660

acacatggag ggaaagaaga tgatgccact ggcaccagag ggttagtact gtgatgcatc 3720

ctaaaatatt tattatattg gtaaaaattc tggttaaata aaaaattaga gatcactctt 3780

ggctgatttc agcaccagga actgtattac agttttagag attaattcct agtgtttacc 3840

tgattatagc agttggcatc atggggcatt taattctgac tttatcccca cgtcagcctt 3900

aataaagtct tctttacctt ctctatgaag actttaaagc ccaaataatc atttttcaca 3960

ttgatattca agaattgaga tagatagaag ccaaagtggg tatctgacaa gtggaaaatc 4020

aaacgtttaa gaagaattac aactctgaaa agcatttata tgtggaactt ctcaaggagc 4080

ctcctgggga ctggaaagta agtcatcagc caggcaaatg actcatgctg aagagagtcc 4140

ccatttcagt cccctgagat ctagctgatg cttagatcct ttgaaataaa aattatgtct 4200

ttataactct gatcttttac ataaagcaga agaggaatca actagttaat tgcaaggttt 4260

ctactctgtt tcctctgtaa agatcagatg gtaatctttc aaataagaaa aaaataaaga 4320

cgtatgtttg accaagtagt ttcacaagaa tatttgggaa cttgtttctt ttaattttat 4380

ttgtccctga gtgaagtcta gaaagaaagg taaagagtct agagtttatt cctctttcca 4440

aaacattctc attcctctcc tccctacact tagtatttcc cccacagagt gcctagaatc 4500

ttaataatga ataaaataaa aagcagcaat atgtcattaa caaatccaga cctgaaaggg 4560

taaagggttt ataactgcac taataaagag aggctctttt tttttcttcc agtttgttgg 4620

tttttaatgg taccgtgttg taaagatacc cactaatgga caatcaaatt gcagaaaagg 4680

ctcaatatcc aagagacagg gactaatgca ctgtacaatc tgcttatcct tgcccttctc 4740

tcttgccaaa gtgtgcttca gaaatatata ctgctttaaa aaagaataaa agaatatcct 4800

tttacaagtg gctttacatt tcctaaaatg ccataagaaa atgcaatatc tgggtactgt 4860

atggggaaaa aaatgtccaa gtttgtgtaa aaccagtgca tttcagcttg caagttactg 4920

aacacaataa tgctgtttta attttgtttt atatcagtta aaattcacaa taatgtagat 4980

agaacaaatt acagacaagg aaagaaaaaa cttgaatgaa atggatttta cagaaagctt 5040

tatgataatt tttgaatgca ttatttattt tttgtgccat gcattttttt tctcaccaaa 5100

tgaccttacc tgtaatacag tcttgtttgt ctgtttacaa ccatgtattt attgcaatgt 5160

acatactgta atgttaattg taaattatct gttcttatta aaacatcatc ccatgatggg 5220

atggtgttga tatatttgga aactcttggt gagagaatga atggtgtgta tacatactct 5280

gtacattttt cttttctcct gtaatatagt cttgtcacct tagagcttgt ttatggaaga 5340

ttcaagaaaa ctataaaata cttaaagata tataaattta aaaaaacata gctgcaggtc 5400

tttggtccca gggctgtgcc ttaactttaa ccaatatttt cttctgtttt gctgcatttg 5460

aaaggtaaca gtggagctag ggctgggcat tttacatcca ggcttttaat tgattagaat 5520

tctgccaata ggtggatttt acaaaaccac agacaacctc tgaaagattc tgagaccctt 5580

ttgagacaga agctcttaag tacttcttgc cagggagcag cactgcatgt gtgatggttg 5640

tttgccatct gttgatcagg aactacttca gctacttgca tttgattatt tccttttttt 5700

ttttttttaa ctcggaaaca caactgggga aatatattct ttcccagtga ttataaacaa 5760

tctttttctt ttttttaagt ccttttggct tctagagctc ataggaaaat ggacttgatt 5820

tgaaattgga gccagagttt actcgtgttg gttatctatt catcagcttc ctgacatgtt 5880

aagagaatac attaaagaga aaatactgtt ttttaatcct aaaatttttc ttccactaag 5940

ataaaccaaa tgtccttaca tatatgtaaa cccatctatt taaacgcaaa ggtgggttga 6000

tgtcagttta catagcagaa agcattcact atcctctaag atttgtttct gcaaaacttt 6060

cattgcttta gaattttaaa atttcacctt gtacaatggc cagcccctaa agcaggaaac 6120

atttataatg gattatatgg aaacatcctc ccagtacttg cccagccctt gaatcatgtg 6180

gcttttcagt gaaaggaaag attctttttc taggaaaaat gagcctattt tattttattt 6240

tattttattt tttgacacaa actgtagatt ttagcagccc tggcccaaag gaatttgatt 6300

acttttgttt taaacagtac aaaggggaca ctataattac aaaaacatcc ttaactgatt 6360

tgagttgttt ttatttcttt ggatatattt tcagagtggt aaattgtgtg tgagaattac 6420

aaatgattat tcttttagtg gtttcttagc ctctcttaca gcccacgggg atagtactgt 6480

acatcaatac cttcatatga aatttttata tgcaatgaaa ataaaagcat gggttgattc 6540

tgcctattta tgactcaatc ttttacaaat aaaagattat tcattttaaa ttatagttca 6600

atcagcatgt ctcttaggat actgaacgtg gttgaaatga aaggatagtg acatcataag 6660

ttagtactga tattcataac caaataaagc caacttgagt aattttgcta cattaaaaat 6720

taccaaaatt acttagatgg cctataagat taagcatggt gttttctaag caagctttga 6780

aaggggcctt ccatacttac ttaattgaat attctgggat attgaaaatt attcagatac 6840

ttgacaatta tttttggtta cctactccgc aaactacaaa gttttaagga ctcaacaata 6900

agttaatgag acacagtgtt tgctttcatg gagcttacag tctggagggg acaaaggctt 6960

aaacaatact catataatta tatatgtgat cagtacaatg aaggagctca gtggggtaaa 7020

taagcaggaa cctgaacttg atctgttccg gagggccaca gaaggcttcc ttgaggcctt 7080

gagaaagtga tttgcatctg agttctgaag gattgtaaga ggtaactagg gaaaaagttg 7140

acaggaagag gaaggggatc cagacaagaa acatttgcaa agatcttgag gcataaatga 7200

gcttgagaca tctggagaaa ctgaggaaaa gtgagagagt aggcagggcc tggagccgca 7260

gagccattgc taaccatcct gtgtgagata tcccccattc tgtagcttta ttctcataac 7320

cctgctcaat tttctttata acacttctca cagatttata tacgtgtttg tttttgttat 7380

ctgtctctcc caccagacca cagctccatg agagcaaggt ctttgcttac caatatatca 7440

ctagcactta aaactatgcc tggtacacag taggttctta atatgtgttg aatatagcca 7500

tcaaattgat attggatata attcaatctg ataagatatt ttgagatatt aaagagtttt 7560

taacttgata ccataaaaaa aaaaaaaaaa a 7591

<210> 18

<211> 518

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 18

Met Pro Glu Ala Asn Tyr Leu Leu Ser Val Ser Trp Gly Tyr Ile Lys

1 5 10 15

Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser Glu Met Ser

20 25 30

Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr Phe Leu Asp

35 40 45

Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys Glu Lys Glu

50 55 60

Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys Lys Leu Met

65 70 75 80

His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe Gly Val Lys

85 90 95

Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp Val Asn Lys

100 105 110

Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly Asn Arg Pro

115 120 125

Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp Leu Leu Lys

130 135 140

Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu Met Thr Leu

145 150 155 160

Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn Ile His Ala

165 170 175

Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala Leu

180 185 190

Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile Phe Ala Ser

195 200 205

Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln Phe Leu Ile

210 215 220

Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser Ser Val Leu

225 230 235 240

Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln Glu Glu Asn

245 250 255

Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln Ser Leu Arg

260 265 270

Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser Lys His Met

275 280 285

Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys Lys Val Thr

290 295 300

Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg Ile Gln Val

305 310 315 320

Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro Thr Lys Pro

325 330 335

Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu Glu Phe Phe

340 345 350

Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile Ser Pro Met

355 360 365

Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val Gly Phe Ile

370 375 380

Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp Leu Val His

385 390 395 400

Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn Arg Glu Trp

405 410 415

Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro Asp Asp Pro

420 425 430

Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe Glu Leu Thr

435 440 445

Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser Gly Ser Gln

450 455 460

Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu Cys Thr Gln

465 470 475 480

Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val Glu Glu Glu

485 490 495

Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys Val Ile Asp

500 505 510

Asp Arg Ser Pro Asp Thr

515

<210> 19

<211> 8130

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 19

agattatagc ccagcgtacg agaagcacga gtcctatagt tggcgtaccc tgaggcctgc 60

cagttcctgc cttaatgcat atgtagtcgt aattgagttc tgacacggcc ttggatgttt 120

ctgtcctaaa tagctgacat tgcatcttca agactgtcat tccagttggc ttttgagtgg 180

atacgtgcag tgagatcatt gacactggaa acactagttc ccattttaat tacttaaaac 240

accacgatga aaagaaatac ctgtgatttg ctttctcgga gcaaaagtgc ctctgaggaa 300

acactacatt ccagtaatga agaggaagac cctttccgcg gaatggaacc ctatcttgtc 360

cggagacttt catgtcgcaa tattcagctt ccccctctcg ccttcagaca gttggaacaa 420

gctgacttga aaagtgaatc agagaacatt caacgaccaa ccagcctccc cctgaagatt 480

ctgccgctga ttgctatcac ttctgcagaa tccagtggtt ttgatgtgga caatggcaca 540

tctgcgggac ggagtccctt ggatcccatg accagcccag gatccgggct aattctccaa 600

gcaaattttg tccacagtca acgacgggag tccttcctgt atcgatccga cagcgattat 660

gacctctctc caaagtctat gtcccggaac tcctccattg ccagtgatat acacggagat 720

gacttgattg tgactccatt tgctcaggtc ttggccagtc tgcgaactgt acgaaacaac 780

tttgctgcat taactaattt gcaagatcga gcacctagca aaagatcacc catgtgcaac 840

caaccatcca tcaacaaagc caccataaca gaggaggcct accagaaact ggccagcgag 900

accctggagg agctggactg gtgtctggac cagctagaga ccctacagac caggcactcc 960

gtcagtgaga tggcctccaa caagtttaaa aggatgctta atcgggagct cacccatctc 1020

tctgaaatga gtcggtctgg aaatcaagtg tcagagttta tatcaaacac attcttagat 1080

aagcaacatg aagtggaaat tccttctcca actcagaagg aaaaggagaa aaagaaaaga 1140

ccaatgtctc agatcagtgg agtcaagaaa ttgatgcaca gctctagtct gactaattca 1200

agtatcccaa ggtttggagt taaaactgaa caagaagatg tccttgccaa ggaactagaa 1260

gatgtgaaca aatggggtct tcatgttttc agaatagcag agttgtctgg taaccggccc 1320

ttgactgtta tcatgcacac catttttcag gaacgggatt tattaaaaac atttaaaatt 1380

ccagtagata ctttaattac atatcttatg actctcgaag accattacca tgctgatgtg 1440

gcctatcaca acaatatcca tgctgcagat gttgtccagt ctactcatgt gctattatct 1500

acacctgctt tggaggctgt gtttacagat ttggagattc ttgcagcaat ttttgccagt 1560

gcaatacatg atgtagatca tcctggtgtg tccaatcaat ttctgatcaa tacaaactct 1620

gaacttgcct tgatgtacaa tgattcctca gtcttagaga accatcattt ggctgtgggc 1680

tttaaattgc ttcaggaaga aaactgtgac attttccaga atttgaccaa aaaacaaaga 1740

caatctttaa ggaaaatggt cattgacatc gtacttgcaa cagatatgtc aaaacacatg 1800

aatctactgg ctgatttgaa gactatggtt gaaactaaga aagtgacaag ctctggagtt 1860

cttcttcttg ataattattc cgataggatt caggttcttc agaatatggt gcactgtgca 1920

gatctgagca acccaacaaa gcctctccag ctgtaccgcc agtggacgga ccggataatg 1980

gaggagttct tccgccaagg agaccgagag agggaacgtg gcatggagat aagccccatg 2040

tgtgacaagc acaatgcttc cgtggaaaaa tcacaggtgg gcttcataga ctatattgtt 2100

catcccctct gggagacatg ggcagacctc gtccaccctg acgcccagga tattttggac 2160

actttggagg acaatcgtga atggtaccag agcacaatcc ctcagagccc ctctcctgca 2220

cctgatgacc cagaggaggg ccggcagggt caaactgaga aattccagtt tgaactaact 2280

ttagaggaag atggtgagtc agacacggaa aaggacagtg gcagtcaagt ggaagaagac 2340

actagctgca gtgactccaa gactctttgt actcaagact cagagtctac tgaaattccc 2400

cttgatgaac aggttgaaga ggaggcagta ggggaagaag aggaaagcca gcctgaagcc 2460

tgtgtcatag atgatcgttc tcctgacacg taacagtgca aaaactttca tgcctttttt 2520

ttttttaagt agaaaaattg tttccaaagt gcatgtcaca tgccacaacc acggtcacac 2580

ctcactgtca tctgccagga cgtttgttga acaaaactga ccttgactac tcagtccagc 2640

gctcaggaat atcgtaacca gttttttcac ctccatgtca tccgagcaag gtggacatct 2700

tcacgaacag cgtttttaac aagatttcag cttggtagag ctgacaaagc agataaaatc 2760

tactccaaat tattttcaag agagtgtgac tcatcaggca gcccaaaagt ttattggact 2820

tggggtttct attccttttt atttgtttgc aatattttca gaagaaaggc attgcacaga 2880

gtgaacttaa tggacgaagc aacaaatatg tcaagaacag gacatagcac gaatctgtta 2940

ccagtaggag gaggatgagc cacagaaatt gcataatttt ctaatttcaa gtcttcctga 3000

tacatgactg aatagtgtgg ttcagtgagc tgcactgacc tctacatttt gtatgatatg 3060

taaaacagat tttttgtaga gcttactttt attattaaat gtattgaggt attatattta 3120

aaaaaaacta tgttcagaac ttcatctgcc actggttatt tttttctaag gagtaacttg 3180

caagttttca gtacaaatct gtgctacact ggataaaaat ctaatttatg aattttactt 3240

gcaccttata gttcatagca attaactgat ttgtagtgat tcattgtttg ttttatatac 3300

caatgacttc catattttaa aagagaaaaa caactttatg ttgcaggaaa ccctttttgt 3360

aagtctttat tatttacttt gcattttgtt tcactctttc cagataagca gagttgctct 3420

tcaccagtgt ttttcttcat gtgcaaagtg actatttgtt ctataatact tttatgtgtg 3480

ttatatcaaa tgtgtcttaa gcttcatgca aactcagtca tcagttcgtg ttgtctgaag 3540

caagtgggag atatataaat acccagtagc taaaatggtc agtctttttt agatgttttc 3600

ctacttagta tctcctaata acgttttgct gtgtcactag atgttcattt cacaagtgca 3660

tgtctttcta ataatccaca catttcatgc tctaataatc cacacatttc atgctcattt 3720

ttattgtttt tacagccagt tatagtaaga aaaaggtttt tccccttgtg ctgctttata 3780

atttagcgtg tgtctgaacc ttatccatgt ttgctagatg aggtcttgtc aaatatatca 3840

ctaccattgt caccggtgaa aagaaacagg tagttaagtt agggttaaca ttcatttcaa 3900

ccacgaggtt gtatatcatg actagctttt actcttggtt tacagagaaa agttaaacag 3960

ccaactaggc agtttttaag aatattaaca atatattaac aaacaccaat acaactaatc 4020

ctatttggtt ttaatgattt caccatggga ttaagaacta tatcaggaac atccctgaga 4080

aacggtttta agtgtagcaa ctactcttcc ttaatggaca gccacataac gtgtaggaag 4140

tcctttatca cttatcctcg atccataagc atatcttgca gaggggaact acttctttaa 4200

acacatggag ggaaagaaga tgatgccact ggcaccagag ggttagtact gtgatgcatc 4260

ctaaaatatt tattatattg gtaaaaattc tggttaaata aaaaattaga gatcactctt 4320

ggctgatttc agcaccagga actgtattac agttttagag attaattcct agtgtttacc 4380

tgattatagc agttggcatc atggggcatt taattctgac tttatcccca cgtcagcctt 4440

aataaagtct tctttacctt ctctatgaag actttaaagc ccaaataatc atttttcaca 4500

ttgatattca agaattgaga tagatagaag ccaaagtggg tatctgacaa gtggaaaatc 4560

aaacgtttaa gaagaattac aactctgaaa agcatttata tgtggaactt ctcaaggagc 4620

ctcctgggga ctggaaagta agtcatcagc caggcaaatg actcatgctg aagagagtcc 4680

ccatttcagt cccctgagat ctagctgatg cttagatcct ttgaaataaa aattatgtct 4740

ttataactct gatcttttac ataaagcaga agaggaatca actagttaat tgcaaggttt 4800

ctactctgtt tcctctgtaa agatcagatg gtaatctttc aaataagaaa aaaataaaga 4860

cgtatgtttg accaagtagt ttcacaagaa tatttgggaa cttgtttctt ttaattttat 4920

ttgtccctga gtgaagtcta gaaagaaagg taaagagtct agagtttatt cctctttcca 4980

aaacattctc attcctctcc tccctacact tagtatttcc cccacagagt gcctagaatc 5040

ttaataatga ataaaataaa aagcagcaat atgtcattaa caaatccaga cctgaaaggg 5100

taaagggttt ataactgcac taataaagag aggctctttt tttttcttcc agtttgttgg 5160

tttttaatgg taccgtgttg taaagatacc cactaatgga caatcaaatt gcagaaaagg 5220

ctcaatatcc aagagacagg gactaatgca ctgtacaatc tgcttatcct tgcccttctc 5280

tcttgccaaa gtgtgcttca gaaatatata ctgctttaaa aaagaataaa agaatatcct 5340

tttacaagtg gctttacatt tcctaaaatg ccataagaaa atgcaatatc tgggtactgt 5400

atggggaaaa aaatgtccaa gtttgtgtaa aaccagtgca tttcagcttg caagttactg 5460

aacacaataa tgctgtttta attttgtttt atatcagtta aaattcacaa taatgtagat 5520

agaacaaatt acagacaagg aaagaaaaaa cttgaatgaa atggatttta cagaaagctt 5580

tatgataatt tttgaatgca ttatttattt tttgtgccat gcattttttt tctcaccaaa 5640

tgaccttacc tgtaatacag tcttgtttgt ctgtttacaa ccatgtattt attgcaatgt 5700

acatactgta atgttaattg taaattatct gttcttatta aaacatcatc ccatgatggg 5760

atggtgttga tatatttgga aactcttggt gagagaatga atggtgtgta tacatactct 5820

gtacattttt cttttctcct gtaatatagt cttgtcacct tagagcttgt ttatggaaga 5880

ttcaagaaaa ctataaaata cttaaagata tataaattta aaaaaacata gctgcaggtc 5940

tttggtccca gggctgtgcc ttaactttaa ccaatatttt cttctgtttt gctgcatttg 6000

aaaggtaaca gtggagctag ggctgggcat tttacatcca ggcttttaat tgattagaat 6060

tctgccaata ggtggatttt acaaaaccac agacaacctc tgaaagattc tgagaccctt 6120

ttgagacaga agctcttaag tacttcttgc cagggagcag cactgcatgt gtgatggttg 6180

tttgccatct gttgatcagg aactacttca gctacttgca tttgattatt tccttttttt 6240

ttttttttaa ctcggaaaca caactgggga aatatattct ttcccagtga ttataaacaa 6300

tctttttctt ttttttaagt ccttttggct tctagagctc ataggaaaat ggacttgatt 6360

tgaaattgga gccagagttt actcgtgttg gttatctatt catcagcttc ctgacatgtt 6420

aagagaatac attaaagaga aaatactgtt ttttaatcct aaaatttttc ttccactaag 6480

ataaaccaaa tgtccttaca tatatgtaaa cccatctatt taaacgcaaa ggtgggttga 6540

tgtcagttta catagcagaa agcattcact atcctctaag atttgtttct gcaaaacttt 6600

cattgcttta gaattttaaa atttcacctt gtacaatggc cagcccctaa agcaggaaac 6660

atttataatg gattatatgg aaacatcctc ccagtacttg cccagccctt gaatcatgtg 6720

gcttttcagt gaaaggaaag attctttttc taggaaaaat gagcctattt tattttattt 6780

tattttattt tttgacacaa actgtagatt ttagcagccc tggcccaaag gaatttgatt 6840

acttttgttt taaacagtac aaaggggaca ctataattac aaaaacatcc ttaactgatt 6900

tgagttgttt ttatttcttt ggatatattt tcagagtggt aaattgtgtg tgagaattac 6960

aaatgattat tcttttagtg gtttcttagc ctctcttaca gcccacgggg atagtactgt 7020

acatcaatac cttcatatga aatttttata tgcaatgaaa ataaaagcat gggttgattc 7080

tgcctattta tgactcaatc ttttacaaat aaaagattat tcattttaaa ttatagttca 7140

atcagcatgt ctcttaggat actgaacgtg gttgaaatga aaggatagtg acatcataag 7200

ttagtactga tattcataac caaataaagc caacttgagt aattttgcta cattaaaaat 7260

taccaaaatt acttagatgg cctataagat taagcatggt gttttctaag caagctttga 7320

aaggggcctt ccatacttac ttaattgaat attctgggat attgaaaatt attcagatac 7380

ttgacaatta tttttggtta cctactccgc aaactacaaa gttttaagga ctcaacaata 7440

agttaatgag acacagtgtt tgctttcatg gagcttacag tctggagggg acaaaggctt 7500

aaacaatact catataatta tatatgtgat cagtacaatg aaggagctca gtggggtaaa 7560

taagcaggaa cctgaacttg atctgttccg gagggccaca gaaggcttcc ttgaggcctt 7620

gagaaagtga tttgcatctg agttctgaag gattgtaaga ggtaactagg gaaaaagttg 7680

acaggaagag gaaggggatc cagacaagaa acatttgcaa agatcttgag gcataaatga 7740

gcttgagaca tctggagaaa ctgaggaaaa gtgagagagt aggcagggcc tggagccgca 7800

gagccattgc taaccatcct gtgtgagata tcccccattc tgtagcttta ttctcataac 7860

cctgctcaat tttctttata acacttctca cagatttata tacgtgtttg tttttgttat 7920

ctgtctctcc caccagacca cagctccatg agagcaaggt ctttgcttac caatatatca 7980

ctagcactta aaactatgcc tggtacacag taggttctta atatgtgttg aatatagcca 8040

tcaaattgat attggatata attcaatctg ataagatatt ttgagatatt aaagagtttt 8100

taacttgata ccataaaaaa aaaaaaaaaa 8130

<210> 20

<211> 748

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 20

Met Lys Arg Asn Thr Cys Asp Leu Leu Ser Arg Ser Lys Ser Ala Ser

1 5 10 15

Glu Glu Thr Leu His Ser Ser Asn Glu Glu Glu Asp Pro Phe Arg Gly

20 25 30

Met Glu Pro Tyr Leu Val Arg Arg Leu Ser Cys Arg Asn Ile Gln Leu

35 40 45

Pro Pro Leu Ala Phe Arg Gln Leu Glu Gln Ala Asp Leu Lys Ser Glu

50 55 60

Ser Glu Asn Ile Gln Arg Pro Thr Ser Leu Pro Leu Lys Ile Leu Pro

65 70 75 80

Leu Ile Ala Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ser Gly Phe Asp Val Asp Asn

85 90 95

Gly Thr Ser Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr Ser Pro Gly

100 105 110

Ser Gly Leu Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln Arg Arg Glu

115 120 125

Ser Phe Leu Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser Pro Lys Ser

130 135 140

Met Ser Arg Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly Asp Asp Leu

145 150 155 160

Ile Val Thr Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg Thr Val Arg

165 170 175

Asn Asn Phe Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala Pro Ser Lys

180 185 190

Arg Ser Pro Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala Thr Ile Thr

195 200 205

Glu Glu Ala Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp

210 215 220

Trp Cys Leu Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser

225 230 235 240

Glu Met Ala Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr

245 250 255

His Leu Ser Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile

260 265 270

Ser Asn Thr Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro

275 280 285

Thr Gln Lys Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser

290 295 300

Gly Val Lys Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile

305 310 315 320

Pro Arg Phe Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu

325 330 335

Leu Glu Asp Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu

340 345 350

Leu Ser Gly Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln

355 360 365

Glu Arg Asp Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile

370 375 380

Thr Tyr Leu Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr

385 390 395 400

His Asn Asn Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu

405 410 415

Leu Ser Thr Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu

420 425 430

Ala Ala Ile Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val

435 440 445

Ser Asn Gln Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr

450 455 460

Asn Asp Ser Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys

465 470 475 480

Leu Leu Gln Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys

485 490 495

Gln Arg Gln Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr

500 505 510

Asp Met Ser Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val

515 520 525

Glu Thr Lys Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr

530 535 540

Ser Asp Arg Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu

545 550 555 560

Ser Asn Pro Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg

565 570 575

Ile Met Glu Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly

580 585 590

Met Glu Ile Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys

595 600 605

Ser Gln Val Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr

610 615 620

Trp Ala Asp Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu

625 630 635 640

Glu Asp Asn Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser

645 650 655

Pro Ala Pro Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys

660 665 670

Phe Gln Phe Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu

675 680 685

Lys Asp Ser Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser

690 695 700

Lys Thr Leu Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp

705 710 715 720

Glu Gln Val Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro

725 730 735

Glu Ala Cys Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr

740 745

<210> 21

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D7_прямой праймер

<400> 21

gaacattcaa cgaccaacca 20

<210> 22

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D7_обратный праймер

<400> 22

tgccattgtc cacatcaaaa 20

<210> 23

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D7 зонд

<400> 23

ctgccgctga ttgctatcac ttctgca 27

<210> 24

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D7 прямой праймер 2

<400> 24

cgctgattgc tatcacttct gc 22

<210> 25

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D7 обратный праймер

<400> 25

gtcgttgact gtggacaaaa tttg 24

<210> 26

<211> 34

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> PDE4D7 зонд 2

<400> 26

ttcccttgga tcccatgacc agcccataag ggaa 34

<210> 27

<211> 8130

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 27