ПРЕДПОСЫЛКИ
Злокачественные опухоли представляют собой класс заболеваний, при которых группа клеток демонстрирует неконтролируемый рост, инвазию и иногда метастазирование. Эти три озлокачествленных свойства злокачественных опухолей отличают их от доброкачественных опухолей, которые самоограничены и не проявляют инвазию или метастазирование. Злокачественная опухоль предстательной железы (PCa) является наиболее часто встречающимся не кожным злокачественным новообразованием у мужчин. Из-за старения популяций, ожидают значительное увеличение заболеваемости PCa в будущем. Стандартное диагностирование посредством определения в крови уровней специфического антигена простаты (PSA), цифрового ректального исследования (DRE) и трансректального ультразвукового исследования (TRUS) ведет к значимой гипердиагностике не злокачественных, доброкачественных состояний предстательной железы. Приблизительно из 1 миллиона биопсий предстательной железы, ежегодно выполняемых в США, чтобы найти приблизительно 250000 новых случаев, приблизительно 75% выполняют без необходимости, что влечет как существенные осложнения (такие как уросепсис, кровотечение и задержка мочи) у пациентов, так и большие расходы. По меньшей мере 4 из 100 мужчин с отрицательной биопсией вероятно будут госпитализированы из-за побочных эффектов и 9 из 10000 пациентов, прошедших биопсию, имеют риск смерти от процедуры, используемой в настоящее время.
Из приблизительно 250000 случаев PCa, вновь обнаруживаемых в год в США, приблизительно 200000 изначально получают характеристику локализованного заболевания, т.е. злокачественной опухоли, находящейся в органе предстательная железа. Это состояние, до определенной степени, можно излечить с помощью подходов первичного лечения, таких как лучевая терапия или частичное или полное удаление предстательной железы посредством хирургической операции (простатэктомии). Однако этим вмешательствам обычно сопутствуют серьезные побочные эффекты, в частности, недержание мочи и/или эректильная дисфункция в качестве очень частых последствий простатэктомии. Кроме того, обычно применяемое лечение локализованной PCa является дорогостоящим.
Среди приблизительно 200000 мужчин в США с клинически локализованным заболеванием в диагнозе, вплоть до 50% имеют злокачественную опухоль с очень низким или низким риском. Соответственно, в National Comprehensive Cancer Network (NCCN) в последнее время пересмотрены их руководства по лечению PCa для того, чтобы расширить активное наблюдение (AS) в качестве мягкой и удобной лечебной альтернативы для пациентов с таким заболеванием с низким риском. Направление подходящих пациентов на AS привело к значительному усовершенствованию качества жизни у таких пациентов по сравнению с мужчинами, прошедшими первичное лечение, и сообщалось, что 5-летние расходы на AS значительно ниже.
Кроме того, в случае выбора хирургической операции (в сравнении с AS) в качестве лечения, предпочтительного для данного пациента, значимое преимущество состоит в стратификации по объему хирургической операции в соответствии с потенциальной агрессивностью опухоли пациента. Например, оперативные приемы с сохранением нервных окончаний могут быть в более общем случае применять для мужчин с заболеванием с предсказанным низким риском, чтобы минимизировать нежелательные эффекты, связанные с потенцией, при радикальной простатэктомии. Аналогичным образом, в соответствии с самыми последними Prostate Cancer Guidelines от European Association Of Urology (EAU), расширенное удаление лимфатических узлов рекомендовано в случае злокачественной опухоли с предсказанным высоким риском, несмотря на тот факт, что процедура сложна, требует времени и ассоциирована с более высокими частотами осложнений по сравнению с более ограниченными процедурами. Следовательно, хотя и показано, что при менее ограниченном удалении лимфатических узлов, пропускают приблизительно 50% метастазов в лимфатических узлах, тактика лечения для мужчин с локализованной злокачественной опухолью предстательной железы выиграет от высокоточных дохирургических предсказаний потенциала агрессивности индивидуальной опухоли, чтобы обеспечивать оптимальный уход для каждого пациента.
Побочные эффекты активных терапевтических возможностей (например, хирургической операции, лучевой терапии и т.д.) можно избегать или снижать посредством выбора активного наблюдения в качестве лечебной альтернативы. Однако поскольку опухоль не лечат при активном наблюдении, вероятность прогрессирования заболевания должна быть самой минимальной, чтобы гарантировать, что множество пациентов, которые могут прогрессировать при активном наблюдении, все еще имеют хороший шанс на излечение посредством переключения с активного наблюдения на активное вмешательство. Традиционные способы определения риска прогрессирования заболевания у пациента склонны относить многих пациентов к категориям активного вмешательства вместо AS, тем самым снижая качество жизни пациента и излишне подвергая таких пациентов нежелательным побочным эффектам инвазивного лечения. Таким образом, желательны новые способы стратификации риска пациента и предоставления пациентам усовершенствованных рекомендаций в отношении того, выбирать ли активное наблюдение или активное вмешательство.
В WO 2010/131194 A1 раскрыт способ диагностирования или обнаружения озлокачествленной, гормоночувствительной злокачественной опухоли предстательной железы посредством определения уровня экспрессии варианта PDE4D7 фосфодиэстеразы 4D. В документе также раскрыто использование PDE-Index для того, чтобы эффективно проводить различия между доброкачественными и озлокачествленными заболеваниями, где экспрессию PDE4D7 нормализуют по PDE4D5 в качестве внутреннего контроля.
В WO 2010/131195 A1 описан способ диагностирования гормонорезистентной злокачественной опухоли предстательной железы в сравнении с гормоночувствительной посредством определения уровня экспрессии PDE4D7. Уровень экспрессии PDE4D7 нормализуют по эталонному гену, которым может быть PDE4D5.
В Henderson, et al., «The cAMP phosphodiesterase-4D7 (PDE4D7) is downregulated in androgen-independent prostate cancer cells and mediates proliferation by compartmentalizing cAMP at the plasma membrane of VCaP prostate cancer cells», British Journal of Cancer, 110(5) 1278-1287 (2014), приведены доказательства того, что PDE4D7 сильно экспрессирована в клетках андрогенчувствительной злокачественной опухоли предстательной железы, но при этом находится под значительной понижающей регуляцией в клетках андрогеннечувствительной злокачественной опухоли предстательной железы, что указывает на потенциальное применение в качестве биомаркера для андрогеннечувствительной злокачественной опухоли предстательной железы, а также терапевтических возможностей.
В EP 1471153 A2 описан анализ транскрипционной активности для определения биологической активности соединения посредством анализа его способности модулировать экспрессию гена. Среди возможных целевых продуктов экспрессии имеют место изоферменты PDE4D. Соединения, идентифицированные в описанном скрининге, могут представлять собой антитела, которые имеют терапевтическое значение при лечении злокачественной опухоли молочной железы.
В WO 2010/059838 A2 описаны ингибиторы фосфодиэстеразы 4 (PDE4) и их использование в лечении и предотвращении инсульта, инфаркта миокарда, сердечнососудистых воспалительных заболеваний и нарушений, а также нарушений центральной нервной системы.
В WO 2004/090157 A1 раскрыто использование PDE4D, в частности PDE4D5 или PDE4D7, в качестве мишени для идентификации соединений, которые можно использовать для лечения атеросклероза или для лечения рестеноза.
В US 2003/220273 A1 описаны антисмысловые соединения, композиции и способы модулирования экспрессии фосфодиэстеразы 4D, а также использование этих соединений для лечения заболеваний, ассоциированных с экспрессией фосфодиэстеразы 4D.
В Merkle, et al., «Roles of cAMP and cAMP-зависим* бел*к kinase in the progression of prostate cancer: Cross-talk with the androgen receptor», Cellular Signalling, 23(3) 507-515, (2011) описано исследование ролей цАМФ и цАМФ-зависимой протеинкиназы при прогрессировании злокачественной опухоли предстательной железы. В контексте этого исследования установлено, что экспрессия PDE4D увеличена в тканях злокачественных опухолей.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
Настоящее изобретение относится к способам диагностирования, мониторинга или прогнозирования злокачественной опухоли предстательной железы или статуса прогрессирования злокачественной опухоли предстательной железы. В частности, это относится к способу стратификации риска для выбора терапии у пациента со злокачественной опухолью предстательной железы на основе уровня экспрессии варианта PDE4D, такого как PDE4D7, и к диагностическому набору, используемому для того, чтобы определять оценку риска для мужчин со злокачественной опухолью предстательной железы. PDE4D7 относится к фосфодиэстеразе циклических нуклеотидов (PDE) из семейства циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) (4), изоформе D, варианту 7.
В соответствии с одним аспектом образцового варианта осуществления, способ стратификации риска включает определение нормализованного профиля экспрессии гена для одного маркерного гена, состоящего из варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7), по отношению к набору эталонных генов, выбранных из группы, состоящей из гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP), а также их сочетаний. Способ дополнительно включает определение прогностической оценки риска с использованием оценочной функции, на основе нормализованного профиля экспрессии гена, оценочную функцию выводят из профилей экспрессии генов для биологических образцов, взятых у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы. Способ дополнительно включает определение комбинированной прогностической оценки риска на основе прогностической оценки риска и второго определения риска, которое представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN).
В соответствии с другим аспектом, диагностический набор содержит по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения уровня экспрессии по меньшей мере одного варианта фосфодиэстеразы 4D (PDE4D), по меньшей мере одного варианта PDE4D, включая PDE4D7, и по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения уровня экспрессии гена для по меньшей мере одного эталонного гена. Набор содержит инструкции для вычисления оценки риска на основе определяемых уровней экспрессии. Инструкции хранят в компьютерном программном продукте, который при исполнении с помощью компьютера выполняет способ, который включает определение нормализованного профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7), по отношению к по меньшей мере одному эталонному гену, и определение прогностической оценки риска с использованием оценочной функции, на основе нормализованного профиля экспрессии гена, и определение комбинированной прогностической оценки риска на основе прогностической оценки риска и второго определения риска, которое представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN).
В соответствии с другим аспектом, способ предоставления терапевтической рекомендации для субъекта со злокачественной опухолью предстательной железы включает определение профиля экспрессии гена в биологическом образце от субъекта. Профиль экспрессии гена включает уровень экспрессии для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7). Профиль экспрессии гена нормализуют с использованием уровня экспрессии для по меньшей мере одного эталонного гена, выбранного из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP. Прогностическую оценку риска определяют для субъекта на основе нормализованного профиля экспрессии гена. Субъекта относят к группе риска PDE4D7 на основе прогностической оценки риска. Способ также включает определение комбинированной прогностической оценки риска для субъекта на основе прогностической оценки риска и второго определения риска, которое представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN). Субъекта относят к группе риска на основе комбинированной прогностической оценки риска. Терапевтическую рекомендацию предоставляют для субъекта на основе группы риска.
В соответствии с другим аспектом, компьютерный программный продукт включает постоянную среду для регистрации, хранящую инструкции, которые при исполнении на компьютере управляют компьютером для того, чтобы осуществлять способ, включающий вычисление нормализованного профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7), по отношению к набору эталонных генов, выбранному из группы, состоящей из: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP), а также их сочетаний; и вычисление прогностической оценки риска для субъекта на основе профиля экспрессии гена с использованием оценочной функции. Оценочную функцию можно выводить из профилей экспрессии генов для биологических образцов, полученных у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы. Способ дополнительно включает вычисление комбинированной прогностической оценки риска на основе прогностической оценки риска и второго определения риска, которое представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN).
Как указано выше, второе определение риска представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN), например, одно или несколько из очень низкого риска (VLR), низкого риска (LR), благоприятного промежуточного риска (FIR), неблагоприятного промежуточного риска (UIR) и высокого риска (HR). Комбинированную прогностическую оценку риска можно определять с использованием функции регрессии, получаемой у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы.
В некоторых вариантах осуществления по любым указанным выше аспектам, профиль экспрессии гена превращают в по меньшей мере одну оценку риска PDE для злокачественной опухоли предстательной железы (прогностическая оценка риска), указывающую на присутствие и/или отсутствие злокачественной опухоли предстательной железы и/или статус прогрессирования злокачественной опухоли предстательной железы. Введение оценки риска PDE обеспечивает хорошее предсказание при диагностировании или прогнозировании злокачественной опухоли предстательной железы. В частности, оценку риска PDE4D7 можно использовать для того, чтобы стратифицировать субъекты со злокачественной опухолью предстательной железы на основе измеряемого уровня этой оценки риска, которая указывает, помещать ли таких субъектов под активное наблюдение (AS) вместо активного лечения (например, хирургической операции, лучевой терапии и т.д.), которое является стандартом лечения для этих субъектов.
Профиль экспрессии гена дополнительно может содержать уровень экспрессии для одного или нескольких других вариантов PDE4D. Например, другой вариант(ы) PDE4D может включать одно или несколько из PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D8 и PDE4D9.
Профиль экспрессии гена может представлять собой профиль экспрессии гена биологического образца от индивидуума, такого как биоптат из предстательной железы индивидуума.
Профиль экспрессии гена может представлять собой нормализованный профиль экспрессии гена, который получают посредством нормализации уровня экспрессии по меньшей мере варианта PDE4D7 по экспрессии по меньшей мере одного эталонного гена. Способ может включать определение уровня экспрессии одного или нескольких эталонных генов в образце перед нормализацией уровня экспрессии по меньшей мере варианта PDE4D7.
Эталонный ген(ы) можно выбирать из гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP), а также их сочетаний, таких как по меньшей мере два или по меньшей мере три или все из них.
Прогностическая оценка риска может быть основана на нормализованном профиле экспрессии гена, который содержит уровень экспрессии для PDE4D7.
Уровень экспрессии гена можно определять посредством обнаружения экспрессии мРНК, используя один или несколько праймеров и/или зондов и/или один или несколько наборов из них.
Уровень экспрессии гена можно определять посредством способа на основе амплификации и/или микрочипового анализа и/или РНК секвенирования.
Определение профиля экспрессии гена может включать выполнение количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-qPCR) с РНК, экстрагированной из биологического образца. В других вариантах осуществления уровень экспрессии гена определяют посредством РНК секвенирования, стандартной ПЦР (с использованием, например, анализа конечной точки посредством электрофореза в геле) или мультиплексной ПЦР.
В случае RT-qPCR, определение профиля экспрессии гена может включать определение значения порогового цикла (Ct) для PDE4D7 и каждого из по меньшей мере одного эталонного гена.
Определение прогностической оценки риска может включать нормализацию значения PDE4D7 с использованием значения каждого из по меньшей мере одного эталонного гена. Определение прогностической оценки риска может включать вычисление оценки риска в виде функции, такой как линейная функция, от нормализованного значения. Функцию можно выводить на основе исходов пациентов после получения биологического образца.
ПЦР можно осуществлять с использованием по меньшей мере одного праймера и/или зонда для измерения эталонного гена, выбранного из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP.
Прогностическая оценка риска для субъекта может представлять собой значение в предварительно определяемом диапазоне.
Способ дополнительно может включать отнесение субъекта к одной из предварительно определяемого набора групп риска, на основе комбинированной прогностической оценки риска. Могут иметь место по меньшей мере две или по меньшей мере три группы риска на основе комбинированной прогностической оценки риска.
Способ дополнительно может включать по меньшей мере одно из: a) предложения терапии для субъекта на основе присваиваемой группы риска, где по меньшей мере две из групп риска ассоциированы с различными потенциальными терапиями; b) вычисления предсказания риска прогрессирования заболевания у субъекта до или после хирургической операции на предстательной железе; и c) вычисления предсказания ответа на терапию для субъекта до или после хирургической операции на предстательной железе. В случае предложения терапии, предлагаемые терапии можно выбирать из: a) по меньшей мере частичной простатэктомии; b) активной терапии, выбранной из лечения излучением, гормональной терапии, химиотерапии и их сочетания; и c) наблюдения без выполнения a) или b). Предлагаемые терапии могут включать: хирургическую операцию на предстательной железе, удаление предстательной железы, химиотерапию, лучевую терапию, гормональную терапию и ограниченное или расширенное удаление лимфатических узлов или их сочетание.
Предлагаемая терапия на основе присваиваемой группы риска может отличаться от предлагаемой терапии на основе только второго определения риска.
Способ и набор могут включать чип нуклеиновых кислот, который содержит один или несколько олигонуклеотидных зондов, комплементарных и гибридизуемых с кодирующей последовательностью по меньшей мере одного варианта PDE4D, выбранного из PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D7, PDE4D8 и PDE4D9, и который дополнительно может содержать один или несколько олигонуклеотидных зондов, комплементарных и гибридизуемых с по меньшей мере одним из эталонных генов, выбранных из TBP, HPRT1, PUM1 и TUBA1B, для определения оценки риска как определено в настоящем описании.
Другой аспект образцового варианта осуществления относится к использованию варианта PDE4D7 и эталонных генов для стратификации риска.
Дополнительный аспект изобретения относится к реализованному на компьютере способу диагностирования, мониторинга или прогнозирования злокачественной опухоли предстательной железы или стратификации риск прогрессирования злокачественной опухоли предстательной железы, который включает стадии способа, как определено в настоящем описании.
Дополнительный аспект изобретения относится к компьютерному программному продукту, содержащему постоянную среду для регистрации, с инструкциями, хранимыми в ней, которые при исполнении на компьютере управляют компьютером для того, чтобы осуществлять способ, который включает вычисление нормализованного профиля экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) по отношению к набору эталонных генов, выбранных из группы, состоящей из: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP), а также их сочетаний, и вычисление прогностической оценки риска для субъекта на основе профиля экспрессии гена с использованием оценочной функции, которую получают из профилей экспрессии генов для биологических образцов, полученных у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы. Способ дополнительно может включать вычисление комбинированной прогностической оценки риска на основе прогностической оценки риска и второго определения риска.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
На фиг. 1 представлена блок-схема, иллюстрирующая способ стратификации риска для выбора терапии у пациента со злокачественной опухолью предстательной железы;
на фиг. 2 представлен нормализованный профиль экспрессии гена PDE4D7 (слева) и преобразование оценки риска PDE4D7 (справа);
на фиг. 3 представлен лесовидная диаграмма для отношений рисков (HR) и 95% доверительных областей (95% CI) после многомерного регрессионного анализа Кокса для полной когорты пациентов (включающей 503 пациента), где тестируемая клиническая конечная точка представляет собой время до биохимического рецидива (BCR) после хирургической операции;
на фиг. 4 представлен анализ Каплана-Мейера для времени до рецидива специфического антигена простаты (PSA) после простатэктомии для групп оценки риска PDE4D7. Также представлено число пациентов (т.е. мужчин) с риском для каждого 20-месячного временного интервала на группу оценки риска и сравнение отношений рисков по группам;
на фиг. 5 представлена лесовидная диаграмма для отношений рисков (HR) и 95% доверительных областей (95% CI) после многомерного регрессионного анализа Кокса полной когорты пациентов (503 пациента), где тестируемая клиническая конечная точка представляет собой время до биохимического рецидива (BCR) после хирургической операции;
на фиг. 6 представлена лесовидная диаграмма для отношений рисков и 95% доверительных областей (95% CI) для нескольких клинических конечных точек после хирургической операции, включая биохимический рецидив, спасительную лучевую терапию, спасительную терапию с андрогенной депривацией, клинический рецидив, специфическую смертность от злокачественной опухоли предстательной железы и общую смертность;
на фиг. 7 представлен график 5-летнего риска биохимического рецидива (BCR) в группах риска NCCN в сравнении с группами оценки риска PDE4D7;
на фиг. 8 представлен график 10-летнего риска клинического рецидива (CR) в группах риска NCCN в сравнении с группами оценки риска PDE4D7;
на фиг. 9 представлен график 10-летнего риска специфической смертности от злокачественной опухоли предстательной железы (PCSM) в группах риска NCCN в сравнении с группами оценки риска PDE4D7.
На фиг. 10 представлен график 10-летнего риска общей смертности (OM) в группах риска NCCN в сравнении с группами оценки риска PDE4D7.
Фиг. 11 иллюстрирует матрицу прогрессирования риска в клинических группах риска NCCN в сравнении с группами риска PDE4D7.
на фиг. 12 представлен анализ Каплана-Мейера для индекса Глисона биоптатов для биохимического рецидива в группе благоприятного промежуточного риска NCCN (128 пациентов). Индекс Глисона биоптатов s делят на группы степени по Глисону 3+3 (нижняя линия на фиг.) и 3+4 (верхняя линия на фиг.). Также проиллюстрировано попарное сравнение групп риска по отношениям рисков (HR).
На фиг. 13 представлен анализ Каплана-Мейера для групп оценки риска PDE4D7 для биохимического рецидива в группе благоприятного промежуточного риска NCCN (128 пациентов). Также проиллюстрировано попарное сравнение групп риска по отношениям рисков (HR).
На фиг. 14 представлен анализ Каплана-Мейера для индекса Глисона биоптатов для биохимического рецидива в группе неблагоприятного промежуточного и высокого риска NCCN (164 пациента). Индекс Глисона биоптатов делят на группы степени по Глисону 3+3, 3+4, 4+3 и ≥4+4. Также проиллюстрировано попарное сравнение групп риска по отношениям рисков (HR).
На фиг. 15 представлен анализ Каплана-Мейера для групп оценки риска PDE4D7 для биохимического рецидива в группе неблагоприятного промежуточного и высокого риска NCCN (164 пациента). Также проиллюстрировано попарное сравнение групп риска по отношениям рисков (HR).
На фиг. 16 представлен калибровочный график логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 для того, чтобы предсказывать 5-летний биохимический рецидив после хирургической операции на основе таблицы сопряженности после определения критерия Хосмера-Лемешоу для когорты из 449 пациентов с полным 5-летним наблюдением.
На фиг. 17 представлен калибровочный график логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 для того, чтобы предсказывать 5-летний биохимический рецидив после хирургической операции на основе таблицы сопряженности после определения критерия Хосмера-Лемешоу для когорты из 449 пациентов с полным 5-летним наблюдением.
На фиг. 18 представлен ROC анализ 2-летнего биохимического рецидива после хирургической операции (BCR) логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 в когорте пациентов (449 пациентов) с полным 5-летним наблюдением.
На фиг. 19 представлен ROC анализ 5-летнего биохимического рецидива после хирургической операции (BCR) логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 в когорте пациентов (449 пациентов) с полным 5-летним наблюдением.
На фиг. 20 представлен ROC анализ 10-летнего биохимического рецидива после хирургической операции (BCR) логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 в когорте пациентов (379 пациентов) с полным 10-летним наблюдением.
На фиг. 21 представлен анализ предсказанного риска по группе NCCN в качестве функции оценки риска PDE4D7, который обнаруживал гетерогенное распределение 5-летнего риска прогрессирования (BCR) даже в группах наименьшего клинического риска NCCN.
На фиг. 22 представлены результаты анализа Каплана-Мейера выживаемости без биохимического рецидива (BCR) в субкогорте пациентов с 5-летним полным наблюдением (449 пациентов). Четыре категории риска определяли на основе вычисленной по логистической регрессионной модели 5-летней вероятности p перенести биохимический рецидив: группа риска 1 (от 0 до <0,1; 139 пациентов); группа риска 2 (от 0,1 до <0,25; 170 пациентов); группа риска 3 (от 0,25 до <0,5; 112 пациентов); группа риска 4 (от 0,5 до 1,0; 28 пациентов).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Аспекты образцового варианта осуществления относятся к идентификации и использованию профилей экспрессии генов, сигнатур или паттернов биомаркерных генов, представляющих интерес (также обозначаемых как маркерные гены или GOI (гены, представляющие интерес)), с клинической важностью для злокачественной опухоли предстательной железы. В частности, в способе используют генетический экспрессионный анализ нуклеиновых кислот, таких как транскрипты биомаркерных генов, которые получают из биологических образцов. Анализ экспрессии этих маркерных генов можно использовать для предоставления оценки риска PDE4D7 для злокачественной опухоли предстательной железы для стратификации риска достижения определенных клинических исходов пациентом.
Более конкретно, описан способ определения оценки риска на основе профиля экспрессии PDE4D7, который, как обнаружено, предоставляет уникальное средство для стратификации риска развития у пациента конкретных конечных точек до и после хирургической операции, включая биохимический рецидив, клинический рецидив, специфическую смертность от злокачественной опухоли предстательной железы и общую смертность. Оценка риска PDE предоставляет очень полезный параметр для персонализированной медицины в отношении диагностики, прогнозирования и лечения пациентов со злокачественной опухолью предстательной железы. Оценку риска PDE можно использовать отдельно или в комбинации с другими средствами и способами, которые предоставляют информацию о персональном состоянии заболевания или стадии заболевании пациента.
Врачи и/или патологи могут благоприятно использовать оценку риска PDE для того, чтобы подтверждать результаты, получаемые в других способах диагностирования, идентификации и прогнозирования пациентов. Способы и средства, предусмотренные изобретением, следовательно, помогают делать более точный диагноз, прогноз и т.д., чтобы находить наилучшее лечение для пациента и избегать не необходимой хирургической операции или другого лечения, которые опасны из-за побочных эффектов, и ведут к сокращению расходов.
Как используют в настоящем описании, термин «вариант транскрипта PDE4D» или «изоформа PDE4D» или «вариант PDE4D» относится к любому из сплайсированных вариантов PDE4D фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. гена фосфодиэстеразы человека PDE4D, например, PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D7, PDE4D8 и PDE4D9.
Термины «маркер», «маркерный ген», «GOI» или «маркерный вариант PDE4D» можно использовать взаимозаменяемо, и они относятся к гену, генетической единице или последовательности (нуклеотидной последовательности или аминокислотной или белковой последовательности), как определено выше в настоящем описании, уровень экспрессии который возрастает или снижается в клетках или тканях озлокачествленных или доброкачественных опухолей предстательной железы или образце в любого типа, включая такие клетки или ткани или их части или фрагменты, при сравнении с контрольным уровнем, при сравнении с экспрессией в нормальной ткани. Термин также относится к любому продукту экспрессии указанной генетической единицы или последовательности, в частности, к мРНК транскрипту варианта PDE4D, полипептиду или белку, кодируемому транскриптом варианта PDE4D или его фрагментами, а также к их гомологичным производным, как раскрыто в настоящем описании выше. В частности, термины «маркер», «маркерный ген», «GOI» или «маркерный вариант PDE4D» относятся к любому из сплайсированных вариантов PDE4D фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D, например, PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D7, PDE4D8 и PDE4D9.
Термин «фосфодиэстераза 4D1» или «PDE4D1» относится к сплайсированному варианту 1 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D1, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001197222.1, в частности, к нуклеотидной последовательности как приведено в SEQ ID № 1, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D1, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 2, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательность NCBI с номером доступа NP_001184151.1, кодирующей полипептид PDE4D1. Термин «фосфодиэстераза 4D1» или «PDE4D1» также относится к ампликону, который можно создавать с помощью пары праймеров PDE1D1D2_прям. (SEQ ID № 3) и PDE1D1D2_обратн. (SEQ ID № 4) и можно обнаруживать с помощью зонда SEQ ID № 5.
Термин «фосфодиэстераза 4D2» или «PDE4D2» относится к сплайсированному варианту 2 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D2, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001197221.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 6, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D2, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 7, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_001184150.1, кодирующей полипептид PDE4D2.
Термин «фосфодиэстераза 4D3» или «PDE4D3» относится к сплайсированному варианту 3 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D3, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_006203.4, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 8, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D3, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 9, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_006194.2, кодирующей полипептид PDE4D3.
Термин «фосфодиэстераза 4D4» или «PDE4D4» относится к сплайсированному варианту 4 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D4, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001104631.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 10, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D4, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 11, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_001098101.1, кодирующей полипептид PDE4D4.
Термин «фосфодиэстераза 4D5» или «PDE4D5» относится к сплайсированному варианту 5 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D5, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001197218.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 12, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D5, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 13, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_001184147.1, кодирующей полипептид PDE4D5. Термин «фосфодиэстераза 4D5» или «PDE4D5» также относится к ампликону, который можно создавать с помощью пары праймеров PDE4D5_прям. (SEQ ID № 14) и PDE4D5_обратн. (SEQ ID № 15) и можно обнаруживать с помощью зонда SEQ ID № 16.
Термин «фосфодиэстераза 4D6» или «PDE4D6» относится к сплайсированному варианту 6 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D6, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001197223.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 17, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D6, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 18, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_001184152.1, кодирующей полипептид PDE4D6.
Термин «фосфодиэстераза 4D7» или «PDE4D7» относится к сплайсированному варианту 7 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D7, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001165899.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 19, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D7, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 20, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_001159371.1, кодирующей полипептид PDE4D7. Термин «фосфодиэстераза 4D7» или «PDE4D7» также относится к ампликону, который можно создавать с помощью пары праймеров PDE4D7_прям. (SEQ ID № 21) и PDE4D7_обратн. (SEQ ID № 22) и можно обнаруживать с помощью зонда SEQ ID № 23.
Полипептид PDE4D7 также можно обнаруживать с использованием пары праймеров PDE4D7-2_прям. (SEQ ID № 24) и PDE4D7_обратн. (SEQ ID № 25) и можно обнаруживать с помощью зонда SEQ ID № 26.
Термин «фосфодиэстераза 4D8» или «PDE4D8» относится к сплайсированному варианту 8 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D8, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001197219.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 27, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D8, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 28, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_001184148.1, кодирующей полипептид PDE4D8.
Термин «фосфодиэстераза 4D9» или «PDE4D9» относится к сплайсированному варианту 9 фосфодиэстеразы человека PDE4D, т.е. к гену фосфодиэстеразы человека PDE4D9, например, к последовательности, как определено в эталонной последовательности NCBI: NM_001197220.1, в частности, к нуклеотидной последовательности, как приведено в SEQ ID № 29, которая соответствует последовательности вышеуказанной эталонной последовательности NCBI транскрипта PDE4D9, а также относится к соответствующей аминокислотной последовательности, например, как приведено в SEQ ID № 30, которая соответствует белковой последовательности, которая определена в эталонной белковой последовательности NCBI с номером доступа NP_001184149.1, кодирующей полипептид PDE4D9. Термин «фосфодиэстераза 4D9» или «PDE4D9» также относится к ампликону, который можно создавать с помощью пары праймеров PDE4D9_прям. (SEQ ID № 31) и PDE4D9_обратн. (SEQ ID № 32) и можно обнаруживать с помощью зонда SEQ ID № 33.
Термины «PDE4D1», «PDE4D2», «PDE4D3», «PDE4D4», «PDE4D5», «PDE4D6», «PDE4D7», «PDE4D8» и «PDE4D9» также включают нуклеотидные последовательности, демонстрирующие высокую степень гомологии с PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D7, PDE4D8 и PDE4D9, соответственно, например, последовательности нуклеиновой кислоты, по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичные последовательности, как приведено в SEQ ID №№ 1, 6, 8, 10, 12, 17, 19, 27 или 29, соответственно, или аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичные последовательности, как приведено в SEQ ID №2, 7, 9, 11, 13, 18, 20, 28 или 30, соответственно, или последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичные последовательности, как приведено в SEQ ID №2, 7, 9, 11, 13, 18, 20, 28 или 30, или аминокислотные последовательности, кодируемые последовательностями нуклеиновой кислоты, по меньшей мере на 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичными последовательности, как приведено в SEQ ID №1, 6, 8, 10, 12, 17, 19, 27 или 29.
Термин «уровень экспрессии», как используют в настоящем описании, относится к количеству транскрипта варианта PDE4D и/или белка PDE4D, получаемого из определенного числа клеток или определенной части ткани, в частности, к количеству транскрипта варианта PDE4D и/или белка варианта PDE4D, которое получают в стандартной процедуре экстрагирования нуклеиновой кислоты (например, РНК) или белка. Подходящие способы экстрагирования известны специалисту в данной области.
Термин «контрольный уровень» (или «контрольное состояние»), как используют в настоящем описании, относится к уровню экспрессии, который можно определять одновременно и/или в условиях, схожих или сравнимых с тестовым образцом, используя (a) образец(ы), предварительно собранный и сохраненный у субъекта/субъектов, у которых известно состояние или состояние заболевания, например, не злокачественное, нормальное или доброкачественная опухоль предстательной железы, запущенная злокачественная опухоль предстательной железы и т.д. Термин «состояние заболевания» или «состояние злокачественного заболевания» относится к любому состоянию или типу клеточного или молекулярного состояния между не злокачественным состоянием клетки и терминальным злокачественным состоянием клетки (включительно). В частности, термин включает различные стадии злокачественной пролиферации/развития или уровни развития опухоли в организме между (и исключая) не злокачественное состояние клетки и (включая) терминальное злокачественное состояние клетки. Такие стадии развития могут включать все стадии системы классификации злокачественных опухолей TNM (опухоль, узел, метастаз), как определено в UICC, например, стадии 0 и I-IV. Термин также включает стадии перед TNM стадией 0, например, стадии развития, на которых биомаркеры злокачественной опухоли, известные специалисту в данной области, демонстрируют модифицированную экспрессию или профиль экспрессии.
Уровень экспрессии, как указано выше, может представлять собой уровень экспрессии вариантов PDE4D, как определено в настоящем описании выше. Альтернативно или дополнительно, уровень экспрессии также может представлять собой уровень экспрессии любого другого подходящего гена или генетического элемента, экспрессируемых в клетке, например, уровень экспрессии эталонного гена или уровень экспрессии комбинации эталонных генов, например, одного или нескольких из гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP). В одном из вариантов осуществления уровень экспрессии определяют для комбинации эталонных генов.
Термин «злокачественный» относится к состоянию злокачественного заболевания, как определено в настоящем описании. Термин «не злокачественный» относится к состоянию, в котором не поддается обнаружению ни доброкачественная, ни злокачественная пролиферация. Подходящие средства обнаружения известны в данной области.
Термин «злокачественная опухоль предстательной железы» относится к злокачественной опухоли предстательной железы в репродуктивной системе мужчины, которая возникает, когда клетки предстательной железы мутируют и начинают размножаться безконтрольно. Обычно злокачественная опухоль предстательной железы связана с повышенным уровнем специфического антигена простаты (PSA). В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения термин «злокачественная опухоль предстательной железы» относится к злокачественной опухоли, демонстрирующей уровни PSA выше 4,0. В другом варианте осуществления термин относится к злокачественной опухоли, демонстрирующей уровни PSA выше 2,0. Термин «уровень PSA» относится к концентрации PSA в крови в нг/мл.
Термин «состояние не прогрессирующей злокачественной опухоли предстательной железы» обозначает, что образец индивидуума не демонстрирует значения параметров, указывающие на «биохимический рецидив» и/или «клинический рецидив».
Термин «состояние прогрессирующей злокачественной опухоли предстательной железы» обозначает, что образец индивидуума демонстрирует значения параметров, указывающие на «биохимический рецидив» и/или «клинический рецидив».
Термин «биохимический рецидив» в целом относится к рецидивным биологическим значениям повышенного PSA, что указывает на присутствие клеток злокачественной опухоли предстательной железы в образце. Однако также возможно использовать другие маркеры, которые можно использовать при обнаружении присутствия или которые вызывают подозрение на такое присутствие.
Термин «клинический рецидив» относится к присутствию клинических признаков, указывающих на присутствие опухолевых клеток, как измеряют, например, с использованием визуализации in vivo.
Термин «увеличенный» или «увеличенный уровень экспрессии» или «уровень экспрессии под повышающей регуляцией» или «увеличения уровня экспрессии» (что можно использовать синонимично) обозначает повышение уровня экспрессии между ситуацией, подлежащей анализу, например, ситуацией, происходящей из образца пациента, и эталонной точкой, которая может представлять собой или нормальный контрольный уровень или злокачественный контрольный уровень, получаемый из любой подходящей стадии опухоли или злокачественной опухоли предстательной железы, известной специалисту в данной области. Уровни экспрессии полагают «увеличенными», когда экспрессия гена варианта PDE4D, например, в биологическом образце, подлежащем анализу, отличается, т.е. повышена, например, на 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% или больше чем 50% в сравнении с контрольным уровнем или по меньшей мере в 0,1 раза, по меньшей мере в 0,2 раза, по меньшей мере в 1 раз, по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 5 раз или по меньшей мере в 10 раз или больше в сравнении с контрольным уровнем. Контрольный уровень может представлять собой или нормальный контрольный уровень или злокачественный контрольный уровень, как определено в настоящем описании выше. Если следует проводить сравнение со злокачественным контрольным уровнем, дополнительное сравнение с нормальным контрольным уровнем предпочтительно. Такое дополнительное сравнение делает возможным определение тенденции модификации, например, можно наблюдать величину увеличения уровня экспрессии и/или можно делать соответствующие заключения. Это может представлять собой сравнение с доброкачественной опухолью предстательной железы или со здоровой тканью или образцом, полученным у здорового индивидуума.
Термин «мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы», как используют в настоящем описании, относится к сопровождению диагностированного или обнаруженного заболевания или нарушения злокачественной опухоли предстательной железы, например, в течение лечебной процедуры или в течение определенного периода времени, обычно в течение 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 6 месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет, 5 лет, 10 лет или любого другого периода времени. Термин «сопровождение» обозначает, что состояния заболевания, как определено в настоящем описании выше, и, в частности, изменения этих состояний заболевания можно обнаруживать посредством сравнения уровня экспрессии маркерного варианта PDE4D в образце с нормальным контрольным уровнем, как определено в настоящем описании выше, в частности, с контрольным уровнем экспрессии, получаемым из контрольной прогрессирующей опухоли, контрольной не прогрессирующей опухоли или здорового контроля, или с уровнем экспрессии стабильной, например, независимой стабильной, клетки или клеточной линии злокачественной опухоли предстательной железы, или клеточной линии в периодическом временном сегменте любого типа, например, каждую неделю, каждые 2 недели, каждый месяц, каждые 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев, каждые 1,5 года, каждые 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 лет, в течение любого периода времени, например, в течение 2 недель, 3 недель, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 или 20 лет, соответственно. Стабильную, например, независимую стабильную, клетку или клеточную линию злокачественной опухоли предстательной железы, дающую начало дополнительному контрольному уровню, можно получать из образцов, соответствующих различным стадиям развития злокачественной опухоли, например, стадиям 0 и I-IV системы классификации TNM. В одном из вариантов осуществления термин относится к сопровождению диагностированной злокачественной опухоли предстательной железы, в частности, прогрессирующей или не прогрессирующей злокачественной опухоли предстательной железы. Мониторинг также может включать обнаружение экспрессии дополнительных генов или генетических элементов, например, эталонных генов.
Термин «прогнозирование злокачественной опухоли предстательной железы», как используют в настоящем описании, относится к предсказанию течения или исхода диагностированной или обнаруженной злокачественной опухоли предстательной железы, например, в течение определенного периода времени, в течение лечения или после лечения. Термин также относится к определению шанса на выживаемость или восстановление после заболевания, а также к предсказанию ожидаемого времени выживания субъекта. В частности, прогнозирование может включать установление вероятности выживаемости субъекта в течение определенного периода времени в будущем, такого как 6 месяцев, 1 год, 2 года, 3 года, 5 лет, 10 лет или любой другой период времени.
Термины «диагностирование» и «прогнозирование» также предназначены для того, чтобы охватывать предсказания и вероятностные анализы. Варианты PDE4D в качестве маркеров, соответственно, можно использовать клинически при принятии решений в отношении модальностей лечения, включая терапевтическое вмешательство или диагностические критерии, такие как наблюдение заболевания. В соответствии с настоящим изобретением, можно предоставлять промежуточный результат для исследования состояния субъекта. Такой промежуточный результат можно комбинировать с дополнительной информацией, чтобы помогать врачу, медсестре или другому практику диагностировать, что субъект страдает заболеванием. Альтернативно, настоящее изобретение можно использовать для того, чтобы обнаруживать злокачественные клетки в ткани, полученной у субъекта, и предоставлять врачу полезную информацию для того, чтобы диагностировать, что субъект страдает заболеванием.
Термин «эталонный ген» или «контрольный ген», как используют в настоящем описании, относится к любому подходящему гену, например, к любому стабильно экспрессируемому и непрерывно поддающемуся обнаружению гену, продукту гена, продукту экспрессии, белку или варианту белка в предпочтительном организме. Термин также включает продукты генов, такие как экспрессируемые белки, пептиды, полипептиды, а также их модифицированные варианты. Термин эталонный ген, таким образом, также включает эталонные белки, происходящие из эталонного гена, если не указано иное. Также включены транскрипты всех типов, происходящие от эталонного гена, а также их модификации, или вторичные параметры, связанные с ними. Альтернативно или дополнительно, другие эталонные параметры также можно использовать для эталонных целей, например, метаболические концентрации, размеры клеток и т.д.
Экспрессию можно осуществлять в одном и том же образце, т.е. уровень варианта PDE4D и эталонного гена определяют в одном и том же образце. Если тестирование осуществляют в одном и том же образце, можно осуществлять подход с одним обнаружением или мультиплексным обнаружением, как раскрыто в настоящем описании. Для эффективности мультиплексного обнаружения можно модифицировать концентрацию праймеров и/или олигонуклеотидов зондов. Кроме того, концентрацию и присутствие дополнительных ингредиентов, таких как буферы, ионы и т.д., можно модифицировать, например, увеличивать или уменьшать в сравнении с указаниями производителей.
В конкретном варианте осуществления можно определять экспрессию больше чем одного эталонного гена или стабильно экспрессируемого гена. Например, можно определять экспрессию 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 30 или больше эталонных генов. Результаты таких измерений можно или вычислять отдельно или можно комбинировать для того, чтобы получать усредненный коэффициент экспрессии. Кроме того, паттерн экспрессии эталонных генов можно определять и/или использовать в качестве основы для последующих стадий. Такой паттерн может быть основан на известном экспрессионном поведении генов в определенной злокачественной опухоли, в частности, на стадиях или в состояниях злокачественной опухоли предстательной железы.
Субъект, такой как пациент или индивидуум, подлежащий диагностированию, мониторингу или прогнозированию злокачественной опухоли предстательной железы или статуса прогрессирования злокачественной опухоли предстательной железы, представляет собой животное, такое как млекопитающее, например, человек.
Уровень варианта PDE4D можно определять на уровне нуклеиновой кислоты, уровне белка или уровне активности, как раскрыто в настоящем описании. Предпочтительным является определением количества транскрипта(ов) варианта PDE4D и/или белка. Вдобавок можно определять уровень эталонного гена в образце.
В одном из вариантов осуществления диагностирование, мониторинг, прогнозирование, стратификацию риска и предоставление рекомендации, как отмечено в настоящем описании, следует осуществлять на биологическом образце, полученном у индивидуума. Термин «биологический образец» или «образец, получаемый у индивидуума» относится к любому биологическому материалу, получаемому подходящими способами, известными специалисту в данной области, у индивидуума. Используемый биологический образец можно брать клинически приемлемым образом, например, таким образом, что сохраняют нуклеиновые кислоты (в частности, РНК) или белки.
Биологический образец(ы) может включать ткань и/или текучее вещество организма, такие как, но не ограничиваясь этим, кровь, пот и моча. Кроме того, биологический образец может содержать клеточный экстракт, полученный из или популяции клеток, включая эпителиальные клетки, такие как злокачественные эпителиальные клетки или эпителиальные клетки, происходящие из ткани, которую подозревают на злокачественность. Биологический образец может содержать популяцию клеток, происходящих из железистой ткани, например, образец может происходить из предстательной железы мужского индивидуума. Дополнительно, клетки можно очищать от полученных тканей и текучих веществ организма, в случае необходимости, и затем использовать в качестве биологического образца. В некоторых вариантах осуществления образец представляет собой образец ткани, образец мочи, образец осадка мочи, образец крови, образец слюны, образец семени, образец, содержащий циркулирующие опухолевые клетки, внеклеточные везикулы, образец, содержащий секретируемые предстательной железой экзосомы, или клеточные линии или линию клеток злокачественной опухоли.
В одном из вариантов осуществления можно получать и/или использовать биоптаты или резекционные образцы. Такие образцы могут включать клетки или клеточные лизаты.
В конкретном варианте осуществления содержимое биологического образца также можно подвергать стадии обогащения. Например, образец можно приводить в контакт с лигандами со специфичностью к клеточной мембране или органеллам определенного типа клеток, например, клеток предстательной железы, которые функционализированы, например, с использованием магнитных частиц. Материал, концентрированный посредством магнитных частиц, впоследствии можно использовать для стадий обнаружения и анализа, как раскрыто в настоящем описании выше или ниже.
Кроме того, клетки, например, опухолевые клетки, можно обогащать через процессы фильтрования образцов текучего вещества или жидкости, например, крови, мочи и т.д. Такие процессы фильтрования также можно комбинировать со стадиями обогащения на основе лиганд-специфических взаимодействий, как раскрыто в настоящем описании выше.
Ведение пациентов со злокачественной опухолью предстательной железы сильно зависит от профилирования риска. В National Comprehensive Cancer Network (NCCN) определены пять категорий риска (очень низкий риск, VLR; низкий риск, LR; благоприятный промежуточный риск, FIR; неблагоприятный промежуточный риск, UIR; и высокий риск, HR) на основе параметров до лечения, которые проиллюстрированы в таблицах 1 и 2.
Таблица 1: клиническая стратификация риска для пациентов со злокачественной опухолью предстательной железы, как определено в руководствах US NCCN
Таблица 2: параметры для присвоения риска
Для каждой группы риска в диапазоне очень низкого, низкого, промежуточного, высокого и очень высокого риска, в руководствах представлены несколько возможностей вмешательства. Несмотря на то, что эту оценку риска пациента легко осуществлять, и она основана на обычно доступных клинических данных, эта простота также вносит вклад в свой основной недостаток, который состоит в категоризации пациентов по непересекающимся группам вместо индивидуального риска для каждого пациента независимо от клинической группировки по рискам. Как следствие, рекомендованное лечение может быть идеальным для одного пациента, но может быть не подходящим для другого пациента в той же клинической группе риска. Таким образом, один аспект данного изобретения состоит в использовании молекулярныюх маркеров, таких как PDE4D7, чтобы добавлять ортогональную и независимую информацию к описанию клинического риска для более стратифицированного выбора терапии.
Со ссылкой на фиг. 1, проиллюстрирован способ стратификации риска для выбора терапии у пациента со злокачественной опухолью предстательной железы. Способ начинается в S100.
В S102 получают биологический образец у каждого из первого набора пациентов (индивидуумов), у которых диагностирована злокачественная опухоль предстательной железы и у которых проводили мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы в течение периода времени, такого как по меньшей мере один год или по меньшей мере два года или приблизительно пять лет после получения биологического образца.
В S104 профиль экспрессии гена для по меньшей мере одного маркерного гена (например, PDE4D7) получают для каждого из биологических образцов, полученных у пациентов первого набора, например, посредством выполнения RT-qPCR (количественной ПЦР в реальном времени) на РНК, экстрагированной из каждого биологического образца. Образцовый профиль экспрессии включает уровень экспрессии (например, значение) для PDE4D7, которое можно нормализовать с использованием значения(й) для каждого из набора эталонных генов, такого как HPRT1, TUBA1B, PUM1 и/или TBP. В одном из вариантов осуществления единственным используемым маркерным геном является PDE4D7, а единственные используемые эталонные гены выбирают из группы, состоящей из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP, например, по меньшей мере один или по меньшей мере два или по меньшей мере три или все из этих эталонных генов.
В S106 определяют оценочную функцию для оценки прогностической оценки риска на основе профиля экспрессии гена для маркерного гена (PDE4D7), который получают для по меньшей мере некоторых биологических образцов, полученных для первого набора пациентов, и соответствующие результаты, получаемые при мониторинге.
В S108 у пациента (индивидуума) получают биологический образец. Пациент может быть новым пациентом или одним из первого набора.
В S110 получают профиль экспрессии гена для по меньшей мере одного маркерного гена (например, PDE4D7), например, посредством выполнения ПЦР на биологическом образце. Профиль экспрессии гена включает уровень экспрессии гена для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7) и для одного или нескольких эталонных генов. Подходящие эталонные гены включают HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP. В одном из вариантов осуществления единственным используемым маркерным геном является PDE4D7, а единственные используемые эталонные гены выбирают из группы, состоящей из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP, например, по меньшей мере один или по меньшей мере два или по меньшей мере три или все из этих эталонных генов. Маркерные и эталонные гены являются теми же, которые используют в S104.
Другие эталонные гены, которые можно дополнительно или альтернативно использовать на стадиях S104 и S110, включают мРНК актина β Homo sapiens (ACTB); мРНК кислого 60S рибосомного фосфопротеина P0 Homo sapiens (RPLP0); полипептид A полимеразы (РНК) II (направленного на ДНК), 220 кДа (POLR2A); β-2-микроглобулин (B2M); и аминолевулинат-δ-синтазу (ALAS-1).
В S112 прогностическую оценку риска определяют для пациента на основе профиля экспрессии гена, используя полученную оценочную функцию.
В S114 пациента можно относить к одной из предварительно определяемого набора групп риска на основе прогностической оценки риска.
В S116 терапевтическую рекомендацию можно предоставлять, например, пациенту или его или ее опекуну, врачу или другому работнику здравоохранения, на основе группы риска пациента. Это может включать одно или несколько из a) предложения терапии для пациента на основе присваиваемой группы риска, причем по меньшей мере две из групп риска ассоциированы с различными терапиями, b) вычисления предсказания риска прогрессирования заболевания у пациента до или после хирургической операции на предстательной железе; и c) вычисления предсказания ответа на терапию у пациента до или после хирургической операции на предстательной железе. Примеры терапии включают по меньшей мере частичную простатэктомию, активную терапию, выбранную из лечения излучением, химиотерапии и их сочетания, и только наблюдения, т.е. без выполнения простатэктомии или активной терапии (т.е. активного наблюдения).
Способ заканчивается в S118.
Образцовая оценочная функция позволяет относить новых пациентов к соответствующей одной из набора групп риска, к которой отнесен первый набор пациентов, на основе результатов их мониторинга. Каждую из групп риска можно ассоциировать с соответствующей предлагаемой терапией, которая различается по ее агрессивности. Каждая предлагаемая терапия может быть основана на результатах пациентов из первого набора, которых относили к этой группе риска, и представляет собой ту, для которой предсказывают обеспечение наименее агрессивной терапии, которая не превышает пороговый клинический риск для развития злокачественной опухоли предстательной железы. В некоторых случаях это позволяет относить нового пациента к группе риска, ассоциированной с менее агрессивной предлагаемой терапией, чем было бы в случае других способов профилирования риска, например, с использованием индекса Глисона.
В одном из вариантов осуществления уровень экспрессии гена в S104, S110 определяют посредством обнаружения экспрессии мРНК с использованием одного или нескольких праймеров и/или зондов и/или одного или нескольких наборов из них.
В варианте способа, в S112 дополнительно определяют комбинированную прогностическую оценку риска для пациента на основе прогностической оценки риска и второго определения риска.
В S114 пациента можно относить к одной из предварительно определяемого набора групп риска на основе комбинированной прогностической оценки риска (а не на основе прогностической оценки риска).
Второе определение риска представляет собой определение риска, отличное от оценки риска PDE4D7 (прогностическая оценка риска), например, оно может быть основано на индексе Глисона. Предпочтительно второе определение риска представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN), такую как одно или несколько из очень низкого риска (VLR), низкого риска (LR), благоприятного промежуточного риска (FIR), неблагоприятного промежуточного риска (UIR) и высокого риска (HR). Комбинированную прогностическую оценку риска можно определять с использованием функции регрессии, получаемой у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы. Дополнительный аспект относится к реализованному на компьютере способу диагностирования, мониторинга или прогнозирования злокачественной опухоли предстательной железы или стратификации риска прогрессирования злокачественной опухоли предстательной железы, который включает стадии способа, как описано на фиг. 1.
В контексте настоящей заявки выражение «реализованный на компьютере способ диагностирования, мониторинга или прогнозирования злокачественной опухоли предстательной железы или стратификации риска прогрессирования злокачественной опухоли предстательной железы» относится к способу, в котором алгоритмы программного обеспечения вычисляют оценку риска и на ее основе предоставляют прогноз для пациента, которого анализируют, где в этом способе используют исходные данные, получаемые при измерении уровня экспрессии гена для генов, упоминаемых в настоящем описании, и их преобразование в оценку риска с использованием уравнения, описанного далее.
Одну или несколько стадий способа, проиллюстрированного на фиг. 1, можно реализовать в компьютерном программном продукте, который можно исполнять на компьютере. Компьютерный программный продукт может содержать постоянную машиночитаемую среду для регистрации, в которой записывают (сохраняют) управляющую программу, такую как диск, жесткий диск или тому подобное. Обыкновенные формы постоянных машиночитаемых сред включают, например, гибкие диски, флоппи-диски, жесткие диски, магнитную ленту или любую другую магнитную запоминающую среду, CD-ROM, DVD или любую другую оптическую среду, RAM, PROM, EPROM, FLASH-EPROM или другой чип или картридж памяти или любую другую постоянную среду, которую компьютер может считывать и использовать.
Альтернативно, способ можно реализовать во временных средах, таких как передаваемая несущая волна, где управляющую программу реализуют в виде сигнала данных с использованием передающих сред, таких как акустические или световые волны, такие как те, которые генерируются в ходе радиоволновой и инфракрасной передачи данных, и т.п.
Образцовый способ можно реализовать в одном или нескольких компьютерах общего назначения, компьютера(ах) специального назначения, запрограммированном микропроцессоре или микроконтроллере и элементах периферических интегральных схем, ASIC или другой интегральной схеме, цифровом сигнальном процессоре, постоянной электронной или логической схеме, такой как схема на дискретных компонентах, программируемом логическом устройстве, таком как PLD, PLA, FPGA, CPU графической карты (GPU), или PAL, или тому подобное. В целом, проиллюстрировано любое устройство, способное реализовать машину конечных состояний, которая в свою очередь способна реализовать блок-схему, представленную на фиг. 1, можно использовать для реализации одной или нескольких стадий способа стратификации риска для выбора терапии для пациента со злокачественной опухолью предстательной железы. Следует принимать во внимание, что, хотя все стадии способа можно реализовать на компьютере, в некоторых вариантах осуществления одну или несколько стадий можно по меньшей мере частично выполнять вручную.
Компьютерные программные инструкции также можно загружать на компьютер, другой программируемый аппарат обработки данных или другие устройства, чтобы управлять серией рабочих стадий, подлежащих осуществлению, на компьютере, другом программируемом аппарате или других устройствах для получения реализованного на компьютере процессора так, что инструкции, которые исполняют на компьютере или другом программируемом аппарате, обеспечивают процессы для реализации функций/действий, точно определенных в настоящем описании.
Термины «определение уровня маркерного гена(ов) или GOI» или «определение уровня экспрессии гена» или «определение уровня экспрессии вариантов PDE4D» относится к определению присутствия или количества маркерного гена(ов) или GOI или продуктов экспрессии вариантов PDE4D. Термин «уровень маркерного гена(ов) или GOI», таким образом, обозначает присутствие или количество маркерного гена(ов) или продуктов экспрессии GOI, например, транскрипта(ов), и/или определение присутствия или количества маркерного гена(ов) или GOI. Определение присутствия или количества маркерного гена(ов) или продуктов экспрессии GOI можно выполнять с помощью любых средств, известных в данной области.
Определение присутствия или количества маркерного гена(ов) или продуктов экспрессии GOI можно выполнять посредством измерения нуклеиновой кислоты. Таким образом, уровень(ни) экспрессии можно определять с помощью способа, включающего обнаружение мРНК, кодируемой геном.
Например, измерение уровня нуклеиновой кислоты маркерного гена(ов) или экспрессии GOI можно оценивать посредством очистки молекул нуклеиновой кислоты (например, РНК или кДНК), получаемых из образца, после чего следует гибридизация со специфическими олигонуклеотидными зондами, как определено в настоящем описании выше. Сравнение уровней экспрессии можно выполнять визуально или с помощью подходящего устройства. Способы обнаружения мРНК или продуктов экспрессии известны специалисту в данной области.
Альтернативно, уровень нуклеиновой кислоты маркерного гена(ов) или экспрессии GOI можно обнаруживать в подходе с ДНК-чипом или микрочипом. Обычно нуклеиновые кислоты образца, получаемые у пациентов, подлежащих тестированию, обрабатывают и метят, например, флуоресцентной меткой. Впоследствии, такие молекулы нуклеиновой кислоты можно использовать в гибридизационном подходе с использованием иммобилизованных захватывающих зондов, соответствующих образцовым маркерным генам. Подходящие средства для осуществления микрочипового анализа известны специалисту в данной области.
В стандартной постановке, ДНК-чип или микрочип содержит иммобилизованные зонды высокой плотности для того, чтобы обнаруживать множество генов. Зонды на чипе комплементарны одной или нескольким частям последовательности маркерных генов. Обычно кДНК, продукты ПЦР и олигонуклеотиды можно использовать в качестве зондов.
Способ обнаружения на основе ДНК-чипа или микрочипа обычно включает следующие стадии: (1) выделение мРНК из образца и необязательное превращение мРНК в кДНК и впоследствии мечение этой РНК или кДНК. Способы выделения РНК, превращения ее в кДНК и мечения нуклеиновых кислот описаны в руководствах для микрочиповой технологии. (2) Гибридизация нуклеиновых кислот со стадии 1 с зондами для маркерных генов. Нуклеиновые кислоты из образца можно метить красителем, таким как флуоресцентные красители Cy3 (красный) или Cy5 (синий). Обычно контрольный образец метят другим красителем. (3) Обнаружение гибридизации нуклеиновых кислот из образца с зондами и определение, по меньшей мере качественное и более конкретно количественное, количеств мРНК в образце для исследуемых маркерных генов. Различие в уровне экспрессии между образцом и контролем можно оценивать на основе различия в интенсивности сигнала. Его можно измерять и анализировать посредством подходящего программного обеспечения, такого как, но не ограничиваясь этим, программное обеспечение, предоставляемое, например, Affymetrix.
Нет ограничений по числу зондов, соответствующих используемым маркерным генам, которые наносят на ДНК-чип. Также маркерный ген может быть представлен двумя или больше зондами, зонды гибридизуются с различными частями гена. Зонды разрабатывают для каждого выбранного маркерного гена. Такой зонд обычно представляет собой олигонуклеотид, содержащий 5-50 нуклеотидных остатков. Более длинную ДНК можно синтезировать с помощью ПЦР или химически. Способы синтеза таких олигонуклеотидов и их нанесения на подложку хорошо известны в области микрочипов. Гены, отличные от маркерных генов, также можно наносить на ДНК-чип. Например, зонд для гена, уровень экспрессии которого не значительно изменен, можно наносить на ДНК-чип для того, чтобы нормализовать результаты анализа или сравнивать результаты анализа для нескольких чипов или различных анализов.
В одном из вариантов осуществления уровень нуклеиновой кислоты маркерного гена(ов) или экспрессии GOI можно обнаруживать в подходе количественной RT-ПЦР, например, в подходе полимеразной цепной реакции (RT-qPCR) в реальном времени после обратной транскрипции транскриптов, представляющих интерес. Обычно, в качестве первой стадии, транскрипт подвергают обратной транскрипции в молекулу кДНК в соответствии с любым подходящим способом, известным специалисту в данной области. Подход количественной ПЦР или ПЦР в реальном времени впоследствии можно осуществлять на основе первой цепи ДНК, полученной, как описано выше.
В одном из вариантов осуществления зонды Taqman или с молекулярными маяками в качестве принципиальных зондов на основе FRET этого типа можно использовать для обнаружения в количественной ПЦР. В обоих случаях зонды служат в качестве внутренних зондов, которые используют в сочетании с парой противолежащих праймеров, которые фланкируют целевую область, представляющую интерес, например, набор олигонуклеотидов со специфичностью к маркерному гену(ам), как определено в настоящем описании выше. При амплификации целевого сегмента, зонд может избирательно связываться с продуктами в идентифицирующей последовательности между участками праймеров, тем самым вызывая увеличение FRET сигналов в связи с увеличением частоты мишеней.
Зонд Taqman, подлежащий использованию для подхода количественной ПЦР, может содержать специфический олигонуклеотид, как определено выше, приблизительно в 22-30 оснований, который метят на обоих концах FRET парой. Обычно, 5'-конец имеет флуорофор с меньшей длиной волны, такой как флуоресцеин (например, FAM), а 3'-конец обычно метят флуоресцентным гасителем с большей длиной волны (например, TAMRA) или соединением нефлуоресцентного гасителя (например, Black Hole Quencher). В одном из вариантов осуществления зонды, подлежащие использованию в количественной ПЦР, в частности, зонды, как определено в настоящем описании выше, не имеют гуанина (G) на 5'-конце смежно с репортерным красителем во избежание гашения флуоресценции репортера после разложения зонда.
В зонде с молекулярным маяком, подлежащим использованию в подходе количественной ПЦР, можно использовать FRET взаимодействия для того, чтобы обнаруживать и количественно определять продукт ПЦР, причем каждый зонд имеет 5'-конец с флуоресцентной меткой и 3’-конец, меченный гасителем. Эта конфигурация шпильки или стебель-петля в структуре зонда может содержат стебель с двумя короткими связывающими себя концами и петлю приблизительно в 20-30 оснований с длинной внутренней областью со специфичностью к мишени.
Альтернативные механизмы обнаружения, которые также можно использовать в контексте настоящего изобретения, относятся к зонду, изготовленному только из структуры петли и без короткой комплементарной области стебля. Альтернативный подход на основе FRET для количественной ПЦР, который также можно использовать, основан на использовании двух зондов для гибридизации, которые связываются со смежными участками на мишени, где первый зонд имеет метку флуоресцентного донора на 3'-конце и второй зонд имеет метку флуоресцентного акцептора на его 5'-конце.
В конкретном варианте осуществления уровень экспрессии гена определяют посредством способа на основе амплификации и/или микрочипового анализа и/или РНК секвенирования.
Образцовый профиль экспрессии гена представляет собой нормализованный профиль экспрессии гена, получаемый посредством нормализации уровня экспрессии по меньшей мере варианта PDE4D7 по экспрессии по меньшей мере одного эталонного гена.
Подробные описания эталонных генов, включая их ID транскриптов (NCBI RefSeq) и соответствующие аминокислотные последовательности для пары праймеров и зонда, приведены в таблице 3. Также в таблице 3 приведены, для каждого эталонного гена, смысловой праймер и антисмысловой праймер, а также последовательность зонда, который специфически связывается с ампликоном.
Таблица 3: образцовые последовательности нуклеиновой кислоты для праймеров и зондов
В конкретных вариантах осуществления прогностическая оценка риска основана на нормализованном профиле экспрессии гена, который содержит нормализованный уровень экспрессии по меньшей мере для PDE4D7. В некоторых вариантах осуществления ни один из вариантов PDE4D не используют в качестве эталонного гена. Другими словами, вариант(ы) PDE4D не используют в качестве эталонного гена для нормализации измеряемого уровня экспрессии. Результаты экспрессии можно нормализовать в соответствии с любым подходящим способом, известным специалисту в данной области. Обычно, такие тесты или соответствующую формулу, которые известны специалисту в данной области, следует использовать для того, чтобы стандартизовать данные об экспрессии, чтобы сделать возможной дифференцировку между реальными вариациями в уровнях экспрессии генов и вариациями, обусловленными процессами измерения. Для микрочипов можно использовать Robust Multi-array Average (RMA) в качестве подхода нормализации.
Нормализованные значения можно создавать посредством применения следующего:
N(Cqген, представляющий интерес) = Среднее(Cqэталонн. ген) - (Cqген, представляющий интерес) (1)
где N(Cqген, представляющий интерес) представляет собой нормализованное значение экспрессии гена (цикл количественного определения, Cq) для выбранного гена, представляющего интерес;
Среднее(Cqэталонн. ген) представляет собой арифметическое среднее для Cq значений ПЦР эталонного гена(в); и
Cqген, представляющий интерес представляет собой Cq значение ПЦР гена, представляющего интерес.
В конкретных вариантах осуществления уровень экспрессии вариантов PDE и эталонных генов определяли посредством ПЦР в реальном времени, как описано в R.H.D. 
«Human phosphodiesterase 4D7 (PDE4D7) expression is increased in TMPRSS2-ERG positive primary prostate cancer and independently adds to a reduced risk of post-surgical disease progression», Br J Cancer, 113, 1502-1511 (2015), включенном в настоящее описание (далее в настоящем описании «
2015»).
Со ссылкой на фиг. 2, в конкретных вариантах осуществления, когда уровни экспрессии PDE4D7 определены и нормализованы, прогностическую оценку риска можно определять посредством применения следующего:
Оценка риска PDE4D7 = (((PDE4D7_норм + A)*B)+1), (2)
Где «Оценка риска PDE4D7» представляет собой прогностическую оценку риска на основе профиля экспрессии гена в образце пациента, PDE4D7_норм представляет собой нормализованное значение экспрессии PDE4D7 (т.е., N(Cqген, представляющий интерес)), а A и B представляют собой переменные.
В конкретных вариантах осуществления A может составлять приблизительно 6-8, например, 6,7167499999999, B может составлять 0,4-0,45, например, 0,420780231744713. Оценка риска PDE4D7, таким образом, может представлять собой значение между 1,0 и 5.0. Затем оценку риска PDE4D7 можно классифицировать или категоризировать по одной из по меньшей мере двух групп риска на основе оценки риска PDE4D7. Например, могут иметь место две группы риска, или три группы риска, или четыре группы риска, или больше чем четыре предварительно определяемых группы риска. Каждая группа риска охватывает соответствующий диапазон (непересекающихся) оценок риска PDE4D7. Например, группа риска может включать все оценки риска PDE4D7 от 1,0 до 2,0, другая группа риска от 2,0 до 3,0, другая группа риска от 3,0 до 4,0, другая группа риска от 4,0 до 5,0.
В некоторых вариантах осуществления предлагаемая терапия может быть основана на прогностической оценке риска и на втором определении риска. Например, второе определение риска может представлять собой индекс Глисона, определяемый посредством гистопатологии. См., например, Sperling, «Revisions of the Gleason grading system make it more accurate», Sperling Prostate Center, 2016. Второе определение риска также может представлять собой клинически определяемую стадию прогрессирования (значение cT), патологически определяемую стадию (значение pT), индекс Глисона биоптатов или группировку, патологический индекс Глисона или группировку, измерение специфического антигена простаты, измерение плотности специфического антигена простаты или их сочетание.
Второе определение риска может представлять собой комбинацию различных определений риска, отличных от оценки риска PDE4D7. Например, второе определение риска может представлять собой классификацию NCCN, например, одно из очень низкого риска (VLR), низкого риска (LR), благоприятного промежуточного риска (FIR), неблагоприятного промежуточного риска (UIR) и высокого риска (HR).
В конкретных вариантах осуществления предлагаемая терапия на основе присваиваемой группы риска PDE4D7 отличается от потенциальной предлагаемой терапии на основе только второго определения риска. То есть, предлагаемая терапия на основе присваиваемой группы риска PDE4D7 отличается от предлагаемой терапии на основе второго определения риска без группы риска PDE4D7.
В дополнительных вариантах осуществления определением группы риска PDE4D7 стратифицируют результаты и рекомендованные терапии на основе второго определения риска. Другими словами, оценка риска PDE4D7 может идентифицировать пациента как не требующего активного вмешательства (т.е. активного лечения), которого взамен можно помещать под активное наблюдение, тогда как отдельно второе определение риска будет указывать, что активное вмешательство необходимо. Альтернативно, оценка риска PDE4D7 позволяет идентифицировать пациента как требующего активного вмешательства вместо активного наблюдения, тогда как отдельно второе определение риска будет указывать, что активное вмешательство еще не было необходимым.
Дополнительный аспект относится к продукту, содержащему праймеры и/или зонды для определения уровня экспрессии по меньшей мере одного варианта фосфодиэстеразы 4D (PDE4D), выбранного из группы, состоящей из PDE4D7, PDE4D1, PDE4D2, PDE4D3, PDE4D4, PDE4D5, PDE4D6, PDE4D8 и PDE4D9, и дополнительно содержащему праймеры и/или зонды для определения уровня экспрессии гена для эталонного гена, выбранного из HPRT1, TUBA1B, PUM1, TBP и их сочетаний. В некоторых вариантах осуществления это обеспечивают с использованием композиции, содержащей набор молекул нуклеиновой кислоты, каждая содержит по меньшей мере одну последовательность олигонуклеотидного праймера и/или зонда для анализа экспрессии гена варианта(ов) PDE4D и по меньшей мере одну последовательность олигонуклеотидного праймера и/или зонда для анализа экспрессии гена для эталонных генов. В некоторых вариантах осуществления это обеспечивают с использованием чипа нуклеиновых кислот, содержащего один или несколько олигонуклеотидных зондов, комплементарных и гибридизуемых с кодирующей последовательностью варианта(ов) PDE4D, и один или несколько олигонуклеотидных зондов, комплементарных и гибридизуемых с эталонным геном(ами) для определения прогностической оценки риска, как определено в настоящем описании.
«Микрочип» представляет собой линейный или двухмерный массив дискретных областей, каждая имеет определенную площадь, образованную на поверхности обычно твердого носителя, такого как, но не ограничиваясь этим, стекло, пластмасса или синтетическая мембрана. Плотность дискретных областей не микрочипе определяют по общему числу иммобилизованных олигонуклеотидов, подлежащих обнаружению на поверхности одной твердофазной основы, например, по меньшей мере приблизительно 50/см2, по меньшей мере приблизительно 100/см2, по меньшей мере приблизительно 500/см2, но меньше приблизительно 1000/см2 в некоторых вариантах осуществления. Чипы могут содержать меньше чем приблизительно 500, приблизительно 1000, приблизительно 1500, приблизительно 2000, приблизительно 2500 или приблизительно 3000 иммобилизованных олигонуклеотидов в совокупности. Как используют в настоящем описании, ДНК микрочип представляет собой массив олигонуклеотидов или олигонуклеотидов, размещенных на чипе или других поверхностях, которые используют для гибридизации с амплифицированными или клонированными олигонуклеотидами из образца. Поскольку положение каждой конкретной группы олигонуклеотидов на чипе известно, отличительные черты олигонуклеотидов образца можно определять на основе их связывания с конкретным положением на микрочипе.
«Олигонуклеотид» представляет собой полимерную форму нуклеотидов, или рибонуклеотидов или дезоксирибонуклеотидов. Этот термин относится только к первичной структуре молекулы. Таким образом, этот термин включает двух- и одноцепочечную ДНК и РНК. Также он включает известные типы модификаций, в том числе метки, известные в данной области, метилирование, «кэпы», замены одного или нескольких встречаемых в природе нуклеотидов на аналог и межнуклеотидные модификации, такие как не заряженные связи (например, фосфотиоаты, фосфородитиоаты и т.д.), а также немодифицированные формы олигонуклеотида.
Термин «амплифицировать» используют в широком смысле для обозначения, что создание продукта амплификации можно выполнять ферментативно с использованием ДНК или РНК полимераз. «Амплификация», как используют в настоящем описании, в целом относится к процессу получения нескольких копий желаемой последовательности, в частности, таковой из образца. «Несколько копий» обозначают по меньшей мере 2 копии. «Копия» не обязательно обозначает идеальную комплементарность или идентичность последовательностей относительно матричной последовательности. Возможно дополнительно использовать любой известный в данной области способ секвенирования для того, чтобы идентифицировать последовательности GOI.
Термин «соответствующий» может относиться, где это применимо, к молекуле нуклеиновой кислоты в качестве имеющей существенное количество идентичности последовательностей с другой молекулой нуклеиновой кислоты. Существенное количество обозначает по меньшей мере 95%, обычно по меньшей мере 98% и более обычно по меньшей мере 99%, и идентичность последовательностей определяют с использованием алгоритма BLAST, как описано в Altschul, et al. J. Mol. Biol. 215:403-410, (1990) (с использованием опубликованных настроек по умолчанию, т.е. параметров w=4, t=17). Способы амплификации мРНК в целом известны в данной области и включают ПЦР с обратной транскрипцией (RT-ПЦР) и то, что описано в U.S. 6,794,141, а также PCT/US 1/50340. Другой способ, который можно использовать, представляет собой количественную ПЦР (или Q-ПЦР). Альтернативно, РНК можно непосредственно метить как соответствующую кДНК известными в данной области способами.
Полагаясь на идентификацию генов (или экспрессированных последовательностей) с повышенной или пониженной экспрессией, один из вариантов осуществления включает определение экспрессии посредством гибридизации мРНК или ее амплифицированной или клонированной версии (такой как ДНК или кДНК) в клетке образца с олигонуклеотидом, который уникален для конкретной генной последовательности. Олигонуклеотиды этого типа могут содержать по меньшей мере приблизительно 20, по меньшей мере приблизительно 22, по меньшей мере приблизительно 24, по меньшей мере приблизительно 26, по меньшей мере приблизительно 28, по меньшей мере приблизительно 30 или по меньшей мере приблизительно 32 последовательных пар оснований генной последовательности, которая не встречается в других генных последовательностях. Термин «приблизительно», как используют в предыдущем предложении, относится к увеличению или уменьшению на 1 относитлеьно заявленного числового значения. В других вариантах осуществления можно использовать олигонуклеотиды по меньшей мере или приблизительно 50, по меньшей мере или приблизительно 100, по меньшей мере приблизительно или 150, по меньшей мере или приблизительно 200, по меньшей мере или приблизительно 250, по меньшей мере или приблизительно 300, по меньшей мере или приблизительно 350, или по меньшей мере или приблизительно 400 пар оснований генной последовательности, которая не встречается в других генных последовательностях. Термин «приблизительно», как используют в предшествующем предложении, относится к увеличению или уменьшению на 10% относительно заявленного числового значения. Такие олигонуклеотиды также можно обозначать как олигонуклеотидные зонды, которые способны к гибридизации с последовательностями генов или их уникальными частями, которые описаны в настоящем описании. Во многих случаях условия гибридизации представляют собой строгие условия приблизительно от 30% об./об. приблизительно до 50% формамида и приблизительно от 0,01 M приблизительно до 0,15 M соли для гибридизации и приблизительно от 0,01 M приблизительно до 0,15 M для условий промывания при приблизительно от 55 приблизительно до 65°C или выше, или условия, эквивалентные этому.
В других вариантах осуществления олигонуклеотидные зонды, которые можно использовать в настоящем описании, могут иметь приблизительно или 95%, приблизительно или 96%, приблизительно или 97%, приблизительно или 98%, или приблизительно или 99% идентичность с последовательностями маркерных генов, экспрессию которых следует определять. Идентичность определяют с использованием алгоритма BLAST, как описано выше. Эти зонды также можно описывать на основе способности к гибридизации с экспрессируемыми маркерными генами, используемыми в образцовом способе, при строгих условиях, как описано выше, или условиях, эквивалентных им.
Во многих случаях последовательностями являются таковые мРНК, кодируемые маркерными генами, соответствующие кДНК для таких мРНК и/или амплифицированные версии таких последовательностей. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотидные зонды иммобилизуют на чипе, других устройствах или в индивидуальных пятнах, которые локализуют зонды.
Подходящие метки, которые можно использовать в соответствии с изобретением, включают радиоизотопы, нуклеотидные хромофоры, ферменты, субстраты, флуоресцентные молекулы, хемилюминесцентные фрагменты, магнитные частицы, биолюминесцентные фрагменты и т.п. По существу, метка представляет собой любую композицию, поддающуюся обнаружению спектроскопическими, фотохимическими, биохимическими, иммунохимическими, электрическими, оптическими или химическими средствами. Термин «основа» относится к стандартным основам, таким как бусы, частицы, полоски, волокна, фильтры, мембраны и силановые или силикатные основы, такие как стеклянные пластины.
В некоторых вариантах осуществления продукт предоставляют в виде набора, используемого для того, чтобы определять оценку риска у субъекта с локализованной злокачественной опухолью предстательной железы, который содержит a) по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения уровня экспрессии по меньшей мере одного варианта фосфодиэстеразы 4D (PDE4D), где по меньшей мере один вариант PDE4D включает PDE4D7, b) по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения уровня экспрессии гена у по меньшей мере одного эталонного гена, и c) инструкции для вычисления оценки риска на основе определяемых экспрессий, например, на бумаге или диске.
Диагностический набор может содержать одно или несколько средств, допускающих специфическое обнаружение маркерного гена(ов) или GOI, как определено в настоящем описании выше. Средства или ингредиенты диагностического набора могут содержаться в одном или нескольких контейнерах или отдельных объектах. Свойства средств определяют с помощью способа обнаружения, для которого предусмотрен набор.
Кроме того, набор может содержать определенное количество известной молекулы нуклеиновой кислоты, которую можно использовать для калибровки набора или в качестве внутреннего контроля. Обычно диагностический набор для обнаружения маркерного гена(ов) или продуктов экспрессии GOI может содержать вспомогательные ингредиенты, такие как ПЦР буферы, dNTP, полимераза, ионы, такие как двухвалентные катионы или одновалентные катионы, растворы для гибридизации и т.д. Такие ингредиенты известны специалисту в данной области и могут варьировать в зависимости от осуществляемого способа обнаружения. Дополнительно, набор может содержать листок с инструкциями и/или может предоставлять информацию о важности получаемых результатов.
Дополнительный аспект относится к системе, содержащей описанные выше продукты и/или наборы и описанные выше компьютерные программные продукты. В конкретных вариантах осуществления системы, описанные выше продукты и/или наборы, а также описанные выше компьютерные программные продукты можно использовать при лечении злокачественной опухоли предстательной железы.
Без намерения ограничивать объем образцового варианта осуществления, следующие примеры иллюстрируют аспекты способа.
ПРИМЕРЫ
Выбор генов и образцы когорты, используемые для построения оценки риска PDE4D7 для злокачественной опухоли предстательной железы
Для того чтобы выбирать гены-кандидаты для построения оценки риска PDE4D7, экспрессию PDE4D7 исследовали в когорте из более 500 пациентов и проводили сравнение с продольными клинически и биологически релевантными исходами пациентов после первичного лечения. Небольшой биоптат (приблизительно 1 миллиметр на 2 миллиметра) ткани брали из репрезентативной области опухоли из иссеченной предстательной железы у 550 пациентов, которых ранее оперировали между 2000 и 2004 годами. Эта когорта пациентов представляла смесь всех клинических групп риска в соответствии с определением, например, в руководствах американской NCCN по злокачественной опухоли предстательной железы. После удаления образцов, которые не отвечали предварительно определяемым критериям качества для количественного определения биомаркеров посредством qPCR и удаления пациента, который проходил адъювантную гормональную терапию после хирургической операции, к анализу допускали образцы всего 503 пациентов, как видно в таблице 4.
Таблица 4: демография исследуемой когорты пациентов
процентная доля
Представлены минимальные и максимальные значения в когорте для возраста пациента, PSA до операции, процентной доли опухолей в биоптатах, объема предстательной железы и плотности PSA, при этом медиана и IQR значения приведены в круглых скобках. Для категорий риска NCCN представлено число пациентов на группу риска. В случае дохирургической патологии указаны группы степени по Глисону для биоптатов, а также клинические стадии (по численной процентной доле пациентов). Патология после хирургической операции представлена группами степени по Глисону для патологии, стадиями патологии, состоянием хирургического края после простатэктомии, состоянием опухолевой инвазии в семенные пузырьки и тазовые лимфатические узлы (по численной процентной доле пациентов).
Наблюдение показывает средние и медианные периоды наблюдения в месяцах после хирургической операции для всех пациентов. Категория исхода иллюстрирует кумулятивный 5- и 10-летний биохимический рецидив (BCR) и клинический рецидив до метастазов (CR) после первичного лечения. В лечении перечислены 5- и 10-летний старт до спасительной лучевой терапии (SRT) или спасительной терапии с андрогенной депривацией (SADT) после хирургической операции. Смертность приведена в виде специфической смертности от злокачественной опухоли предстательной железы (PCSM), а также общей смертности (OM).
Лабораторные способы
Праймеры и зонды, используемые для количественной ПЦР в реальном времени для того, чтобы измерять гены, представляющие интерес, а также эталонные гены, представляют собой то, что описано в таблице 3. Все способы молекулярной биологии, используемые в настоящем описании, описаны ранее в 2015.
Анализ данных и статистика
Чтобы сделать возможным сравнение данных qPCR среди различных экспериментов, значение Cq для PDE4D7 нормализуют по среднему для значений Cq для эталонных генов, чтобы получать нормализованное значение экспрессии PDE4D7 в соответствии с ур. (1), где используют эталонные гены HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP.
Для того чтобы определять корреляцию PDE4D7 с клиническими исходами, нормализованную экспрессию PDE4D7 преобразовывали в оценку риска PDE4D7 посредством линейного преобразования (ур. 2), как видно на фиг. 2.
Затем категории риска PDE4D7 определяли посредством слияния всех оценок риска PDE4D7 между 1 и 2, между 2 и 3, между 3 и 4 и между 4 и 5.
Затем категории риска PDE4D7 тестировали с различными доступными биологическими и связанными с лечением исходами. Для статистического анализа использовали пакет программного обеспечения MedCalc (MedCalc Software BVBA, Ostend, Belgium).
Результаты
Со ссылкой на таблицу 5, дифференциальную экспрессию для оценки риска PDE4D7 оценивали в подгруппе из когорты пациентов, охватывающей 446 и 347 пациентов с полным 5-летним и 10-летним наблюдением на предмет биохимического рецидива после хирургической операции, соответственно. Для сравнения две дополнительные прогностические оценки риска определяли на основе двух других транскриптов PDE4D, PDE4D5 и PDE4D9, которые, как известно, также экспрессируются в предстательной железе.
Таблица 5: результаты U-критерия Манна-Уитни, который выполняли для определения дифференциальной экспрессии PDE4D5, PDE4D7 и PDE4D9 в субкогорте пациентов с полным исходом и наблюдением в течение 5 лет (446 пациентов) или 10 лет после хирургической операции (347 пациентов)
Как видно в таблице 5, между пациентами с или без 5- или 10-летнего биохимического рецидива оценка риска PDE4D7 выражена значительно различно; однако ни PDE4D5 ни PDE4D9 не позволяли проводить различия между этими двумя поднаборами когорты пациентов. Это демонстрирует уникальную способность оценки риска PDE4D7 проводить различия между клиническими исходами.
Со ссылкой на таблицу 6 и фиг. 3, одномерный и многомерный регрессионные анализы Кокса демонстрируют очень значимую корреляцию непрерывной оценки риска PDE4D7 и времени до биохимического рецидива (BCR) после хирургической операции (HR = 0,5; 95% CI = 0,4-0,7; p = 2,5E-07). Кроме того, при корректировке по известным прогностическим клиническим параметрам после хирургической операции, PDE4D7 продолжала вносить значимое независимое значение в регрессионную модель (HR = 0,5; 95% CI = 0,4-0,7; p = 9,7E-06). При использовании группы наименьшего риска PDE4D7 (т.е. PDE4D7 (1-2)) в качеств эталона, категории риска PDE4D7 с более высокими уровнями экспрессии PDE4D7 демонстрировали сильное снижение риска биохимического рецидива с течением времени в многопараметрическом анализе по сравнению с эталонной категорией риска PDE4D7 (PDE4D7 (4-5): HR = 0,1; 95% CI = 0,1-0,5; p = 1,4E-04; PDE4D7 (3-4): HR = 0,3; 95% CI = 0,1-0,8; p = 1,4E-02).
Таблица 6: одно- и многопараметрический регрессионный анализ Кокса для непрерывной и категоризированной оценки риска PDE4D7 в полной когорте пациентов (503 пациента), с клинической конечной точкой биохимического рецидива, где оценку риска PDE4D7 корректировали по клиническим параметрам после хирургической операции в многопараметрическом анализе
Это подтверждают с помощью анализа Каплана-Мейера, который выполняли на категориях риска PDE4D7 с использованием времени до рецидива PSA в качестве клинической конечной точки, как видно на фиг. 4. Категория наивысшего риска PDE4D7 включает мужчин с меньше чем 5% вероятностью 5-летнего BCR, тогда как шанс перенести рецидив PSA возрастает до больше чем 50% в группе пациентов с наименьшими уровнями оценки риска PDE4D7. Стоит отметить, что все события BCR в когорте пациентов с наименьшими оценками риска PDE4D7 происходят в пределах приблизительно 3,5 года после хирургической операции, при этом после этого периода времени дальнейшее событие отсутствует.
Со ссылкой на таблицу 7 и фиг. 5, определяли независимое значение оценки риска PDE4D7 в многомерном анализе, при такой же корректировке по известным прогностическим дохирургическим клиническим параметрам. Как можно видеть, в сравнении с многомерным анализом с дохирургическими клиническими данными для непрерывной оценки риска PDE4D7, наблюдали схожие результаты.
Таблица 7: одно- и многопараметрический регрессионный анализ Кокса непрерывной и категоризированной оценки риска PDE4D7 в полной когорте пациентов (503 пациента), с клинической конечной точкой биохимического рецидива, где оценку риска PDE4D7 корректировали по дохирургическим клиническим параметрам в многопараметрическом анализе
Со ссылкой на таблицу 8 и фиг. 6, показана корреляция непрерывной оценки риска PDE4D7 в одномерном анализе со временем до клинических конечных точек после хирургической операции, отличных от биохимического рецидива, причем конечные точки включают: старт до спасительной лучевой терапии (SRT); старт до спасительной терапии с андрогенной депривацией (SADT); клинический рецидив (CR); специфическую смертность от злокачественной опухоли предстательной железы (PCSM); и общую смертность (OM). Как можно видеть, PDE4D7 значительно отрицательно коррелирует с моментом времени всех конечных точек с отношением рисков между 0,2 и 0,5. Кроме того, вероятность перенести серьезную клиническую конечную точку, такую как метастазы (CR) или смерть из-за злокачественной опухоли предстательной железы (PCSM), возрастает, в частности, со снижением уровней PDE4D7. Кроме того, похоже, что оценка риска PDE4D7 имеет значимую корреляцию с общей выживаемостью.
Таблица 8: непрерывная оценка риска PDE4D7 в одномерном анализе со временем до клинических конечных точек после хирургической операции
Таким образом, как можно видеть на фиг. 3, 5 и 6, не только экспрессия PDE4D7 в ткани опухоли имеет значимую отрицательную корреляцию с биологическими исходами, такими как BCR, показано, что эта отрицательная корреляция предоставляет независимое значение в многомерном моделировании при корректировке по диапазону известных прогностических клинических параметров до и после хирургической операции. Кроме того, уровни экспрессии PDE4D7 также позволяют предсказывать другие клинические конечные точки, такие как старт спасительного лечения, а также конечные точки, связанные с прогрессированием заболевания и специфической смертностью от злокачественной опухоли.
Стратификация - анализ оценки риска PDE4D7 в клинически определенных группах риска
Со ссылкой на фиг. 7-10, проиллюстрировано добавленное значение оценки риска PDE4D7 поверх клинически определяемых групп риска, как показано на примере определений групп риска из руководства NCCN по злокачественной опухоли предстательной железы. Четыре определенных группы риска PDE4D7 сравнивают с группами риска NCCN для: 5-летнего шанса перенести конечную точку биохимического рецидива (BCR) после хирургической операции (фиг. 7); 10-летнего шанса достигнуть конечной точки клинического рецидива (CR) (фиг. 8); 10-летнего шанса достигнуть конечной точки специфической смертности от злокачественной опухоли предстательной железы (CSM) (фиг. 9); и 10-летнего шанса достигнуть конечной точки общей смертности (OM) (фиг. 10). Включены группы риска NCCN: (1) группа очень низкого и низкого риска (VL и LR); (2) группа благоприятного промежуточного риска (FIR); (3) группа неблагоприятного промежуточного риска (UIR); и (4) группа высокого риска (HR). Эти группы риска NCCN сравнивали, соответственно, с четырьмя группами риска PDE4D7, включая: (1) PDE4D7 (4-5); (2) PDE4D7 (3-4); (3) PDE4D7 (2-3); и (4) PDE4D7 (1-2).
Как можно видеть на фиг. 7-10, хотя группа возрастающего риска вносит вклад в увеличенную вероятность достижения одной из исследуемых конечных точек, распределение рисков по схемам низких рисков отличается среди четырех категорий риска, соответственно. В частности, это показано на фиг. 9 и 10, где увеличение риска среди групп риска NCCN является очень линейным и увеличение наклона не является очень крутым. В отличие от этого, имеет место небольшой 10-летний риск смерти, связанной с метастазами или злокачественной опухолью предстательной железы, в двух категориях наивысшего риска PDE4D7 (3-4 и 4-5), тогда как увеличение наклона в группах с более низкими оценками риска PDE4D7 (2-3 и 1-2) значительно возрастает до достижения конечного уровня риска 25% в категории наименьшего риска PDE4D7 по сравнению с 10-15% в группе высокого риска NCCN.
Эти различия между группами риска NCCN и группами риска PDE4D7 могут помочь стратифицировать пациентов с диагнозом злокачественной опухоли предстательной железы, например, на пациентов, у которых можно отсрочить незамедлительное активное вмешательство и взамен лечить с активным наблюдением, и пациентов, которых не следует лечить с использованием активной интервенционной терапии. Другими словами, оценка риска PDE4D7 и группы риска могут помогать поставщикам медицинских услуг рекомендовать пациенту другие или альтернативные терапии на основе дополнительной информации, предоставляемой посредством оценки риска PDE4D7. То есть, оценка риска PDE4D7 может помогать поставщикам медицинских услуг рекомендовать пациенту перейти под активное наблюдение вместо того, чтобы проходить активную интервенционную терапию, поскольку, на основе PDE4D7, риск пациента перенести одну или несколько конкретных клинических конечных точек мал или ниже конкретного порога, даже когда пациента классифицируют в качестве имеющего более высокий риск в соответствии с другими клиническими метриками.
Со ссылкой на фиг. 11, проиллюстрирован шанс 5-летнего BCR среди всех комбинаций четырех групп риска NCCN в сравнении со всеми категориями риска PDE4D7. Как ожидают из предыдущего анализа, группы пациентов, представляющие категории наивысшего риска PDE4D7 (4-5), имеют меньший шанс перенести один из измеряемых продольных исходов по сравнению с клинической группой очень низкого и низкого риска NCCN, и наоборот для когорты пациентов с наименьшим риском PDE4D7 (1-2) по сравнению с группой клинически высокого риска NCCN. Стоит отметить, имеет место когорта мужчин, которую определяют по высоким уровням экспрессии PDE4D7 в их опухолях, которые имеют >50% меньший риск BCR в течение 5 лет после хирургической операции по сравнению с группой клинически очень низкого и низкого риска (4,2% в сравнении с 9,5%, соответственно). Это все еще является случаем, когда учитывают только группу клинически очень низкого риска (4,2% в сравнении с 6,6%, соответственно; не показано). Кроме того, эта когорта с высокой экспрессией PDE4D7 состоит из мужчин из всех групп клинического риска, включая группу неблагоприятного промежуточного и высокого риска.
Таким образом, как можно видеть на фиг. 11, оценку риска PDE4D7 можно использовать в комбинации со вторым определением риска, таким как группа риска NCCN, для того, чтобы определять рекомендованную или предлагаемую терапию или лечение. Кроме того, дополнительная информация об оценке риска PDE4D7 может помогать стратифицировать пациентов для того, чтобы предоставлять другие, альтернативные или более подходящие лечения. Например, как видно на фиг. 17, есть 148 пациентов, отнесенных к группам UIR (неблагоприятного промежуточного) и HR (высокого) риска NCCN. На основе только этого анализа, этих пациентов можно выбирать для незамедлительного активного вмешательства, поскольку имеет место 34,4% и 46,5% шанс 5-летнего BCR. Однако с учетом оценки риска PDE4D7 этих пациентов можно стратифицировать таким образом, который дифференцирует между их фактическим риском 5-летнего BCR. Как результат, 14 пациентов с 14,3% шансом 5-летнего BCR, 10 пациентов с 10% шансом 5-летнего BCR и даже 59 пациентов с 28.8% шансом 5-летнего BCR могут взамен выбирать активное наблюдение вместо активной интервенционной терапии, тем самым отсрочивая многие серьезные побочные эффекты активной интервенционной терапии и повышая качество жизни этих пациентов. Другими словами, поставщик медицинских услуг может рекомендовать этим 24 или 83 пациентам проходить активное наблюдение вместо активного вмешательства даже несмотря на то, что группа риска NCCN будет указывать на то, что они должны проходить некоторое активное интервенционное лечение.
Со ссылкой на фиг. 12-15, влияние индекса Глисона биоптатов в сравнении с категорией риска PDE4D7 в подгруппах клинического риска с очень низким и низким риском (VL и LR), благоприятным промежуточным риском (FIR) и неблагоприятным промежуточным риском и высоким риском (UI и HR) измеряли посредством анализа выживаемости Каплана-Мейера для времени до биохимического и клинического рецидива. В случае группы VL и L риска (не показано) отсутствовало значимое влияние категорий риска PDE4D7 на стратификацию субкогорты пациентов дополнительно в различные группы риска. Это может показывать, что общий риск в этой группе уже очень низок и, следовательно, трудно проводить дальнейшую субстратификацию этой когорты пациентов. Другими словами, группа клинически низкого риска (PSA < 10 нг/мл, биопсия по Глисону ≤ 3+3; cT ≤ T2) представляет собой отдельную группу с небольшими геномными изменениями, которые таят небольшой риск агрессивности будущего заболевания и которые отражены в <10% шансе 5-летнего биохимического рецидива, <1% шансе 10-летнего прогрессирования до метастазов и отсутствии риска специфической смертности от злокачественной опухоли предстательной железы в течение 10 лет после первичного лечения.
Однако, как видно на фиг. 12 и 13, при анализе группы благоприятного промежуточного риска очевидно, что биопсия по Глисону не дает дополнительной значительной стратификации рисков в этой группе (фиг. 12, p = 0,19), тогда как категории риска PDE4D7 четко определяют различные поднаборы пациентов с различными продольными профилями риска (фиг. 13, p = 0,01).
Аналогичным образом, как видно на фиг. 14, анализ пациентов с неблагоприятным промежуточным риском и высоким риском показывает, что, несмотря на то, что индекс Глисона биоптатов стратифицирует пациентов по различиям в исходах клинических рецидивов, этот параметр главным образом указывает на мужчин с высоким риском биохимического рецидива после хирургической операции. В частности, это верно для небольшой группы мужчин с индексом Глисона биоптатов 4+4.
В отличие от этого, со ссылкой на фиг. 15, категории риска PDE4D7 субстратифицируют пациентов на две группы риска с наивысшими оценками PDE4D7 (3-5) с очень небольшим риском клинического рецидива в течение 10 лет после хирургической операции (только 1 событие у 114 пациентов; 0,9%). С другой стороны, события в категории наименьшего риска PDE4D7 (2 из 6) наступают в пределах 20 месяцев после хирургической операции, что указывает не только на высокий риск рецидива в этой группе пациентов (33,3%), но также быстрый рецидив после хирургической операции, в случае возникновения рецидива.
Таким образом, количественное определение PDE4D7 при оценке риска для пациентов со злокачественной опухолью предстательной железы добавляет независимое и комплементарное значение в стратификацию риска популяций, определяемых по клиническим параметрам. В частности, высокие уровни экспрессии PDE4D7 могут быть способны предоставлять дополнительное подкрепление решения для того, чтобы выбирать пациентов с более низким риском, по сравнению с только клинической информацией среди всех клинических групп риска. Одновременно низкая экспрессия PDE4D7 может вносить вклад в повторную стратификацию пациентов с очень высоким риском быстрой декомпенсации в конечных точках, таких как рецидив PSA. Кроме того, оценка риска PDE4D7, которую определяют как раскрыто в настоящем описании, позволяет субстратифицировать пациентов по различными рискам выживаемости без прогрессирования, что невозможно с использованием других определений риска.
Комбинация оценки риска PDE4D7 со вторым определением риска
Данные, представленные в этом описании, показывают, что риск прогрессирования заболевания, предоставляемый с помощью оценки риска PDE4D7, дает новое понимание субпопуляций злокачественной опухоли предстательной железы и, таким образом, должен быть комплементарен рискам, предоставляемым с помощью критериев существующей клинической практики (второе определение риска). Следовательно, выдвинута гипотеза о том, что комбинация обеих оценок риска с помощью вычислительного моделирования позволит предсказывать долгосрочные исходя заболевания более эффективно по сравнению с использованием любой одной оценки отдельно. Для того чтобы оценивать эту гипотезу, выбирали субкогорту из 449 пациентов (92 события; 20,5%) с полным анамнезом 5-летних исходов и создавали логистическую регрессионную модель для того, чтобы предсказывать 5-летний риск биохимического рецидива после хирургической операции. Моделирование подтверждало независимое предсказательное значение оценки риска PDE4D7 (отношение шансов = 0,42; 95% CI = 0,28-0,63; p <1,0E-04; таблица 3). Для того чтобы предсказывать индивидуальный 5-летний риск прогрессирования (BCR) для всех 449 пациентов использовали логистическую функцию регрессионной модели, которая представляет собой:
logit(p) = A + (B*LR) + (C*FIR) +
+ (D* UIR) + (E*HR) + (F*PDE4D7_оценк.), (3)
где LR = низкий риск NCCN, FIR = благоприятный промежуточный риск NCCN, UIR = неблагоприятный промежуточный риск NCCN, HR = высокий риск NCCN, A, B, C, D, E и F представляют собой веса, а PDE4D7_оценк. представляет собой непрерывную оценку риска PDE4D7.
В конкретных вариантах осуществления A может составлять приблизительно (-0,5)-0,5, например, 0,16, B может составлять приблизительно 0,0-1,0, например, 0,59, C может составлять приблизительно 0,0-2,0, например, 1,07, D может составлять приблизительно 1,0-3,0, например, 2,03, E может составлять приблизительно 2,0-3,0, например, 2,52, и F может составлять приблизительно (-1,5)-(-0,5), например, -0,87. При вычислении регрессионной модели, значение 1 подставляли в логистическую функцию для категории риска NCCN, в которую попадает пациент, и значение 0 подставляли для других категорий риска NCCN. Например, если пациента относили к высокому риску NCCN, значение 1 подставляли в логистическую функцию для HR и значение 0 подставляли для каждого из LR, FIR и UIR.
Вероятность p для пациента перенести предсказанное событие составляет
p = 1 / (1 + e(-logit(p)). (4)
Вероятность p дает комбинированную прогностическую оценку риска, которая основана на оценке риска PDE4D7 и втором определении риска, здесь на классификации NCCN (в дальнейшем также NCCN и оценке риска PDE4D7). Комбинированную прогностическую оценку риска можно классифицировать или категоризировать в одну из по меньшей мере двух групп риска. Например, может быть две группы риска, или три группы риска, или четыре группы риска, или больше чем четыре предварительно определяемых группы риска. Каждая группа риска охватывает соответствующий диапазон (непересекающихся) вероятностей p. Например, группа риска может включать все вероятности p от 0,0 до <0,1, другая группа риска от 0,1 до <0,25, другая группа риска от 0,25 до <0,5 и другая группа риска от 0,5 до <1,0.
В таблице 9 представлены дополнительные подробности о логистической регрессионной модели. Как указано выше, в качестве входных переменных модели использовали оценку риска PDE4D7 в комбинации с клиническими категориями риска NCCN: очень низкий риск (VLR), низкий риск (LR), благоприятный промежуточный риск (FIR), неблагоприятный промежуточный риск (UIR) и высокий риск (HR) прогрессирования заболевания. Группу с очень низким клиническим риском определяли как эталонную группу, т.е. для пациента, который попадает в клиническую категорию риска VLR NCCN оценку риска NCCN и PDE4D7 вычисляют с использованием только веса A из уравнения (3) (т.е. коэффициента регрессии для «Постоянной» в таблице) и взвешенной непрерывной оценки риска PDE4D7 F*PDE4D7_оценк. из уравнения (3) (вес F является коэффициентом регрессии для «PDE4D7_оценк.» в таблице). Соответствующие параметры логистического регрессионного моделирования приведены в таблице. Даны коэффициенты регрессии (веса) для построения функции logit(p), а также отношения шансов, 95% доверительные области (95% CI) и p-значения. Кроме того, представлены стандартные ошибки и статистика Вальда.
Таблица 9: логистическая регрессионная модель для предсказания 5-летнего биохимического рецидива после хирургической операции (449 пациентов).
Тестирование регрессионной модели показало хорошую калибровку ожидаемых в сравнении с наблюдаемыми событиями как в группах событий, так и в группах без событий:
На фиг. 16 представлен калибровочный график логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 для того, чтобы предсказывать 5-летний биохимический рецидив после хирургической операции на основе таблицы сопряженности после определения критерия Хосмера-Лемешоу (хи-квадрат 3,9; p=0,87) для когорты из 449 пациентов с полным 5-летним наблюдением. График показывает наблюдаемое в сравнении с ожидаемым (т.е. предсказанным логистической регрессионной моделью) числом пациентов, которые не имели рецидива PSA в течение 5 лет после первичного лечения в 10 децильных подгруппах общей когорты. Коэффициент детерминации составляет 0,9336, детали уравнения для нанесенной на график регрессионной линии y = отрезок на оси + наклон*x (прямая штриховая линия) представляет собой следующее: отрезок на оси = 0,7006 со стандартной ошибкой = 3,3621, 95% CI = -7,0525-8,4537, t = 0,2084 и p = 0,8401; наклон = 0,9804 со стандартной ошибкой = 0,09243, 95% CI = 0,7672-1,1935, t = 10,6072 и p <0,0001. Кривые штриховые линии показывают 95% доверительную область.
На фиг. 17 представлен калибровочный график логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 для того, чтобы предсказывать 5-летний биохимический рецидив после хирургической операции на основе таблицы сопряженности после определения критерия Хосмера-Лемешоу (хи-квадрат 3,9; p = 0, 87) для когорты из 449 пациентов с полным 5-летним наблюдением. График показывает наблюдаемое в сравнении с ожидаемым (т.е. предсказанным логистической регрессионной моделью) числом пациентов, которые имели рецидив PSA в течение 5 лет после первичного лечения в 10 децильных подгруппах общей когорты. Коэффициент детерминации составляет 0,9291, детали уравнения для построенной на графике регрессионной линии y = отрезок на оси + наклон*x (прямая штриховая линия) представляют собой следующее: отрезок на осик = 0,2083 со стандартной ошибкой = 1,0895, 95% CI = -2,3041-2,7207, t = 0,1912 и p = 0,8532; наклон = 0,9774 со стандартной ошибкой = 0,09544, 95% CI = 0,7573-1,1975, t = 10,2405 и p <0,0001. Кривые штриховые линии показывают 95% доверительную область.
Затем осуществляли анализ ROC (рабочей характеристики приемника) для того, чтобы вычислять 2-, 5- и 10-летние AUC (площади под кривой ROC), равные 0,779, 0,749 и 0,748, соответственно:
На фиг. 18 представлен ROC анализ 2-летнего биохимического рецидива после хирургической операции (BCR) для логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 в когорте из 449 пациентов с полным 5-летним наблюдением. График показывает кривую ROC на графике ложноположительных (чувствительность) в сравнении с ложноотрицательными (специфичность). Статистические детали ROC анализа представляют собой следующее: положительная группа = 47 (10,47%), отрицательная группа 402 (89,53%), распространенность заболевания = 10,5%, AUC = 0,779, стандартная ошибка = 0,0334, 95% CI = 0,738-0,817, z-статистика = 8,368, p (площадь=0,5) <0,0001.
На фиг. 19 представлен ROC анализ 5-летнего биохимического рецидива после хирургической операции (BCR) логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 в когорте из 449 пациентов с полным 5-летним наблюдением. График показывает кривую ROC на графике ложноположительных (чувствительность) в сравнении с ложноотрицательными (специфичность). Статистические детали ROC анализа представляют собой следующее: положительная группа = 92 (20,49%), отрицательная группа 357 (79,51%), распространенность заболевания = неизвестна , AUC = 0,749, стандартная ошибка = 0,0284, 95% CI = 0,706-0,788, z-статистика = 8,739, p (площадь=0,5) <0,0001.
На фиг. 20 представлен ROC анализ 10-летнего биохимического рецидива после хирургической операции (BCR) для логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 в когорте из 379 пациентов с полным 10-летним наблюдением. График показывает кривую ROC на графике ложноположительных (чувствительность) в сравнении с ложноотрицательными (специфичность). Статистические детали ROC анализа представляют собой следующее: положительная группа = 134 (35,36%), отрицательная группа 245 (64,64%), распространенность заболевания = неизвестна, AUC = 0,748, стандартная ошибка = 0,0259, 95% CI = 0,701-0,791, z-статистика = 9,549, p (площадь=0,5) <0,0001.
Как показано на фиг. 21, анализ предсказанного риска для каждой клинической категории риска NCCN в качестве функции оценки риска PDE4D7 обнаруживал гетерогенное распределение 5-летнего риска прогрессирования (BCR) даже в группах наименьшего клинического риска NCCN. На фиг. 5-летная предсказанная вероятность p нанесена на график в зависимости от оценок риска PDE4D7 для каждой индивидуальной категории риска NCCN.
На основе предсказанного риска по пациентам четыре группы риска определяли с низкой вероятностью 5-летнего (<10%) или 10-летнего (<15%) BCR после первичного лечения (группа риска от 0 до <0,1) на фиг. 22) или с очень существенным 5-летним риском после хирургической операции (>70%) рецидива PSA (группа риска (от 0,5 до 1,0) на фиг. 22) с медианным риском до события только 27,1 месяца. Медианный риск для группы риска (от 0,25 до <0,5) составлял 149,7 месяца, тогда как медианной выживаемости без прогрессирования не достигали для групп риска (от 0 до <0,1) и (от 0,1 до <0,25). При использовании группы риска (от 0 до <0,1) в качестве эталона в анализе Каплана-Мейера отношения рисков для группы риска (от 0,1 до <0,25), (от 0,25 до <0,5) и (от 0,5 до 1,0) составляли 2,2 (95% CI 1,7-3,5), 4,3 (95% CI 2,8-6,6) и 11,5 (95% CI 4,6-28,8), соответственно (фиг. 22; таблица 10).
Талица 10: таблица отношений рисков для логистической регрессионной модели с оценками NCCN и PDE4D7 в анализе выживаемости Каплана-Мейера для клинической конечной точки выживаемости без биохимического рецидива
Обсуждение
Для того чтобы оценивать индивидуальный риск на основе каждого пациента разрабатывали регрессионную модель на основе группы риска NCCN и оценки риска PDE4D7. Регрессионная модель показывала, что оценка риска PDE4D7 определяла широко перекрывающиеся распределения индивидуальных рисков в современных категориях риска NCCN. Независимо от группы риска NCCN, которую определяли для индивидуального пациента, более высокая оценка риска PDE4D7 определяла более низкий риск прогрессирования, тогда как более низкая оценка риска PDE4D7 показывала более высокий риск прогрессирующего заболевания для данного пациента.
В самое последнее время опубликованы долгосрочные результаты когорты активного наблюдения в гетеборгском рандомизированном скрининговом исследовании злокачественной опухоли предстательной железы. Они показывают, что мужчины с заболеванием с клинически низким риском могут иметь существенный риск перенести прогрессирующее заболевание при отложенной схеме лечения. Следовательно, авторы поставили вопрос о том, будут ли пригодны мужчины, отличные от тех, у которых заболевание с очень низким риском, для выжидательных стратегий наблюдения. Недавняя публикация 10-летних исходов из исследования ProtecT демонстрирует схожие заключения в группе активного мониторинга из этого исследования. Несмотря на то, что имеют место некоторые дискуссии о валидности этих результатов для современной практики, они могут подсказывать, что только пациентам с самым наименьшим риском не грозит какое-либо прогрессирование в ходе выжидательной тактики лечения. Хотя использование клинических критериев делает возможным выбор такой очень маленькой когорты пациентов с очень низким риском (например, 62 из 449 пациентов когорте авторов изобретения; 13,8%), авторы изобретения ожидают, что добавление молекулярных маркеров увеличит эту группу пациентов с очень низким риском (например, 122 из 449 в когорте авторов изобретения, когда оценку риска PDE4D7 объединяют с категорией риска NCC, что соответствует 27,2%).
Как используют в этом описании и в приложенной формуле изобретения, формы единственного числа также включают соответствующие формы множественного числа, пока контекст явно не диктует иное.
Термин «приблизительно» обозначает интервал точности, который специалист в данной области поймет как все еще обеспечивающий технический эффект рассматриваемого признака. Термин обычно указывает на отклонение от приведенного числового значения ±20%, или ±15%, или ±10%, или ±5%.
Следует понимать, что термин «содержит» не является ограничивающим. Для целей настоящего изобретения, термин «состоит из считают предпочтительным вариантом осуществления термина «содержит если далее в настоящем описании группу определяют как содержащую по меньшей мере определенное число вариантов осуществления, это также обозначает, что охвачена группа, которая состоит только из этих вариантов осуществления.
Кроме того, термины «первый», «второй», «третий» или «(a)», «(b)», «(c)», «(d)» и т.д. и т.п. в описании и в формуле изобретения используют, чтобы различать схожие элементы, и необязательно для описания последовательного или хронологического порядка. Следует понимать, что термины, используемые таким образом, взаимозаменяемы при подходящих условиях и что варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем описании, могут работать в других последовательностях, чем описано или проиллюстрировано в настоящем описании.
В случае, когда термины «первый», «второй», «третий» или «(a)», «(b)», «(c)», «(d)» и т.д. относятся к стадиям способа или использованию, между стадиями нет согласованности во времени или временном интервале, т.е. стадии можно осуществлять одновременно или могут иметь место временные интервалы в секунды, минуты, часы, дни, недели, месяцы или даже годы между такими стадиями, если не указано иное в заявке, как указано в настоящем описании выше или ниже. Следует понимать, что это изобретение не ограничено конкретными способами, протоколами, белками, бактериями, векторами, реактивами и т.д., описанными в настоящем описании, поскольку они могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, служит лишь цели описания конкретных вариантов осуществления, и не предназначена для того, чтобы ограничивать объем настоящего изобретения, который ограничен только приложенной формулой изобретения. Пока не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют те же значения, как их обычно понимает специалист в данной области.
Приложенный список последовательностей, озаглавленный 2014PF01672_Sequence Listing_ST25, включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Koninklijke Philips N.V.
<120> ОЦЕНКИ РИСКА НА ОСНОВЕ ЭКСПРЕССИИ ВАРИАНТА 7 ФОСФОДИЭСТЕРАЗЫ
4D ЧЕЛОВЕКА
<130> 2016PF01363
<150> PCT/EP2016/061886
<151> 2016-05-26
<150> EP15169788.5
<151> 2015-05-29
<160> 73
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 7801
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 1
gtggtggccg cgcacccggc cgcggctgat tcattcactt caagtgccgt gcagaaggct 60
cggcaggcgg ggcgggcgtg gggccgcggc tccgggttgg ggaccgagga gatccggctg 120
tggaccagac gctcctctgc ggggcgggca cccaagcgcg ctcgccaccc cctcgccatc 180
cgctagagcc gggctcctgg actgggactc gggcccgccg cacagttgaa aagtcgcata 240
gtggtttttc cgctcgcgtc gctgtgtgaa agttggctcg ccgctctttg cacgccctcc 300
ctggaggccg acccgagacg ccaagctgga gagaccgtgc ctccccgagg ccggccgccc 360
cgcgagcaca gcctccgccc ccgttgcact gccgggctgg gcaatatgaa ggagcagccc 420
tcatgtgccg gcaccgggca tccgagcatg gcggggtatg gcaggatggc cccctttgaa 480
ctcgctagcg gacccgtgaa gcgcttgaga actgagtccc cctttccctg tctcttcgca 540
gaggaggcct accagaaact ggccagcgag accctggagg agctggactg gtgtctggac 600
cagctagaga ccctacagac caggcactcc gtcagtgaga tggcctccaa caagtttaaa 660
aggatgctta atcgggagct cacccatctc tctgaaatga gtcggtctgg aaatcaagtg 720
tcagagttta tatcaaacac attcttagat aagcaacatg aagtggaaat tccttctcca 780
actcagaagg aaaaggagaa aaagaaaaga ccaatgtctc agatcagtgg agtcaagaaa 840
ttgatgcaca gctctagtct gactaattca agtatcccaa ggtttggagt taaaactgaa 900
caagaagatg tccttgccaa ggaactagaa gatgtgaaca aatggggtct tcatgttttc 960
agaatagcag agttgtctgg taaccggccc ttgactgtta tcatgcacac catttttcag 1020
gaacgggatt tattaaaaac atttaaaatt ccagtagata ctttaattac atatcttatg 1080
actctcgaag accattacca tgctgatgtg gcctatcaca acaatatcca tgctgcagat 1140
gttgtccagt ctactcatgt gctattatct acacctgctt tggaggctgt gtttacagat 1200
ttggagattc ttgcagcaat ttttgccagt gcaatacatg atgtagatca tcctggtgtg 1260
tccaatcaat ttctgatcaa tacaaactct gaacttgcct tgatgtacaa tgattcctca 1320
gtcttagaga accatcattt ggctgtgggc tttaaattgc ttcaggaaga aaactgtgac 1380
attttccaga atttgaccaa aaaacaaaga caatctttaa ggaaaatggt cattgacatc 1440
gtacttgcaa cagatatgtc aaaacacatg aatctactgg ctgatttgaa gactatggtt 1500
gaaactaaga aagtgacaag ctctggagtt cttcttcttg ataattattc cgataggatt 1560
caggttcttc agaatatggt gcactgtgca gatctgagca acccaacaaa gcctctccag 1620
ctgtaccgcc agtggacgga ccggataatg gaggagttct tccgccaagg agaccgagag 1680
agggaacgtg gcatggagat aagccccatg tgtgacaagc acaatgcttc cgtggaaaaa 1740
tcacaggtgg gcttcataga ctatattgtt catcccctct gggagacatg ggcagacctc 1800
gtccaccctg acgcccagga tattttggac actttggagg acaatcgtga atggtaccag 1860
agcacaatcc ctcagagccc ctctcctgca cctgatgacc cagaggaggg ccggcagggt 1920
caaactgaga aattccagtt tgaactaact ttagaggaag atggtgagtc agacacggaa 1980
aaggacagtg gcagtcaagt ggaagaagac actagctgca gtgactccaa gactctttgt 2040
actcaagact cagagtctac tgaaattccc cttgatgaac aggttgaaga ggaggcagta 2100
ggggaagaag aggaaagcca gcctgaagcc tgtgtcatag atgatcgttc tcctgacacg 2160
taacagtgca aaaactttca tgcctttttt ttttttaagt agaaaaattg tttccaaagt 2220
gcatgtcaca tgccacaacc acggtcacac ctcactgtca tctgccagga cgtttgttga 2280
acaaaactga ccttgactac tcagtccagc gctcaggaat atcgtaacca gttttttcac 2340
ctccatgtca tccgagcaag gtggacatct tcacgaacag cgtttttaac aagatttcag 2400
cttggtagag ctgacaaagc agataaaatc tactccaaat tattttcaag agagtgtgac 2460
tcatcaggca gcccaaaagt ttattggact tggggtttct attccttttt atttgtttgc 2520
aatattttca gaagaaaggc attgcacaga gtgaacttaa tggacgaagc aacaaatatg 2580
tcaagaacag gacatagcac gaatctgtta ccagtaggag gaggatgagc cacagaaatt 2640
gcataatttt ctaatttcaa gtcttcctga tacatgactg aatagtgtgg ttcagtgagc 2700
tgcactgacc tctacatttt gtatgatatg taaaacagat tttttgtaga gcttactttt 2760
attattaaat gtattgaggt attatattta aaaaaaacta tgttcagaac ttcatctgcc 2820
actggttatt tttttctaag gagtaacttg caagttttca gtacaaatct gtgctacact 2880
ggataaaaat ctaatttatg aattttactt gcaccttata gttcatagca attaactgat 2940
ttgtagtgat tcattgtttg ttttatatac caatgacttc catattttaa aagagaaaaa 3000
caactttatg ttgcaggaaa ccctttttgt aagtctttat tatttacttt gcattttgtt 3060
tcactctttc cagataagca gagttgctct tcaccagtgt ttttcttcat gtgcaaagtg 3120
actatttgtt ctataatact tttatgtgtg ttatatcaaa tgtgtcttaa gcttcatgca 3180
aactcagtca tcagttcgtg ttgtctgaag caagtgggag atatataaat acccagtagc 3240
taaaatggtc agtctttttt agatgttttc ctacttagta tctcctaata acgttttgct 3300
gtgtcactag atgttcattt cacaagtgca tgtctttcta ataatccaca catttcatgc 3360
tctaataatc cacacatttc atgctcattt ttattgtttt tacagccagt tatagtaaga 3420
aaaaggtttt tccccttgtg ctgctttata atttagcgtg tgtctgaacc ttatccatgt 3480
ttgctagatg aggtcttgtc aaatatatca ctaccattgt caccggtgaa aagaaacagg 3540
tagttaagtt agggttaaca ttcatttcaa ccacgaggtt gtatatcatg actagctttt 3600
actcttggtt tacagagaaa agttaaacag ccaactaggc agtttttaag aatattaaca 3660
atatattaac aaacaccaat acaactaatc ctatttggtt ttaatgattt caccatggga 3720
ttaagaacta tatcaggaac atccctgaga aacggtttta agtgtagcaa ctactcttcc 3780
ttaatggaca gccacataac gtgtaggaag tcctttatca cttatcctcg atccataagc 3840
atatcttgca gaggggaact acttctttaa acacatggag ggaaagaaga tgatgccact 3900
ggcaccagag ggttagtact gtgatgcatc ctaaaatatt tattatattg gtaaaaattc 3960
tggttaaata aaaaattaga gatcactctt ggctgatttc agcaccagga actgtattac 4020
agttttagag attaattcct agtgtttacc tgattatagc agttggcatc atggggcatt 4080
taattctgac tttatcccca cgtcagcctt aataaagtct tctttacctt ctctatgaag 4140
actttaaagc ccaaataatc atttttcaca ttgatattca agaattgaga tagatagaag 4200
ccaaagtggg tatctgacaa gtggaaaatc aaacgtttaa gaagaattac aactctgaaa 4260
agcatttata tgtggaactt ctcaaggagc ctcctgggga ctggaaagta agtcatcagc 4320
caggcaaatg actcatgctg aagagagtcc ccatttcagt cccctgagat ctagctgatg 4380
cttagatcct ttgaaataaa aattatgtct ttataactct gatcttttac ataaagcaga 4440
agaggaatca actagttaat tgcaaggttt ctactctgtt tcctctgtaa agatcagatg 4500
gtaatctttc aaataagaaa aaaataaaga cgtatgtttg accaagtagt ttcacaagaa 4560
tatttgggaa cttgtttctt ttaattttat ttgtccctga gtgaagtcta gaaagaaagg 4620
taaagagtct agagtttatt cctctttcca aaacattctc attcctctcc tccctacact 4680
tagtatttcc cccacagagt gcctagaatc ttaataatga ataaaataaa aagcagcaat 4740
atgtcattaa caaatccaga cctgaaaggg taaagggttt ataactgcac taataaagag 4800
aggctctttt tttttcttcc agtttgttgg tttttaatgg taccgtgttg taaagatacc 4860
cactaatgga caatcaaatt gcagaaaagg ctcaatatcc aagagacagg gactaatgca 4920
ctgtacaatc tgcttatcct tgcccttctc tcttgccaaa gtgtgcttca gaaatatata 4980
ctgctttaaa aaagaataaa agaatatcct tttacaagtg gctttacatt tcctaaaatg 5040
ccataagaaa atgcaatatc tgggtactgt atggggaaaa aaatgtccaa gtttgtgtaa 5100
aaccagtgca tttcagcttg caagttactg aacacaataa tgctgtttta attttgtttt 5160
atatcagtta aaattcacaa taatgtagat agaacaaatt acagacaagg aaagaaaaaa 5220
cttgaatgaa atggatttta cagaaagctt tatgataatt tttgaatgca ttatttattt 5280
tttgtgccat gcattttttt tctcaccaaa tgaccttacc tgtaatacag tcttgtttgt 5340
ctgtttacaa ccatgtattt attgcaatgt acatactgta atgttaattg taaattatct 5400
gttcttatta aaacatcatc ccatgatggg atggtgttga tatatttgga aactcttggt 5460
gagagaatga atggtgtgta tacatactct gtacattttt cttttctcct gtaatatagt 5520
cttgtcacct tagagcttgt ttatggaaga ttcaagaaaa ctataaaata cttaaagata 5580
tataaattta aaaaaacata gctgcaggtc tttggtccca gggctgtgcc ttaactttaa 5640
ccaatatttt cttctgtttt gctgcatttg aaaggtaaca gtggagctag ggctgggcat 5700
tttacatcca ggcttttaat tgattagaat tctgccaata ggtggatttt acaaaaccac 5760
agacaacctc tgaaagattc tgagaccctt ttgagacaga agctcttaag tacttcttgc 5820
cagggagcag cactgcatgt gtgatggttg tttgccatct gttgatcagg aactacttca 5880
gctacttgca tttgattatt tccttttttt ttttttttaa ctcggaaaca caactgggga 5940
aatatattct ttcccagtga ttataaacaa tctttttctt ttttttaagt ccttttggct 6000
tctagagctc ataggaaaat ggacttgatt tgaaattgga gccagagttt actcgtgttg 6060
gttatctatt catcagcttc ctgacatgtt aagagaatac attaaagaga aaatactgtt 6120
ttttaatcct aaaatttttc ttccactaag ataaaccaaa tgtccttaca tatatgtaaa 6180
cccatctatt taaacgcaaa ggtgggttga tgtcagttta catagcagaa agcattcact 6240
atcctctaag atttgtttct gcaaaacttt cattgcttta gaattttaaa atttcacctt 6300
gtacaatggc cagcccctaa agcaggaaac atttataatg gattatatgg aaacatcctc 6360
ccagtacttg cccagccctt gaatcatgtg gcttttcagt gaaaggaaag attctttttc 6420
taggaaaaat gagcctattt tattttattt tattttattt tttgacacaa actgtagatt 6480
ttagcagccc tggcccaaag gaatttgatt acttttgttt taaacagtac aaaggggaca 6540
ctataattac aaaaacatcc ttaactgatt tgagttgttt ttatttcttt ggatatattt 6600
tcagagtggt aaattgtgtg tgagaattac aaatgattat tcttttagtg gtttcttagc 6660
ctctcttaca gcccacgggg atagtactgt acatcaatac cttcatatga aatttttata 6720
tgcaatgaaa ataaaagcat gggttgattc tgcctattta tgactcaatc ttttacaaat 6780
aaaagattat tcattttaaa ttatagttca atcagcatgt ctcttaggat actgaacgtg 6840
gttgaaatga aaggatagtg acatcataag ttagtactga tattcataac caaataaagc 6900
caacttgagt aattttgcta cattaaaaat taccaaaatt acttagatgg cctataagat 6960
taagcatggt gttttctaag caagctttga aaggggcctt ccatacttac ttaattgaat 7020
attctgggat attgaaaatt attcagatac ttgacaatta tttttggtta cctactccgc 7080
aaactacaaa gttttaagga ctcaacaata agttaatgag acacagtgtt tgctttcatg 7140
gagcttacag tctggagggg acaaaggctt aaacaatact catataatta tatatgtgat 7200
cagtacaatg aaggagctca gtggggtaaa taagcaggaa cctgaacttg atctgttccg 7260
gagggccaca gaaggcttcc ttgaggcctt gagaaagtga tttgcatctg agttctgaag 7320
gattgtaaga ggtaactagg gaaaaagttg acaggaagag gaaggggatc cagacaagaa 7380
acatttgcaa agatcttgag gcataaatga gcttgagaca tctggagaaa ctgaggaaaa 7440
gtgagagagt aggcagggcc tggagccgca gagccattgc taaccatcct gtgtgagata 7500
tcccccattc tgtagcttta ttctcataac cctgctcaat tttctttata acacttctca 7560
cagatttata tacgtgtttg tttttgttat ctgtctctcc caccagacca cagctccatg 7620
agagcaaggt ctttgcttac caatatatca ctagcactta aaactatgcc tggtacacag 7680
taggttctta atatgtgttg aatatagcca tcaaattgat attggatata attcaatctg 7740
ataagatatt ttgagatatt aaagagtttt taacttgata ccataaaaaa aaaaaaaaaa 7800
a 7801
<210> 2
<211> 585
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Lys Glu Gln Pro Ser Cys Ala Gly Thr Gly His Pro Ser Met Ala
1 5 10 15
Gly Tyr Gly Arg Met Ala Pro Phe Glu Leu Ala Ser Gly Pro Val Lys
20 25 30
Arg Leu Arg Thr Glu Ser Pro Phe Pro Cys Leu Phe Ala Glu Glu Ala
35 40 45
Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu
50 55 60
Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala
65 70 75 80
Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser
85 90 95
Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr
100 105 110
Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys
115 120 125
Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys
130 135 140
Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe
145 150 155 160
Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp
165 170 175
Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly
180 185 190
Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp
195 200 205
Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu
210 215 220
Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn
225 230 235 240
Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr
245 250 255
Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile
260 265 270
Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln
275 280 285
Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser
290 295 300
Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln
305 310 315 320
Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln
325 330 335
Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser
340 345 350
Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys
355 360 365
Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg
370 375 380
Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro
385 390 395 400
Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu
405 410 415
Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile
420 425 430
Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val
435 440 445
Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp
450 455 460
Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn
465 470 475 480
Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro
485 490 495
Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe
500 505 510
Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser
515 520 525
Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu
530 535 540
Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val
545 550 555 560
Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys
565 570 575
Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr
580 585
<210> 3
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D1D2_прямой праймер
<400> 3
aatatgaagg agcagccctc a 21
<210> 4
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D1D2_обратный праймер
<400> 4
gtctcgctgg ccagtttc 18
<210> 5
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд PDE4D1D2
<400> 5
catccgagca tggcggga 18
<210> 6
<211> 7715
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 6
gtggtggccg cgcacccggc cgcggctgat tcattcactt caagtgccgt gcagaaggct 60
cggcaggcgg ggcgggcgtg gggccgcggc tccgggttgg ggaccgagga gatccggctg 120
tggaccagac gctcctctgc ggggcgggca cccaagcgcg ctcgccaccc cctcgccatc 180
cgctagagcc gggctcctgg actgggactc gggcccgccg cacagttgaa aagtcgcata 240
gtggtttttc cgctcgcgtc gctgtgtgaa agttggctcg ccgctctttg cacgccctcc 300
ctggaggccg acccgagacg ccaagctgga gagaccgtgc ctccccgagg ccggccgccc 360
cgcgagcaca gcctccgccc ccgttgcact gccgggctgg gcaatatgaa ggagcagccc 420
tcatgtgccg gcaccgggca tccgagcatg gcgggaggag gcctaccaga aactggccag 480
cgagaccctg gaggagctgg actggtgtct ggaccagcta gagaccctac agaccaggca 540
ctccgtcagt gagatggcct ccaacaagtt taaaaggatg cttaatcggg agctcaccca 600
tctctctgaa atgagtcggt ctggaaatca agtgtcagag tttatatcaa acacattctt 660
agataagcaa catgaagtgg aaattccttc tccaactcag aaggaaaagg agaaaaagaa 720
aagaccaatg tctcagatca gtggagtcaa gaaattgatg cacagctcta gtctgactaa 780
ttcaagtatc ccaaggtttg gagttaaaac tgaacaagaa gatgtccttg ccaaggaact 840
agaagatgtg aacaaatggg gtcttcatgt tttcagaata gcagagttgt ctggtaaccg 900
gcccttgact gttatcatgc acaccatttt tcaggaacgg gatttattaa aaacatttaa 960
aattccagta gatactttaa ttacatatct tatgactctc gaagaccatt accatgctga 1020
tgtggcctat cacaacaata tccatgctgc agatgttgtc cagtctactc atgtgctatt 1080
atctacacct gctttggagg ctgtgtttac agatttggag attcttgcag caatttttgc 1140
cagtgcaata catgatgtag atcatcctgg tgtgtccaat caatttctga tcaatacaaa 1200
ctctgaactt gccttgatgt acaatgattc ctcagtctta gagaaccatc atttggctgt 1260
gggctttaaa ttgcttcagg aagaaaactg tgacattttc cagaatttga ccaaaaaaca 1320
aagacaatct ttaaggaaaa tggtcattga catcgtactt gcaacagata tgtcaaaaca 1380
catgaatcta ctggctgatt tgaagactat ggttgaaact aagaaagtga caagctctgg 1440
agttcttctt cttgataatt attccgatag gattcaggtt cttcagaata tggtgcactg 1500
tgcagatctg agcaacccaa caaagcctct ccagctgtac cgccagtgga cggaccggat 1560
aatggaggag ttcttccgcc aaggagaccg agagagggaa cgtggcatgg agataagccc 1620
catgtgtgac aagcacaatg cttccgtgga aaaatcacag gtgggcttca tagactatat 1680
tgttcatccc ctctgggaga catgggcaga cctcgtccac cctgacgccc aggatatttt 1740
ggacactttg gaggacaatc gtgaatggta ccagagcaca atccctcaga gcccctctcc 1800
tgcacctgat gacccagagg agggccggca gggtcaaact gagaaattcc agtttgaact 1860
aactttagag gaagatggtg agtcagacac ggaaaaggac agtggcagtc aagtggaaga 1920
agacactagc tgcagtgact ccaagactct ttgtactcaa gactcagagt ctactgaaat 1980
tccccttgat gaacaggttg aagaggaggc agtaggggaa gaagaggaaa gccagcctga 2040
agcctgtgtc atagatgatc gttctcctga cacgtaacag tgcaaaaact ttcatgcctt 2100
tttttttttt aagtagaaaa attgtttcca aagtgcatgt cacatgccac aaccacggtc 2160
acacctcact gtcatctgcc aggacgtttg ttgaacaaaa ctgaccttga ctactcagtc 2220
cagcgctcag gaatatcgta accagttttt tcacctccat gtcatccgag caaggtggac 2280
atcttcacga acagcgtttt taacaagatt tcagcttggt agagctgaca aagcagataa 2340
aatctactcc aaattatttt caagagagtg tgactcatca ggcagcccaa aagtttattg 2400
gacttggggt ttctattcct ttttatttgt ttgcaatatt ttcagaagaa aggcattgca 2460
cagagtgaac ttaatggacg aagcaacaaa tatgtcaaga acaggacata gcacgaatct 2520
gttaccagta ggaggaggat gagccacaga aattgcataa ttttctaatt tcaagtcttc 2580
ctgatacatg actgaatagt gtggttcagt gagctgcact gacctctaca ttttgtatga 2640
tatgtaaaac agattttttg tagagcttac ttttattatt aaatgtattg aggtattata 2700
tttaaaaaaa actatgttca gaacttcatc tgccactggt tatttttttc taaggagtaa 2760
cttgcaagtt ttcagtacaa atctgtgcta cactggataa aaatctaatt tatgaatttt 2820
acttgcacct tatagttcat agcaattaac tgatttgtag tgattcattg tttgttttat 2880
ataccaatga cttccatatt ttaaaagaga aaaacaactt tatgttgcag gaaacccttt 2940
ttgtaagtct ttattattta ctttgcattt tgtttcactc tttccagata agcagagttg 3000
ctcttcacca gtgtttttct tcatgtgcaa agtgactatt tgttctataa tacttttatg 3060
tgtgttatat caaatgtgtc ttaagcttca tgcaaactca gtcatcagtt cgtgttgtct 3120
gaagcaagtg ggagatatat aaatacccag tagctaaaat ggtcagtctt ttttagatgt 3180
tttcctactt agtatctcct aataacgttt tgctgtgtca ctagatgttc atttcacaag 3240
tgcatgtctt tctaataatc cacacatttc atgctctaat aatccacaca tttcatgctc 3300
atttttattg tttttacagc cagttatagt aagaaaaagg tttttcccct tgtgctgctt 3360
tataatttag cgtgtgtctg aaccttatcc atgtttgcta gatgaggtct tgtcaaatat 3420
atcactacca ttgtcaccgg tgaaaagaaa caggtagtta agttagggtt aacattcatt 3480
tcaaccacga ggttgtatat catgactagc ttttactctt ggtttacaga gaaaagttaa 3540
acagccaact aggcagtttt taagaatatt aacaatatat taacaaacac caatacaact 3600
aatcctattt ggttttaatg atttcaccat gggattaaga actatatcag gaacatccct 3660
gagaaacggt tttaagtgta gcaactactc ttccttaatg gacagccaca taacgtgtag 3720
gaagtccttt atcacttatc ctcgatccat aagcatatct tgcagagggg aactacttct 3780
ttaaacacat ggagggaaag aagatgatgc cactggcacc agagggttag tactgtgatg 3840
catcctaaaa tatttattat attggtaaaa attctggtta aataaaaaat tagagatcac 3900
tcttggctga tttcagcacc aggaactgta ttacagtttt agagattaat tcctagtgtt 3960
tacctgatta tagcagttgg catcatgggg catttaattc tgactttatc cccacgtcag 4020
ccttaataaa gtcttcttta ccttctctat gaagacttta aagcccaaat aatcattttt 4080
cacattgata ttcaagaatt gagatagata gaagccaaag tgggtatctg acaagtggaa 4140
aatcaaacgt ttaagaagaa ttacaactct gaaaagcatt tatatgtgga acttctcaag 4200
gagcctcctg gggactggaa agtaagtcat cagccaggca aatgactcat gctgaagaga 4260
gtccccattt cagtcccctg agatctagct gatgcttaga tcctttgaaa taaaaattat 4320
gtctttataa ctctgatctt ttacataaag cagaagagga atcaactagt taattgcaag 4380
gtttctactc tgtttcctct gtaaagatca gatggtaatc tttcaaataa gaaaaaaata 4440
aagacgtatg tttgaccaag tagtttcaca agaatatttg ggaacttgtt tcttttaatt 4500
ttatttgtcc ctgagtgaag tctagaaaga aaggtaaaga gtctagagtt tattcctctt 4560
tccaaaacat tctcattcct ctcctcccta cacttagtat ttcccccaca gagtgcctag 4620
aatcttaata atgaataaaa taaaaagcag caatatgtca ttaacaaatc cagacctgaa 4680
agggtaaagg gtttataact gcactaataa agagaggctc tttttttttc ttccagtttg 4740
ttggttttta atggtaccgt gttgtaaaga tacccactaa tggacaatca aattgcagaa 4800
aaggctcaat atccaagaga cagggactaa tgcactgtac aatctgctta tccttgccct 4860
tctctcttgc caaagtgtgc ttcagaaata tatactgctt taaaaaagaa taaaagaata 4920
tccttttaca agtggcttta catttcctaa aatgccataa gaaaatgcaa tatctgggta 4980
ctgtatgggg aaaaaaatgt ccaagtttgt gtaaaaccag tgcatttcag cttgcaagtt 5040
actgaacaca ataatgctgt tttaattttg ttttatatca gttaaaattc acaataatgt 5100
agatagaaca aattacagac aaggaaagaa aaaacttgaa tgaaatggat tttacagaaa 5160
gctttatgat aatttttgaa tgcattattt attttttgtg ccatgcattt tttttctcac 5220
caaatgacct tacctgtaat acagtcttgt ttgtctgttt acaaccatgt atttattgca 5280
atgtacatac tgtaatgtta attgtaaatt atctgttctt attaaaacat catcccatga 5340
tgggatggtg ttgatatatt tggaaactct tggtgagaga atgaatggtg tgtatacata 5400
ctctgtacat ttttcttttc tcctgtaata tagtcttgtc accttagagc ttgtttatgg 5460
aagattcaag aaaactataa aatacttaaa gatatataaa tttaaaaaaa catagctgca 5520
ggtctttggt cccagggctg tgccttaact ttaaccaata ttttcttctg ttttgctgca 5580
tttgaaaggt aacagtggag ctagggctgg gcattttaca tccaggcttt taattgatta 5640
gaattctgcc aataggtgga ttttacaaaa ccacagacaa cctctgaaag attctgagac 5700
ccttttgaga cagaagctct taagtacttc ttgccaggga gcagcactgc atgtgtgatg 5760
gttgtttgcc atctgttgat caggaactac ttcagctact tgcatttgat tatttccttt 5820
tttttttttt ttaactcgga aacacaactg gggaaatata ttctttccca gtgattataa 5880
acaatctttt tctttttttt aagtcctttt ggcttctaga gctcatagga aaatggactt 5940
gatttgaaat tggagccaga gtttactcgt gttggttatc tattcatcag cttcctgaca 6000
tgttaagaga atacattaaa gagaaaatac tgttttttaa tcctaaaatt tttcttccac 6060
taagataaac caaatgtcct tacatatatg taaacccatc tatttaaacg caaaggtggg 6120
ttgatgtcag tttacatagc agaaagcatt cactatcctc taagatttgt ttctgcaaaa 6180
ctttcattgc tttagaattt taaaatttca ccttgtacaa tggccagccc ctaaagcagg 6240
aaacatttat aatggattat atggaaacat cctcccagta cttgcccagc ccttgaatca 6300
tgtggctttt cagtgaaagg aaagattctt tttctaggaa aaatgagcct attttatttt 6360
attttatttt attttttgac acaaactgta gattttagca gccctggccc aaaggaattt 6420
gattactttt gttttaaaca gtacaaaggg gacactataa ttacaaaaac atccttaact 6480
gatttgagtt gtttttattt ctttggatat attttcagag tggtaaattg tgtgtgagaa 6540
ttacaaatga ttattctttt agtggtttct tagcctctct tacagcccac ggggatagta 6600
ctgtacatca ataccttcat atgaaatttt tatatgcaat gaaaataaaa gcatgggttg 6660
attctgccta tttatgactc aatcttttac aaataaaaga ttattcattt taaattatag 6720
ttcaatcagc atgtctctta ggatactgaa cgtggttgaa atgaaaggat agtgacatca 6780
taagttagta ctgatattca taaccaaata aagccaactt gagtaatttt gctacattaa 6840
aaattaccaa aattacttag atggcctata agattaagca tggtgttttc taagcaagct 6900
ttgaaagggg ccttccatac ttacttaatt gaatattctg ggatattgaa aattattcag 6960
atacttgaca attatttttg gttacctact ccgcaaacta caaagtttta aggactcaac 7020
aataagttaa tgagacacag tgtttgcttt catggagctt acagtctgga ggggacaaag 7080
gcttaaacaa tactcatata attatatatg tgatcagtac aatgaaggag ctcagtgggg 7140
taaataagca ggaacctgaa cttgatctgt tccggagggc cacagaaggc ttccttgagg 7200
ccttgagaaa gtgatttgca tctgagttct gaaggattgt aagaggtaac tagggaaaaa 7260
gttgacagga agaggaaggg gatccagaca agaaacattt gcaaagatct tgaggcataa 7320
atgagcttga gacatctgga gaaactgagg aaaagtgaga gagtaggcag ggcctggagc 7380
cgcagagcca ttgctaacca tcctgtgtga gatatccccc attctgtagc tttattctca 7440
taaccctgct caattttctt tataacactt ctcacagatt tatatacgtg tttgtttttg 7500
ttatctgtct ctcccaccag accacagctc catgagagca aggtctttgc ttaccaatat 7560
atcactagca cttaaaacta tgcctggtac acagtaggtt cttaatatgt gttgaatata 7620
gccatcaaat tgatattgga tataattcaa tctgataaga tattttgaga tattaaagag 7680
tttttaactt gataccataa aaaaaaaaaa aaaaa 7715
<210> 7
<211> 507
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 7
Met Ala Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His
1 5 10 15
Leu Ser Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser
20 25 30
Asn Thr Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr
35 40 45
Gln Lys Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly
50 55 60
Val Lys Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro
65 70 75 80
Arg Phe Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu
85 90 95
Glu Asp Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu
100 105 110
Ser Gly Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu
115 120 125
Arg Asp Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr
130 135 140
Tyr Leu Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His
145 150 155 160
Asn Asn Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu
165 170 175
Ser Thr Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala
180 185 190
Ala Ile Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser
195 200 205
Asn Gln Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn
210 215 220
Asp Ser Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu
225 230 235 240
Leu Gln Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln
245 250 255
Arg Gln Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp
260 265 270
Met Ser Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu
275 280 285
Thr Lys Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser
290 295 300
Asp Arg Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser
305 310 315 320
Asn Pro Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile
325 330 335
Met Glu Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met
340 345 350
Glu Ile Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser
355 360 365
Gln Val Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp
370 375 380
Ala Asp Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu
385 390 395 400
Asp Asn Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro
405 410 415
Ala Pro Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe
420 425 430
Gln Phe Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys
435 440 445
Asp Ser Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys
450 455 460
Thr Leu Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu
465 470 475 480
Gln Val Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu
485 490 495
Ala Cys Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr
500 505
<210> 8
<211> 7783
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 8
aatacttgtt gcaataattg cccacgatag ctgctcaaac aagagagttg gaattcatct 60
gtaaaaatca ctacatgtaa cgtaggagac aagaaaaata ttaatgacag aagatctgcg 120
aacatgatgc acgtgaataa ttttcccttt agaaggcatt cctggatatg ttttgatgtg 180
gacaatggca catctgcggg acggagtccc ttggatccca tgaccagccc aggatccggg 240
ctaattctcc aagcaaattt tgtccacagt caacgacggg agtccttcct gtatcgatcc 300
gacagcgatt atgacctctc tccaaagtct atgtcccgga actcctccat tgccagtgat 360
atacacggag atgacttgat tgtgactcca tttgctcagg tcttggccag tctgcgaact 420
gtacgaaaca actttgctgc attaactaat ttgcaagatc gagcacctag caaaagatca 480
cccatgtgca accaaccatc catcaacaaa gccaccataa cagaggaggc ctaccagaaa 540
ctggccagcg agaccctgga ggagctggac tggtgtctgg accagctaga gaccctacag 600
accaggcact ccgtcagtga gatggcctcc aacaagttta aaaggatgct taatcgggag 660
ctcacccatc tctctgaaat gagtcggtct ggaaatcaag tgtcagagtt tatatcaaac 720
acattcttag ataagcaaca tgaagtggaa attccttctc caactcagaa ggaaaaggag 780
aaaaagaaaa gaccaatgtc tcagatcagt ggagtcaaga aattgatgca cagctctagt 840
ctgactaatt caagtatccc aaggtttgga gttaaaactg aacaagaaga tgtccttgcc 900
aaggaactag aagatgtgaa caaatggggt cttcatgttt tcagaatagc agagttgtct 960
ggtaaccggc ccttgactgt tatcatgcac accatttttc aggaacggga tttattaaaa 1020
acatttaaaa ttccagtaga tactttaatt acatatctta tgactctcga agaccattac 1080
catgctgatg tggcctatca caacaatatc catgctgcag atgttgtcca gtctactcat 1140
gtgctattat ctacacctgc tttggaggct gtgtttacag atttggagat tcttgcagca 1200
atttttgcca gtgcaataca tgatgtagat catcctggtg tgtccaatca atttctgatc 1260
aatacaaact ctgaacttgc cttgatgtac aatgattcct cagtcttaga gaaccatcat 1320
ttggctgtgg gctttaaatt gcttcaggaa gaaaactgtg acattttcca gaatttgacc 1380
aaaaaacaaa gacaatcttt aaggaaaatg gtcattgaca tcgtacttgc aacagatatg 1440
tcaaaacaca tgaatctact ggctgatttg aagactatgg ttgaaactaa gaaagtgaca 1500
agctctggag ttcttcttct tgataattat tccgatagga ttcaggttct tcagaatatg 1560
gtgcactgtg cagatctgag caacccaaca aagcctctcc agctgtaccg ccagtggacg 1620
gaccggataa tggaggagtt cttccgccaa ggagaccgag agagggaacg tggcatggag 1680
ataagcccca tgtgtgacaa gcacaatgct tccgtggaaa aatcacaggt gggcttcata 1740
gactatattg ttcatcccct ctgggagaca tgggcagacc tcgtccaccc tgacgcccag 1800
gatattttgg acactttgga ggacaatcgt gaatggtacc agagcacaat ccctcagagc 1860
ccctctcctg cacctgatga cccagaggag ggccggcagg gtcaaactga gaaattccag 1920
tttgaactaa ctttagagga agatggtgag tcagacacgg aaaaggacag tggcagtcaa 1980
gtggaagaag acactagctg cagtgactcc aagactcttt gtactcaaga ctcagagtct 2040
actgaaattc cccttgatga acaggttgaa gaggaggcag taggggaaga agaggaaagc 2100
cagcctgaag cctgtgtcat agatgatcgt tctcctgaca cgtaacagtg caaaaacttt 2160
catgcctttt ttttttttaa gtagaaaaat tgtttccaaa gtgcatgtca catgccacaa 2220
ccacggtcac acctcactgt catctgccag gacgtttgtt gaacaaaact gaccttgact 2280
actcagtcca gcgctcagga atatcgtaac cagttttttc acctccatgt catccgagca 2340
aggtggacat cttcacgaac agcgttttta acaagatttc agcttggtag agctgacaaa 2400
gcagataaaa tctactccaa attattttca agagagtgtg actcatcagg cagcccaaaa 2460
gtttattgga cttggggttt ctattccttt ttatttgttt gcaatatttt cagaagaaag 2520
gcattgcaca gagtgaactt aatggacgaa gcaacaaata tgtcaagaac aggacatagc 2580
acgaatctgt taccagtagg aggaggatga gccacagaaa ttgcataatt ttctaatttc 2640
aagtcttcct gatacatgac tgaatagtgt ggttcagtga gctgcactga cctctacatt 2700
ttgtatgata tgtaaaacag attttttgta gagcttactt ttattattaa atgtattgag 2760
gtattatatt taaaaaaaac tatgttcaga acttcatctg ccactggtta tttttttcta 2820
aggagtaact tgcaagtttt cagtacaaat ctgtgctaca ctggataaaa atctaattta 2880
tgaattttac ttgcacctta tagttcatag caattaactg atttgtagtg attcattgtt 2940
tgttttatat accaatgact tccatatttt aaaagagaaa aacaacttta tgttgcagga 3000
aacccttttt gtaagtcttt attatttact ttgcattttg tttcactctt tccagataag 3060
cagagttgct cttcaccagt gtttttcttc atgtgcaaag tgactatttg ttctataata 3120
cttttatgtg tgttatatca aatgtgtctt aagcttcatg caaactcagt catcagttcg 3180
tgttgtctga agcaagtggg agatatataa atacccagta gctaaaatgg tcagtctttt 3240
ttagatgttt tcctacttag tatctcctaa taacgttttg ctgtgtcact agatgttcat 3300
ttcacaagtg catgtctttc taataatcca cacatttcat gctctaataa tccacacatt 3360
tcatgctcat ttttattgtt tttacagcca gttatagtaa gaaaaaggtt tttccccttg 3420
tgctgcttta taatttagcg tgtgtctgaa ccttatccat gtttgctaga tgaggtcttg 3480
tcaaatatat cactaccatt gtcaccggtg aaaagaaaca ggtagttaag ttagggttaa 3540
cattcatttc aaccacgagg ttgtatatca tgactagctt ttactcttgg tttacagaga 3600
aaagttaaac agccaactag gcagttttta agaatattaa caatatatta acaaacacca 3660
atacaactaa tcctatttgg ttttaatgat ttcaccatgg gattaagaac tatatcagga 3720
acatccctga gaaacggttt taagtgtagc aactactctt ccttaatgga cagccacata 3780
acgtgtagga agtcctttat cacttatcct cgatccataa gcatatcttg cagaggggaa 3840
ctacttcttt aaacacatgg agggaaagaa gatgatgcca ctggcaccag agggttagta 3900
ctgtgatgca tcctaaaata tttattatat tggtaaaaat tctggttaaa taaaaaatta 3960
gagatcactc ttggctgatt tcagcaccag gaactgtatt acagttttag agattaattc 4020
ctagtgttta cctgattata gcagttggca tcatggggca tttaattctg actttatccc 4080
cacgtcagcc ttaataaagt cttctttacc ttctctatga agactttaaa gcccaaataa 4140
tcatttttca cattgatatt caagaattga gatagataga agccaaagtg ggtatctgac 4200
aagtggaaaa tcaaacgttt aagaagaatt acaactctga aaagcattta tatgtggaac 4260
ttctcaagga gcctcctggg gactggaaag taagtcatca gccaggcaaa tgactcatgc 4320
tgaagagagt ccccatttca gtcccctgag atctagctga tgcttagatc ctttgaaata 4380
aaaattatgt ctttataact ctgatctttt acataaagca gaagaggaat caactagtta 4440
attgcaaggt ttctactctg tttcctctgt aaagatcaga tggtaatctt tcaaataaga 4500
aaaaaataaa gacgtatgtt tgaccaagta gtttcacaag aatatttggg aacttgtttc 4560
ttttaatttt atttgtccct gagtgaagtc tagaaagaaa ggtaaagagt ctagagttta 4620
ttcctctttc caaaacattc tcattcctct cctccctaca cttagtattt cccccacaga 4680
gtgcctagaa tcttaataat gaataaaata aaaagcagca atatgtcatt aacaaatcca 4740
gacctgaaag ggtaaagggt ttataactgc actaataaag agaggctctt tttttttctt 4800
ccagtttgtt ggtttttaat ggtaccgtgt tgtaaagata cccactaatg gacaatcaaa 4860
ttgcagaaaa ggctcaatat ccaagagaca gggactaatg cactgtacaa tctgcttatc 4920
cttgcccttc tctcttgcca aagtgtgctt cagaaatata tactgcttta aaaaagaata 4980
aaagaatatc cttttacaag tggctttaca tttcctaaaa tgccataaga aaatgcaata 5040
tctgggtact gtatggggaa aaaaatgtcc aagtttgtgt aaaaccagtg catttcagct 5100
tgcaagttac tgaacacaat aatgctgttt taattttgtt ttatatcagt taaaattcac 5160
aataatgtag atagaacaaa ttacagacaa ggaaagaaaa aacttgaatg aaatggattt 5220
tacagaaagc tttatgataa tttttgaatg cattatttat tttttgtgcc atgcattttt 5280
tttctcacca aatgacctta cctgtaatac agtcttgttt gtctgtttac aaccatgtat 5340
ttattgcaat gtacatactg taatgttaat tgtaaattat ctgttcttat taaaacatca 5400
tcccatgatg ggatggtgtt gatatatttg gaaactcttg gtgagagaat gaatggtgtg 5460
tatacatact ctgtacattt ttcttttctc ctgtaatata gtcttgtcac cttagagctt 5520
gtttatggaa gattcaagaa aactataaaa tacttaaaga tatataaatt taaaaaaaca 5580
tagctgcagg tctttggtcc cagggctgtg ccttaacttt aaccaatatt ttcttctgtt 5640
ttgctgcatt tgaaaggtaa cagtggagct agggctgggc attttacatc caggctttta 5700
attgattaga attctgccaa taggtggatt ttacaaaacc acagacaacc tctgaaagat 5760
tctgagaccc ttttgagaca gaagctctta agtacttctt gccagggagc agcactgcat 5820
gtgtgatggt tgtttgccat ctgttgatca ggaactactt cagctacttg catttgatta 5880
tttccttttt tttttttttt aactcggaaa cacaactggg gaaatatatt ctttcccagt 5940
gattataaac aatctttttc ttttttttaa gtccttttgg cttctagagc tcataggaaa 6000
atggacttga tttgaaattg gagccagagt ttactcgtgt tggttatcta ttcatcagct 6060
tcctgacatg ttaagagaat acattaaaga gaaaatactg ttttttaatc ctaaaatttt 6120
tcttccacta agataaacca aatgtcctta catatatgta aacccatcta tttaaacgca 6180
aaggtgggtt gatgtcagtt tacatagcag aaagcattca ctatcctcta agatttgttt 6240
ctgcaaaact ttcattgctt tagaatttta aaatttcacc ttgtacaatg gccagcccct 6300
aaagcaggaa acatttataa tggattatat ggaaacatcc tcccagtact tgcccagccc 6360
ttgaatcatg tggcttttca gtgaaaggaa agattctttt tctaggaaaa atgagcctat 6420
tttattttat tttattttat tttttgacac aaactgtaga ttttagcagc cctggcccaa 6480
aggaatttga ttacttttgt tttaaacagt acaaagggga cactataatt acaaaaacat 6540
ccttaactga tttgagttgt ttttatttct ttggatatat tttcagagtg gtaaattgtg 6600
tgtgagaatt acaaatgatt attcttttag tggtttctta gcctctctta cagcccacgg 6660
ggatagtact gtacatcaat accttcatat gaaattttta tatgcaatga aaataaaagc 6720
atgggttgat tctgcctatt tatgactcaa tcttttacaa ataaaagatt attcatttta 6780
aattatagtt caatcagcat gtctcttagg atactgaacg tggttgaaat gaaaggatag 6840
tgacatcata agttagtact gatattcata accaaataaa gccaacttga gtaattttgc 6900
tacattaaaa attaccaaaa ttacttagat ggcctataag attaagcatg gtgttttcta 6960
agcaagcttt gaaaggggcc ttccatactt acttaattga atattctggg atattgaaaa 7020
ttattcagat acttgacaat tatttttggt tacctactcc gcaaactaca aagttttaag 7080
gactcaacaa taagttaatg agacacagtg tttgctttca tggagcttac agtctggagg 7140
ggacaaaggc ttaaacaata ctcatataat tatatatgtg atcagtacaa tgaaggagct 7200
cagtggggta aataagcagg aacctgaact tgatctgttc cggagggcca cagaaggctt 7260
ccttgaggcc ttgagaaagt gatttgcatc tgagttctga aggattgtaa gaggtaacta 7320
gggaaaaagt tgacaggaag aggaagggga tccagacaag aaacatttgc aaagatcttg 7380
aggcataaat gagcttgaga catctggaga aactgaggaa aagtgagaga gtaggcaggg 7440
cctggagccg cagagccatt gctaaccatc ctgtgtgaga tatcccccat tctgtagctt 7500
tattctcata accctgctca attttcttta taacacttct cacagattta tatacgtgtt 7560
tgtttttgtt atctgtctct cccaccagac cacagctcca tgagagcaag gtctttgctt 7620
accaatatat cactagcact taaaactatg cctggtacac agtaggttct taatatgtgt 7680
tgaatatagc catcaaattg atattggata taattcaatc tgataagata ttttgagata 7740
ttaaagagtt tttaacttga taccataaaa aaaaaaaaaa aaa 7783
<210> 9
<211> 673
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 9
Met Met His Val Asn Asn Phe Pro Phe Arg Arg His Ser Trp Ile Cys
1 5 10 15
Phe Asp Val Asp Asn Gly Thr Ser Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro
20 25 30
Met Thr Ser Pro Gly Ser Gly Leu Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His
35 40 45
Ser Gln Arg Arg Glu Ser Phe Leu Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp
50 55 60
Leu Ser Pro Lys Ser Met Ser Arg Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile
65 70 75 80
His Gly Asp Asp Leu Ile Val Thr Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser
85 90 95
Leu Arg Thr Val Arg Asn Asn Phe Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp
100 105 110
Arg Ala Pro Ser Lys Arg Ser Pro Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Ile Thr Glu Glu Ala Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr
130 135 140
Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr
145 150 155 160
Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu
165 170 175
Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln
180 185 190
Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val
195 200 205
Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro
210 215 220
Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu
225 230 235 240
Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp
245 250 255
Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val
260 265 270
Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met
275 280 285
His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro
290 295 300
Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His
305 310 315 320
Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln
325 330 335
Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr
340 345 350
Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val
355 360 365
Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu
370 375 380
Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser Ser Val Leu Glu Asn His His Leu
385 390 395 400
Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln
405 410 415
Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp
420 425 430
Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp
435 440 445
Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu
450 455 460
Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val
465 470 475 480
His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg
485 490 495
Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg
500 505 510
Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn
515 520 525
Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His
530 535 540
Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp
545 550 555 560
Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile
565 570 575
Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln
580 585 590
Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly
595 600 605
Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr
610 615 620
Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr
625 630 635 640
Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu
645 650 655
Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp
660 665 670
Thr
<210> 10
<211> 8240
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 10
cccctctcgg tagccctgag gctctggcgc cttcaagtga gaagctaagc accagcctct 60
gctgggctgc agaagcggcg gcggcggcag cagcagcagc agcatcagga aggcgctcgg 120
gccagcgcgg tgaacccggg ctgggcagca ggtcgcggag ccgcgagcca ggatggaggc 180
agagggcagc agcgcgccgg cccgggcggg cagcggagag ggcagcgaca gcgccggcgg 240
ggccacgctc aaagccccca agcatctctg gaggcacgag cagcaccacc agtacccgct 300
ccggcagccc cagttccgcc tcctgcatcc ccatcaccac ctgcccccgc cgccgccacc 360
ctcgccccag ccccagcccc agtgtccgct acagccgccg ccgccgcccc ccctgccgcc 420
gcccccgccg ccgcccgggg ctgcccgcgg ccgctacgcc tcgagcgggg ccaccggccg 480
cgtccggcat cgcggctact cggacaccga gcgctacctg tactgtcgcg ccatggaccg 540
cacctcctac gcggtggaga ccggccaccg gcccggcctg aagaaatcca ggatgtcctg 600
gccctcctcg ttccagggac tcaggcgttt tgatgtggac aatggcacat ctgcgggacg 660
gagtcccttg gatcccatga ccagcccagg atccgggcta attctccaag caaattttgt 720
ccacagtcaa cgacgggagt ccttcctgta tcgatccgac agcgattatg acctctctcc 780
aaagtctatg tcccggaact cctccattgc cagtgatata cacggagatg acttgattgt 840
gactccattt gctcaggtct tggccagtct gcgaactgta cgaaacaact ttgctgcatt 900
aactaatttg caagatcgag cacctagcaa aagatcaccc atgtgcaacc aaccatccat 960
caacaaagcc accataacag aggaggccta ccagaaactg gccagcgaga ccctggagga 1020
gctggactgg tgtctggacc agctagagac cctacagacc aggcactccg tcagtgagat 1080
ggcctccaac aagtttaaaa ggatgcttaa tcgggagctc acccatctct ctgaaatgag 1140
tcggtctgga aatcaagtgt cagagtttat atcaaacaca ttcttagata agcaacatga 1200
agtggaaatt ccttctccaa ctcagaagga aaaggagaaa aagaaaagac caatgtctca 1260
gatcagtgga gtcaagaaat tgatgcacag ctctagtctg actaattcaa gtatcccaag 1320
gtttggagtt aaaactgaac aagaagatgt ccttgccaag gaactagaag atgtgaacaa 1380
atggggtctt catgttttca gaatagcaga gttgtctggt aaccggccct tgactgttat 1440
catgcacacc atttttcagg aacgggattt attaaaaaca tttaaaattc cagtagatac 1500
tttaattaca tatcttatga ctctcgaaga ccattaccat gctgatgtgg cctatcacaa 1560
caatatccat gctgcagatg ttgtccagtc tactcatgtg ctattatcta cacctgcttt 1620
ggaggctgtg tttacagatt tggagattct tgcagcaatt tttgccagtg caatacatga 1680
tgtagatcat cctggtgtgt ccaatcaatt tctgatcaat acaaactctg aacttgcctt 1740
gatgtacaat gattcctcag tcttagagaa ccatcatttg gctgtgggct ttaaattgct 1800
tcaggaagaa aactgtgaca ttttccagaa tttgaccaaa aaacaaagac aatctttaag 1860
gaaaatggtc attgacatcg tacttgcaac agatatgtca aaacacatga atctactggc 1920
tgatttgaag actatggttg aaactaagaa agtgacaagc tctggagttc ttcttcttga 1980
taattattcc gataggattc aggttcttca gaatatggtg cactgtgcag atctgagcaa 2040
cccaacaaag cctctccagc tgtaccgcca gtggacggac cggataatgg aggagttctt 2100
ccgccaagga gaccgagaga gggaacgtgg catggagata agccccatgt gtgacaagca 2160
caatgcttcc gtggaaaaat cacaggtggg cttcatagac tatattgttc atcccctctg 2220
ggagacatgg gcagacctcg tccaccctga cgcccaggat attttggaca ctttggagga 2280
caatcgtgaa tggtaccaga gcacaatccc tcagagcccc tctcctgcac ctgatgaccc 2340
agaggagggc cggcagggtc aaactgagaa attccagttt gaactaactt tagaggaaga 2400
tggtgagtca gacacggaaa aggacagtgg cagtcaagtg gaagaagaca ctagctgcag 2460
tgactccaag actctttgta ctcaagactc agagtctact gaaattcccc ttgatgaaca 2520
ggttgaagag gaggcagtag gggaagaaga ggaaagccag cctgaagcct gtgtcataga 2580
tgatcgttct cctgacacgt aacagtgcaa aaactttcat gccttttttt tttttaagta 2640
gaaaaattgt ttccaaagtg catgtcacat gccacaacca cggtcacacc tcactgtcat 2700
ctgccaggac gtttgttgaa caaaactgac cttgactact cagtccagcg ctcaggaata 2760
tcgtaaccag ttttttcacc tccatgtcat ccgagcaagg tggacatctt cacgaacagc 2820
gtttttaaca agatttcagc ttggtagagc tgacaaagca gataaaatct actccaaatt 2880
attttcaaga gagtgtgact catcaggcag cccaaaagtt tattggactt ggggtttcta 2940
ttccttttta tttgtttgca atattttcag aagaaaggca ttgcacagag tgaacttaat 3000
ggacgaagca acaaatatgt caagaacagg acatagcacg aatctgttac cagtaggagg 3060
aggatgagcc acagaaattg cataattttc taatttcaag tcttcctgat acatgactga 3120
atagtgtggt tcagtgagct gcactgacct ctacattttg tatgatatgt aaaacagatt 3180
ttttgtagag cttactttta ttattaaatg tattgaggta ttatatttaa aaaaaactat 3240
gttcagaact tcatctgcca ctggttattt ttttctaagg agtaacttgc aagttttcag 3300
tacaaatctg tgctacactg gataaaaatc taatttatga attttacttg caccttatag 3360
ttcatagcaa ttaactgatt tgtagtgatt cattgtttgt tttatatacc aatgacttcc 3420
atattttaaa agagaaaaac aactttatgt tgcaggaaac cctttttgta agtctttatt 3480
atttactttg cattttgttt cactctttcc agataagcag agttgctctt caccagtgtt 3540
tttcttcatg tgcaaagtga ctatttgttc tataatactt ttatgtgtgt tatatcaaat 3600
gtgtcttaag cttcatgcaa actcagtcat cagttcgtgt tgtctgaagc aagtgggaga 3660
tatataaata cccagtagct aaaatggtca gtctttttta gatgttttcc tacttagtat 3720
ctcctaataa cgttttgctg tgtcactaga tgttcatttc acaagtgcat gtctttctaa 3780
taatccacac atttcatgct ctaataatcc acacatttca tgctcatttt tattgttttt 3840
acagccagtt atagtaagaa aaaggttttt ccccttgtgc tgctttataa tttagcgtgt 3900
gtctgaacct tatccatgtt tgctagatga ggtcttgtca aatatatcac taccattgtc 3960
accggtgaaa agaaacaggt agttaagtta gggttaacat tcatttcaac cacgaggttg 4020
tatatcatga ctagctttta ctcttggttt acagagaaaa gttaaacagc caactaggca 4080
gtttttaaga atattaacaa tatattaaca aacaccaata caactaatcc tatttggttt 4140
taatgatttc accatgggat taagaactat atcaggaaca tccctgagaa acggttttaa 4200
gtgtagcaac tactcttcct taatggacag ccacataacg tgtaggaagt cctttatcac 4260
ttatcctcga tccataagca tatcttgcag aggggaacta cttctttaaa cacatggagg 4320
gaaagaagat gatgccactg gcaccagagg gttagtactg tgatgcatcc taaaatattt 4380
attatattgg taaaaattct ggttaaataa aaaattagag atcactcttg gctgatttca 4440
gcaccaggaa ctgtattaca gttttagaga ttaattccta gtgtttacct gattatagca 4500
gttggcatca tggggcattt aattctgact ttatccccac gtcagcctta ataaagtctt 4560
ctttaccttc tctatgaaga ctttaaagcc caaataatca tttttcacat tgatattcaa 4620
gaattgagat agatagaagc caaagtgggt atctgacaag tggaaaatca aacgtttaag 4680
aagaattaca actctgaaaa gcatttatat gtggaacttc tcaaggagcc tcctggggac 4740
tggaaagtaa gtcatcagcc aggcaaatga ctcatgctga agagagtccc catttcagtc 4800
ccctgagatc tagctgatgc ttagatcctt tgaaataaaa attatgtctt tataactctg 4860
atcttttaca taaagcagaa gaggaatcaa ctagttaatt gcaaggtttc tactctgttt 4920
cctctgtaaa gatcagatgg taatctttca aataagaaaa aaataaagac gtatgtttga 4980
ccaagtagtt tcacaagaat atttgggaac ttgtttcttt taattttatt tgtccctgag 5040
tgaagtctag aaagaaaggt aaagagtcta gagtttattc ctctttccaa aacattctca 5100
ttcctctcct ccctacactt agtatttccc ccacagagtg cctagaatct taataatgaa 5160
taaaataaaa agcagcaata tgtcattaac aaatccagac ctgaaagggt aaagggttta 5220
taactgcact aataaagaga ggctcttttt ttttcttcca gtttgttggt ttttaatggt 5280
accgtgttgt aaagataccc actaatggac aatcaaattg cagaaaaggc tcaatatcca 5340
agagacaggg actaatgcac tgtacaatct gcttatcctt gcccttctct cttgccaaag 5400
tgtgcttcag aaatatatac tgctttaaaa aagaataaaa gaatatcctt ttacaagtgg 5460
ctttacattt cctaaaatgc cataagaaaa tgcaatatct gggtactgta tggggaaaaa 5520
aatgtccaag tttgtgtaaa accagtgcat ttcagcttgc aagttactga acacaataat 5580
gctgttttaa ttttgtttta tatcagttaa aattcacaat aatgtagata gaacaaatta 5640
cagacaagga aagaaaaaac ttgaatgaaa tggattttac agaaagcttt atgataattt 5700
ttgaatgcat tatttatttt ttgtgccatg catttttttt ctcaccaaat gaccttacct 5760
gtaatacagt cttgtttgtc tgtttacaac catgtattta ttgcaatgta catactgtaa 5820
tgttaattgt aaattatctg ttcttattaa aacatcatcc catgatggga tggtgttgat 5880
atatttggaa actcttggtg agagaatgaa tggtgtgtat acatactctg tacatttttc 5940
ttttctcctg taatatagtc ttgtcacctt agagcttgtt tatggaagat tcaagaaaac 6000
tataaaatac ttaaagatat ataaatttaa aaaaacatag ctgcaggtct ttggtcccag 6060
ggctgtgcct taactttaac caatattttc ttctgttttg ctgcatttga aaggtaacag 6120
tggagctagg gctgggcatt ttacatccag gcttttaatt gattagaatt ctgccaatag 6180
gtggatttta caaaaccaca gacaacctct gaaagattct gagacccttt tgagacagaa 6240
gctcttaagt acttcttgcc agggagcagc actgcatgtg tgatggttgt ttgccatctg 6300
ttgatcagga actacttcag ctacttgcat ttgattattt cctttttttt tttttttaac 6360
tcggaaacac aactggggaa atatattctt tcccagtgat tataaacaat ctttttcttt 6420
tttttaagtc cttttggctt ctagagctca taggaaaatg gacttgattt gaaattggag 6480
ccagagttta ctcgtgttgg ttatctattc atcagcttcc tgacatgtta agagaataca 6540
ttaaagagaa aatactgttt tttaatccta aaatttttct tccactaaga taaaccaaat 6600
gtccttacat atatgtaaac ccatctattt aaacgcaaag gtgggttgat gtcagtttac 6660
atagcagaaa gcattcacta tcctctaaga tttgtttctg caaaactttc attgctttag 6720
aattttaaaa tttcaccttg tacaatggcc agcccctaaa gcaggaaaca tttataatgg 6780
attatatgga aacatcctcc cagtacttgc ccagcccttg aatcatgtgg cttttcagtg 6840
aaaggaaaga ttctttttct aggaaaaatg agcctatttt attttatttt attttatttt 6900
ttgacacaaa ctgtagattt tagcagccct ggcccaaagg aatttgatta cttttgtttt 6960
aaacagtaca aaggggacac tataattaca aaaacatcct taactgattt gagttgtttt 7020
tatttctttg gatatatttt cagagtggta aattgtgtgt gagaattaca aatgattatt 7080
cttttagtgg tttcttagcc tctcttacag cccacgggga tagtactgta catcaatacc 7140
ttcatatgaa atttttatat gcaatgaaaa taaaagcatg ggttgattct gcctatttat 7200
gactcaatct tttacaaata aaagattatt cattttaaat tatagttcaa tcagcatgtc 7260
tcttaggata ctgaacgtgg ttgaaatgaa aggatagtga catcataagt tagtactgat 7320
attcataacc aaataaagcc aacttgagta attttgctac attaaaaatt accaaaatta 7380
cttagatggc ctataagatt aagcatggtg ttttctaagc aagctttgaa aggggccttc 7440
catacttact taattgaata ttctgggata ttgaaaatta ttcagatact tgacaattat 7500
ttttggttac ctactccgca aactacaaag ttttaaggac tcaacaataa gttaatgaga 7560
cacagtgttt gctttcatgg agcttacagt ctggagggga caaaggctta aacaatactc 7620
atataattat atatgtgatc agtacaatga aggagctcag tggggtaaat aagcaggaac 7680
ctgaacttga tctgttccgg agggccacag aaggcttcct tgaggccttg agaaagtgat 7740
ttgcatctga gttctgaagg attgtaagag gtaactaggg aaaaagttga caggaagagg 7800
aaggggatcc agacaagaaa catttgcaaa gatcttgagg cataaatgag cttgagacat 7860
ctggagaaac tgaggaaaag tgagagagta ggcagggcct ggagccgcag agccattgct 7920
aaccatcctg tgtgagatat cccccattct gtagctttat tctcataacc ctgctcaatt 7980
ttctttataa cacttctcac agatttatat acgtgtttgt ttttgttatc tgtctctccc 8040
accagaccac agctccatga gagcaaggtc tttgcttacc aatatatcac tagcacttaa 8100
aactatgcct ggtacacagt aggttcttaa tatgtgttga atatagccat caaattgata 8160
ttggatataa ttcaatctga taagatattt tgagatatta aagagttttt aacttgatac 8220
cataaaaaaa aaaaaaaaaa 8240
<210> 11
<211> 809
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 11
Met Glu Ala Glu Gly Ser Ser Ala Pro Ala Arg Ala Gly Ser Gly Glu
1 5 10 15
Gly Ser Asp Ser Ala Gly Gly Ala Thr Leu Lys Ala Pro Lys His Leu
20 25 30
Trp Arg His Glu Gln His His Gln Tyr Pro Leu Arg Gln Pro Gln Phe
35 40 45
Arg Leu Leu His Pro His His His Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ser
50 55 60
Pro Gln Pro Gln Pro Gln Cys Pro Leu Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro
65 70 75 80
Leu Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Ala Ala Arg Gly Arg Tyr Ala
85 90 95
Ser Ser Gly Ala Thr Gly Arg Val Arg His Arg Gly Tyr Ser Asp Thr
100 105 110
Glu Arg Tyr Leu Tyr Cys Arg Ala Met Asp Arg Thr Ser Tyr Ala Val
115 120 125
Glu Thr Gly His Arg Pro Gly Leu Lys Lys Ser Arg Met Ser Trp Pro
130 135 140
Ser Ser Phe Gln Gly Leu Arg Arg Phe Asp Val Asp Asn Gly Thr Ser
145 150 155 160
Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr Ser Pro Gly Ser Gly Leu
165 170 175
Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln Arg Arg Glu Ser Phe Leu
180 185 190
Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser Pro Lys Ser Met Ser Arg
195 200 205
Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly Asp Asp Leu Ile Val Thr
210 215 220
Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg Thr Val Arg Asn Asn Phe
225 230 235 240
Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala Pro Ser Lys Arg Ser Pro
245 250 255
Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala Thr Ile Thr Glu Glu Ala
260 265 270
Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu
275 280 285
Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala
290 295 300
Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser
305 310 315 320
Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr
325 330 335
Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys
340 345 350
Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys
355 360 365
Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe
370 375 380
Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp
385 390 395 400
Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly
405 410 415
Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp
420 425 430
Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu
435 440 445
Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn
450 455 460
Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr
465 470 475 480
Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile
485 490 495
Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln
500 505 510
Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser
515 520 525
Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln
530 535 540
Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln
545 550 555 560
Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser
565 570 575
Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys
580 585 590
Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg
595 600 605
Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro
610 615 620
Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu
625 630 635 640
Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile
645 650 655
Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val
660 665 670
Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp
675 680 685
Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn
690 695 700
Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro
705 710 715 720
Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe
725 730 735
Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser
740 745 750
Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu
755 760 765
Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val
770 775 780
Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys
785 790 795 800
Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr
805
<210> 12
<211> 7979
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 12
cagcagcagg ctcagacctg cttccctgga catttccggg accgtgagcg agggaaccac 60
gttgccctgg attcttgcca gctgtacaaa gttgaccagg aaaatggctc agcagacaag 120
cccggacact ttaacagtac ctgaagtgga taatccgcat tgtccaaacc cgtggctgaa 180
cgaagacctt gtgaaatcct tgcgagaaaa cctgttgcag catgagaagt ccaagacagc 240
gaggaaatcg gtttctccca agctctctcc agtgatctct ccgagaaatt cccccaggct 300
tctgcgcaga atgcttctca gcagcaacat ccccaaacag cggcgtttca cggtggcaca 360
tacatgtttt gatgtggaca atggcacatc tgcgggacgg agtcccttgg atcccatgac 420
cagcccagga tccgggctaa ttctccaagc aaattttgtc cacagtcaac gacgggagtc 480
cttcctgtat cgatccgaca gcgattatga cctctctcca aagtctatgt cccggaactc 540
ctccattgcc agtgatatac acggagatga cttgattgtg actccatttg ctcaggtctt 600
ggccagtctg cgaactgtac gaaacaactt tgctgcatta actaatttgc aagatcgagc 660
acctagcaaa agatcaccca tgtgcaacca accatccatc aacaaagcca ccataacaga 720
ggaggcctac cagaaactgg ccagcgagac cctggaggag ctggactggt gtctggacca 780
gctagagacc ctacagacca ggcactccgt cagtgagatg gcctccaaca agtttaaaag 840
gatgcttaat cgggagctca cccatctctc tgaaatgagt cggtctggaa atcaagtgtc 900
agagtttata tcaaacacat tcttagataa gcaacatgaa gtggaaattc cttctccaac 960
tcagaaggaa aaggagaaaa agaaaagacc aatgtctcag atcagtggag tcaagaaatt 1020
gatgcacagc tctagtctga ctaattcaag tatcccaagg tttggagtta aaactgaaca 1080
agaagatgtc cttgccaagg aactagaaga tgtgaacaaa tggggtcttc atgttttcag 1140
aatagcagag ttgtctggta accggccctt gactgttatc atgcacacca tttttcagga 1200
acgggattta ttaaaaacat ttaaaattcc agtagatact ttaattacat atcttatgac 1260
tctcgaagac cattaccatg ctgatgtggc ctatcacaac aatatccatg ctgcagatgt 1320
tgtccagtct actcatgtgc tattatctac acctgctttg gaggctgtgt ttacagattt 1380
ggagattctt gcagcaattt ttgccagtgc aatacatgat gtagatcatc ctggtgtgtc 1440
caatcaattt ctgatcaata caaactctga acttgccttg atgtacaatg attcctcagt 1500
cttagagaac catcatttgg ctgtgggctt taaattgctt caggaagaaa actgtgacat 1560
tttccagaat ttgaccaaaa aacaaagaca atctttaagg aaaatggtca ttgacatcgt 1620
acttgcaaca gatatgtcaa aacacatgaa tctactggct gatttgaaga ctatggttga 1680
aactaagaaa gtgacaagct ctggagttct tcttcttgat aattattccg ataggattca 1740
ggttcttcag aatatggtgc actgtgcaga tctgagcaac ccaacaaagc ctctccagct 1800
gtaccgccag tggacggacc ggataatgga ggagttcttc cgccaaggag accgagagag 1860
ggaacgtggc atggagataa gccccatgtg tgacaagcac aatgcttccg tggaaaaatc 1920
acaggtgggc ttcatagact atattgttca tcccctctgg gagacatggg cagacctcgt 1980
ccaccctgac gcccaggata ttttggacac tttggaggac aatcgtgaat ggtaccagag 2040
cacaatccct cagagcccct ctcctgcacc tgatgaccca gaggagggcc ggcagggtca 2100
aactgagaaa ttccagtttg aactaacttt agaggaagat ggtgagtcag acacggaaaa 2160
ggacagtggc agtcaagtgg aagaagacac tagctgcagt gactccaaga ctctttgtac 2220
tcaagactca gagtctactg aaattcccct tgatgaacag gttgaagagg aggcagtagg 2280
ggaagaagag gaaagccagc ctgaagcctg tgtcatagat gatcgttctc ctgacacgta 2340
acagtgcaaa aactttcatg cctttttttt ttttaagtag aaaaattgtt tccaaagtgc 2400
atgtcacatg ccacaaccac ggtcacacct cactgtcatc tgccaggacg tttgttgaac 2460
aaaactgacc ttgactactc agtccagcgc tcaggaatat cgtaaccagt tttttcacct 2520
ccatgtcatc cgagcaaggt ggacatcttc acgaacagcg tttttaacaa gatttcagct 2580
tggtagagct gacaaagcag ataaaatcta ctccaaatta ttttcaagag agtgtgactc 2640
atcaggcagc ccaaaagttt attggacttg gggtttctat tcctttttat ttgtttgcaa 2700
tattttcaga agaaaggcat tgcacagagt gaacttaatg gacgaagcaa caaatatgtc 2760
aagaacagga catagcacga atctgttacc agtaggagga ggatgagcca cagaaattgc 2820
ataattttct aatttcaagt cttcctgata catgactgaa tagtgtggtt cagtgagctg 2880
cactgacctc tacattttgt atgatatgta aaacagattt tttgtagagc ttacttttat 2940
tattaaatgt attgaggtat tatatttaaa aaaaactatg ttcagaactt catctgccac 3000
tggttatttt tttctaagga gtaacttgca agttttcagt acaaatctgt gctacactgg 3060
ataaaaatct aatttatgaa ttttacttgc accttatagt tcatagcaat taactgattt 3120
gtagtgattc attgtttgtt ttatatacca atgacttcca tattttaaaa gagaaaaaca 3180
actttatgtt gcaggaaacc ctttttgtaa gtctttatta tttactttgc attttgtttc 3240
actctttcca gataagcaga gttgctcttc accagtgttt ttcttcatgt gcaaagtgac 3300
tatttgttct ataatacttt tatgtgtgtt atatcaaatg tgtcttaagc ttcatgcaaa 3360
ctcagtcatc agttcgtgtt gtctgaagca agtgggagat atataaatac ccagtagcta 3420
aaatggtcag tcttttttag atgttttcct acttagtatc tcctaataac gttttgctgt 3480
gtcactagat gttcatttca caagtgcatg tctttctaat aatccacaca tttcatgctc 3540
taataatcca cacatttcat gctcattttt attgttttta cagccagtta tagtaagaaa 3600
aaggtttttc cccttgtgct gctttataat ttagcgtgtg tctgaacctt atccatgttt 3660
gctagatgag gtcttgtcaa atatatcact accattgtca ccggtgaaaa gaaacaggta 3720
gttaagttag ggttaacatt catttcaacc acgaggttgt atatcatgac tagcttttac 3780
tcttggttta cagagaaaag ttaaacagcc aactaggcag tttttaagaa tattaacaat 3840
atattaacaa acaccaatac aactaatcct atttggtttt aatgatttca ccatgggatt 3900
aagaactata tcaggaacat ccctgagaaa cggttttaag tgtagcaact actcttcctt 3960
aatggacagc cacataacgt gtaggaagtc ctttatcact tatcctcgat ccataagcat 4020
atcttgcaga ggggaactac ttctttaaac acatggaggg aaagaagatg atgccactgg 4080
caccagaggg ttagtactgt gatgcatcct aaaatattta ttatattggt aaaaattctg 4140
gttaaataaa aaattagaga tcactcttgg ctgatttcag caccaggaac tgtattacag 4200
ttttagagat taattcctag tgtttacctg attatagcag ttggcatcat ggggcattta 4260
attctgactt tatccccacg tcagccttaa taaagtcttc tttaccttct ctatgaagac 4320
tttaaagccc aaataatcat ttttcacatt gatattcaag aattgagata gatagaagcc 4380
aaagtgggta tctgacaagt ggaaaatcaa acgtttaaga agaattacaa ctctgaaaag 4440
catttatatg tggaacttct caaggagcct cctggggact ggaaagtaag tcatcagcca 4500
ggcaaatgac tcatgctgaa gagagtcccc atttcagtcc cctgagatct agctgatgct 4560
tagatccttt gaaataaaaa ttatgtcttt ataactctga tcttttacat aaagcagaag 4620
aggaatcaac tagttaattg caaggtttct actctgtttc ctctgtaaag atcagatggt 4680
aatctttcaa ataagaaaaa aataaagacg tatgtttgac caagtagttt cacaagaata 4740
tttgggaact tgtttctttt aattttattt gtccctgagt gaagtctaga aagaaaggta 4800
aagagtctag agtttattcc tctttccaaa acattctcat tcctctcctc cctacactta 4860
gtatttcccc cacagagtgc ctagaatctt aataatgaat aaaataaaaa gcagcaatat 4920
gtcattaaca aatccagacc tgaaagggta aagggtttat aactgcacta ataaagagag 4980
gctctttttt tttcttccag tttgttggtt tttaatggta ccgtgttgta aagataccca 5040
ctaatggaca atcaaattgc agaaaaggct caatatccaa gagacaggga ctaatgcact 5100
gtacaatctg cttatccttg cccttctctc ttgccaaagt gtgcttcaga aatatatact 5160
gctttaaaaa agaataaaag aatatccttt tacaagtggc tttacatttc ctaaaatgcc 5220
ataagaaaat gcaatatctg ggtactgtat ggggaaaaaa atgtccaagt ttgtgtaaaa 5280
ccagtgcatt tcagcttgca agttactgaa cacaataatg ctgttttaat tttgttttat 5340
atcagttaaa attcacaata atgtagatag aacaaattac agacaaggaa agaaaaaact 5400
tgaatgaaat ggattttaca gaaagcttta tgataatttt tgaatgcatt atttattttt 5460
tgtgccatgc attttttttc tcaccaaatg accttacctg taatacagtc ttgtttgtct 5520
gtttacaacc atgtatttat tgcaatgtac atactgtaat gttaattgta aattatctgt 5580
tcttattaaa acatcatccc atgatgggat ggtgttgata tatttggaaa ctcttggtga 5640
gagaatgaat ggtgtgtata catactctgt acatttttct tttctcctgt aatatagtct 5700
tgtcacctta gagcttgttt atggaagatt caagaaaact ataaaatact taaagatata 5760
taaatttaaa aaaacatagc tgcaggtctt tggtcccagg gctgtgcctt aactttaacc 5820
aatattttct tctgttttgc tgcatttgaa aggtaacagt ggagctaggg ctgggcattt 5880
tacatccagg cttttaattg attagaattc tgccaatagg tggattttac aaaaccacag 5940
acaacctctg aaagattctg agaccctttt gagacagaag ctcttaagta cttcttgcca 6000
gggagcagca ctgcatgtgt gatggttgtt tgccatctgt tgatcaggaa ctacttcagc 6060
tacttgcatt tgattatttc cttttttttt ttttttaact cggaaacaca actggggaaa 6120
tatattcttt cccagtgatt ataaacaatc tttttctttt ttttaagtcc ttttggcttc 6180
tagagctcat aggaaaatgg acttgatttg aaattggagc cagagtttac tcgtgttggt 6240
tatctattca tcagcttcct gacatgttaa gagaatacat taaagagaaa atactgtttt 6300
ttaatcctaa aatttttctt ccactaagat aaaccaaatg tccttacata tatgtaaacc 6360
catctattta aacgcaaagg tgggttgatg tcagtttaca tagcagaaag cattcactat 6420
cctctaagat ttgtttctgc aaaactttca ttgctttaga attttaaaat ttcaccttgt 6480
acaatggcca gcccctaaag caggaaacat ttataatgga ttatatggaa acatcctccc 6540
agtacttgcc cagcccttga atcatgtggc ttttcagtga aaggaaagat tctttttcta 6600
ggaaaaatga gcctatttta ttttatttta ttttattttt tgacacaaac tgtagatttt 6660
agcagccctg gcccaaagga atttgattac ttttgtttta aacagtacaa aggggacact 6720
ataattacaa aaacatcctt aactgatttg agttgttttt atttctttgg atatattttc 6780
agagtggtaa attgtgtgtg agaattacaa atgattattc ttttagtggt ttcttagcct 6840
ctcttacagc ccacggggat agtactgtac atcaatacct tcatatgaaa tttttatatg 6900
caatgaaaat aaaagcatgg gttgattctg cctatttatg actcaatctt ttacaaataa 6960
aagattattc attttaaatt atagttcaat cagcatgtct cttaggatac tgaacgtggt 7020
tgaaatgaaa ggatagtgac atcataagtt agtactgata ttcataacca aataaagcca 7080
acttgagtaa ttttgctaca ttaaaaatta ccaaaattac ttagatggcc tataagatta 7140
agcatggtgt tttctaagca agctttgaaa ggggccttcc atacttactt aattgaatat 7200
tctgggatat tgaaaattat tcagatactt gacaattatt tttggttacc tactccgcaa 7260
actacaaagt tttaaggact caacaataag ttaatgagac acagtgtttg ctttcatgga 7320
gcttacagtc tggaggggac aaaggcttaa acaatactca tataattata tatgtgatca 7380
gtacaatgaa ggagctcagt ggggtaaata agcaggaacc tgaacttgat ctgttccgga 7440
gggccacaga aggcttcctt gaggccttga gaaagtgatt tgcatctgag ttctgaagga 7500
ttgtaagagg taactaggga aaaagttgac aggaagagga aggggatcca gacaagaaac 7560
atttgcaaag atcttgaggc ataaatgagc ttgagacatc tggagaaact gaggaaaagt 7620
gagagagtag gcagggcctg gagccgcaga gccattgcta accatcctgt gtgagatatc 7680
ccccattctg tagctttatt ctcataaccc tgctcaattt tctttataac acttctcaca 7740
gatttatata cgtgtttgtt tttgttatct gtctctccca ccagaccaca gctccatgag 7800
agcaaggtct ttgcttacca atatatcact agcacttaaa actatgcctg gtacacagta 7860
ggttcttaat atgtgttgaa tatagccatc aaattgatat tggatataat tcaatctgat 7920
aagatatttt gagatattaa agagttttta acttgatacc ataaaaaaaa aaaaaaaaa 7979
<210> 13
<211> 745
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 13
Met Ala Gln Gln Thr Ser Pro Asp Thr Leu Thr Val Pro Glu Val Asp
1 5 10 15
Asn Pro His Cys Pro Asn Pro Trp Leu Asn Glu Asp Leu Val Lys Ser
20 25 30
Leu Arg Glu Asn Leu Leu Gln His Glu Lys Ser Lys Thr Ala Arg Lys
35 40 45
Ser Val Ser Pro Lys Leu Ser Pro Val Ile Ser Pro Arg Asn Ser Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Arg Arg Met Leu Leu Ser Ser Asn Ile Pro Lys Gln Arg
65 70 75 80
Arg Phe Thr Val Ala His Thr Cys Phe Asp Val Asp Asn Gly Thr Ser
85 90 95
Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr Ser Pro Gly Ser Gly Leu
100 105 110
Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln Arg Arg Glu Ser Phe Leu
115 120 125
Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser Pro Lys Ser Met Ser Arg
130 135 140
Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly Asp Asp Leu Ile Val Thr
145 150 155 160
Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg Thr Val Arg Asn Asn Phe
165 170 175
Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala Pro Ser Lys Arg Ser Pro
180 185 190
Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala Thr Ile Thr Glu Glu Ala
195 200 205
Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu
210 215 220
Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala
225 230 235 240
Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser
245 250 255
Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr
260 265 270
Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys
275 280 285
Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys
290 295 300
Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe
305 310 315 320
Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp
325 330 335
Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly
340 345 350
Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp
355 360 365
Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu
370 375 380
Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn
385 390 395 400
Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr
405 410 415
Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile
420 425 430
Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln
435 440 445
Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser
450 455 460
Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln
465 470 475 480
Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln
485 490 495
Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser
500 505 510
Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys
515 520 525
Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg
530 535 540
Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro
545 550 555 560
Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu
565 570 575
Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile
580 585 590
Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val
595 600 605
Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp
610 615 620
Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn
625 630 635 640
Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro
645 650 655
Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe
660 665 670
Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser
675 680 685
Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu
690 695 700
Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val
705 710 715 720
Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys
725 730 735
Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr
740 745
<210> 14
<211> 19
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D5_прямой праймер
<400> 14
gcttctcagc agcaacatc 19
<210> 15
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D5_обратный праймер
<400> 15
tgccattgtc cacatcaaaa 20
<210> 16
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд PDE4D5
<400> 16
acagcggcgt ttcacggtgg caca 24
<210> 17
<211> 7591
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 17
agttccttat ttggtagctt ttgacaggac tagcctttct tgcaactaag catcttgaca 60
tacattattc attaagccct ggagctcggg agagaaagat gcagaccctt agatctttag 120
atattccttt atcacgtgga ttttctttat tcagaatagt tgctgaattt tgtgccattc 180
tggagtctta caaatggcat gtattcgatg ggaagacggc tggatgggat ttaatgcgag 240
gctttcttat gtatacttaa ttaccaaaaa tctttaaaaa ctcatactct gcgtggcttg 300
tggaggttgt taaagtgtcg agattttgaa gctaaataca ttttagagct tactatatat 360
atacatatat atatatatac atataatcaa tcaaaaatgc ctgaagcaaa ctatttactg 420
tcagtgtctt ggggctacat aaagtttaaa aggatgctta atcgggagct cacccatctc 480
tctgaaatga gtcggtctgg aaatcaagtg tcagagttta tatcaaacac attcttagat 540
aagcaacatg aagtggaaat tccttctcca actcagaagg aaaaggagaa aaagaaaaga 600
ccaatgtctc agatcagtgg agtcaagaaa ttgatgcaca gctctagtct gactaattca 660
agtatcccaa ggtttggagt taaaactgaa caagaagatg tccttgccaa ggaactagaa 720
gatgtgaaca aatggggtct tcatgttttc agaatagcag agttgtctgg taaccggccc 780
ttgactgtta tcatgcacac catttttcag gaacgggatt tattaaaaac atttaaaatt 840
ccagtagata ctttaattac atatcttatg actctcgaag accattacca tgctgatgtg 900
gcctatcaca acaatatcca tgctgcagat gttgtccagt ctactcatgt gctattatct 960
acacctgctt tggaggctgt gtttacagat ttggagattc ttgcagcaat ttttgccagt 1020
gcaatacatg atgtagatca tcctggtgtg tccaatcaat ttctgatcaa tacaaactct 1080
gaacttgcct tgatgtacaa tgattcctca gtcttagaga accatcattt ggctgtgggc 1140
tttaaattgc ttcaggaaga aaactgtgac attttccaga atttgaccaa aaaacaaaga 1200
caatctttaa ggaaaatggt cattgacatc gtacttgcaa cagatatgtc aaaacacatg 1260
aatctactgg ctgatttgaa gactatggtt gaaactaaga aagtgacaag ctctggagtt 1320
cttcttcttg ataattattc cgataggatt caggttcttc agaatatggt gcactgtgca 1380
gatctgagca acccaacaaa gcctctccag ctgtaccgcc agtggacgga ccggataatg 1440
gaggagttct tccgccaagg agaccgagag agggaacgtg gcatggagat aagccccatg 1500
tgtgacaagc acaatgcttc cgtggaaaaa tcacaggtgg gcttcataga ctatattgtt 1560
catcccctct gggagacatg ggcagacctc gtccaccctg acgcccagga tattttggac 1620
actttggagg acaatcgtga atggtaccag agcacaatcc ctcagagccc ctctcctgca 1680
cctgatgacc cagaggaggg ccggcagggt caaactgaga aattccagtt tgaactaact 1740
ttagaggaag atggtgagtc agacacggaa aaggacagtg gcagtcaagt ggaagaagac 1800
actagctgca gtgactccaa gactctttgt actcaagact cagagtctac tgaaattccc 1860
cttgatgaac aggttgaaga ggaggcagta ggggaagaag aggaaagcca gcctgaagcc 1920
tgtgtcatag atgatcgttc tcctgacacg taacagtgca aaaactttca tgcctttttt 1980
ttttttaagt agaaaaattg tttccaaagt gcatgtcaca tgccacaacc acggtcacac 2040
ctcactgtca tctgccagga cgtttgttga acaaaactga ccttgactac tcagtccagc 2100
gctcaggaat atcgtaacca gttttttcac ctccatgtca tccgagcaag gtggacatct 2160
tcacgaacag cgtttttaac aagatttcag cttggtagag ctgacaaagc agataaaatc 2220
tactccaaat tattttcaag agagtgtgac tcatcaggca gcccaaaagt ttattggact 2280
tggggtttct attccttttt atttgtttgc aatattttca gaagaaaggc attgcacaga 2340
gtgaacttaa tggacgaagc aacaaatatg tcaagaacag gacatagcac gaatctgtta 2400
ccagtaggag gaggatgagc cacagaaatt gcataatttt ctaatttcaa gtcttcctga 2460
tacatgactg aatagtgtgg ttcagtgagc tgcactgacc tctacatttt gtatgatatg 2520
taaaacagat tttttgtaga gcttactttt attattaaat gtattgaggt attatattta 2580
aaaaaaacta tgttcagaac ttcatctgcc actggttatt tttttctaag gagtaacttg 2640
caagttttca gtacaaatct gtgctacact ggataaaaat ctaatttatg aattttactt 2700
gcaccttata gttcatagca attaactgat ttgtagtgat tcattgtttg ttttatatac 2760
caatgacttc catattttaa aagagaaaaa caactttatg ttgcaggaaa ccctttttgt 2820
aagtctttat tatttacttt gcattttgtt tcactctttc cagataagca gagttgctct 2880
tcaccagtgt ttttcttcat gtgcaaagtg actatttgtt ctataatact tttatgtgtg 2940
ttatatcaaa tgtgtcttaa gcttcatgca aactcagtca tcagttcgtg ttgtctgaag 3000
caagtgggag atatataaat acccagtagc taaaatggtc agtctttttt agatgttttc 3060
ctacttagta tctcctaata acgttttgct gtgtcactag atgttcattt cacaagtgca 3120
tgtctttcta ataatccaca catttcatgc tctaataatc cacacatttc atgctcattt 3180
ttattgtttt tacagccagt tatagtaaga aaaaggtttt tccccttgtg ctgctttata 3240
atttagcgtg tgtctgaacc ttatccatgt ttgctagatg aggtcttgtc aaatatatca 3300
ctaccattgt caccggtgaa aagaaacagg tagttaagtt agggttaaca ttcatttcaa 3360
ccacgaggtt gtatatcatg actagctttt actcttggtt tacagagaaa agttaaacag 3420
ccaactaggc agtttttaag aatattaaca atatattaac aaacaccaat acaactaatc 3480
ctatttggtt ttaatgattt caccatggga ttaagaacta tatcaggaac atccctgaga 3540
aacggtttta agtgtagcaa ctactcttcc ttaatggaca gccacataac gtgtaggaag 3600
tcctttatca cttatcctcg atccataagc atatcttgca gaggggaact acttctttaa 3660
acacatggag ggaaagaaga tgatgccact ggcaccagag ggttagtact gtgatgcatc 3720
ctaaaatatt tattatattg gtaaaaattc tggttaaata aaaaattaga gatcactctt 3780
ggctgatttc agcaccagga actgtattac agttttagag attaattcct agtgtttacc 3840
tgattatagc agttggcatc atggggcatt taattctgac tttatcccca cgtcagcctt 3900
aataaagtct tctttacctt ctctatgaag actttaaagc ccaaataatc atttttcaca 3960
ttgatattca agaattgaga tagatagaag ccaaagtggg tatctgacaa gtggaaaatc 4020
aaacgtttaa gaagaattac aactctgaaa agcatttata tgtggaactt ctcaaggagc 4080
ctcctgggga ctggaaagta agtcatcagc caggcaaatg actcatgctg aagagagtcc 4140
ccatttcagt cccctgagat ctagctgatg cttagatcct ttgaaataaa aattatgtct 4200
ttataactct gatcttttac ataaagcaga agaggaatca actagttaat tgcaaggttt 4260
ctactctgtt tcctctgtaa agatcagatg gtaatctttc aaataagaaa aaaataaaga 4320
cgtatgtttg accaagtagt ttcacaagaa tatttgggaa cttgtttctt ttaattttat 4380
ttgtccctga gtgaagtcta gaaagaaagg taaagagtct agagtttatt cctctttcca 4440
aaacattctc attcctctcc tccctacact tagtatttcc cccacagagt gcctagaatc 4500
ttaataatga ataaaataaa aagcagcaat atgtcattaa caaatccaga cctgaaaggg 4560
taaagggttt ataactgcac taataaagag aggctctttt tttttcttcc agtttgttgg 4620
tttttaatgg taccgtgttg taaagatacc cactaatgga caatcaaatt gcagaaaagg 4680
ctcaatatcc aagagacagg gactaatgca ctgtacaatc tgcttatcct tgcccttctc 4740
tcttgccaaa gtgtgcttca gaaatatata ctgctttaaa aaagaataaa agaatatcct 4800
tttacaagtg gctttacatt tcctaaaatg ccataagaaa atgcaatatc tgggtactgt 4860
atggggaaaa aaatgtccaa gtttgtgtaa aaccagtgca tttcagcttg caagttactg 4920
aacacaataa tgctgtttta attttgtttt atatcagtta aaattcacaa taatgtagat 4980
agaacaaatt acagacaagg aaagaaaaaa cttgaatgaa atggatttta cagaaagctt 5040
tatgataatt tttgaatgca ttatttattt tttgtgccat gcattttttt tctcaccaaa 5100
tgaccttacc tgtaatacag tcttgtttgt ctgtttacaa ccatgtattt attgcaatgt 5160
acatactgta atgttaattg taaattatct gttcttatta aaacatcatc ccatgatggg 5220
atggtgttga tatatttgga aactcttggt gagagaatga atggtgtgta tacatactct 5280
gtacattttt cttttctcct gtaatatagt cttgtcacct tagagcttgt ttatggaaga 5340
ttcaagaaaa ctataaaata cttaaagata tataaattta aaaaaacata gctgcaggtc 5400
tttggtccca gggctgtgcc ttaactttaa ccaatatttt cttctgtttt gctgcatttg 5460
aaaggtaaca gtggagctag ggctgggcat tttacatcca ggcttttaat tgattagaat 5520
tctgccaata ggtggatttt acaaaaccac agacaacctc tgaaagattc tgagaccctt 5580
ttgagacaga agctcttaag tacttcttgc cagggagcag cactgcatgt gtgatggttg 5640
tttgccatct gttgatcagg aactacttca gctacttgca tttgattatt tccttttttt 5700
ttttttttaa ctcggaaaca caactgggga aatatattct ttcccagtga ttataaacaa 5760
tctttttctt ttttttaagt ccttttggct tctagagctc ataggaaaat ggacttgatt 5820
tgaaattgga gccagagttt actcgtgttg gttatctatt catcagcttc ctgacatgtt 5880
aagagaatac attaaagaga aaatactgtt ttttaatcct aaaatttttc ttccactaag 5940
ataaaccaaa tgtccttaca tatatgtaaa cccatctatt taaacgcaaa ggtgggttga 6000
tgtcagttta catagcagaa agcattcact atcctctaag atttgtttct gcaaaacttt 6060
cattgcttta gaattttaaa atttcacctt gtacaatggc cagcccctaa agcaggaaac 6120
atttataatg gattatatgg aaacatcctc ccagtacttg cccagccctt gaatcatgtg 6180
gcttttcagt gaaaggaaag attctttttc taggaaaaat gagcctattt tattttattt 6240
tattttattt tttgacacaa actgtagatt ttagcagccc tggcccaaag gaatttgatt 6300
acttttgttt taaacagtac aaaggggaca ctataattac aaaaacatcc ttaactgatt 6360
tgagttgttt ttatttcttt ggatatattt tcagagtggt aaattgtgtg tgagaattac 6420
aaatgattat tcttttagtg gtttcttagc ctctcttaca gcccacgggg atagtactgt 6480
acatcaatac cttcatatga aatttttata tgcaatgaaa ataaaagcat gggttgattc 6540
tgcctattta tgactcaatc ttttacaaat aaaagattat tcattttaaa ttatagttca 6600
atcagcatgt ctcttaggat actgaacgtg gttgaaatga aaggatagtg acatcataag 6660
ttagtactga tattcataac caaataaagc caacttgagt aattttgcta cattaaaaat 6720
taccaaaatt acttagatgg cctataagat taagcatggt gttttctaag caagctttga 6780
aaggggcctt ccatacttac ttaattgaat attctgggat attgaaaatt attcagatac 6840
ttgacaatta tttttggtta cctactccgc aaactacaaa gttttaagga ctcaacaata 6900
agttaatgag acacagtgtt tgctttcatg gagcttacag tctggagggg acaaaggctt 6960
aaacaatact catataatta tatatgtgat cagtacaatg aaggagctca gtggggtaaa 7020
taagcaggaa cctgaacttg atctgttccg gagggccaca gaaggcttcc ttgaggcctt 7080
gagaaagtga tttgcatctg agttctgaag gattgtaaga ggtaactagg gaaaaagttg 7140
acaggaagag gaaggggatc cagacaagaa acatttgcaa agatcttgag gcataaatga 7200
gcttgagaca tctggagaaa ctgaggaaaa gtgagagagt aggcagggcc tggagccgca 7260
gagccattgc taaccatcct gtgtgagata tcccccattc tgtagcttta ttctcataac 7320
cctgctcaat tttctttata acacttctca cagatttata tacgtgtttg tttttgttat 7380
ctgtctctcc caccagacca cagctccatg agagcaaggt ctttgcttac caatatatca 7440
ctagcactta aaactatgcc tggtacacag taggttctta atatgtgttg aatatagcca 7500
tcaaattgat attggatata attcaatctg ataagatatt ttgagatatt aaagagtttt 7560
taacttgata ccataaaaaa aaaaaaaaaa a 7591
<210> 18
<211> 518
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 18
Met Pro Glu Ala Asn Tyr Leu Leu Ser Val Ser Trp Gly Tyr Ile Lys
1 5 10 15
Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser Glu Met Ser
20 25 30
Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr Phe Leu Asp
35 40 45
Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys Glu Lys Glu
50 55 60
Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys Lys Leu Met
65 70 75 80
His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe Gly Val Lys
85 90 95
Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp Val Asn Lys
100 105 110
Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly Asn Arg Pro
115 120 125
Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp Leu Leu Lys
130 135 140
Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu Met Thr Leu
145 150 155 160
Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn Ile His Ala
165 170 175
Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala Leu
180 185 190
Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile Phe Ala Ser
195 200 205
Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln Phe Leu Ile
210 215 220
Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser Ser Val Leu
225 230 235 240
Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln Glu Glu Asn
245 250 255
Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln Ser Leu Arg
260 265 270
Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser Lys His Met
275 280 285
Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys Lys Val Thr
290 295 300
Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg Ile Gln Val
305 310 315 320
Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro Thr Lys Pro
325 330 335
Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu Glu Phe Phe
340 345 350
Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile Ser Pro Met
355 360 365
Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val Gly Phe Ile
370 375 380
Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp Leu Val His
385 390 395 400
Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn Arg Glu Trp
405 410 415
Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro Asp Asp Pro
420 425 430
Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe Glu Leu Thr
435 440 445
Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser Gly Ser Gln
450 455 460
Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu Cys Thr Gln
465 470 475 480
Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val Glu Glu Glu
485 490 495
Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys Val Ile Asp
500 505 510
Asp Arg Ser Pro Asp Thr
515
<210> 19
<211> 8130
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 19
agattatagc ccagcgtacg agaagcacga gtcctatagt tggcgtaccc tgaggcctgc 60
cagttcctgc cttaatgcat atgtagtcgt aattgagttc tgacacggcc ttggatgttt 120
ctgtcctaaa tagctgacat tgcatcttca agactgtcat tccagttggc ttttgagtgg 180
atacgtgcag tgagatcatt gacactggaa acactagttc ccattttaat tacttaaaac 240
accacgatga aaagaaatac ctgtgatttg ctttctcgga gcaaaagtgc ctctgaggaa 300
acactacatt ccagtaatga agaggaagac cctttccgcg gaatggaacc ctatcttgtc 360
cggagacttt catgtcgcaa tattcagctt ccccctctcg ccttcagaca gttggaacaa 420
gctgacttga aaagtgaatc agagaacatt caacgaccaa ccagcctccc cctgaagatt 480
ctgccgctga ttgctatcac ttctgcagaa tccagtggtt ttgatgtgga caatggcaca 540
tctgcgggac ggagtccctt ggatcccatg accagcccag gatccgggct aattctccaa 600
gcaaattttg tccacagtca acgacgggag tccttcctgt atcgatccga cagcgattat 660
gacctctctc caaagtctat gtcccggaac tcctccattg ccagtgatat acacggagat 720
gacttgattg tgactccatt tgctcaggtc ttggccagtc tgcgaactgt acgaaacaac 780
tttgctgcat taactaattt gcaagatcga gcacctagca aaagatcacc catgtgcaac 840
caaccatcca tcaacaaagc caccataaca gaggaggcct accagaaact ggccagcgag 900
accctggagg agctggactg gtgtctggac cagctagaga ccctacagac caggcactcc 960
gtcagtgaga tggcctccaa caagtttaaa aggatgctta atcgggagct cacccatctc 1020
tctgaaatga gtcggtctgg aaatcaagtg tcagagttta tatcaaacac attcttagat 1080
aagcaacatg aagtggaaat tccttctcca actcagaagg aaaaggagaa aaagaaaaga 1140
ccaatgtctc agatcagtgg agtcaagaaa ttgatgcaca gctctagtct gactaattca 1200
agtatcccaa ggtttggagt taaaactgaa caagaagatg tccttgccaa ggaactagaa 1260
gatgtgaaca aatggggtct tcatgttttc agaatagcag agttgtctgg taaccggccc 1320
ttgactgtta tcatgcacac catttttcag gaacgggatt tattaaaaac atttaaaatt 1380
ccagtagata ctttaattac atatcttatg actctcgaag accattacca tgctgatgtg 1440
gcctatcaca acaatatcca tgctgcagat gttgtccagt ctactcatgt gctattatct 1500
acacctgctt tggaggctgt gtttacagat ttggagattc ttgcagcaat ttttgccagt 1560
gcaatacatg atgtagatca tcctggtgtg tccaatcaat ttctgatcaa tacaaactct 1620
gaacttgcct tgatgtacaa tgattcctca gtcttagaga accatcattt ggctgtgggc 1680
tttaaattgc ttcaggaaga aaactgtgac attttccaga atttgaccaa aaaacaaaga 1740
caatctttaa ggaaaatggt cattgacatc gtacttgcaa cagatatgtc aaaacacatg 1800
aatctactgg ctgatttgaa gactatggtt gaaactaaga aagtgacaag ctctggagtt 1860
cttcttcttg ataattattc cgataggatt caggttcttc agaatatggt gcactgtgca 1920
gatctgagca acccaacaaa gcctctccag ctgtaccgcc agtggacgga ccggataatg 1980
gaggagttct tccgccaagg agaccgagag agggaacgtg gcatggagat aagccccatg 2040
tgtgacaagc acaatgcttc cgtggaaaaa tcacaggtgg gcttcataga ctatattgtt 2100
catcccctct gggagacatg ggcagacctc gtccaccctg acgcccagga tattttggac 2160
actttggagg acaatcgtga atggtaccag agcacaatcc ctcagagccc ctctcctgca 2220
cctgatgacc cagaggaggg ccggcagggt caaactgaga aattccagtt tgaactaact 2280
ttagaggaag atggtgagtc agacacggaa aaggacagtg gcagtcaagt ggaagaagac 2340
actagctgca gtgactccaa gactctttgt actcaagact cagagtctac tgaaattccc 2400
cttgatgaac aggttgaaga ggaggcagta ggggaagaag aggaaagcca gcctgaagcc 2460
tgtgtcatag atgatcgttc tcctgacacg taacagtgca aaaactttca tgcctttttt 2520
ttttttaagt agaaaaattg tttccaaagt gcatgtcaca tgccacaacc acggtcacac 2580
ctcactgtca tctgccagga cgtttgttga acaaaactga ccttgactac tcagtccagc 2640
gctcaggaat atcgtaacca gttttttcac ctccatgtca tccgagcaag gtggacatct 2700
tcacgaacag cgtttttaac aagatttcag cttggtagag ctgacaaagc agataaaatc 2760
tactccaaat tattttcaag agagtgtgac tcatcaggca gcccaaaagt ttattggact 2820
tggggtttct attccttttt atttgtttgc aatattttca gaagaaaggc attgcacaga 2880
gtgaacttaa tggacgaagc aacaaatatg tcaagaacag gacatagcac gaatctgtta 2940
ccagtaggag gaggatgagc cacagaaatt gcataatttt ctaatttcaa gtcttcctga 3000
tacatgactg aatagtgtgg ttcagtgagc tgcactgacc tctacatttt gtatgatatg 3060
taaaacagat tttttgtaga gcttactttt attattaaat gtattgaggt attatattta 3120
aaaaaaacta tgttcagaac ttcatctgcc actggttatt tttttctaag gagtaacttg 3180
caagttttca gtacaaatct gtgctacact ggataaaaat ctaatttatg aattttactt 3240
gcaccttata gttcatagca attaactgat ttgtagtgat tcattgtttg ttttatatac 3300
caatgacttc catattttaa aagagaaaaa caactttatg ttgcaggaaa ccctttttgt 3360
aagtctttat tatttacttt gcattttgtt tcactctttc cagataagca gagttgctct 3420
tcaccagtgt ttttcttcat gtgcaaagtg actatttgtt ctataatact tttatgtgtg 3480
ttatatcaaa tgtgtcttaa gcttcatgca aactcagtca tcagttcgtg ttgtctgaag 3540
caagtgggag atatataaat acccagtagc taaaatggtc agtctttttt agatgttttc 3600
ctacttagta tctcctaata acgttttgct gtgtcactag atgttcattt cacaagtgca 3660
tgtctttcta ataatccaca catttcatgc tctaataatc cacacatttc atgctcattt 3720
ttattgtttt tacagccagt tatagtaaga aaaaggtttt tccccttgtg ctgctttata 3780
atttagcgtg tgtctgaacc ttatccatgt ttgctagatg aggtcttgtc aaatatatca 3840
ctaccattgt caccggtgaa aagaaacagg tagttaagtt agggttaaca ttcatttcaa 3900
ccacgaggtt gtatatcatg actagctttt actcttggtt tacagagaaa agttaaacag 3960
ccaactaggc agtttttaag aatattaaca atatattaac aaacaccaat acaactaatc 4020
ctatttggtt ttaatgattt caccatggga ttaagaacta tatcaggaac atccctgaga 4080
aacggtttta agtgtagcaa ctactcttcc ttaatggaca gccacataac gtgtaggaag 4140
tcctttatca cttatcctcg atccataagc atatcttgca gaggggaact acttctttaa 4200
acacatggag ggaaagaaga tgatgccact ggcaccagag ggttagtact gtgatgcatc 4260
ctaaaatatt tattatattg gtaaaaattc tggttaaata aaaaattaga gatcactctt 4320
ggctgatttc agcaccagga actgtattac agttttagag attaattcct agtgtttacc 4380
tgattatagc agttggcatc atggggcatt taattctgac tttatcccca cgtcagcctt 4440
aataaagtct tctttacctt ctctatgaag actttaaagc ccaaataatc atttttcaca 4500
ttgatattca agaattgaga tagatagaag ccaaagtggg tatctgacaa gtggaaaatc 4560
aaacgtttaa gaagaattac aactctgaaa agcatttata tgtggaactt ctcaaggagc 4620
ctcctgggga ctggaaagta agtcatcagc caggcaaatg actcatgctg aagagagtcc 4680
ccatttcagt cccctgagat ctagctgatg cttagatcct ttgaaataaa aattatgtct 4740
ttataactct gatcttttac ataaagcaga agaggaatca actagttaat tgcaaggttt 4800
ctactctgtt tcctctgtaa agatcagatg gtaatctttc aaataagaaa aaaataaaga 4860
cgtatgtttg accaagtagt ttcacaagaa tatttgggaa cttgtttctt ttaattttat 4920
ttgtccctga gtgaagtcta gaaagaaagg taaagagtct agagtttatt cctctttcca 4980
aaacattctc attcctctcc tccctacact tagtatttcc cccacagagt gcctagaatc 5040
ttaataatga ataaaataaa aagcagcaat atgtcattaa caaatccaga cctgaaaggg 5100
taaagggttt ataactgcac taataaagag aggctctttt tttttcttcc agtttgttgg 5160
tttttaatgg taccgtgttg taaagatacc cactaatgga caatcaaatt gcagaaaagg 5220
ctcaatatcc aagagacagg gactaatgca ctgtacaatc tgcttatcct tgcccttctc 5280
tcttgccaaa gtgtgcttca gaaatatata ctgctttaaa aaagaataaa agaatatcct 5340
tttacaagtg gctttacatt tcctaaaatg ccataagaaa atgcaatatc tgggtactgt 5400
atggggaaaa aaatgtccaa gtttgtgtaa aaccagtgca tttcagcttg caagttactg 5460
aacacaataa tgctgtttta attttgtttt atatcagtta aaattcacaa taatgtagat 5520
agaacaaatt acagacaagg aaagaaaaaa cttgaatgaa atggatttta cagaaagctt 5580
tatgataatt tttgaatgca ttatttattt tttgtgccat gcattttttt tctcaccaaa 5640
tgaccttacc tgtaatacag tcttgtttgt ctgtttacaa ccatgtattt attgcaatgt 5700
acatactgta atgttaattg taaattatct gttcttatta aaacatcatc ccatgatggg 5760
atggtgttga tatatttgga aactcttggt gagagaatga atggtgtgta tacatactct 5820
gtacattttt cttttctcct gtaatatagt cttgtcacct tagagcttgt ttatggaaga 5880
ttcaagaaaa ctataaaata cttaaagata tataaattta aaaaaacata gctgcaggtc 5940
tttggtccca gggctgtgcc ttaactttaa ccaatatttt cttctgtttt gctgcatttg 6000
aaaggtaaca gtggagctag ggctgggcat tttacatcca ggcttttaat tgattagaat 6060
tctgccaata ggtggatttt acaaaaccac agacaacctc tgaaagattc tgagaccctt 6120
ttgagacaga agctcttaag tacttcttgc cagggagcag cactgcatgt gtgatggttg 6180
tttgccatct gttgatcagg aactacttca gctacttgca tttgattatt tccttttttt 6240
ttttttttaa ctcggaaaca caactgggga aatatattct ttcccagtga ttataaacaa 6300
tctttttctt ttttttaagt ccttttggct tctagagctc ataggaaaat ggacttgatt 6360
tgaaattgga gccagagttt actcgtgttg gttatctatt catcagcttc ctgacatgtt 6420
aagagaatac attaaagaga aaatactgtt ttttaatcct aaaatttttc ttccactaag 6480
ataaaccaaa tgtccttaca tatatgtaaa cccatctatt taaacgcaaa ggtgggttga 6540
tgtcagttta catagcagaa agcattcact atcctctaag atttgtttct gcaaaacttt 6600
cattgcttta gaattttaaa atttcacctt gtacaatggc cagcccctaa agcaggaaac 6660
atttataatg gattatatgg aaacatcctc ccagtacttg cccagccctt gaatcatgtg 6720
gcttttcagt gaaaggaaag attctttttc taggaaaaat gagcctattt tattttattt 6780
tattttattt tttgacacaa actgtagatt ttagcagccc tggcccaaag gaatttgatt 6840
acttttgttt taaacagtac aaaggggaca ctataattac aaaaacatcc ttaactgatt 6900
tgagttgttt ttatttcttt ggatatattt tcagagtggt aaattgtgtg tgagaattac 6960
aaatgattat tcttttagtg gtttcttagc ctctcttaca gcccacgggg atagtactgt 7020
acatcaatac cttcatatga aatttttata tgcaatgaaa ataaaagcat gggttgattc 7080
tgcctattta tgactcaatc ttttacaaat aaaagattat tcattttaaa ttatagttca 7140
atcagcatgt ctcttaggat actgaacgtg gttgaaatga aaggatagtg acatcataag 7200
ttagtactga tattcataac caaataaagc caacttgagt aattttgcta cattaaaaat 7260
taccaaaatt acttagatgg cctataagat taagcatggt gttttctaag caagctttga 7320
aaggggcctt ccatacttac ttaattgaat attctgggat attgaaaatt attcagatac 7380
ttgacaatta tttttggtta cctactccgc aaactacaaa gttttaagga ctcaacaata 7440
agttaatgag acacagtgtt tgctttcatg gagcttacag tctggagggg acaaaggctt 7500
aaacaatact catataatta tatatgtgat cagtacaatg aaggagctca gtggggtaaa 7560
taagcaggaa cctgaacttg atctgttccg gagggccaca gaaggcttcc ttgaggcctt 7620
gagaaagtga tttgcatctg agttctgaag gattgtaaga ggtaactagg gaaaaagttg 7680
acaggaagag gaaggggatc cagacaagaa acatttgcaa agatcttgag gcataaatga 7740
gcttgagaca tctggagaaa ctgaggaaaa gtgagagagt aggcagggcc tggagccgca 7800
gagccattgc taaccatcct gtgtgagata tcccccattc tgtagcttta ttctcataac 7860
cctgctcaat tttctttata acacttctca cagatttata tacgtgtttg tttttgttat 7920
ctgtctctcc caccagacca cagctccatg agagcaaggt ctttgcttac caatatatca 7980
ctagcactta aaactatgcc tggtacacag taggttctta atatgtgttg aatatagcca 8040
tcaaattgat attggatata attcaatctg ataagatatt ttgagatatt aaagagtttt 8100
taacttgata ccataaaaaa aaaaaaaaaa 8130
<210> 20
<211> 748
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 20
Met Lys Arg Asn Thr Cys Asp Leu Leu Ser Arg Ser Lys Ser Ala Ser
1 5 10 15
Glu Glu Thr Leu His Ser Ser Asn Glu Glu Glu Asp Pro Phe Arg Gly
20 25 30
Met Glu Pro Tyr Leu Val Arg Arg Leu Ser Cys Arg Asn Ile Gln Leu
35 40 45
Pro Pro Leu Ala Phe Arg Gln Leu Glu Gln Ala Asp Leu Lys Ser Glu
50 55 60
Ser Glu Asn Ile Gln Arg Pro Thr Ser Leu Pro Leu Lys Ile Leu Pro
65 70 75 80
Leu Ile Ala Ile Thr Ser Ala Glu Ser Ser Gly Phe Asp Val Asp Asn
85 90 95
Gly Thr Ser Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr Ser Pro Gly
100 105 110
Ser Gly Leu Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln Arg Arg Glu
115 120 125
Ser Phe Leu Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser Pro Lys Ser
130 135 140
Met Ser Arg Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly Asp Asp Leu
145 150 155 160
Ile Val Thr Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg Thr Val Arg
165 170 175
Asn Asn Phe Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala Pro Ser Lys
180 185 190
Arg Ser Pro Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala Thr Ile Thr
195 200 205
Glu Glu Ala Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp
210 215 220
Trp Cys Leu Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser
225 230 235 240
Glu Met Ala Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr
245 250 255
His Leu Ser Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile
260 265 270
Ser Asn Thr Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro
275 280 285
Thr Gln Lys Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser
290 295 300
Gly Val Lys Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile
305 310 315 320
Pro Arg Phe Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu
325 330 335
Leu Glu Asp Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu
340 345 350
Leu Ser Gly Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln
355 360 365
Glu Arg Asp Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile
370 375 380
Thr Tyr Leu Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr
385 390 395 400
His Asn Asn Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu
405 410 415
Leu Ser Thr Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu
420 425 430
Ala Ala Ile Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val
435 440 445
Ser Asn Gln Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr
450 455 460
Asn Asp Ser Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys
465 470 475 480
Leu Leu Gln Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys
485 490 495
Gln Arg Gln Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr
500 505 510
Asp Met Ser Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val
515 520 525
Glu Thr Lys Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr
530 535 540
Ser Asp Arg Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu
545 550 555 560
Ser Asn Pro Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg
565 570 575
Ile Met Glu Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly
580 585 590
Met Glu Ile Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys
595 600 605
Ser Gln Val Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr
610 615 620
Trp Ala Asp Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu
625 630 635 640
Glu Asp Asn Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser
645 650 655
Pro Ala Pro Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys
660 665 670
Phe Gln Phe Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu
675 680 685
Lys Asp Ser Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser
690 695 700
Lys Thr Leu Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp
705 710 715 720
Glu Gln Val Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro
725 730 735
Glu Ala Cys Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr
740 745
<210> 21
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D7_прямой праймер
<400> 21
gaacattcaa cgaccaacca 20
<210> 22
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D7_обратный праймер
<400> 22
tgccattgtc cacatcaaaa 20
<210> 23
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D7 probe
<400> 23
ctgccgctga ttgctatcac ttctgca 27
<210> 24
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D7 прямой праймер 2
<400> 24
cgctgattgc tatcacttct gc 22
<210> 25
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D7 обратный праймер
<400> 25
gtcgttgact gtggacaaaa tttg 24
<210> 26
<211> 34
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D7 зонд 2
<400> 26
ttcccttgga tcccatgacc agcccataag ggaa 34
<210> 27
<211> 8130
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 27
agattatagc ccagcgtacg agaagcacga gtcctatagt tggcgtaccc tgaggcctgc 60
cagttcctgc cttaatgcat atgtagtcgt aattgagttc tgacacggcc ttggatgttt 120
ctgtcctaaa tagctgacat tgcatcttca agactgtcat tccagttggc ttttgagtgg 180
atacgtgcag tgagatcatt gacactggaa acactagttc ccattttaat tacttaaaac 240
accacgatga aaagaaatac ctgtgatttg ctttctcgga gcaaaagtgc ctctgaggaa 300
acactacatt ccagtaatga agaggaagac cctttccgcg gaatggaacc ctatcttgtc 360
cggagacttt catgtcgcaa tattcagctt ccccctctcg ccttcagaca gttggaacaa 420
gctgacttga aaagtgaatc agagaacatt caacgaccaa ccagcctccc cctgaagatt 480
ctgccgctga ttgctatcac ttctgcagaa tccagtggtt ttgatgtgga caatggcaca 540
tctgcgggac ggagtccctt ggatcccatg accagcccag gatccgggct aattctccaa 600
gcaaattttg tccacagtca acgacgggag tccttcctgt atcgatccga cagcgattat 660
gacctctctc caaagtctat gtcccggaac tcctccattg ccagtgatat acacggagat 720
gacttgattg tgactccatt tgctcaggtc ttggccagtc tgcgaactgt acgaaacaac 780
tttgctgcat taactaattt gcaagatcga gcacctagca aaagatcacc catgtgcaac 840
caaccatcca tcaacaaagc caccataaca gaggaggcct accagaaact ggccagcgag 900
accctggagg agctggactg gtgtctggac cagctagaga ccctacagac caggcactcc 960
gtcagtgaga tggcctccaa caagtttaaa aggatgctta atcgggagct cacccatctc 1020
tctgaaatga gtcggtctgg aaatcaagtg tcagagttta tatcaaacac attcttagat 1080
aagcaacatg aagtggaaat tccttctcca actcagaagg aaaaggagaa aaagaaaaga 1140
ccaatgtctc agatcagtgg agtcaagaaa ttgatgcaca gctctagtct gactaattca 1200
agtatcccaa ggtttggagt taaaactgaa caagaagatg tccttgccaa ggaactagaa 1260
gatgtgaaca aatggggtct tcatgttttc agaatagcag agttgtctgg taaccggccc 1320
ttgactgtta tcatgcacac catttttcag gaacgggatt tattaaaaac atttaaaatt 1380
ccagtagata ctttaattac atatcttatg actctcgaag accattacca tgctgatgtg 1440
gcctatcaca acaatatcca tgctgcagat gttgtccagt ctactcatgt gctattatct 1500
acacctgctt tggaggctgt gtttacagat ttggagattc ttgcagcaat ttttgccagt 1560
gcaatacatg atgtagatca tcctggtgtg tccaatcaat ttctgatcaa tacaaactct 1620
gaacttgcct tgatgtacaa tgattcctca gtcttagaga accatcattt ggctgtgggc 1680
tttaaattgc ttcaggaaga aaactgtgac attttccaga atttgaccaa aaaacaaaga 1740
caatctttaa ggaaaatggt cattgacatc gtacttgcaa cagatatgtc aaaacacatg 1800
aatctactgg ctgatttgaa gactatggtt gaaactaaga aagtgacaag ctctggagtt 1860
cttcttcttg ataattattc cgataggatt caggttcttc agaatatggt gcactgtgca 1920
gatctgagca acccaacaaa gcctctccag ctgtaccgcc agtggacgga ccggataatg 1980
gaggagttct tccgccaagg agaccgagag agggaacgtg gcatggagat aagccccatg 2040
tgtgacaagc acaatgcttc cgtggaaaaa tcacaggtgg gcttcataga ctatattgtt 2100
catcccctct gggagacatg ggcagacctc gtccaccctg acgcccagga tattttggac 2160
actttggagg acaatcgtga atggtaccag agcacaatcc ctcagagccc ctctcctgca 2220
cctgatgacc cagaggaggg ccggcagggt caaactgaga aattccagtt tgaactaact 2280
ttagaggaag atggtgagtc agacacggaa aaggacagtg gcagtcaagt ggaagaagac 2340
actagctgca gtgactccaa gactctttgt actcaagact cagagtctac tgaaattccc 2400
cttgatgaac aggttgaaga ggaggcagta ggggaagaag aggaaagcca gcctgaagcc 2460
tgtgtcatag atgatcgttc tcctgacacg taacagtgca aaaactttca tgcctttttt 2520
ttttttaagt agaaaaattg tttccaaagt gcatgtcaca tgccacaacc acggtcacac 2580
ctcactgtca tctgccagga cgtttgttga acaaaactga ccttgactac tcagtccagc 2640
gctcaggaat atcgtaacca gttttttcac ctccatgtca tccgagcaag gtggacatct 2700
tcacgaacag cgtttttaac aagatttcag cttggtagag ctgacaaagc agataaaatc 2760
tactccaaat tattttcaag agagtgtgac tcatcaggca gcccaaaagt ttattggact 2820
tggggtttct attccttttt atttgtttgc aatattttca gaagaaaggc attgcacaga 2880
gtgaacttaa tggacgaagc aacaaatatg tcaagaacag gacatagcac gaatctgtta 2940
ccagtaggag gaggatgagc cacagaaatt gcataatttt ctaatttcaa gtcttcctga 3000
tacatgactg aatagtgtgg ttcagtgagc tgcactgacc tctacatttt gtatgatatg 3060
taaaacagat tttttgtaga gcttactttt attattaaat gtattgaggt attatattta 3120
aaaaaaacta tgttcagaac ttcatctgcc actggttatt tttttctaag gagtaacttg 3180
caagttttca gtacaaatct gtgctacact ggataaaaat ctaatttatg aattttactt 3240
gcaccttata gttcatagca attaactgat ttgtagtgat tcattgtttg ttttatatac 3300
caatgacttc catattttaa aagagaaaaa caactttatg ttgcaggaaa ccctttttgt 3360
aagtctttat tatttacttt gcattttgtt tcactctttc cagataagca gagttgctct 3420
tcaccagtgt ttttcttcat gtgcaaagtg actatttgtt ctataatact tttatgtgtg 3480
ttatatcaaa tgtgtcttaa gcttcatgca aactcagtca tcagttcgtg ttgtctgaag 3540
caagtgggag atatataaat acccagtagc taaaatggtc agtctttttt agatgttttc 3600
ctacttagta tctcctaata acgttttgct gtgtcactag atgttcattt cacaagtgca 3660
tgtctttcta ataatccaca catttcatgc tctaataatc cacacatttc atgctcattt 3720
ttattgtttt tacagccagt tatagtaaga aaaaggtttt tccccttgtg ctgctttata 3780
atttagcgtg tgtctgaacc ttatccatgt ttgctagatg aggtcttgtc aaatatatca 3840
ctaccattgt caccggtgaa aagaaacagg tagttaagtt agggttaaca ttcatttcaa 3900
ccacgaggtt gtatatcatg actagctttt actcttggtt tacagagaaa agttaaacag 3960
ccaactaggc agtttttaag aatattaaca atatattaac aaacaccaat acaactaatc 4020
ctatttggtt ttaatgattt caccatggga ttaagaacta tatcaggaac atccctgaga 4080
aacggtttta agtgtagcaa ctactcttcc ttaatggaca gccacataac gtgtaggaag 4140
tcctttatca cttatcctcg atccataagc atatcttgca gaggggaact acttctttaa 4200
acacatggag ggaaagaaga tgatgccact ggcaccagag ggttagtact gtgatgcatc 4260
ctaaaatatt tattatattg gtaaaaattc tggttaaata aaaaattaga gatcactctt 4320
ggctgatttc agcaccagga actgtattac agttttagag attaattcct agtgtttacc 4380
tgattatagc agttggcatc atggggcatt taattctgac tttatcccca cgtcagcctt 4440
aataaagtct tctttacctt ctctatgaag actttaaagc ccaaataatc atttttcaca 4500
ttgatattca agaattgaga tagatagaag ccaaagtggg tatctgacaa gtggaaaatc 4560
aaacgtttaa gaagaattac aactctgaaa agcatttata tgtggaactt ctcaaggagc 4620
ctcctgggga ctggaaagta agtcatcagc caggcaaatg actcatgctg aagagagtcc 4680
ccatttcagt cccctgagat ctagctgatg cttagatcct ttgaaataaa aattatgtct 4740
ttataactct gatcttttac ataaagcaga agaggaatca actagttaat tgcaaggttt 4800
ctactctgtt tcctctgtaa agatcagatg gtaatctttc aaataagaaa aaaataaaga 4860
cgtatgtttg accaagtagt ttcacaagaa tatttgggaa cttgtttctt ttaattttat 4920
ttgtccctga gtgaagtcta gaaagaaagg taaagagtct agagtttatt cctctttcca 4980
aaacattctc attcctctcc tccctacact tagtatttcc cccacagagt gcctagaatc 5040
ttaataatga ataaaataaa aagcagcaat atgtcattaa caaatccaga cctgaaaggg 5100
taaagggttt ataactgcac taataaagag aggctctttt tttttcttcc agtttgttgg 5160
tttttaatgg taccgtgttg taaagatacc cactaatgga caatcaaatt gcagaaaagg 5220
ctcaatatcc aagagacagg gactaatgca ctgtacaatc tgcttatcct tgcccttctc 5280
tcttgccaaa gtgtgcttca gaaatatata ctgctttaaa aaagaataaa agaatatcct 5340
tttacaagtg gctttacatt tcctaaaatg ccataagaaa atgcaatatc tgggtactgt 5400
atggggaaaa aaatgtccaa gtttgtgtaa aaccagtgca tttcagcttg caagttactg 5460
aacacaataa tgctgtttta attttgtttt atatcagtta aaattcacaa taatgtagat 5520
agaacaaatt acagacaagg aaagaaaaaa cttgaatgaa atggatttta cagaaagctt 5580
tatgataatt tttgaatgca ttatttattt tttgtgccat gcattttttt tctcaccaaa 5640
tgaccttacc tgtaatacag tcttgtttgt ctgtttacaa ccatgtattt attgcaatgt 5700
acatactgta atgttaattg taaattatct gttcttatta aaacatcatc ccatgatggg 5760
atggtgttga tatatttgga aactcttggt gagagaatga atggtgtgta tacatactct 5820
gtacattttt cttttctcct gtaatatagt cttgtcacct tagagcttgt ttatggaaga 5880
ttcaagaaaa ctataaaata cttaaagata tataaattta aaaaaacata gctgcaggtc 5940
tttggtccca gggctgtgcc ttaactttaa ccaatatttt cttctgtttt gctgcatttg 6000
aaaggtaaca gtggagctag ggctgggcat tttacatcca ggcttttaat tgattagaat 6060
tctgccaata ggtggatttt acaaaaccac agacaacctc tgaaagattc tgagaccctt 6120
ttgagacaga agctcttaag tacttcttgc cagggagcag cactgcatgt gtgatggttg 6180
tttgccatct gttgatcagg aactacttca gctacttgca tttgattatt tccttttttt 6240
ttttttttaa ctcggaaaca caactgggga aatatattct ttcccagtga ttataaacaa 6300
tctttttctt ttttttaagt ccttttggct tctagagctc ataggaaaat ggacttgatt 6360
tgaaattgga gccagagttt actcgtgttg gttatctatt catcagcttc ctgacatgtt 6420
aagagaatac attaaagaga aaatactgtt ttttaatcct aaaatttttc ttccactaag 6480
ataaaccaaa tgtccttaca tatatgtaaa cccatctatt taaacgcaaa ggtgggttga 6540
tgtcagttta catagcagaa agcattcact atcctctaag atttgtttct gcaaaacttt 6600
cattgcttta gaattttaaa atttcacctt gtacaatggc cagcccctaa agcaggaaac 6660
atttataatg gattatatgg aaacatcctc ccagtacttg cccagccctt gaatcatgtg 6720
gcttttcagt gaaaggaaag attctttttc taggaaaaat gagcctattt tattttattt 6780
tattttattt tttgacacaa actgtagatt ttagcagccc tggcccaaag gaatttgatt 6840
acttttgttt taaacagtac aaaggggaca ctataattac aaaaacatcc ttaactgatt 6900
tgagttgttt ttatttcttt ggatatattt tcagagtggt aaattgtgtg tgagaattac 6960
aaatgattat tcttttagtg gtttcttagc ctctcttaca gcccacgggg atagtactgt 7020
acatcaatac cttcatatga aatttttata tgcaatgaaa ataaaagcat gggttgattc 7080
tgcctattta tgactcaatc ttttacaaat aaaagattat tcattttaaa ttatagttca 7140
atcagcatgt ctcttaggat actgaacgtg gttgaaatga aaggatagtg acatcataag 7200
ttagtactga tattcataac caaataaagc caacttgagt aattttgcta cattaaaaat 7260
taccaaaatt acttagatgg cctataagat taagcatggt gttttctaag caagctttga 7320
aaggggcctt ccatacttac ttaattgaat attctgggat attgaaaatt attcagatac 7380
ttgacaatta tttttggtta cctactccgc aaactacaaa gttttaagga ctcaacaata 7440
agttaatgag acacagtgtt tgctttcatg gagcttacag tctggagggg acaaaggctt 7500
aaacaatact catataatta tatatgtgat cagtacaatg aaggagctca gtggggtaaa 7560
taagcaggaa cctgaacttg atctgttccg gagggccaca gaaggcttcc ttgaggcctt 7620
gagaaagtga tttgcatctg agttctgaag gattgtaaga ggtaactagg gaaaaagttg 7680
acaggaagag gaaggggatc cagacaagaa acatttgcaa agatcttgag gcataaatga 7740
gcttgagaca tctggagaaa ctgaggaaaa gtgagagagt aggcagggcc tggagccgca 7800
gagccattgc taaccatcct gtgtgagata tcccccattc tgtagcttta ttctcataac 7860
cctgctcaat tttctttata acacttctca cagatttata tacgtgtttg tttttgttat 7920
ctgtctctcc caccagacca cagctccatg agagcaaggt ctttgcttac caatatatca 7980
ctagcactta aaactatgcc tggtacacag taggttctta atatgtgttg aatatagcca 8040
tcaaattgat attggatata attcaatctg ataagatatt ttgagatatt aaagagtttt 8100
taacttgata ccataaaaaa aaaaaaaaaa 8130
<210> 28
<211> 687
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 28
Met Ala Phe Val Trp Asp Pro Leu Gly Ala Thr Val Pro Gly Pro Ser
1 5 10 15
Thr Arg Ala Lys Ser Arg Leu Arg Phe Ser Lys Ser Tyr Ser Phe Asp
20 25 30
Val Asp Asn Gly Thr Ser Ala Gly Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr
35 40 45
Ser Pro Gly Ser Gly Leu Ile Leu Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln
50 55 60
Arg Arg Glu Ser Phe Leu Tyr Arg Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser
65 70 75 80
Pro Lys Ser Met Ser Arg Asn Ser Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly
85 90 95
Asp Asp Leu Ile Val Thr Pro Phe Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg
100 105 110
Thr Val Arg Asn Asn Phe Ala Ala Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala
115 120 125
Pro Ser Lys Arg Ser Pro Met Cys Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala
130 135 140
Thr Ile Thr Glu Glu Ala Tyr Gln Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu
145 150 155 160
Glu Leu Asp Trp Cys Leu Asp Gln Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His
165 170 175
Ser Val Ser Glu Met Ala Ser Asn Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg
180 185 190
Glu Leu Thr His Leu Ser Glu Met Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser
195 200 205
Glu Phe Ile Ser Asn Thr Phe Leu Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile
210 215 220
Pro Ser Pro Thr Gln Lys Glu Lys Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser
225 230 235 240
Gln Ile Ser Gly Val Lys Lys Leu Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn
245 250 255
Ser Ser Ile Pro Arg Phe Gly Val Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu
260 265 270
Ala Lys Glu Leu Glu Asp Val Asn Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg
275 280 285
Ile Ala Glu Leu Ser Gly Asn Arg Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr
290 295 300
Ile Phe Gln Glu Arg Asp Leu Leu Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp
305 310 315 320
Thr Leu Ile Thr Tyr Leu Met Thr Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp
325 330 335
Val Ala Tyr His Asn Asn Ile His Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr
340 345 350
His Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu
355 360 365
Glu Ile Leu Ala Ala Ile Phe Ala Ser Ala Ile His Asp Val Asp His
370 375 380
Pro Gly Val Ser Asn Gln Phe Leu Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala
385 390 395 400
Leu Met Tyr Asn Asp Ser Ser Val Leu Glu Asn His His Leu Ala Val
405 410 415
Gly Phe Lys Leu Leu Gln Glu Glu Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu
420 425 430
Thr Lys Lys Gln Arg Gln Ser Leu Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val
435 440 445
Leu Ala Thr Asp Met Ser Lys His Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys
450 455 460
Thr Met Val Glu Thr Lys Lys Val Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu
465 470 475 480
Asp Asn Tyr Ser Asp Arg Ile Gln Val Leu Gln Asn Met Val His Cys
485 490 495
Ala Asp Leu Ser Asn Pro Thr Lys Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp
500 505 510
Thr Asp Arg Ile Met Glu Glu Phe Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg
515 520 525
Glu Arg Gly Met Glu Ile Ser Pro Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser
530 535 540
Val Glu Lys Ser Gln Val Gly Phe Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu
545 550 555 560
Trp Glu Thr Trp Ala Asp Leu Val His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu
565 570 575
Asp Thr Leu Glu Asp Asn Arg Glu Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln
580 585 590
Ser Pro Ser Pro Ala Pro Asp Asp Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln
595 600 605
Thr Glu Lys Phe Gln Phe Glu Leu Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser
610 615 620
Asp Thr Glu Lys Asp Ser Gly Ser Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys
625 630 635 640
Ser Asp Ser Lys Thr Leu Cys Thr Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile
645 650 655
Pro Leu Asp Glu Gln Val Glu Glu Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu
660 665 670
Ser Gln Pro Glu Ala Cys Val Ile Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr
675 680 685
<210> 29
<211> 8395
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 29
ttctcactgc cctgcggtgt tttgaactgc cttcttacag acgtcataca gcccttgagg 60
aatagtttct gcctggtgag attgaatgat agttctcatt cacaaaaccc tggattctaa 120
gcagggacac acagaaatta ctttcgcagg taaatcagcc cacccagcca aagtgtggag 180
agatttgttc cttggctgac ttctttgctc cacggagagg agtgttttcc tgtgcttgcc 240
ctgaaatgga acttccttga cagctctccc gtgttacagt acctcccggt cattttcttt 300
ttctctctct ctacctgcgc tcttcgagtg tcagaaacct ttaaagctgt tactatggaa 360
ttgcaaaaaa gagatcaagt gactctttca ctatgctggt ttcccttgtg acccagatga 420
agaatcaatt cagaattcag ttcctccctt ggcattgcaa gacacagaag aaactgtcac 480
ttcctaacag cctagtactg gagtaaattc agtatgaagg aagaaagcgc tcctgcgtgt 540
tagaaccttg cccatgagct ggaccgagga caggagatgg actccaggaa aattggattt 600
cttcaagcag cctcccttgg aaatggaata tctttaaaat cttctttgca gaaagacagt 660
tagaatgtat taatcagaat agttgaagac ttattttcct ttttattttt tttcaaaatg 720
agcattatta tgaagccaag atcccgatct acaagttccc taaggactgc agaggcagtt 780
tgttttgatg tggacaatgg cacatctgcg ggacggagtc ccttggatcc catgaccagc 840
ccaggatccg ggctaattct ccaagcaaat tttgtccaca gtcaacgacg ggagtccttc 900
ctgtatcgat ccgacagcga ttatgacctc tctccaaagt ctatgtcccg gaactcctcc 960
attgccagtg atatacacgg agatgacttg attgtgactc catttgctca ggtcttggcc 1020
agtctgcgaa ctgtacgaaa caactttgct gcattaacta atttgcaaga tcgagcacct 1080
agcaaaagat cacccatgtg caaccaacca tccatcaaca aagccaccat aacagaggag 1140
gcctaccaga aactggccag cgagaccctg gaggagctgg actggtgtct ggaccagcta 1200
gagaccctac agaccaggca ctccgtcagt gagatggcct ccaacaagtt taaaaggatg 1260
cttaatcggg agctcaccca tctctctgaa atgagtcggt ctggaaatca agtgtcagag 1320
tttatatcaa acacattctt agataagcaa catgaagtgg aaattccttc tccaactcag 1380
aaggaaaagg agaaaaagaa aagaccaatg tctcagatca gtggagtcaa gaaattgatg 1440
cacagctcta gtctgactaa ttcaagtatc ccaaggtttg gagttaaaac tgaacaagaa 1500
gatgtccttg ccaaggaact agaagatgtg aacaaatggg gtcttcatgt tttcagaata 1560
gcagagttgt ctggtaaccg gcccttgact gttatcatgc acaccatttt tcaggaacgg 1620
gatttattaa aaacatttaa aattccagta gatactttaa ttacatatct tatgactctc 1680
gaagaccatt accatgctga tgtggcctat cacaacaata tccatgctgc agatgttgtc 1740
cagtctactc atgtgctatt atctacacct gctttggagg ctgtgtttac agatttggag 1800
attcttgcag caatttttgc cagtgcaata catgatgtag atcatcctgg tgtgtccaat 1860
caatttctga tcaatacaaa ctctgaactt gccttgatgt acaatgattc ctcagtctta 1920
gagaaccatc atttggctgt gggctttaaa ttgcttcagg aagaaaactg tgacattttc 1980
cagaatttga ccaaaaaaca aagacaatct ttaaggaaaa tggtcattga catcgtactt 2040
gcaacagata tgtcaaaaca catgaatcta ctggctgatt tgaagactat ggttgaaact 2100
aagaaagtga caagctctgg agttcttctt cttgataatt attccgatag gattcaggtt 2160
cttcagaata tggtgcactg tgcagatctg agcaacccaa caaagcctct ccagctgtac 2220
cgccagtgga cggaccggat aatggaggag ttcttccgcc aaggagaccg agagagggaa 2280
cgtggcatgg agataagccc catgtgtgac aagcacaatg cttccgtgga aaaatcacag 2340
gtgggcttca tagactatat tgttcatccc ctctgggaga catgggcaga cctcgtccac 2400
cctgacgccc aggatatttt ggacactttg gaggacaatc gtgaatggta ccagagcaca 2460
atccctcaga gcccctctcc tgcacctgat gacccagagg agggccggca gggtcaaact 2520
gagaaattcc agtttgaact aactttagag gaagatggtg agtcagacac ggaaaaggac 2580
agtggcagtc aagtggaaga agacactagc tgcagtgact ccaagactct ttgtactcaa 2640
gactcagagt ctactgaaat tccccttgat gaacaggttg aagaggaggc agtaggggaa 2700
gaagaggaaa gccagcctga agcctgtgtc atagatgatc gttctcctga cacgtaacag 2760
tgcaaaaact ttcatgcctt tttttttttt aagtagaaaa attgtttcca aagtgcatgt 2820
cacatgccac aaccacggtc acacctcact gtcatctgcc aggacgtttg ttgaacaaaa 2880
ctgaccttga ctactcagtc cagcgctcag gaatatcgta accagttttt tcacctccat 2940
gtcatccgag caaggtggac atcttcacga acagcgtttt taacaagatt tcagcttggt 3000
agagctgaca aagcagataa aatctactcc aaattatttt caagagagtg tgactcatca 3060
ggcagcccaa aagtttattg gacttggggt ttctattcct ttttatttgt ttgcaatatt 3120
ttcagaagaa aggcattgca cagagtgaac ttaatggacg aagcaacaaa tatgtcaaga 3180
acaggacata gcacgaatct gttaccagta ggaggaggat gagccacaga aattgcataa 3240
ttttctaatt tcaagtcttc ctgatacatg actgaatagt gtggttcagt gagctgcact 3300
gacctctaca ttttgtatga tatgtaaaac agattttttg tagagcttac ttttattatt 3360
aaatgtattg aggtattata tttaaaaaaa actatgttca gaacttcatc tgccactggt 3420
tatttttttc taaggagtaa cttgcaagtt ttcagtacaa atctgtgcta cactggataa 3480
aaatctaatt tatgaatttt acttgcacct tatagttcat agcaattaac tgatttgtag 3540
tgattcattg tttgttttat ataccaatga cttccatatt ttaaaagaga aaaacaactt 3600
tatgttgcag gaaacccttt ttgtaagtct ttattattta ctttgcattt tgtttcactc 3660
tttccagata agcagagttg ctcttcacca gtgtttttct tcatgtgcaa agtgactatt 3720
tgttctataa tacttttatg tgtgttatat caaatgtgtc ttaagcttca tgcaaactca 3780
gtcatcagtt cgtgttgtct gaagcaagtg ggagatatat aaatacccag tagctaaaat 3840
ggtcagtctt ttttagatgt tttcctactt agtatctcct aataacgttt tgctgtgtca 3900
ctagatgttc atttcacaag tgcatgtctt tctaataatc cacacatttc atgctctaat 3960
aatccacaca tttcatgctc atttttattg tttttacagc cagttatagt aagaaaaagg 4020
tttttcccct tgtgctgctt tataatttag cgtgtgtctg aaccttatcc atgtttgcta 4080
gatgaggtct tgtcaaatat atcactacca ttgtcaccgg tgaaaagaaa caggtagtta 4140
agttagggtt aacattcatt tcaaccacga ggttgtatat catgactagc ttttactctt 4200
ggtttacaga gaaaagttaa acagccaact aggcagtttt taagaatatt aacaatatat 4260
taacaaacac caatacaact aatcctattt ggttttaatg atttcaccat gggattaaga 4320
actatatcag gaacatccct gagaaacggt tttaagtgta gcaactactc ttccttaatg 4380
gacagccaca taacgtgtag gaagtccttt atcacttatc ctcgatccat aagcatatct 4440
tgcagagggg aactacttct ttaaacacat ggagggaaag aagatgatgc cactggcacc 4500
agagggttag tactgtgatg catcctaaaa tatttattat attggtaaaa attctggtta 4560
aataaaaaat tagagatcac tcttggctga tttcagcacc aggaactgta ttacagtttt 4620
agagattaat tcctagtgtt tacctgatta tagcagttgg catcatgggg catttaattc 4680
tgactttatc cccacgtcag ccttaataaa gtcttcttta ccttctctat gaagacttta 4740
aagcccaaat aatcattttt cacattgata ttcaagaatt gagatagata gaagccaaag 4800
tgggtatctg acaagtggaa aatcaaacgt ttaagaagaa ttacaactct gaaaagcatt 4860
tatatgtgga acttctcaag gagcctcctg gggactggaa agtaagtcat cagccaggca 4920
aatgactcat gctgaagaga gtccccattt cagtcccctg agatctagct gatgcttaga 4980
tcctttgaaa taaaaattat gtctttataa ctctgatctt ttacataaag cagaagagga 5040
atcaactagt taattgcaag gtttctactc tgtttcctct gtaaagatca gatggtaatc 5100
tttcaaataa gaaaaaaata aagacgtatg tttgaccaag tagtttcaca agaatatttg 5160
ggaacttgtt tcttttaatt ttatttgtcc ctgagtgaag tctagaaaga aaggtaaaga 5220
gtctagagtt tattcctctt tccaaaacat tctcattcct ctcctcccta cacttagtat 5280
ttcccccaca gagtgcctag aatcttaata atgaataaaa taaaaagcag caatatgtca 5340
ttaacaaatc cagacctgaa agggtaaagg gtttataact gcactaataa agagaggctc 5400
tttttttttc ttccagtttg ttggttttta atggtaccgt gttgtaaaga tacccactaa 5460
tggacaatca aattgcagaa aaggctcaat atccaagaga cagggactaa tgcactgtac 5520
aatctgctta tccttgccct tctctcttgc caaagtgtgc ttcagaaata tatactgctt 5580
taaaaaagaa taaaagaata tccttttaca agtggcttta catttcctaa aatgccataa 5640
gaaaatgcaa tatctgggta ctgtatgggg aaaaaaatgt ccaagtttgt gtaaaaccag 5700
tgcatttcag cttgcaagtt actgaacaca ataatgctgt tttaattttg ttttatatca 5760
gttaaaattc acaataatgt agatagaaca aattacagac aaggaaagaa aaaacttgaa 5820
tgaaatggat tttacagaaa gctttatgat aatttttgaa tgcattattt attttttgtg 5880
ccatgcattt tttttctcac caaatgacct tacctgtaat acagtcttgt ttgtctgttt 5940
acaaccatgt atttattgca atgtacatac tgtaatgtta attgtaaatt atctgttctt 6000
attaaaacat catcccatga tgggatggtg ttgatatatt tggaaactct tggtgagaga 6060
atgaatggtg tgtatacata ctctgtacat ttttcttttc tcctgtaata tagtcttgtc 6120
accttagagc ttgtttatgg aagattcaag aaaactataa aatacttaaa gatatataaa 6180
tttaaaaaaa catagctgca ggtctttggt cccagggctg tgccttaact ttaaccaata 6240
ttttcttctg ttttgctgca tttgaaaggt aacagtggag ctagggctgg gcattttaca 6300
tccaggcttt taattgatta gaattctgcc aataggtgga ttttacaaaa ccacagacaa 6360
cctctgaaag attctgagac ccttttgaga cagaagctct taagtacttc ttgccaggga 6420
gcagcactgc atgtgtgatg gttgtttgcc atctgttgat caggaactac ttcagctact 6480
tgcatttgat tatttccttt tttttttttt ttaactcgga aacacaactg gggaaatata 6540
ttctttccca gtgattataa acaatctttt tctttttttt aagtcctttt ggcttctaga 6600
gctcatagga aaatggactt gatttgaaat tggagccaga gtttactcgt gttggttatc 6660
tattcatcag cttcctgaca tgttaagaga atacattaaa gagaaaatac tgttttttaa 6720
tcctaaaatt tttcttccac taagataaac caaatgtcct tacatatatg taaacccatc 6780
tatttaaacg caaaggtggg ttgatgtcag tttacatagc agaaagcatt cactatcctc 6840
taagatttgt ttctgcaaaa ctttcattgc tttagaattt taaaatttca ccttgtacaa 6900
tggccagccc ctaaagcagg aaacatttat aatggattat atggaaacat cctcccagta 6960
cttgcccagc ccttgaatca tgtggctttt cagtgaaagg aaagattctt tttctaggaa 7020
aaatgagcct attttatttt attttatttt attttttgac acaaactgta gattttagca 7080
gccctggccc aaaggaattt gattactttt gttttaaaca gtacaaaggg gacactataa 7140
ttacaaaaac atccttaact gatttgagtt gtttttattt ctttggatat attttcagag 7200
tggtaaattg tgtgtgagaa ttacaaatga ttattctttt agtggtttct tagcctctct 7260
tacagcccac ggggatagta ctgtacatca ataccttcat atgaaatttt tatatgcaat 7320
gaaaataaaa gcatgggttg attctgccta tttatgactc aatcttttac aaataaaaga 7380
ttattcattt taaattatag ttcaatcagc atgtctctta ggatactgaa cgtggttgaa 7440
atgaaaggat agtgacatca taagttagta ctgatattca taaccaaata aagccaactt 7500
gagtaatttt gctacattaa aaattaccaa aattacttag atggcctata agattaagca 7560
tggtgttttc taagcaagct ttgaaagggg ccttccatac ttacttaatt gaatattctg 7620
ggatattgaa aattattcag atacttgaca attatttttg gttacctact ccgcaaacta 7680
caaagtttta aggactcaac aataagttaa tgagacacag tgtttgcttt catggagctt 7740
acagtctgga ggggacaaag gcttaaacaa tactcatata attatatatg tgatcagtac 7800
aatgaaggag ctcagtgggg taaataagca ggaacctgaa cttgatctgt tccggagggc 7860
cacagaaggc ttccttgagg ccttgagaaa gtgatttgca tctgagttct gaaggattgt 7920
aagaggtaac tagggaaaaa gttgacagga agaggaaggg gatccagaca agaaacattt 7980
gcaaagatct tgaggcataa atgagcttga gacatctgga gaaactgagg aaaagtgaga 8040
gagtaggcag ggcctggagc cgcagagcca ttgctaacca tcctgtgtga gatatccccc 8100
attctgtagc tttattctca taaccctgct caattttctt tataacactt ctcacagatt 8160
tatatacgtg tttgtttttg ttatctgtct ctcccaccag accacagctc catgagagca 8220
aggtctttgc ttaccaatat atcactagca cttaaaacta tgcctggtac acagtaggtt 8280
cttaatatgt gttgaatata gccatcaaat tgatattgga tataattcaa tctgataaga 8340
tattttgaga tattaaagag tttttaactt gataccataa aaaaaaaaaa aaaaa 8395
<210> 30
<211> 679
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 30
Met Ser Ile Ile Met Lys Pro Arg Ser Arg Ser Thr Ser Ser Leu Arg
1 5 10 15
Thr Ala Glu Ala Val Cys Phe Asp Val Asp Asn Gly Thr Ser Ala Gly
20 25 30
Arg Ser Pro Leu Asp Pro Met Thr Ser Pro Gly Ser Gly Leu Ile Leu
35 40 45
Gln Ala Asn Phe Val His Ser Gln Arg Arg Glu Ser Phe Leu Tyr Arg
50 55 60
Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu Ser Pro Lys Ser Met Ser Arg Asn Ser
65 70 75 80
Ser Ile Ala Ser Asp Ile His Gly Asp Asp Leu Ile Val Thr Pro Phe
85 90 95
Ala Gln Val Leu Ala Ser Leu Arg Thr Val Arg Asn Asn Phe Ala Ala
100 105 110
Leu Thr Asn Leu Gln Asp Arg Ala Pro Ser Lys Arg Ser Pro Met Cys
115 120 125
Asn Gln Pro Ser Ile Asn Lys Ala Thr Ile Thr Glu Glu Ala Tyr Gln
130 135 140
Lys Leu Ala Ser Glu Thr Leu Glu Glu Leu Asp Trp Cys Leu Asp Gln
145 150 155 160
Leu Glu Thr Leu Gln Thr Arg His Ser Val Ser Glu Met Ala Ser Asn
165 170 175
Lys Phe Lys Arg Met Leu Asn Arg Glu Leu Thr His Leu Ser Glu Met
180 185 190
Ser Arg Ser Gly Asn Gln Val Ser Glu Phe Ile Ser Asn Thr Phe Leu
195 200 205
Asp Lys Gln His Glu Val Glu Ile Pro Ser Pro Thr Gln Lys Glu Lys
210 215 220
Glu Lys Lys Lys Arg Pro Met Ser Gln Ile Ser Gly Val Lys Lys Leu
225 230 235 240
Met His Ser Ser Ser Leu Thr Asn Ser Ser Ile Pro Arg Phe Gly Val
245 250 255
Lys Thr Glu Gln Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Leu Glu Asp Val Asn
260 265 270
Lys Trp Gly Leu His Val Phe Arg Ile Ala Glu Leu Ser Gly Asn Arg
275 280 285
Pro Leu Thr Val Ile Met His Thr Ile Phe Gln Glu Arg Asp Leu Leu
290 295 300
Lys Thr Phe Lys Ile Pro Val Asp Thr Leu Ile Thr Tyr Leu Met Thr
305 310 315 320
Leu Glu Asp His Tyr His Ala Asp Val Ala Tyr His Asn Asn Ile His
325 330 335
Ala Ala Asp Val Val Gln Ser Thr His Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala
340 345 350
Leu Glu Ala Val Phe Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Ala Ile Phe Ala
355 360 365
Ser Ala Ile His Asp Val Asp His Pro Gly Val Ser Asn Gln Phe Leu
370 375 380
Ile Asn Thr Asn Ser Glu Leu Ala Leu Met Tyr Asn Asp Ser Ser Val
385 390 395 400
Leu Glu Asn His His Leu Ala Val Gly Phe Lys Leu Leu Gln Glu Glu
405 410 415
Asn Cys Asp Ile Phe Gln Asn Leu Thr Lys Lys Gln Arg Gln Ser Leu
420 425 430
Arg Lys Met Val Ile Asp Ile Val Leu Ala Thr Asp Met Ser Lys His
435 440 445
Met Asn Leu Leu Ala Asp Leu Lys Thr Met Val Glu Thr Lys Lys Val
450 455 460
Thr Ser Ser Gly Val Leu Leu Leu Asp Asn Tyr Ser Asp Arg Ile Gln
465 470 475 480
Val Leu Gln Asn Met Val His Cys Ala Asp Leu Ser Asn Pro Thr Lys
485 490 495
Pro Leu Gln Leu Tyr Arg Gln Trp Thr Asp Arg Ile Met Glu Glu Phe
500 505 510
Phe Arg Gln Gly Asp Arg Glu Arg Glu Arg Gly Met Glu Ile Ser Pro
515 520 525
Met Cys Asp Lys His Asn Ala Ser Val Glu Lys Ser Gln Val Gly Phe
530 535 540
Ile Asp Tyr Ile Val His Pro Leu Trp Glu Thr Trp Ala Asp Leu Val
545 550 555 560
His Pro Asp Ala Gln Asp Ile Leu Asp Thr Leu Glu Asp Asn Arg Glu
565 570 575
Trp Tyr Gln Ser Thr Ile Pro Gln Ser Pro Ser Pro Ala Pro Asp Asp
580 585 590
Pro Glu Glu Gly Arg Gln Gly Gln Thr Glu Lys Phe Gln Phe Glu Leu
595 600 605
Thr Leu Glu Glu Asp Gly Glu Ser Asp Thr Glu Lys Asp Ser Gly Ser
610 615 620
Gln Val Glu Glu Asp Thr Ser Cys Ser Asp Ser Lys Thr Leu Cys Thr
625 630 635 640
Gln Asp Ser Glu Ser Thr Glu Ile Pro Leu Asp Glu Gln Val Glu Glu
645 650 655
Glu Ala Val Gly Glu Glu Glu Glu Ser Gln Pro Glu Ala Cys Val Ile
660 665 670
Asp Asp Arg Ser Pro Asp Thr
675
<210> 31
<211> 26
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D9_прямой праймер
<400> 31
atgagcatta ttatgaagcc aagatc 26
<210> 32
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PDE4D9_обратный праймер
<400> 32
gtgccattgt ccacatcaaa ac 22
<210> 33
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд PDE4D9
<400> 33
ctacaagttc cctaaggact gcagagg 27
<210> 34
<211> 1435
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 34
ggcggggcct gcttctcctc agcttcaggc ggctgcgacg agccctcagg cgaacctctc 60
ggctttcccg cgcggcgccg cctcttgctg cgcctccgcc tcctcctctg ctccgccacc 120
ggcttcctcc tcctgagcag tcagcccgcg cgccggccgg ctccgttatg gcgacccgca 180
gccctggcgt cgtgattagt gatgatgaac caggttatga ccttgattta ttttgcatac 240
ctaatcatta tgctgaggat ttggaaaggg tgtttattcc tcatggacta attatggaca 300
ggactgaacg tcttgctcga gatgtgatga aggagatggg aggccatcac attgtagccc 360
tctgtgtgct caaggggggc tataaattct ttgctgacct gctggattac atcaaagcac 420
tgaatagaaa tagtgataga tccattccta tgactgtaga ttttatcaga ctgaagagct 480
attgtaatga ccagtcaaca ggggacataa aagtaattgg tggagatgat ctctcaactt 540
taactggaaa gaatgtcttg attgtggaag atataattga cactggcaaa acaatgcaga 600
ctttgctttc cttggtcagg cagtataatc caaagatggt caaggtcgca agcttgctgg 660
tgaaaaggac cccacgaagt gttggatata agccagactt tgttggattt gaaattccag 720
acaagtttgt tgtaggatat gcccttgact ataatgaata cttcagggat ttgaatcatg 780
tttgtgtcat tagtgaaact ggaaaagcaa aatacaaagc ctaagatgag agttcaagtt 840
gagtttggaa acatctggag tcctattgac atcgccagta aaattatcaa tgttctagtt 900
ctgtggccat ctgcttagta gagctttttg catgtatctt ctaagaattt tatctgtttt 960
gtactttaga aatgtcagtt gctgcattcc taaactgttt atttgcacta tgagcctata 1020
gactatcagt tccctttggg cggattgttg tttaacttgt aaatgaaaaa attctcttaa 1080
accacagcac tattgagtga aacattgaac tcatatctgt aagaaataaa gagaagatat 1140
attagttttt taattggtat tttaattttt atatatgcag gaaagaatag aagtgattga 1200
atattgttaa ttataccacc gtgtgttaga aaagtaagaa gcagtcaatt ttcacatcaa 1260
agacagcatc taagaagttt tgttctgtcc tggaattatt ttagtagtgt ttcagtaatg 1320
ttgactgtat tttccaactt gttcaaatta ttaccagtga atctttgtca gcagttccct 1380
tttaaatgca aatcaataaa ttcccaaaaa tttaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1435
<210> 35
<211> 218
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 35
Met Ala Thr Arg Ser Pro Gly Val Val Ile Ser Asp Asp Glu Pro Gly
1 5 10 15
Tyr Asp Leu Asp Leu Phe Cys Ile Pro Asn His Tyr Ala Glu Asp Leu
20 25 30
Glu Arg Val Phe Ile Pro His Gly Leu Ile Met Asp Arg Thr Glu Arg
35 40 45
Leu Ala Arg Asp Val Met Lys Glu Met Gly Gly His His Ile Val Ala
50 55 60
Leu Cys Val Leu Lys Gly Gly Tyr Lys Phe Phe Ala Asp Leu Leu Asp
65 70 75 80
Tyr Ile Lys Ala Leu Asn Arg Asn Ser Asp Arg Ser Ile Pro Met Thr
85 90 95
Val Asp Phe Ile Arg Leu Lys Ser Tyr Cys Asn Asp Gln Ser Thr Gly
100 105 110
Asp Ile Lys Val Ile Gly Gly Asp Asp Leu Ser Thr Leu Thr Gly Lys
115 120 125
Asn Val Leu Ile Val Glu Asp Ile Ile Asp Thr Gly Lys Thr Met Gln
130 135 140
Thr Leu Leu Ser Leu Val Arg Gln Tyr Asn Pro Lys Met Val Lys Val
145 150 155 160
Ala Ser Leu Leu Val Lys Arg Thr Pro Arg Ser Val Gly Tyr Lys Pro
165 170 175
Asp Phe Val Gly Phe Glu Ile Pro Asp Lys Phe Val Val Gly Tyr Ala
180 185 190
Leu Asp Tyr Asn Glu Tyr Phe Arg Asp Leu Asn His Val Cys Val Ile
195 200 205
Ser Glu Thr Gly Lys Ala Lys Tyr Lys Ala
210 215
<210> 36
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HPRT1_прямой праймер
<400> 36
gaggatttgg aaagggtgtt tatt 24
<210> 37
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HPRT1_обратный праймер
<400> 37
acagagggct acaatgtgat g 21
<210> 38
<211> 26
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> HPRT1 зонд
<400> 38
acgtcttgct cgagatgtga tgaagg 26
<210> 39
<211> 1771
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 39
ggcggccagg ccgggcgcgg agtgggcgcg cggggccgga ggaggggcca gcgaccgcgg 60
caccgcctgt gcccgcccgc ccctccgcag ccgctactta agaggctcca gcgccggccc 120
cgccctagtg cgttacttac ctcgactctt agcttgtcgg ggacggtaac cgggacccgg 180
tgtctgctcc tgtcgccttc gcctcctaat ccctagccac tatgcgtgag tgcatctcca 240
tccacgttgg ccaggctggt gtccagattg gcaatgcctg ctgggagctc tactgcctgg 300
aacacggcat ccagcccgat ggccagatgc caagtgacaa gaccattggg ggaggagatg 360
actccttcaa caccttcttc agtgagacgg gcgctggcaa gcacgtgccc cgggctgtgt 420
ttgtagactt ggaacccaca gtcattgatg aagttcgcac tggcacctac cgccagctct 480
tccaccctga gcagctcatc acaggcaagg aagatgctgc caataactat gcccgagggc 540
actacaccat tggcaaggag atcattgacc ttgtgttgga ccgaattcgc aagctggctg 600
accagtgcac cggtcttcag ggcttcttgg ttttccacag ctttggtggg ggaactggtt 660
ctgggttcac ctccctgctc atggaacgtc tctcagttga ttatggcaag aagtccaagc 720
tggagttctc catttaccca gcaccccagg tttccacagc tgtagttgag ccctacaact 780
ccatcctcac cacccacacc accctggagc actctgattg tgccttcatg gtagacaatg 840
aggccatcta tgacatctgt cgtagaaacc tcgatatcga gcgcccaacc tacactaacc 900
ttaaccgcct tattagccag attgtgtcct ccatcactgc ttccctgaga tttgatggag 960
ccctgaatgt tgacctgaca gaattccaga ccaacctggt gccctacccc cgcatccact 1020
tccctctggc cacatatgcc cctgtcatct ctgctgagaa agcctaccat gaacagcttt 1080
ctgtagcaga gatcaccaat gcttgctttg agccagccaa ccagatggtg aaatgtgacc 1140
ctcgccatgg taaatacatg gcttgctgcc tgttgtaccg tggtgacgtg gttcccaaag 1200
atgtcaatgc tgccattgcc accatcaaaa ccaagcgcag catccagttt gtggattggt 1260
gccccactgg cttcaaggtt ggcatcaact accagcctcc cactgtggtg cctggtggag 1320
acctggccaa ggtacagaga gctgtgtgca tgctgagcaa caccacagcc attgctgagg 1380
cctgggctcg cctggaccac aagtttgacc tgatgtatgc caagcgtgcc tttgttcact 1440
ggtacgtggg tgaggggatg gaggaaggcg agttttcaga ggcccgtgaa gatatggctg 1500
cccttgagaa ggattatgag gaggttggtg tggattctgt tgaaggagag ggtgaggaag 1560
aaggagagga atactaatta tccattcctt ttggccctgc agcatgtcat gctcccagaa 1620
tttcagcttc agcttaactg acagacgtta aagctttctg gttagattgt tttcacttgg 1680
tgatcatgtc ttttccatgt gtacctgtaa tatttttcca tcatatctca aagtaaagtc 1740
attaacatca aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 1771
<210> 40
<211> 451
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 40
Met Arg Glu Cys Ile Ser Ile His Val Gly Gln Ala Gly Val Gln Ile
1 5 10 15
Gly Asn Ala Cys Trp Glu Leu Tyr Cys Leu Glu His Gly Ile Gln Pro
20 25 30
Asp Gly Gln Met Pro Ser Asp Lys Thr Ile Gly Gly Gly Asp Asp Ser
35 40 45
Phe Asn Thr Phe Phe Ser Glu Thr Gly Ala Gly Lys His Val Pro Arg
50 55 60
Ala Val Phe Val Asp Leu Glu Pro Thr Val Ile Asp Glu Val Arg Thr
65 70 75 80
Gly Thr Tyr Arg Gln Leu Phe His Pro Glu Gln Leu Ile Thr Gly Lys
85 90 95
Glu Asp Ala Ala Asn Asn Tyr Ala Arg Gly His Tyr Thr Ile Gly Lys
100 105 110
Glu Ile Ile Asp Leu Val Leu Asp Arg Ile Arg Lys Leu Ala Asp Gln
115 120 125
Cys Thr Gly Leu Gln Gly Phe Leu Val Phe His Ser Phe Gly Gly Gly
130 135 140
Thr Gly Ser Gly Phe Thr Ser Leu Leu Met Glu Arg Leu Ser Val Asp
145 150 155 160
Tyr Gly Lys Lys Ser Lys Leu Glu Phe Ser Ile Tyr Pro Ala Pro Gln
165 170 175
Val Ser Thr Ala Val Val Glu Pro Tyr Asn Ser Ile Leu Thr Thr His
180 185 190
Thr Thr Leu Glu His Ser Asp Cys Ala Phe Met Val Asp Asn Glu Ala
195 200 205
Ile Tyr Asp Ile Cys Arg Arg Asn Leu Asp Ile Glu Arg Pro Thr Tyr
210 215 220
Thr Asn Leu Asn Arg Leu Ile Ser Gln Ile Val Ser Ser Ile Thr Ala
225 230 235 240
Ser Leu Arg Phe Asp Gly Ala Leu Asn Val Asp Leu Thr Glu Phe Gln
245 250 255
Thr Asn Leu Val Pro Tyr Pro Arg Ile His Phe Pro Leu Ala Thr Tyr
260 265 270
Ala Pro Val Ile Ser Ala Glu Lys Ala Tyr His Glu Gln Leu Ser Val
275 280 285
Ala Glu Ile Thr Asn Ala Cys Phe Glu Pro Ala Asn Gln Met Val Lys
290 295 300
Cys Asp Pro Arg His Gly Lys Tyr Met Ala Cys Cys Leu Leu Tyr Arg
305 310 315 320
Gly Asp Val Val Pro Lys Asp Val Asn Ala Ala Ile Ala Thr Ile Lys
325 330 335
Thr Lys Arg Ser Ile Gln Phe Val Asp Trp Cys Pro Thr Gly Phe Lys
340 345 350
Val Gly Ile Asn Tyr Gln Pro Pro Thr Val Val Pro Gly Gly Asp Leu
355 360 365
Ala Lys Val Gln Arg Ala Val Cys Met Leu Ser Asn Thr Thr Ala Ile
370 375 380
Ala Glu Ala Trp Ala Arg Leu Asp His Lys Phe Asp Leu Met Tyr Ala
385 390 395 400
Lys Arg Ala Phe Val His Trp Tyr Val Gly Glu Gly Met Glu Glu Gly
405 410 415
Glu Phe Ser Glu Ala Arg Glu Asp Met Ala Ala Leu Glu Lys Asp Tyr
420 425 430
Glu Glu Val Gly Val Asp Ser Val Glu Gly Glu Gly Glu Glu Glu Gly
435 440 445
Glu Glu Tyr
450
<210> 41
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> TUBA1B_прямой праймер
<400> 41
tgactccttc aacaccttct tc 22
<210> 42
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> TUBA1B_обратный праймер
<400> 42
tgccagtgcg aacttcat 18
<210> 43
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд TUBA1B
<400> 43
ccgggctgtg tttgtagact tgga 24
<210> 44
<211> 5416
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 44
agtgggccgc catgttgtcg gagtgaaagg taagggggag cgagagcgcc agagagagaa 60
gatcgggggg ctgaaatcca tcttcatcct accgctccgc ccgtgttggt ggaatgagcg 120
ttgcatgtgt cttgaagaga aaagcagtgc tttggcagga ctctttcagc ccccacctga 180
aacatcaccc tcaagaacca gctaatccca acatgcctgt tgttttgaca tctggaacag 240
ggtcgcaagc gcagccacaa ccagctgcaa atcaggctct tgcagctggg actcactcca 300
gccctgtccc aggatctata ggagttgcag gccgttccca ggacgacgct atggtggact 360
acttctttca gaggcagcat ggtgagcagc ttgggggagg aggaagtgga ggaggcggct 420
ataataatag caaacatcga tggcctactg gggataacat tcatgcagaa catcaggtgc 480
gttccatgga tgaactgaat catgattttc aagcacttgc tctggaggga agagcgatgg 540
gagagcagct cttgccaggt aaaaagtttt gggaaacaga tgaatccagc aaagatggac 600
caaaaggaat attcctgggt gatcaatggc gagacagtgc ctggggaaca tcagatcatt 660
cagtttccca gccaatcatg gtgcagagaa gacctggtca gagtttccat gtgaacagtg 720
aggtcaattc tgtactgtcc ccacgatcgg agagtggggg actaggcgtt agcatggtgg 780
agtatgtgtt gagctcatcc ccgggcgatt cctgtctaag aaaaggagga tttggcccaa 840
gggatgcaga cagtgatgaa aacgacaaag gtgaaaagaa gaacaagggt acgtttgatg 900
gagataagct aggagatttg aaggaggagg gtgatgtgat ggacaagacc aatggtttac 960
cagtgcagaa tgggattgat gcagacgtca aagattttag ccgtacccct ggtaattgcc 1020
agaactctgc taatgaagtg gatcttctgg gtccaaacca gaatggttct gagggcttag 1080
cccagctgac cagcaccaat ggtgccaagc ctgtggagga tttctccaac atggagtccc 1140
agagtgtccc cttggacccc atggaacatg tgggcatgga gcctcttcag tttgattatt 1200
caggcacgca ggtacctgtg gactcagcag cagcaactgt gggacttttt gactacaatt 1260
ctcaacaaca gctgttccaa agacctaatg cgcttgctgt ccagcagttg acagctgctc 1320
agcagcagca gtatgcactg gcagctgctc atcagccgca catcggttta gctcccgctg 1380
cgtttgtccc caatccatac atcatcagcg ctgctccccc agggacggac ccctacacag 1440
ctggattggc tgcagcagcg acactaggcc cagctgtggt ccctcaccag tattatggag 1500
ttactccctg gggagtctac cctgccagtc ttttccagca gcaagctgcc gctgccgctg 1560
cagcaactaa ttcagctaat caacagacca ccccacaggc tcagcaagga cagcagcagg 1620
ttctccgtgg aggagccagc caacgtcctt tgaccccaaa ccagaaccag cagggacagc 1680
aaacggatcc ccttgtggca gctgcagcag tgaattctgc ccttgcattt ggacaaggtc 1740
tggcagcagg catgccaggt tatccggtgt tggctcctgc tgcttactat gaccaaactg 1800
gtgcccttgt agtgaatgca ggcgcgagaa atggtcttgg agctcctgtt cgacttgtag 1860
ctcctgcccc agtcatcatt agttcctcag ctgcacaagc agctgttgca gcagccgcag 1920
cttcagcaaa tggagcagct ggtggtcttg ctggaacaac aaatggacca tttcgccctt 1980
taggaacaca gcagcctcag ccccagcccc agcagcagcc caataacaac ctggcatcca 2040
gttctttcta cggcaacaac tctctgaaca gcaattcaca gagcagctcc ctcttctccc 2100
agggctctgc ccagcctgcc aacacatcct tgggattcgg aagtagcagt tctctcggcg 2160
ccaccctggg atccgccctt ggagggtttg gaacagcagt tgcaaactcc aacactggca 2220
gtggctcccg ccgtgactcc ctgactggca gcagtgacct ttataagagg acatcgagca 2280
gcttgacccc cattggacac agtttttata acggccttag cttttcctcc tctcctggac 2340
ccgtgggcat gcctctccct agtcagggac caggacattc acagacacca cctccttccc 2400
tctcttcaca tggatcctct tcaagcttaa acctgggagg actcacgaat ggcagtggaa 2460
gatacatctc tgctgctcca ggcgctgaag ccaagtaccg cagtgcaagc agcgcctcca 2520
gcctcttcag cccgagcagc actcttttct cttcctctcg tttgcgatat ggaatgtctg 2580
atgtcatgcc ttctggcagg agcaggcttt tggaagattt tcgaaacaac cggtacccca 2640
atttacaact gcgggagatt gctggacata taatggaatt ttcccaagac cagcatgggt 2700
ccagattcat tcagctgaaa ctggagcgtg ccacaccagc tgagcgccag cttgtcttca 2760
atgaaatcct ccaggctgcc taccaactca tggtggatgt gtttggtaat tacgtcattc 2820
agaagttctt tgaatttggc agtcttgaac agaagctggc tttggcagaa cggattcgag 2880
gccacgtcct gtcattggca ctacagatgt atggctgccg tgttatccag aaagctcttg 2940
agtttattcc ttcagaccag caggtaatta atgagatggt tcgggaacta gatggccatg 3000
tcttgaagtg tgtgaaagat cagaatggca atcacgtggt tcagaaatgc attgaatgtg 3060
tacagcccca gtctttgcaa tttatcatcg atgcgtttaa gggacaggta tttgccttat 3120
ccacacatcc ttatggctgc cgagtgattc agagaatcct ggagcactgt ctccctgacc 3180
agacactccc tattttagag gagcttcacc agcacacaga gcagcttgta caggatcaat 3240
atggaaatta tgtaatccaa catgtactgg agcacggtcg tcctgaggat aaaagcaaaa 3300
ttgtagcaga aatccgaggc aatgtacttg tattgagtca gcacaaattt gcaagcaatg 3360
ttgtggagaa gtgtgttact cacgcctcac gtacggagcg cgctgtgctc atcgatgagg 3420
tgtgcaccat gaacgacggt ccccacagtg ccttatacac catgatgaag gaccagtatg 3480
ccaactacgt ggtccagaag atgattgacg tggcggagcc aggccagcgg aagatcgtca 3540
tgcataagat ccggccccac atcgcaactc ttcgtaagta cacctatggc aagcacattc 3600
tggccaagct ggagaagtac tacatgaaga acggtgttga cttagggccc atctgtggcc 3660
cccctaatgg tatcatctga ggcagtgtca cccgctgttc cctcattccc gctgacctca 3720
ctggcccact ggcaaatcca accagcaacc agaaatgttc tagtgtagag tctgagacgg 3780
gcaagtggtt gctccaggat tactccctcc tccaaaaaag gaatcaaatc cacgagtgga 3840
aaagcctttg taaatttaat tttattacac ataacatgta ctattttttt taattgacta 3900
attgccctgc tgttttactg gtgtatagga tacttgtaca taggtaacca atgtacatgg 3960
gaggccacat attttgttca ctgttgtatc tatatttcac atgtggaaac tttcagggtg 4020
gttggtttaa caaaaaaaaa aagctttaaa aaaaaaagaa aaaaaggaaa aggtttttag 4080
ctcatttgcc tggccggcaa gttttgcaaa tagctcttcc ccacctcctc attttagtaa 4140
aaaacaaaca aaaacaaaaa aacctgagaa gtttgaattg tagttaaatg accccaaact 4200
ggcatttaac actgtttata aaaaatatat atatatatat atatatatat aatgaaaaag 4260
gtttcagagt tgctaaagct tcagtttgtg acattaagtt tatgaaattc taaaaaatgc 4320
cttttttgga gactatatta tgctgaagaa ggctgttcgt gaggaggaga tgcgagcacc 4380
cagaacgtct tttgaggctg ggcgggtgtg attgtttact gcctactgga tttttttcta 4440
ttaacattga aaggtaaaat ctgattattt agcatgagaa aaaaaaatcc aactctgctt 4500
ttggtcttgc ttctataaat atatagtgta tacttggtgt agactttgca tatatacaaa 4560
tttgtagtat tttcttgttt tgatgtctaa tctgtatcta taatgtaccc tagtagtcga 4620
acatactttt gattgtacaa ttgtacattt gtatacctgt aatgtaaatg tggagaagtt 4680
tgaatcaaca taaacacgtt ttttggtaag aaaagagaat tagccagccc tgtgcattca 4740
gtgtatattc tcacctttta tggtcgtagc atatagtgtt gtatattgta aattgtaatt 4800
tcaaccagaa gtaaattttt ttcttttgaa ggaataaatg ttctttatac agcctagtta 4860
atgtttaaaa agaaaaaaat agcttggttt tatttgtcat ctagtctcaa gtatagcgag 4920
attctttcta aatgttattc aagattgagt tctcactagt gtttttttaa tcctaaaaaa 4980
gtaatgtttt gattttgtga cagtcaaaag gacgtgcaaa agtctagcct tgcccgagct 5040
ttccttacaa tcagagcccc tctcaccttg taaagtgtga atcgcccttc ccttttgtac 5100
agaagatgaa ctgtattttg cattttgtct acttgtaagt gaatgtaaca tactgtcaat 5160
tttccttgtt tgaatataga attgtaacac tacacggtgt acatttccag agccttgtgt 5220
atatttccaa tgaacttttt tgcaagcaca cttgtaacca tatgtgtata attaacaaac 5280
ctgtgtatgc ttatgcctgg gcaactattt tttgtaactc ttgtgtagat tgtctctaaa 5340
caatgtgtga tctttatttt gaaaaataca gaactttgga atctgaaaaa aaaaaaaaaa 5400
aaaaaaaaaa aaaaaa 5416
<210> 45
<211> 5410
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 45
agtgggccgc catgttgtcg gagtgaaagg taagggggag cgagagcgcc agagagagaa 60
gatcgggggg ctgaaatcca tcttcatcct accgctccgc ccgtgttggt ggaatgagcg 120
ttgcatgtgt cttgaagaga aaagcagtgc tttggcagga ctctttcagc ccccacctga 180
aacatcaccc tcaagaacca gctaatccca acatgcctgt tgttttgaca tctggaacag 240
ggtcgcaagc gcagccacaa ccagctgcaa atcaggctct tgcagctggg actcactcca 300
gccctgtccc aggatctata ggagttgcag gccgttccca ggacgacgct atggtggact 360
acttctttca gaggcagcat ggtgagcagc ttgggggagg aggaagtgga ggaggcggct 420
ataataatag caaacatcga tggcctactg gggataacat tcatgcagaa catcaggtgc 480
gttccatgga tgaactgaat catgattttc aagcacttgc tctggaggga agagcgatgg 540
gagagcagct cttgccaggt aaaaagtttt gggaaacaga tgaatccagc aaagatggac 600
caaaaggaat attcctgggt gatcaatggc gagacagtgc ctggggaaca tcagatcatt 660
cagtttccca gccaatcatg gtgcagagaa gacctggtca gagtttccat gtgaacagtg 720
aggtcaattc tgtactgtcc ccacgatcgg agagtggggg actaggcgtt agcatggtgg 780
agtatgtgtt gagctcatcc ccgggcgatt cctgtctaag aaaaggagga tttggcccaa 840
gggatgcaga cagtgatgaa aacgacaaag gtgaaaagaa gaacaagggt acgtttgatg 900
gagataagct aggagatttg aaggaggagg gtgatgtgat ggacaagacc aatggtttac 960
cagtgcagaa tgggattgat gcagacgtca aagattttag ccgtacccct ggtaattgcc 1020
agaactctgc taatgaagtg gatcttctgg gtccaaacca gaatggttct gagggcttag 1080
cccagctgac cagcaccaat ggtgccaagc ctgtggagga tttctccaac atggagtccc 1140
agagtgtccc cttggacccc atggaacatg tgggcatgga gcctcttcag tttgattatt 1200
caggcacgca ggtacctgtg gactcagcag cagcaactgt gggacttttt gactacaatt 1260
ctcaacaaca gctgttccaa agacctaatg cgcttgctgt ccagcagttg acagctgctc 1320
agcagcagca gtatgcactg gcagctgctc atcagccgca catcggttta gctcccgctg 1380
cgtttgtccc caatccatac atcatcagcg ctgctccccc agggacggac ccctacacag 1440
ctggattggc tgcagcagcg acactaggcc cagctgtggt ccctcaccag tattatggag 1500
ttactccctg gggagtctac cctgccagtc ttttccagca gcaagctgcc gctgccgctg 1560
cagcaactaa ttcagctaat caacagacca ccccacaggc tcagcaagga cagcagcagg 1620
ttctccgtgg aggagccagc caacgtcctt tgaccccaaa ccagaaccag cagggacagc 1680
aaacggatcc ccttgtggca gctgcagcag tgaattctgc ccttgcattt ggacaaggtc 1740
tggcagcagg catgccaggt tatccggtgt tggctcctgc tgcttactat gaccaaactg 1800
gtgcccttgt agtgaatgca ggcgcgagaa atggtcttgg agctcctgtt cgacttgtag 1860
ctcctgcccc agtcatcatt agttcctcag ctgcacaagc agctgttgca gcagccgcag 1920
cttcagcaaa tggagcagct ggtggtcttg ctggaacaac aaatggacca tttcgccctt 1980
taggaacaca gcagcctcag ccccagcccc agcagcagcc caataacaac ctggcatcca 2040
gttctttcta cggcaacaac tctctgaaca gcaattcaca gagcagctcc ctcttctccc 2100
agggctctgc ccagcctgcc aacacatcct tgggattcgg aagtagcagt tctctcggcg 2160
ccaccctggg atccgccctt ggagggtttg gaacagcagt tgcaaactcc aacactggca 2220
gtggctcccg ccgtgactcc ctgactggca gcagtgacct ttataagagg acatcgagca 2280
gcttgacccc cattggacac agtttttata acggccttag cttttcctcc tctcctggac 2340
ccgtgggcat gcctctccct agtcagggac caggacattc acagacacca cctccttccc 2400
tctcttcaca tggatcctct tcaagcttaa acctgggagg actcacgaat ggcagtggaa 2460
gatacatctc tgctgctcca ggcgctgaag ccaagtaccg cagtgcaagc agcgcctcca 2520
gcctcttcag cccgagcagc actcttttct cttcctctcg tttgcgatat ggaatgtctg 2580
atgtcatgcc ttctggcagg agcaggcttt tggaagattt tcgaaacaac cggtacccca 2640
atttacaact gcgggagatt gctggacata taatggaatt ttcccaagac cagcatgggt 2700
ccagattcat tcagctgaaa ctggagcgtg ccacaccagc tgagcgccag cttgtcttca 2760
atgaaatcct ccaggctgcc taccaactca tggtggatgt gtttggtaat tacgtcattc 2820
agaagttctt tgaatttggc agtcttgaac agaagctggc tttggcagaa cggattcgag 2880
gccacgtcct gtcattggca ctacagatgt atggctgccg tgttatccag aaagctcttg 2940
agtttattcc ttcagaccag cagaatgaga tggttcggga actagatggc catgtcttga 3000
agtgtgtgaa agatcagaat ggcaatcacg tggttcagaa atgcattgaa tgtgtacagc 3060
cccagtcttt gcaatttatc atcgatgcgt ttaagggaca ggtatttgcc ttatccacac 3120
atccttatgg ctgccgagtg attcagagaa tcctggagca ctgtctccct gaccagacac 3180
tccctatttt agaggagctt caccagcaca cagagcagct tgtacaggat caatatggaa 3240
attatgtaat ccaacatgta ctggagcacg gtcgtcctga ggataaaagc aaaattgtag 3300
cagaaatccg aggcaatgta cttgtattga gtcagcacaa atttgcaagc aatgttgtgg 3360
agaagtgtgt tactcacgcc tcacgtacgg agcgcgctgt gctcatcgat gaggtgtgca 3420
ccatgaacga cggtccccac agtgccttat acaccatgat gaaggaccag tatgccaact 3480
acgtggtcca gaagatgatt gacgtggcgg agccaggcca gcggaagatc gtcatgcata 3540
agatccggcc ccacatcgca actcttcgta agtacaccta tggcaagcac attctggcca 3600
agctggagaa gtactacatg aagaacggtg ttgacttagg gcccatctgt ggccccccta 3660
atggtatcat ctgaggcagt gtcacccgct gttccctcat tcccgctgac ctcactggcc 3720
cactggcaaa tccaaccagc aaccagaaat gttctagtgt agagtctgag acgggcaagt 3780
ggttgctcca ggattactcc ctcctccaaa aaaggaatca aatccacgag tggaaaagcc 3840
tttgtaaatt taattttatt acacataaca tgtactattt tttttaattg actaattgcc 3900
ctgctgtttt actggtgtat aggatacttg tacataggta accaatgtac atgggaggcc 3960
acatattttg ttcactgttg tatctatatt tcacatgtgg aaactttcag ggtggttggt 4020
ttaacaaaaa aaaaaagctt taaaaaaaaa agaaaaaaag gaaaaggttt ttagctcatt 4080
tgcctggccg gcaagttttg caaatagctc ttccccacct cctcatttta gtaaaaaaca 4140
aacaaaaaca aaaaaacctg agaagtttga attgtagtta aatgacccca aactggcatt 4200
taacactgtt tataaaaaat atatatatat atatatatat atataatgaa aaaggtttca 4260
gagttgctaa agcttcagtt tgtgacatta agtttatgaa attctaaaaa atgccttttt 4320
tggagactat attatgctga agaaggctgt tcgtgaggag gagatgcgag cacccagaac 4380
gtcttttgag gctgggcggg tgtgattgtt tactgcctac tggatttttt tctattaaca 4440
ttgaaaggta aaatctgatt atttagcatg agaaaaaaaa atccaactct gcttttggtc 4500
ttgcttctat aaatatatag tgtatacttg gtgtagactt tgcatatata caaatttgta 4560
gtattttctt gttttgatgt ctaatctgta tctataatgt accctagtag tcgaacatac 4620
ttttgattgt acaattgtac atttgtatac ctgtaatgta aatgtggaga agtttgaatc 4680
aacataaaca cgttttttgg taagaaaaga gaattagcca gccctgtgca ttcagtgtat 4740
attctcacct tttatggtcg tagcatatag tgttgtatat tgtaaattgt aatttcaacc 4800
agaagtaaat ttttttcttt tgaaggaata aatgttcttt atacagccta gttaatgttt 4860
aaaaagaaaa aaatagcttg gttttatttg tcatctagtc tcaagtatag cgagattctt 4920
tctaaatgtt attcaagatt gagttctcac tagtgttttt ttaatcctaa aaaagtaatg 4980
ttttgatttt gtgacagtca aaaggacgtg caaaagtcta gccttgcccg agctttcctt 5040
acaatcagag cccctctcac cttgtaaagt gtgaatcgcc cttccctttt gtacagaaga 5100
tgaactgtat tttgcatttt gtctacttgt aagtgaatgt aacatactgt caattttcct 5160
tgtttgaata tagaattgta acactacacg gtgtacattt ccagagcctt gtgtatattt 5220
ccaatgaact tttttgcaag cacacttgta accatatgtg tataattaac aaacctgtgt 5280
atgcttatgc ctgggcaact attttttgta actcttgtgt agattgtctc taaacaatgt 5340
gtgatcttta ttttgaaaaa tacagaactt tggaatctga aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 5400
aaaaaaaaaa 5410
<210> 46
<211> 1188
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 46
Met Ser Val Ala Cys Val Leu Lys Arg Lys Ala Val Leu Trp Gln Asp
1 5 10 15
Ser Phe Ser Pro His Leu Lys His His Pro Gln Glu Pro Ala Asn Pro
20 25 30
Asn Met Pro Val Val Leu Thr Ser Gly Thr Gly Ser Gln Ala Gln Pro
35 40 45
Gln Pro Ala Ala Asn Gln Ala Leu Ala Ala Gly Thr His Ser Ser Pro
50 55 60
Val Pro Gly Ser Ile Gly Val Ala Gly Arg Ser Gln Asp Asp Ala Met
65 70 75 80
Val Asp Tyr Phe Phe Gln Arg Gln His Gly Glu Gln Leu Gly Gly Gly
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Tyr Asn Asn Ser Lys His Arg Trp Pro Thr
100 105 110
Gly Asp Asn Ile His Ala Glu His Gln Val Arg Ser Met Asp Glu Leu
115 120 125
Asn His Asp Phe Gln Ala Leu Ala Leu Glu Gly Arg Ala Met Gly Glu
130 135 140
Gln Leu Leu Pro Gly Lys Lys Phe Trp Glu Thr Asp Glu Ser Ser Lys
145 150 155 160
Asp Gly Pro Lys Gly Ile Phe Leu Gly Asp Gln Trp Arg Asp Ser Ala
165 170 175
Trp Gly Thr Ser Asp His Ser Val Ser Gln Pro Ile Met Val Gln Arg
180 185 190
Arg Pro Gly Gln Ser Phe His Val Asn Ser Glu Val Asn Ser Val Leu
195 200 205
Ser Pro Arg Ser Glu Ser Gly Gly Leu Gly Val Ser Met Val Glu Tyr
210 215 220
Val Leu Ser Ser Ser Pro Gly Asp Ser Cys Leu Arg Lys Gly Gly Phe
225 230 235 240
Gly Pro Arg Asp Ala Asp Ser Asp Glu Asn Asp Lys Gly Glu Lys Lys
245 250 255
Asn Lys Gly Thr Phe Asp Gly Asp Lys Leu Gly Asp Leu Lys Glu Glu
260 265 270
Gly Asp Val Met Asp Lys Thr Asn Gly Leu Pro Val Gln Asn Gly Ile
275 280 285
Asp Ala Asp Val Lys Asp Phe Ser Arg Thr Pro Gly Asn Cys Gln Asn
290 295 300
Ser Ala Asn Glu Val Asp Leu Leu Gly Pro Asn Gln Asn Gly Ser Glu
305 310 315 320
Gly Leu Ala Gln Leu Thr Ser Thr Asn Gly Ala Lys Pro Val Glu Asp
325 330 335
Phe Ser Asn Met Glu Ser Gln Ser Val Pro Leu Asp Pro Met Glu His
340 345 350
Val Gly Met Glu Pro Leu Gln Phe Asp Tyr Ser Gly Thr Gln Val Pro
355 360 365
Val Asp Ser Ala Ala Ala Thr Val Gly Leu Phe Asp Tyr Asn Ser Gln
370 375 380
Gln Gln Leu Phe Gln Arg Pro Asn Ala Leu Ala Val Gln Gln Leu Thr
385 390 395 400
Ala Ala Gln Gln Gln Gln Tyr Ala Leu Ala Ala Ala His Gln Pro His
405 410 415
Ile Gly Leu Ala Pro Ala Ala Phe Val Pro Asn Pro Tyr Ile Ile Ser
420 425 430
Ala Ala Pro Pro Gly Thr Asp Pro Tyr Thr Ala Gly Leu Ala Ala Ala
435 440 445
Ala Thr Leu Gly Pro Ala Val Val Pro His Gln Tyr Tyr Gly Val Thr
450 455 460
Pro Trp Gly Val Tyr Pro Ala Ser Leu Phe Gln Gln Gln Ala Ala Ala
465 470 475 480
Ala Ala Ala Ala Thr Asn Ser Ala Asn Gln Gln Thr Thr Pro Gln Ala
485 490 495
Gln Gln Gly Gln Gln Gln Val Leu Arg Gly Gly Ala Ser Gln Arg Pro
500 505 510
Leu Thr Pro Asn Gln Asn Gln Gln Gly Gln Gln Thr Asp Pro Leu Val
515 520 525
Ala Ala Ala Ala Val Asn Ser Ala Leu Ala Phe Gly Gln Gly Leu Ala
530 535 540
Ala Gly Met Pro Gly Tyr Pro Val Leu Ala Pro Ala Ala Tyr Tyr Asp
545 550 555 560
Gln Thr Gly Ala Leu Val Val Asn Ala Gly Ala Arg Asn Gly Leu Gly
565 570 575
Ala Pro Val Arg Leu Val Ala Pro Ala Pro Val Ile Ile Ser Ser Ser
580 585 590
Ala Ala Gln Ala Ala Val Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ala Asn Gly Ala
595 600 605
Ala Gly Gly Leu Ala Gly Thr Thr Asn Gly Pro Phe Arg Pro Leu Gly
610 615 620
Thr Gln Gln Pro Gln Pro Gln Pro Gln Gln Gln Pro Asn Asn Asn Leu
625 630 635 640
Ala Ser Ser Ser Phe Tyr Gly Asn Asn Ser Leu Asn Ser Asn Ser Gln
645 650 655
Ser Ser Ser Leu Phe Ser Gln Gly Ser Ala Gln Pro Ala Asn Thr Ser
660 665 670
Leu Gly Phe Gly Ser Ser Ser Ser Leu Gly Ala Thr Leu Gly Ser Ala
675 680 685
Leu Gly Gly Phe Gly Thr Ala Val Ala Asn Ser Asn Thr Gly Ser Gly
690 695 700
Ser Arg Arg Asp Ser Leu Thr Gly Ser Ser Asp Leu Tyr Lys Arg Thr
705 710 715 720
Ser Ser Ser Leu Thr Pro Ile Gly His Ser Phe Tyr Asn Gly Leu Ser
725 730 735
Phe Ser Ser Ser Pro Gly Pro Val Gly Met Pro Leu Pro Ser Gln Gly
740 745 750
Pro Gly His Ser Gln Thr Pro Pro Pro Ser Leu Ser Ser His Gly Ser
755 760 765
Ser Ser Ser Leu Asn Leu Gly Gly Leu Thr Asn Gly Ser Gly Arg Tyr
770 775 780
Ile Ser Ala Ala Pro Gly Ala Glu Ala Lys Tyr Arg Ser Ala Ser Ser
785 790 795 800
Ala Ser Ser Leu Phe Ser Pro Ser Ser Thr Leu Phe Ser Ser Ser Arg
805 810 815
Leu Arg Tyr Gly Met Ser Asp Val Met Pro Ser Gly Arg Ser Arg Leu
820 825 830
Leu Glu Asp Phe Arg Asn Asn Arg Tyr Pro Asn Leu Gln Leu Arg Glu
835 840 845
Ile Ala Gly His Ile Met Glu Phe Ser Gln Asp Gln His Gly Ser Arg
850 855 860
Phe Ile Gln Leu Lys Leu Glu Arg Ala Thr Pro Ala Glu Arg Gln Leu
865 870 875 880
Val Phe Asn Glu Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Gln Leu Met Val Asp Val
885 890 895
Phe Gly Asn Tyr Val Ile Gln Lys Phe Phe Glu Phe Gly Ser Leu Glu
900 905 910
Gln Lys Leu Ala Leu Ala Glu Arg Ile Arg Gly His Val Leu Ser Leu
915 920 925
Ala Leu Gln Met Tyr Gly Cys Arg Val Ile Gln Lys Ala Leu Glu Phe
930 935 940
Ile Pro Ser Asp Gln Gln Val Ile Asn Glu Met Val Arg Glu Leu Asp
945 950 955 960
Gly His Val Leu Lys Cys Val Lys Asp Gln Asn Gly Asn His Val Val
965 970 975
Gln Lys Cys Ile Glu Cys Val Gln Pro Gln Ser Leu Gln Phe Ile Ile
980 985 990
Asp Ala Phe Lys Gly Gln Val Phe Ala Leu Ser Thr His Pro Tyr Gly
995 1000 1005
Cys Arg Val Ile Gln Arg Ile Leu Glu His Cys Leu Pro Asp Gln
1010 1015 1020
Thr Leu Pro Ile Leu Glu Glu Leu His Gln His Thr Glu Gln Leu
1025 1030 1035
Val Gln Asp Gln Tyr Gly Asn Tyr Val Ile Gln His Val Leu Glu
1040 1045 1050
His Gly Arg Pro Glu Asp Lys Ser Lys Ile Val Ala Glu Ile Arg
1055 1060 1065
Gly Asn Val Leu Val Leu Ser Gln His Lys Phe Ala Ser Asn Val
1070 1075 1080
Val Glu Lys Cys Val Thr His Ala Ser Arg Thr Glu Arg Ala Val
1085 1090 1095
Leu Ile Asp Glu Val Cys Thr Met Asn Asp Gly Pro His Ser Ala
1100 1105 1110
Leu Tyr Thr Met Met Lys Asp Gln Tyr Ala Asn Tyr Val Val Gln
1115 1120 1125
Lys Met Ile Asp Val Ala Glu Pro Gly Gln Arg Lys Ile Val Met
1130 1135 1140
His Lys Ile Arg Pro His Ile Ala Thr Leu Arg Lys Tyr Thr Tyr
1145 1150 1155
Gly Lys His Ile Leu Ala Lys Leu Glu Lys Tyr Tyr Met Lys Asn
1160 1165 1170
Gly Val Asp Leu Gly Pro Ile Cys Gly Pro Pro Asn Gly Ile Ile
1175 1180 1185
<210> 47
<211> 1186
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 47
Met Ser Val Ala Cys Val Leu Lys Arg Lys Ala Val Leu Trp Gln Asp
1 5 10 15
Ser Phe Ser Pro His Leu Lys His His Pro Gln Glu Pro Ala Asn Pro
20 25 30
Asn Met Pro Val Val Leu Thr Ser Gly Thr Gly Ser Gln Ala Gln Pro
35 40 45
Gln Pro Ala Ala Asn Gln Ala Leu Ala Ala Gly Thr His Ser Ser Pro
50 55 60
Val Pro Gly Ser Ile Gly Val Ala Gly Arg Ser Gln Asp Asp Ala Met
65 70 75 80
Val Asp Tyr Phe Phe Gln Arg Gln His Gly Glu Gln Leu Gly Gly Gly
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Tyr Asn Asn Ser Lys His Arg Trp Pro Thr
100 105 110
Gly Asp Asn Ile His Ala Glu His Gln Val Arg Ser Met Asp Glu Leu
115 120 125
Asn His Asp Phe Gln Ala Leu Ala Leu Glu Gly Arg Ala Met Gly Glu
130 135 140
Gln Leu Leu Pro Gly Lys Lys Phe Trp Glu Thr Asp Glu Ser Ser Lys
145 150 155 160
Asp Gly Pro Lys Gly Ile Phe Leu Gly Asp Gln Trp Arg Asp Ser Ala
165 170 175
Trp Gly Thr Ser Asp His Ser Val Ser Gln Pro Ile Met Val Gln Arg
180 185 190
Arg Pro Gly Gln Ser Phe His Val Asn Ser Glu Val Asn Ser Val Leu
195 200 205
Ser Pro Arg Ser Glu Ser Gly Gly Leu Gly Val Ser Met Val Glu Tyr
210 215 220
Val Leu Ser Ser Ser Pro Gly Asp Ser Cys Leu Arg Lys Gly Gly Phe
225 230 235 240
Gly Pro Arg Asp Ala Asp Ser Asp Glu Asn Asp Lys Gly Glu Lys Lys
245 250 255
Asn Lys Gly Thr Phe Asp Gly Asp Lys Leu Gly Asp Leu Lys Glu Glu
260 265 270
Gly Asp Val Met Asp Lys Thr Asn Gly Leu Pro Val Gln Asn Gly Ile
275 280 285
Asp Ala Asp Val Lys Asp Phe Ser Arg Thr Pro Gly Asn Cys Gln Asn
290 295 300
Ser Ala Asn Glu Val Asp Leu Leu Gly Pro Asn Gln Asn Gly Ser Glu
305 310 315 320
Gly Leu Ala Gln Leu Thr Ser Thr Asn Gly Ala Lys Pro Val Glu Asp
325 330 335
Phe Ser Asn Met Glu Ser Gln Ser Val Pro Leu Asp Pro Met Glu His
340 345 350
Val Gly Met Glu Pro Leu Gln Phe Asp Tyr Ser Gly Thr Gln Val Pro
355 360 365
Val Asp Ser Ala Ala Ala Thr Val Gly Leu Phe Asp Tyr Asn Ser Gln
370 375 380
Gln Gln Leu Phe Gln Arg Pro Asn Ala Leu Ala Val Gln Gln Leu Thr
385 390 395 400
Ala Ala Gln Gln Gln Gln Tyr Ala Leu Ala Ala Ala His Gln Pro His
405 410 415
Ile Gly Leu Ala Pro Ala Ala Phe Val Pro Asn Pro Tyr Ile Ile Ser
420 425 430
Ala Ala Pro Pro Gly Thr Asp Pro Tyr Thr Ala Gly Leu Ala Ala Ala
435 440 445
Ala Thr Leu Gly Pro Ala Val Val Pro His Gln Tyr Tyr Gly Val Thr
450 455 460
Pro Trp Gly Val Tyr Pro Ala Ser Leu Phe Gln Gln Gln Ala Ala Ala
465 470 475 480
Ala Ala Ala Ala Thr Asn Ser Ala Asn Gln Gln Thr Thr Pro Gln Ala
485 490 495
Gln Gln Gly Gln Gln Gln Val Leu Arg Gly Gly Ala Ser Gln Arg Pro
500 505 510
Leu Thr Pro Asn Gln Asn Gln Gln Gly Gln Gln Thr Asp Pro Leu Val
515 520 525
Ala Ala Ala Ala Val Asn Ser Ala Leu Ala Phe Gly Gln Gly Leu Ala
530 535 540
Ala Gly Met Pro Gly Tyr Pro Val Leu Ala Pro Ala Ala Tyr Tyr Asp
545 550 555 560
Gln Thr Gly Ala Leu Val Val Asn Ala Gly Ala Arg Asn Gly Leu Gly
565 570 575
Ala Pro Val Arg Leu Val Ala Pro Ala Pro Val Ile Ile Ser Ser Ser
580 585 590
Ala Ala Gln Ala Ala Val Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ala Asn Gly Ala
595 600 605
Ala Gly Gly Leu Ala Gly Thr Thr Asn Gly Pro Phe Arg Pro Leu Gly
610 615 620
Thr Gln Gln Pro Gln Pro Gln Pro Gln Gln Gln Pro Asn Asn Asn Leu
625 630 635 640
Ala Ser Ser Ser Phe Tyr Gly Asn Asn Ser Leu Asn Ser Asn Ser Gln
645 650 655
Ser Ser Ser Leu Phe Ser Gln Gly Ser Ala Gln Pro Ala Asn Thr Ser
660 665 670
Leu Gly Phe Gly Ser Ser Ser Ser Leu Gly Ala Thr Leu Gly Ser Ala
675 680 685
Leu Gly Gly Phe Gly Thr Ala Val Ala Asn Ser Asn Thr Gly Ser Gly
690 695 700
Ser Arg Arg Asp Ser Leu Thr Gly Ser Ser Asp Leu Tyr Lys Arg Thr
705 710 715 720
Ser Ser Ser Leu Thr Pro Ile Gly His Ser Phe Tyr Asn Gly Leu Ser
725 730 735
Phe Ser Ser Ser Pro Gly Pro Val Gly Met Pro Leu Pro Ser Gln Gly
740 745 750
Pro Gly His Ser Gln Thr Pro Pro Pro Ser Leu Ser Ser His Gly Ser
755 760 765
Ser Ser Ser Leu Asn Leu Gly Gly Leu Thr Asn Gly Ser Gly Arg Tyr
770 775 780
Ile Ser Ala Ala Pro Gly Ala Glu Ala Lys Tyr Arg Ser Ala Ser Ser
785 790 795 800
Ala Ser Ser Leu Phe Ser Pro Ser Ser Thr Leu Phe Ser Ser Ser Arg
805 810 815
Leu Arg Tyr Gly Met Ser Asp Val Met Pro Ser Gly Arg Ser Arg Leu
820 825 830
Leu Glu Asp Phe Arg Asn Asn Arg Tyr Pro Asn Leu Gln Leu Arg Glu
835 840 845
Ile Ala Gly His Ile Met Glu Phe Ser Gln Asp Gln His Gly Ser Arg
850 855 860
Phe Ile Gln Leu Lys Leu Glu Arg Ala Thr Pro Ala Glu Arg Gln Leu
865 870 875 880
Val Phe Asn Glu Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Gln Leu Met Val Asp Val
885 890 895
Phe Gly Asn Tyr Val Ile Gln Lys Phe Phe Glu Phe Gly Ser Leu Glu
900 905 910
Gln Lys Leu Ala Leu Ala Glu Arg Ile Arg Gly His Val Leu Ser Leu
915 920 925
Ala Leu Gln Met Tyr Gly Cys Arg Val Ile Gln Lys Ala Leu Glu Phe
930 935 940
Ile Pro Ser Asp Gln Gln Asn Glu Met Val Arg Glu Leu Asp Gly His
945 950 955 960
Val Leu Lys Cys Val Lys Asp Gln Asn Gly Asn His Val Val Gln Lys
965 970 975
Cys Ile Glu Cys Val Gln Pro Gln Ser Leu Gln Phe Ile Ile Asp Ala
980 985 990
Phe Lys Gly Gln Val Phe Ala Leu Ser Thr His Pro Tyr Gly Cys Arg
995 1000 1005
Val Ile Gln Arg Ile Leu Glu His Cys Leu Pro Asp Gln Thr Leu
1010 1015 1020
Pro Ile Leu Glu Glu Leu His Gln His Thr Glu Gln Leu Val Gln
1025 1030 1035
Asp Gln Tyr Gly Asn Tyr Val Ile Gln His Val Leu Glu His Gly
1040 1045 1050
Arg Pro Glu Asp Lys Ser Lys Ile Val Ala Glu Ile Arg Gly Asn
1055 1060 1065
Val Leu Val Leu Ser Gln His Lys Phe Ala Ser Asn Val Val Glu
1070 1075 1080
Lys Cys Val Thr His Ala Ser Arg Thr Glu Arg Ala Val Leu Ile
1085 1090 1095
Asp Glu Val Cys Thr Met Asn Asp Gly Pro His Ser Ala Leu Tyr
1100 1105 1110
Thr Met Met Lys Asp Gln Tyr Ala Asn Tyr Val Val Gln Lys Met
1115 1120 1125
Ile Asp Val Ala Glu Pro Gly Gln Arg Lys Ile Val Met His Lys
1130 1135 1140
Ile Arg Pro His Ile Ala Thr Leu Arg Lys Tyr Thr Tyr Gly Lys
1145 1150 1155
His Ile Leu Ala Lys Leu Glu Lys Tyr Tyr Met Lys Asn Gly Val
1160 1165 1170
Asp Leu Gly Pro Ile Cys Gly Pro Pro Asn Gly Ile Ile
1175 1180 1185
<210> 48
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PUM1_прямой праймер
<400> 48
gccagcttgt cttcaatgaa at 22
<210> 49
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> PUM1_обратный праймер
<400> 49
caaagccagc ttctgttcaa g 21
<210> 50
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд PUM1
<400> 50
atccaccatg agttggtagg cagc 24
<210> 51
<211> 1921
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 51
ggcggaagtg acattatcaa cgcgcgccag gggttcagtg aggtcgggca ggttcgctgt 60
ggcgggcgcc tgggccgccg gctgtttaac ttcgcttccg ctggcccata gtgatctttg 120
cagtgaccca gcatcactgt ttcttggcgt gtgaagataa cccaaggaat tgaggaagtt 180
gctgagaaga gtgtgctgga gatgctctag gaaaaaattg aatagtgaga cgagttccag 240
cgcaagggtt tctggtttgc caagaagaaa gtgaacatca tggatcagaa caacagcctg 300
ccaccttacg ctcagggctt ggcctcccct cagggtgcca tgactcccgg aatccctatc 360
tttagtccaa tgatgcctta tggcactgga ctgaccccac agcctattca gaacaccaat 420
agtctgtcta ttttggaaga gcaacaaagg cagcagcagc aacaacaaca gcagcagcag 480
cagcagcagc agcaacagca acagcagcag cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag 540
cagcagcagc agcagcagca acaggcagtg gcagctgcag ccgttcagca gtcaacgtcc 600
cagcaggcaa cacagggaac ctcaggccag gcaccacagc tcttccactc acagactctc 660
acaactgcac ccttgccggg caccactcca ctgtatccct cccccatgac tcccatgacc 720
cccatcactc ctgccacgcc agcttcggag agttctggga ttgtaccgca gctgcaaaat 780
attgtatcca cagtgaatct tggttgtaaa cttgacctaa agaccattgc acttcgtgcc 840
cgaaacgccg aatataatcc caagcggttt gctgcggtaa tcatgaggat aagagagcca 900
cgaaccacgg cactgatttt cagttctggg aaaatggtgt gcacaggagc caagagtgaa 960
gaacagtcca gactggcagc aagaaaatat gctagagttg tacagaagtt gggttttcca 1020
gctaagttct tggacttcaa gattcagaat atggtgggga gctgtgatgt gaagtttcct 1080
ataaggttag aaggccttgt gctcacccac caacaattta gtagttatga gccagagtta 1140
tttcctggtt taatctacag aatgatcaaa cccagaattg ttctccttat ttttgtttct 1200
ggaaaagttg tattaacagg tgctaaagtc agagcagaaa tttatgaagc atttgaaaac 1260
atctacccta ttctaaaggg attcaggaag acgacgtaat ggctctcatg tacccttgcc 1320
tcccccaccc ccttcttttt ttttttttaa acaaatcagt ttgttttggt acctttaaat 1380
ggtggtgttg tgagaagatg gatgttgagt tgcagggtgt ggcaccaggt gatgcccttc 1440
tgtaagtgcc caccgcggga tgccgggaag gggcattatt tgtgcactga gaacaccgcg 1500
cagcgtgact gtgagttgct cataccgtgc tgctatctgg gcagcgctgc ccatttattt 1560
atatgtagat tttaaacact gctgttgaca agttggtttg agggagaaaa ctttaagtgt 1620
taaagccacc tctataattg attggacttt ttaattttaa tgtttttccc catgaaccac 1680
agtttttata tttctaccag aaaagtaaaa atctttttta aaagtgttgt ttttctaatt 1740
tataactcct aggggttatt tctgtgccag acacattcca cctctccagt attgcaggac 1800
agaatatatg tgttaatgaa aatgaatggc tgtacatatt tttttctttc ttcagagtac 1860
tctgtacaat aaatgcagtt tataaaagtg ttagattgtt gttaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920
a 1921
<210> 52
<211> 339
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 52
Met Asp Gln Asn Asn Ser Leu Pro Pro Tyr Ala Gln Gly Leu Ala Ser
1 5 10 15
Pro Gln Gly Ala Met Thr Pro Gly Ile Pro Ile Phe Ser Pro Met Met
20 25 30
Pro Tyr Gly Thr Gly Leu Thr Pro Gln Pro Ile Gln Asn Thr Asn Ser
35 40 45
Leu Ser Ile Leu Glu Glu Gln Gln Arg Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln
50 55 60
Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln
65 70 75 80
Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Ala
85 90 95
Val Ala Ala Ala Ala Val Gln Gln Ser Thr Ser Gln Gln Ala Thr Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Gly Gln Ala Pro Gln Leu Phe His Ser Gln Thr Leu Thr
115 120 125
Thr Ala Pro Leu Pro Gly Thr Thr Pro Leu Tyr Pro Ser Pro Met Thr
130 135 140
Pro Met Thr Pro Ile Thr Pro Ala Thr Pro Ala Ser Glu Ser Ser Gly
145 150 155 160
Ile Val Pro Gln Leu Gln Asn Ile Val Ser Thr Val Asn Leu Gly Cys
165 170 175
Lys Leu Asp Leu Lys Thr Ile Ala Leu Arg Ala Arg Asn Ala Glu Tyr
180 185 190
Asn Pro Lys Arg Phe Ala Ala Val Ile Met Arg Ile Arg Glu Pro Arg
195 200 205
Thr Thr Ala Leu Ile Phe Ser Ser Gly Lys Met Val Cys Thr Gly Ala
210 215 220
Lys Ser Glu Glu Gln Ser Arg Leu Ala Ala Arg Lys Tyr Ala Arg Val
225 230 235 240
Val Gln Lys Leu Gly Phe Pro Ala Lys Phe Leu Asp Phe Lys Ile Gln
245 250 255
Asn Met Val Gly Ser Cys Asp Val Lys Phe Pro Ile Arg Leu Glu Gly
260 265 270
Leu Val Leu Thr His Gln Gln Phe Ser Ser Tyr Glu Pro Glu Leu Phe
275 280 285
Pro Gly Leu Ile Tyr Arg Met Ile Lys Pro Arg Ile Val Leu Leu Ile
290 295 300
Phe Val Ser Gly Lys Val Val Leu Thr Gly Ala Lys Val Arg Ala Glu
305 310 315 320
Ile Tyr Glu Ala Phe Glu Asn Ile Tyr Pro Ile Leu Lys Gly Phe Arg
325 330 335
Lys Thr Thr
<210> 53
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> TBP_прямой праймер
<400> 53
gccaagaaga aagtgaacat cat 23
<210> 54
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> TBP_обратный праймер
<400> 54
atagggattc cgggagtcat 20
<210> 55
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> TBP probe
<400> 55
tcagaacaac agcctgccac ctta 24
<210> 56
<211> 1852
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 56
accgccgaga ccgcgtccgc cccgcgagca cagagcctcg cctttgccga tccgccgccc 60
gtccacaccc gccgccagct caccatggat gatgatatcg ccgcgctcgt cgtcgacaac 120
ggctccggca tgtgcaaggc cggcttcgcg ggcgacgatg ccccccgggc cgtcttcccc 180
tccatcgtgg ggcgccccag gcaccagggc gtgatggtgg gcatgggtca gaaggattcc 240
tatgtgggcg acgaggccca gagcaagaga ggcatcctca ccctgaagta ccccatcgag 300
cacggcatcg tcaccaactg ggacgacatg gagaaaatct ggcaccacac cttctacaat 360
gagctgcgtg tggctcccga ggagcacccc gtgctgctga ccgaggcccc cctgaacccc 420
aaggccaacc gcgagaagat gacccagatc atgtttgaga ccttcaacac cccagccatg 480
tacgttgcta tccaggctgt gctatccctg tacgcctctg gccgtaccac tggcatcgtg 540
atggactccg gtgacggggt cacccacact gtgcccatct acgaggggta tgccctcccc 600
catgccatcc tgcgtctgga cctggctggc cgggacctga ctgactacct catgaagatc 660
ctcaccgagc gcggctacag cttcaccacc acggccgagc gggaaatcgt gcgtgacatt 720
aaggagaagc tgtgctacgt cgccctggac ttcgagcaag agatggccac ggctgcttcc 780
agctcctccc tggagaagag ctacgagctg cctgacggcc aggtcatcac cattggcaat 840
gagcggttcc gctgccctga ggcactcttc cagccttcct tcctgggcat ggagtcctgt 900
ggcatccacg aaactacctt caactccatc atgaagtgtg acgtggacat ccgcaaagac 960
ctgtacgcca acacagtgct gtctggcggc accaccatgt accctggcat tgccgacagg 1020
atgcagaagg agatcactgc cctggcaccc agcacaatga agatcaagat cattgctcct 1080
cctgagcgca agtactccgt gtggatcggc ggctccatcc tggcctcgct gtccaccttc 1140
cagcagatgt ggatcagcaa gcaggagtat gacgagtccg gcccctccat cgtccaccgc 1200
aaatgcttct aggcggacta tgacttagtt gcgttacacc ctttcttgac aaaacctaac 1260
ttgcgcagaa aacaagatga gattggcatg gctttatttg ttttttttgt tttgttttgg 1320
tttttttttt ttttttggct tgactcagga tttaaaaact ggaacggtga aggtgacagc 1380
agtcggttgg agcgagcatc ccccaaagtt cacaatgtgg ccgaggactt tgattgcaca 1440
ttgttgtttt tttaatagtc attccaaata tgagatgcgt tgttacagga agtcccttgc 1500
catcctaaaa gccaccccac ttctctctaa ggagaatggc ccagtcctct cccaagtcca 1560
cacaggggag gtgatagcat tgctttcgtg taaattatgt aatgcaaaat ttttttaatc 1620
ttcgccttaa tactttttta ttttgtttta ttttgaatga tgagccttcg tgccccccct 1680
tccccctttt ttgtccccca acttgagatg tatgaaggct tttggtctcc ctgggagtgg 1740
gtggaggcag ccagggctta cctgtacact gacttgagac cagttgaata aaagtgcaca 1800
ccttaaaaat gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 1852
<210> 57
<211> 375
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 57
Met Asp Asp Asp Ile Ala Ala Leu Val Val Asp Asn Gly Ser Gly Met
1 5 10 15
Cys Lys Ala Gly Phe Ala Gly Asp Asp Ala Pro Arg Ala Val Phe Pro
20 25 30
Ser Ile Val Gly Arg Pro Arg His Gln Gly Val Met Val Gly Met Gly
35 40 45
Gln Lys Asp Ser Tyr Val Gly Asp Glu Ala Gln Ser Lys Arg Gly Ile
50 55 60
Leu Thr Leu Lys Tyr Pro Ile Glu His Gly Ile Val Thr Asn Trp Asp
65 70 75 80
Asp Met Glu Lys Ile Trp His His Thr Phe Tyr Asn Glu Leu Arg Val
85 90 95
Ala Pro Glu Glu His Pro Val Leu Leu Thr Glu Ala Pro Leu Asn Pro
100 105 110
Lys Ala Asn Arg Glu Lys Met Thr Gln Ile Met Phe Glu Thr Phe Asn
115 120 125
Thr Pro Ala Met Tyr Val Ala Ile Gln Ala Val Leu Ser Leu Tyr Ala
130 135 140
Ser Gly Arg Thr Thr Gly Ile Val Met Asp Ser Gly Asp Gly Val Thr
145 150 155 160
His Thr Val Pro Ile Tyr Glu Gly Tyr Ala Leu Pro His Ala Ile Leu
165 170 175
Arg Leu Asp Leu Ala Gly Arg Asp Leu Thr Asp Tyr Leu Met Lys Ile
180 185 190
Leu Thr Glu Arg Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Thr Ala Glu Arg Glu Ile
195 200 205
Val Arg Asp Ile Lys Glu Lys Leu Cys Tyr Val Ala Leu Asp Phe Glu
210 215 220
Gln Glu Met Ala Thr Ala Ala Ser Ser Ser Ser Leu Glu Lys Ser Tyr
225 230 235 240
Glu Leu Pro Asp Gly Gln Val Ile Thr Ile Gly Asn Glu Arg Phe Arg
245 250 255
Cys Pro Glu Ala Leu Phe Gln Pro Ser Phe Leu Gly Met Glu Ser Cys
260 265 270
Gly Ile His Glu Thr Thr Phe Asn Ser Ile Met Lys Cys Asp Val Asp
275 280 285
Ile Arg Lys Asp Leu Tyr Ala Asn Thr Val Leu Ser Gly Gly Thr Thr
290 295 300
Met Tyr Pro Gly Ile Ala Asp Arg Met Gln Lys Glu Ile Thr Ala Leu
305 310 315 320
Ala Pro Ser Thr Met Lys Ile Lys Ile Ile Ala Pro Pro Glu Arg Lys
325 330 335
Tyr Ser Val Trp Ile Gly Gly Ser Ile Leu Ala Ser Leu Ser Thr Phe
340 345 350
Gln Gln Met Trp Ile Ser Lys Gln Glu Tyr Asp Glu Ser Gly Pro Ser
355 360 365
Ile Val His Arg Lys Cys Phe
370 375
<210> 58
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ACTB_прямой праймер
<400> 58
ccaaccgcga gaagatga 18
<210> 59
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ACTB_обратный праймер
<400> 59
ccagaggcgt acagggatag 20
<210> 60
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд ACTB
<400> 60
ccatgtacgt tgctatccag gct 23
<210> 61
<211> 1229
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 61
gtctgacggg cgatggcgca gccaatagac aggagcgcta tccgcggttt ctgattggct 60
actttgttcg cattataaaa ggcacgcgcg ggcgcgaggc ccttctctcg ccaggcgtcc 120
tcgtggaagt gacatcgtct ttaaaccctg cgtggcaatc cctgacgcac cgccgtgatg 180
cccagggaag acagggcgac ctggaagtcc aactacttcc ttaagatcat ccaactattg 240
gatgattatc cgaaatgttt cattgtggga gcagacaatg tgggctccaa gcagatgcag 300
cagatccgca tgtcccttcg cgggaaggct gtggtgctga tgggcaagaa caccatgatg 360
cgcaaggcca tccgagggca cctggaaaac aacccagctc tggagaaact gctgcctcat 420
atccggggga atgtgggctt tgtgttcacc aaggaggacc tcactgagat cagggacatg 480
ttgctggcca ataaggtgcc agctgctgcc cgtgctggtg ccattgcccc atgtgaagtc 540
actgtgccag cccagaacac tggtctcggg cccgagaaga cctccttttt ccaggcttta 600
ggtatcacca ctaaaatctc caggggcacc attgaaatcc tgagtgatgt gcagctgatc 660
aagactggag acaaagtggg agccagcgaa gccacgctgc tgaacatgct caacatctcc 720
cccttctcct ttgggctggt catccagcag gtgttcgaca atggcagcat ctacaaccct 780
gaagtgcttg atatcacaga ggaaactctg cattctcgct tcctggaggg tgtccgcaat 840
gttgccagtg tctgtctgca gattggctac ccaactgttg catcagtacc ccattctatc 900
atcaacgggt acaaacgagt cctggccttg tctgtggaga cggattacac cttcccactt 960
gctgaaaagg tcaaggcctt cttggctgat ccatctgcct ttgtggctgc tgcccctgtg 1020
gctgctgcca ccacagctgc tcctgctgct gctgcagccc cagctaaggt tgaagccaag 1080
gaagagtcgg aggagtcgga cgaggatatg ggatttggtc tctttgacta atcaccaaaa 1140
agcaaccaac ttagccagtt ttatttgcaa aacaaggaaa taaaggctta cttctttaaa 1200
aagtaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 1229
<210> 62
<211> 317
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 62
Met Pro Arg Glu Asp Arg Ala Thr Trp Lys Ser Asn Tyr Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ile Gln Leu Leu Asp Asp Tyr Pro Lys Cys Phe Ile Val Gly Ala
20 25 30
Asp Asn Val Gly Ser Lys Gln Met Gln Gln Ile Arg Met Ser Leu Arg
35 40 45
Gly Lys Ala Val Val Leu Met Gly Lys Asn Thr Met Met Arg Lys Ala
50 55 60
Ile Arg Gly His Leu Glu Asn Asn Pro Ala Leu Glu Lys Leu Leu Pro
65 70 75 80
His Ile Arg Gly Asn Val Gly Phe Val Phe Thr Lys Glu Asp Leu Thr
85 90 95
Glu Ile Arg Asp Met Leu Leu Ala Asn Lys Val Pro Ala Ala Ala Arg
100 105 110
Ala Gly Ala Ile Ala Pro Cys Glu Val Thr Val Pro Ala Gln Asn Thr
115 120 125
Gly Leu Gly Pro Glu Lys Thr Ser Phe Phe Gln Ala Leu Gly Ile Thr
130 135 140
Thr Lys Ile Ser Arg Gly Thr Ile Glu Ile Leu Ser Asp Val Gln Leu
145 150 155 160
Ile Lys Thr Gly Asp Lys Val Gly Ala Ser Glu Ala Thr Leu Leu Asn
165 170 175
Met Leu Asn Ile Ser Pro Phe Ser Phe Gly Leu Val Ile Gln Gln Val
180 185 190
Phe Asp Asn Gly Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Val Leu Asp Ile Thr Glu
195 200 205
Glu Thr Leu His Ser Arg Phe Leu Glu Gly Val Arg Asn Val Ala Ser
210 215 220
Val Cys Leu Gln Ile Gly Tyr Pro Thr Val Ala Ser Val Pro His Ser
225 230 235 240
Ile Ile Asn Gly Tyr Lys Arg Val Leu Ala Leu Ser Val Glu Thr Asp
245 250 255
Tyr Thr Phe Pro Leu Ala Glu Lys Val Lys Ala Phe Leu Ala Asp Pro
260 265 270
Ser Ala Phe Val Ala Ala Ala Pro Val Ala Ala Ala Thr Thr Ala Ala
275 280 285
Pro Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ala Lys Val Glu Ala Lys Glu Glu Ser
290 295 300
Glu Glu Ser Asp Glu Asp Met Gly Phe Gly Leu Phe Asp
305 310 315
<210> 63
<211> 317
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 63
Met Pro Arg Glu Asp Arg Ala Thr Trp Lys Ser Asn Tyr Phe Leu Lys
1 5 10 15
Ile Ile Gln Leu Leu Asp Asp Tyr Pro Lys Cys Phe Ile Val Gly Ala
20 25 30
Asp Asn Val Gly Ser Lys Gln Met Gln Gln Ile Arg Met Ser Leu Arg
35 40 45
Gly Lys Ala Val Val Leu Met Gly Lys Asn Thr Met Met Arg Lys Ala
50 55 60
Ile Arg Gly His Leu Glu Asn Asn Pro Ala Leu Glu Lys Leu Leu Pro
65 70 75 80
His Ile Arg Gly Asn Val Gly Phe Val Phe Thr Lys Glu Asp Leu Thr
85 90 95
Glu Ile Arg Asp Met Leu Leu Ala Asn Lys Val Pro Ala Ala Ala Arg
100 105 110
Ala Gly Ala Ile Ala Pro Cys Glu Val Thr Val Pro Ala Gln Asn Thr
115 120 125
Gly Leu Gly Pro Glu Lys Thr Ser Phe Phe Gln Ala Leu Gly Ile Thr
130 135 140
Thr Lys Ile Ser Arg Gly Thr Ile Glu Ile Leu Ser Asp Val Gln Leu
145 150 155 160
Ile Lys Thr Gly Asp Lys Val Gly Ala Ser Glu Ala Thr Leu Leu Asn
165 170 175
Met Leu Asn Ile Ser Pro Phe Ser Phe Gly Leu Val Ile Gln Gln Val
180 185 190
Phe Asp Asn Gly Ser Ile Tyr Asn Pro Glu Val Leu Asp Ile Thr Glu
195 200 205
Glu Thr Leu His Ser Arg Phe Leu Glu Gly Val Arg Asn Val Ala Ser
210 215 220
Val Cys Leu Gln Ile Gly Tyr Pro Thr Val Ala Ser Val Pro His Ser
225 230 235 240
Ile Ile Asn Gly Tyr Lys Arg Val Leu Ala Leu Ser Val Glu Thr Asp
245 250 255
Tyr Thr Phe Pro Leu Ala Glu Lys Val Lys Ala Phe Leu Ala Asp Pro
260 265 270
Ser Ala Phe Val Ala Ala Ala Pro Val Ala Ala Ala Thr Thr Ala Ala
275 280 285
Pro Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ala Lys Val Glu Ala Lys Glu Glu Ser
290 295 300
Glu Glu Ser Asp Glu Asp Met Gly Phe Gly Leu Phe Asp
305 310 315
<210> 64
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> RPLP0_прямой праймер
<400> 64
taaaccctgc gtggcaat 18
<210> 65
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> RPLP0_обратный праймер
<400> 65
acatttcgga taatcatcca atagttg 27
<210> 66
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд RPLP0
<400> 66
aagtagttgg acttccaggt cgcc 24
<210> 67
<211> 2458
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 67
cagaagaagg cagcgcccaa ggcgcatgcg cagcggtcac tcccgctgta tattaaggcg 60
ccggcgatcg cggcctgagg ctgctcccgg acaagggcaa cgagcgtttc gtttggactt 120
ctcgacttga gtgcccgcct ccttcgccgc cgcctctgca gtcctcagcg cagttatgcc 180
cagttcttcc cgctgtgggg acacgaccac ggaggaatcc ttgcttcagg gactcgggac 240
cctgctggac cccttcctcg ggtttagggg atgtggggac caggagaaag tcaggatccc 300
taagagtctt ccctgcctgg atggatgagt ggcttcttct ccacctagat tctttccaca 360
ggagccagca tacttcctga acatggagag tgttgttcgc cgctgcccat tcttatcccg 420
agtcccccag gcctttctgc agaaagcagg caaatctctg ttgttctatg cccaaaactg 480
ccccaagatg atggaagttg gggccaagcc agcccctcgg gcattgtcca ctgcagcagt 540
acactaccaa cagatcaaag aaacccctcc ggccagtgag aaagacaaaa ctgctaaggc 600
caaggtccaa cagactcctg atggatccca gcagagtcca gatggcacac agcttccgtc 660
tggacacccc ttgcctgcca caagccaggg cactgcaagc aaatgccctt tcctggcagc 720
acagatgaat cagagaggca gcagtgtctt ctgcaaagcc agtcttgagc ttcaggagga 780
tgtgcaggaa atgaatgccg tgaggaaaga ggttgctgaa acctcagcag gccccagtgt 840
ggttagtgtg aaaaccgatg gaggggatcc cagtggactg ctgaagaact tccaggacat 900
catgcaaaag caaagaccag aaagagtgtc tcatcttctt caagataact tgccaaaatc 960
tgtttccact tttcagtatg atcgtttctt tgagaaaaaa attgatgaga aaaagaatga 1020
ccacacctat cgagttttta aaactgtgaa ccggcgagca cacatcttcc ccatggcaga 1080
tgactattca gactccctca tcaccaaaaa gcaagtgtca gtctggtgca gtaatgacta 1140
cctaggaatg agtcgccacc cacgggtgtg tggggcagtt atggacactt tgaaacaaca 1200
tggtgctggg gcaggtggta ctagaaatat ttctggaact agtaaattcc atgtggactt 1260
agagcgggag ctggcagacc tccatgggaa agatgccgca ctcttgtttt cctcgtgctt 1320
tgtggccaat gactcaaccc tcttcaccct ggctaagatg atgccaggct gtgagattta 1380
ctctgattct gggaaccatg cctccatgat ccaagggatt cgaaacagcc gagtgccaaa 1440
gtacatcttc cgccacaatg atgtcagcca cctcagagaa ctgctgcaaa gatctgaccc 1500
ctcagtcccc aagattgtgg catttgaaac tgtccattca atggatgggg cggtgtgccc 1560
actggaagag ctgtgtgatg tggcccatga gtttggagca atcaccttcg tggatgaggt 1620
ccacgcagtg gggctttatg gggctcgagg cggagggatt ggggatcggg atggagtcat 1680
gccaaaaatg gacatcattt ctggaacact tggcaaagcc tttggttgtg ttggagggta 1740
catcgccagc acgagttctc tgattgacac cgtacggtcc tatgctgctg gcttcatctt 1800
caccacctct ctgccaccca tgctgctggc tggagccctg gagtctgtgc ggatcctgaa 1860
gagcgctgag ggacgggtgc ttcgccgcca gcaccagcgc aacgtcaaac tcatgagaca 1920
gatgctaatg gatgccggcc tccctgttgt ccactgcccc agccacatca tccctgtgcg 1980
ggttgcagat gctgctaaaa acacagaagt ctgtgatgaa ctaatgagca gacataacat 2040
ctacgtgcaa gcaatcaatt accctacggt gccccgggga gaagagctcc tacggattgc 2100
ccccacccct caccacacac cccagatgat gaactacttc cttgagaatc tgctagtcac 2160
atggaagcaa gtggggctgg aactgaagcc tcattcctca gctgagtgca acttctgcag 2220
gaggccactg cattttgaag tgatgagtga aagagagaag tcctatttct caggcttgag 2280
caagttggta tctgctcagg cctgagcatg acctcaatta tttcacttaa ccccaggcca 2340
ttatcatatc cagatggtct tcagagttgt ctttatatgt gaattaagtt atattaaatt 2400
ttaatctata gtaaaaacat agtcctggaa ataaattctt gcttaaatgg tgaaaaaa 2458
<210> 68
<211> 2281
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 68
cagaagaagg cagcgcccaa ggcgcatgcg cagcggtcac tcccgctgta tattaaggcg 60
ccggcgatcg cggcctgagg ctgctcccgg acaagggcaa cgagcgtttc gtttggactt 120
ctcgacttga gtgcccgcct ccttcgccgc cgcctctgca gtcctcagcg cagtctttcc 180
acaggagcca gcatacttcc tgaacatgga gagtgttgtt cgccgctgcc cattcttatc 240
ccgagtcccc caggcctttc tgcagaaagc aggcaaatct ctgttgttct atgcccaaaa 300
ctgccccaag atgatggaag ttggggccaa gccagcccct cgggcattgt ccactgcagc 360
agtacactac caacagatca aagaaacccc tccggccagt gagaaagaca aaactgctaa 420
ggccaaggtc caacagactc ctgatggatc ccagcagagt ccagatggca cacagcttcc 480
gtctggacac cccttgcctg ccacaagcca gggcactgca agcaaatgcc ctttcctggc 540
agcacagatg aatcagagag gcagcagtgt cttctgcaaa gccagtcttg agcttcagga 600
ggatgtgcag gaaatgaatg ccgtgaggaa agaggttgct gaaacctcag caggccccag 660
tgtggttagt gtgaaaaccg atggagggga tcccagtgga ctgctgaaga acttccagga 720
catcatgcaa aagcaaagac cagaaagagt gtctcatctt cttcaagata acttgccaaa 780
atctgtttcc acttttcagt atgatcgttt ctttgagaaa aaaattgatg agaaaaagaa 840
tgaccacacc tatcgagttt ttaaaactgt gaaccggcga gcacacatct tccccatggc 900
agatgactat tcagactccc tcatcaccaa aaagcaagtg tcagtctggt gcagtaatga 960
ctacctagga atgagtcgcc acccacgggt gtgtggggca gttatggaca ctttgaaaca 1020
acatggtgct ggggcaggtg gtactagaaa tatttctgga actagtaaat tccatgtgga 1080
cttagagcgg gagctggcag acctccatgg gaaagatgcc gcactcttgt tttcctcgtg 1140
ctttgtggcc aatgactcaa ccctcttcac cctggctaag atgatgccag gctgtgagat 1200
ttactctgat tctgggaacc atgcctccat gatccaaggg attcgaaaca gccgagtgcc 1260
aaagtacatc ttccgccaca atgatgtcag ccacctcaga gaactgctgc aaagatctga 1320
cccctcagtc cccaagattg tggcatttga aactgtccat tcaatggatg gggcggtgtg 1380
cccactggaa gagctgtgtg atgtggccca tgagtttgga gcaatcacct tcgtggatga 1440
ggtccacgca gtggggcttt atggggctcg aggcggaggg attggggatc gggatggagt 1500
catgccaaaa atggacatca tttctggaac acttggcaaa gcctttggtt gtgttggagg 1560
gtacatcgcc agcacgagtt ctctgattga caccgtacgg tcctatgctg ctggcttcat 1620
cttcaccacc tctctgccac ccatgctgct ggctggagcc ctggagtctg tgcggatcct 1680
gaagagcgct gagggacggg tgcttcgccg ccagcaccag cgcaacgtca aactcatgag 1740
acagatgcta atggatgccg gcctccctgt tgtccactgc cccagccaca tcatccctgt 1800
gcgggttgca gatgctgcta aaaacacaga agtctgtgat gaactaatga gcagacataa 1860
catctacgtg caagcaatca attaccctac ggtgccccgg ggagaagagc tcctacggat 1920
tgcccccacc cctcaccaca caccccagat gatgaactac ttccttgaga atctgctagt 1980
cacatggaag caagtggggc tggaactgaa gcctcattcc tcagctgagt gcaacttctg 2040
caggaggcca ctgcattttg aagtgatgag tgaaagagag aagtcctatt tctcaggctt 2100
gagcaagttg gtatctgctc aggcctgagc atgacctcaa ttatttcact taaccccagg 2160
ccattatcat atccagatgg tcttcagagt tgtctttata tgtgaattaa gttatattaa 2220
attttaatct atagtaaaaa catagtcctg gaaataaatt cttgcttaaa tggtgaaaaa 2280
a 2281
<210> 69
<211> 640
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 69
Met Glu Ser Val Val Arg Arg Cys Pro Phe Leu Ser Arg Val Pro Gln
1 5 10 15
Ala Phe Leu Gln Lys Ala Gly Lys Ser Leu Leu Phe Tyr Ala Gln Asn
20 25 30
Cys Pro Lys Met Met Glu Val Gly Ala Lys Pro Ala Pro Arg Ala Leu
35 40 45
Ser Thr Ala Ala Val His Tyr Gln Gln Ile Lys Glu Thr Pro Pro Ala
50 55 60
Ser Glu Lys Asp Lys Thr Ala Lys Ala Lys Val Gln Gln Thr Pro Asp
65 70 75 80
Gly Ser Gln Gln Ser Pro Asp Gly Thr Gln Leu Pro Ser Gly His Pro
85 90 95
Leu Pro Ala Thr Ser Gln Gly Thr Ala Ser Lys Cys Pro Phe Leu Ala
100 105 110
Ala Gln Met Asn Gln Arg Gly Ser Ser Val Phe Cys Lys Ala Ser Leu
115 120 125
Glu Leu Gln Glu Asp Val Gln Glu Met Asn Ala Val Arg Lys Glu Val
130 135 140
Ala Glu Thr Ser Ala Gly Pro Ser Val Val Ser Val Lys Thr Asp Gly
145 150 155 160
Gly Asp Pro Ser Gly Leu Leu Lys Asn Phe Gln Asp Ile Met Gln Lys
165 170 175
Gln Arg Pro Glu Arg Val Ser His Leu Leu Gln Asp Asn Leu Pro Lys
180 185 190
Ser Val Ser Thr Phe Gln Tyr Asp Arg Phe Phe Glu Lys Lys Ile Asp
195 200 205
Glu Lys Lys Asn Asp His Thr Tyr Arg Val Phe Lys Thr Val Asn Arg
210 215 220
Arg Ala His Ile Phe Pro Met Ala Asp Asp Tyr Ser Asp Ser Leu Ile
225 230 235 240
Thr Lys Lys Gln Val Ser Val Trp Cys Ser Asn Asp Tyr Leu Gly Met
245 250 255
Ser Arg His Pro Arg Val Cys Gly Ala Val Met Asp Thr Leu Lys Gln
260 265 270
His Gly Ala Gly Ala Gly Gly Thr Arg Asn Ile Ser Gly Thr Ser Lys
275 280 285
Phe His Val Asp Leu Glu Arg Glu Leu Ala Asp Leu His Gly Lys Asp
290 295 300
Ala Ala Leu Leu Phe Ser Ser Cys Phe Val Ala Asn Asp Ser Thr Leu
305 310 315 320
Phe Thr Leu Ala Lys Met Met Pro Gly Cys Glu Ile Tyr Ser Asp Ser
325 330 335
Gly Asn His Ala Ser Met Ile Gln Gly Ile Arg Asn Ser Arg Val Pro
340 345 350
Lys Tyr Ile Phe Arg His Asn Asp Val Ser His Leu Arg Glu Leu Leu
355 360 365
Gln Arg Ser Asp Pro Ser Val Pro Lys Ile Val Ala Phe Glu Thr Val
370 375 380
His Ser Met Asp Gly Ala Val Cys Pro Leu Glu Glu Leu Cys Asp Val
385 390 395 400
Ala His Glu Phe Gly Ala Ile Thr Phe Val Asp Glu Val His Ala Val
405 410 415
Gly Leu Tyr Gly Ala Arg Gly Gly Gly Ile Gly Asp Arg Asp Gly Val
420 425 430
Met Pro Lys Met Asp Ile Ile Ser Gly Thr Leu Gly Lys Ala Phe Gly
435 440 445
Cys Val Gly Gly Tyr Ile Ala Ser Thr Ser Ser Leu Ile Asp Thr Val
450 455 460
Arg Ser Tyr Ala Ala Gly Phe Ile Phe Thr Thr Ser Leu Pro Pro Met
465 470 475 480
Leu Leu Ala Gly Ala Leu Glu Ser Val Arg Ile Leu Lys Ser Ala Glu
485 490 495
Gly Arg Val Leu Arg Arg Gln His Gln Arg Asn Val Lys Leu Met Arg
500 505 510
Gln Met Leu Met Asp Ala Gly Leu Pro Val Val His Cys Pro Ser His
515 520 525
Ile Ile Pro Val Arg Val Ala Asp Ala Ala Lys Asn Thr Glu Val Cys
530 535 540
Asp Glu Leu Met Ser Arg His Asn Ile Tyr Val Gln Ala Ile Asn Tyr
545 550 555 560
Pro Thr Val Pro Arg Gly Glu Glu Leu Leu Arg Ile Ala Pro Thr Pro
565 570 575
His His Thr Pro Gln Met Met Asn Tyr Phe Leu Glu Asn Leu Leu Val
580 585 590
Thr Trp Lys Gln Val Gly Leu Glu Leu Lys Pro His Ser Ser Ala Glu
595 600 605
Cys Asn Phe Cys Arg Arg Pro Leu His Phe Glu Val Met Ser Glu Arg
610 615 620
Glu Lys Ser Tyr Phe Ser Gly Leu Ser Lys Leu Val Ser Ala Gln Ala
625 630 635 640
<210> 70
<211> 640
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 70
Met Glu Ser Val Val Arg Arg Cys Pro Phe Leu Ser Arg Val Pro Gln
1 5 10 15
Ala Phe Leu Gln Lys Ala Gly Lys Ser Leu Leu Phe Tyr Ala Gln Asn
20 25 30
Cys Pro Lys Met Met Glu Val Gly Ala Lys Pro Ala Pro Arg Ala Leu
35 40 45
Ser Thr Ala Ala Val His Tyr Gln Gln Ile Lys Glu Thr Pro Pro Ala
50 55 60
Ser Glu Lys Asp Lys Thr Ala Lys Ala Lys Val Gln Gln Thr Pro Asp
65 70 75 80
Gly Ser Gln Gln Ser Pro Asp Gly Thr Gln Leu Pro Ser Gly His Pro
85 90 95
Leu Pro Ala Thr Ser Gln Gly Thr Ala Ser Lys Cys Pro Phe Leu Ala
100 105 110
Ala Gln Met Asn Gln Arg Gly Ser Ser Val Phe Cys Lys Ala Ser Leu
115 120 125
Glu Leu Gln Glu Asp Val Gln Glu Met Asn Ala Val Arg Lys Glu Val
130 135 140
Ala Glu Thr Ser Ala Gly Pro Ser Val Val Ser Val Lys Thr Asp Gly
145 150 155 160
Gly Asp Pro Ser Gly Leu Leu Lys Asn Phe Gln Asp Ile Met Gln Lys
165 170 175
Gln Arg Pro Glu Arg Val Ser His Leu Leu Gln Asp Asn Leu Pro Lys
180 185 190
Ser Val Ser Thr Phe Gln Tyr Asp Arg Phe Phe Glu Lys Lys Ile Asp
195 200 205
Glu Lys Lys Asn Asp His Thr Tyr Arg Val Phe Lys Thr Val Asn Arg
210 215 220
Arg Ala His Ile Phe Pro Met Ala Asp Asp Tyr Ser Asp Ser Leu Ile
225 230 235 240
Thr Lys Lys Gln Val Ser Val Trp Cys Ser Asn Asp Tyr Leu Gly Met
245 250 255
Ser Arg His Pro Arg Val Cys Gly Ala Val Met Asp Thr Leu Lys Gln
260 265 270
His Gly Ala Gly Ala Gly Gly Thr Arg Asn Ile Ser Gly Thr Ser Lys
275 280 285
Phe His Val Asp Leu Glu Arg Glu Leu Ala Asp Leu His Gly Lys Asp
290 295 300
Ala Ala Leu Leu Phe Ser Ser Cys Phe Val Ala Asn Asp Ser Thr Leu
305 310 315 320
Phe Thr Leu Ala Lys Met Met Pro Gly Cys Glu Ile Tyr Ser Asp Ser
325 330 335
Gly Asn His Ala Ser Met Ile Gln Gly Ile Arg Asn Ser Arg Val Pro
340 345 350
Lys Tyr Ile Phe Arg His Asn Asp Val Ser His Leu Arg Glu Leu Leu
355 360 365
Gln Arg Ser Asp Pro Ser Val Pro Lys Ile Val Ala Phe Glu Thr Val
370 375 380
His Ser Met Asp Gly Ala Val Cys Pro Leu Glu Glu Leu Cys Asp Val
385 390 395 400
Ala His Glu Phe Gly Ala Ile Thr Phe Val Asp Glu Val His Ala Val
405 410 415
Gly Leu Tyr Gly Ala Arg Gly Gly Gly Ile Gly Asp Arg Asp Gly Val
420 425 430
Met Pro Lys Met Asp Ile Ile Ser Gly Thr Leu Gly Lys Ala Phe Gly
435 440 445
Cys Val Gly Gly Tyr Ile Ala Ser Thr Ser Ser Leu Ile Asp Thr Val
450 455 460
Arg Ser Tyr Ala Ala Gly Phe Ile Phe Thr Thr Ser Leu Pro Pro Met
465 470 475 480
Leu Leu Ala Gly Ala Leu Glu Ser Val Arg Ile Leu Lys Ser Ala Glu
485 490 495
Gly Arg Val Leu Arg Arg Gln His Gln Arg Asn Val Lys Leu Met Arg
500 505 510
Gln Met Leu Met Asp Ala Gly Leu Pro Val Val His Cys Pro Ser His
515 520 525
Ile Ile Pro Val Arg Val Ala Asp Ala Ala Lys Asn Thr Glu Val Cys
530 535 540
Asp Glu Leu Met Ser Arg His Asn Ile Tyr Val Gln Ala Ile Asn Tyr
545 550 555 560
Pro Thr Val Pro Arg Gly Glu Glu Leu Leu Arg Ile Ala Pro Thr Pro
565 570 575
His His Thr Pro Gln Met Met Asn Tyr Phe Leu Glu Asn Leu Leu Val
580 585 590
Thr Trp Lys Gln Val Gly Leu Glu Leu Lys Pro His Ser Ser Ala Glu
595 600 605
Cys Asn Phe Cys Arg Arg Pro Leu His Phe Glu Val Met Ser Glu Arg
610 615 620
Glu Lys Ser Tyr Phe Ser Gly Leu Ser Lys Leu Val Ser Ala Gln Ala
625 630 635 640
<210> 71
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ALAS-1_прямой праймер
<400> 71
agccacatca tccctgt 17
<210> 72
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ALAS-1_обратный праймер
<400> 72
cgtagatgtt atgtctgctc at 22
<210> 73
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> зонд ALAS-1
<400> 73
tttagcagca tctgcaaccc gc 22
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБЫ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАКА ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ | 2016 |
|
RU2721916C2 |
| Предоперационная стратификация риска на основании экспрессии PDE4D7 и DHX9 | 2019 |
|
RU2793635C2 |
| Т-КЛЕТКИ, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ХИМЕРНЫМ РЕЦЕПТОРОМ АНТИГЕНА, НАЦЕЛЕННЫМ НА CS1, ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АМИЛОИДОЗА AL | 2018 |
|
RU2774895C2 |
| Т-КЛЕТКИ, МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ХИМЕРНЫМ РЕЦЕПТОРОМ АНТИГЕНА, НАЦЕЛЕННЫМ НА CS1 | 2015 |
|
RU2727451C2 |
| РЕКОМБИНАНТНАЯ CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM ДЛЯ ЭФФЕКТИВНОГО СИНТЕЗА ВЫСОКООЧИЩЕННОЙ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ И ЕЕ ОЛИГОСАХАРИДОВ | 2019 |
|
RU2823305C1 |
| АНТИТЕЛО, НАЦЕЛЕННОЕ НА ВСМА, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2018 |
|
RU2799655C2 |
| АНТИТЕЛО К ЦИТОМЕГАЛОВИРУСУ ЧЕЛОВЕКА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2817217C1 |
| АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕ CTLA-4, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2018 |
|
RU2756100C1 |
| ВИДЫ КОМБИНИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ РАКА, НАЦЕЛИВАЮЩИЕСЯ НА CD38 И TGF-БЕТА | 2019 |
|
RU2808632C2 |
| АДЕНОВИРУСЫ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ АДЕНОВИРУСОВ | 2019 |
|
RU2782528C1 |
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ стратификации риска для пациентов со злокачественной опухолью предстательной железы и предоставления рекомендации по лечению пациенту на основе оценки риска по варианту 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7). Также описаны диагностический набор и применение профиля экспрессии гена для стратификации риска. Изобретение позволяет осуществить эффективную комбинированную оценку риска для пациентов со злокачественной опухолью предстательной железы. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 22 ил., 10 табл., 22 пр.
1. Способ стратификации риска, который включает:
определение нормализованного профиля экспрессии гена для одного маркерного гена, состоящего из варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7), представленного нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 19, относительно одного или более из эталонных генов, выбранного из группы, состоящей из: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP), а также их сочетания;
определение прогностической оценки риска с использованием оценочной функции, на основе нормализованного профиля экспрессии гена, оценочную функцию получают из профилей экспрессии генов для биологических образцов, полученных у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы, где определение профиля экспрессии гена включает определение значения Cq для PDE4D7 и каждого из по меньшей мере одного эталонного гена, и определение прогностической оценки риска включает нормализацию значения PDE4D7 с использованием значения каждого из эталонных генов и вычисление оценки риска в качестве линейной функции нормализованной оценки; и
определение комбинированной прогностической оценки риска на основе прогностической оценки риска и второго определения риска, которое представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN), где комбинированную прогностическую оценку риска определяют с использованием функции регрессии, получаемой у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы.
2. Способ по п. 1, который дополнительно отличается по меньшей мере одним эталонным геном, включающим по меньшей мере два из, или по меньшей мере три из, или все из HPRT1, TUBA1B, PUM1 и TBP.
3. Способ по любому предыдущему пункту, который дополнительно отличается прогностической оценкой риска, которая основана на нормализованном профиле экспрессии гена, который включает уровень экспрессии для PDE4D7 в качестве единственного маркерного гена.
4. Способ по любому предыдущему пункту, который дополнительно отличается определением профиля экспрессии гена, включающим выполнение RT-qPCR на РНК, экстрагированной из биологического образца.
5. Способ по любому предыдущему пункту, который дополнительно отличается отнесением субъекта в одну из предварительно определяемого набора из по меньшей мере двух или по меньшей мере трех групп риска на основе комбинированной прогностической оценки риска.
6. Способ по п. 5, который дополнительно включает по меньшей мере одно из:
предложения терапии для субъекта на основе присваиваемой группы риска, по меньшей мере две группы риска ассоциированы с различными терапиями;
вычисления предсказания риска прогрессирования заболевания у субъекта до или после хирургической операции на предстательной железе; и
вычисления предсказания ответа на терапию для субъекта до или после хирургической операции на предстательной железе.
7. Способ по п. 6, который дополнительно отличается предлагаемой терапией, которую выбирают из группы, состоящей из:
a) по меньшей мере частичной простатэктомии;
b) активной терапии, выбранной из лечения излучением, гормональной терапии, химиотерапии и их сочетания;
c) наблюдения без выполнения a) или b).
8. Способ по п. 7, который дополнительно отличается предлагаемой терапией на основе присваиваемой группы риска, которая отличается от предлагаемой терапии на основе только второго определения риска.
9. Диагностический набор для определения оценки риска для мужчин со злокачественной опухолью предстательной железы, набор содержит:
по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения уровня экспрессии варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7), представленного нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 19;
по меньшей мере один праймер и/или зонд для определения уровня экспрессии гена по меньшей мере одного эталонного гена, выбранного из группы, состоящей из: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP), а также их сочетаний; и
инструкции для вычисления оценки риска на основе определяемых уровней экспрессии посредством выполнения способа по п. 1.
10. Использование профиля экспрессии гена для стратификации риска, которое включает:
определение профиля экспрессии гена биологического образца, получаемого у субъекта, где профиль экспрессии гена представляет собой уровень экспрессии для варианта 7 фосфодиэстеразы 4D (PDE4D7), нормализованный относительно набора эталонных генов, выбранных из группы, состоящей из: гипоксантинфосфорибозилтрансферазы 1 Homo sapiens (HPRT1), тубулина-α-1b (TUBA1B), члена РНК-связывающего семейства pumilio Homo sapiens (PUM1) и связывающего TATA-бокс белка Homo sapiens (TBP), а также их сочетаний;
определение прогностической оценки риска для субъекта на основе профиля экспрессии гена с оценочной функцией, которую получают из профилей экспрессии генов для биологических образцов, полученных у субъектов, у которых осуществляли мониторинг злокачественной опухоли предстательной железы; и
определение комбинированной прогностической оценки риска на основе прогностической оценки риска и второго определения риска, которое представляет собой классификацию National Comprehensive Cancer Network (NCCN).
| WO 2010131194 A1, 18.11.2010 | |||
| BOETTCHER R et.al | |||
| Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды | 1921 |
|
SU4A1 |
| Устройство для закрепления лыж на раме мотоциклов и велосипедов взамен переднего колеса | 1924 |
|
SU2015A1 |
| RU 2011150264, 20.06.2013. | |||
