ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке США с № 62/545858, поданной 15 августа 2017 года, которая полностью включена в данное описание посредством ссылки для любых целей.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Настоящее изобретение относится к вариантам IgG-Fc (вариантам полипептидов IgG-Fc) у животных-компаньонов, имеющим улучшенные функции, включая увеличенное связывание белка А (например, для простоты очистки), сниженное связывание C1q (например, для снижения опосредованного комплементом иммунного ответа), сниженное связывание CD16 (например, для уменьшения индукции антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC)), повышение стабильности и/или способность образовывать гетеродимерные белки. Варианты полипептидов IgG-Fc по настоящему изобретению могут получить широкое применение в терапевтических средствах для животных-компаньонов. Например, варианты полипептидов IgG-Fc могут использоваться при создании и изготовлении полипептидов GLP1 длительного действия для лечения, например, сахарного диабета, ожирения или связанных заболеваний у животных-компаньонов, таких как представители семейств собачьих, кошачьих и лошадиных. Кроме того, варианты полипептидов IgG-Fc могут использоваться при создании и изготовлении антител или слитых белков для лечения различных заболеваний у животных-компаньонов.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] IgG-Fc играет важную роль в функциях иммуноглобулинов, опосредуемых Fc-областью, через взаимодействие с FcRn, Fc-рецептором и C1q. У животных-компаньонов, различные подтипы IgG отличаются по этим функциям, что необходимо учитывать при выборе конкретного IgG-антитела или белка, слитого с Fc-областью IgG, для применения в терапевтических или диагностических целях. Например, может быть выгодной слабая или недетектируемая аффинность связывания с C1q или CD16 у подтипа IgG. Кроме того, способность IgG-Fc связывать белок А может быть полезной для очистки с использованием способа очистки на основе сродства к белку A.
[0004] Однако большинство подтипов IgG-Fc у представителей семейств собачьих, кошачьих и лошадиных не обладают способностью связывать белок А, имеют слабую или недетектируемую аффинность связывания с CD16, и слабую или недетектируемую аффинность связывания с C1q. Так, например, из четырех подтипов IgG-Fc у представителей семейства собачьих (IgG-A, IgG-B, IgG-C и IgG-D), Fc-область только IgG-B имеет заметную аффинность связывания с белком А. В то же время Fc-области только IgG-A и IgG-D у представителей семейства собачьих не имеют или имеют слабое связывание с C1q или CD16. Антитела и слитые с Fc-областью белки, содержащие варианты полипептидов IgG-Fc, которые имеют пониженное связывание с C1q и/или с CD16, и/или которые способны связываться с белком А, являются желательными.
[0005] Глюкагон-подобный пептид-1 (GLP1) является мощным анти-гипергликемическим гормоном, который играет важную роль в регулировании уровня глюкозы в крови. Природный GLP1 имеет время полужизни in vivo приблизительно 2 минуты. GLP1-полипептиды пролонгированного действия могут быть использованы для лечения диабета и ожирения, профилактики диабета, контроля состояния гипергликемии, снижения содержания липидов, лечения заболеваний, причиной которых является повышение уровня глюкозы в крови, подавления желудочно-кишечной перистальтики, замедления опорожнения желудка и/или снижения потребления пищи. На сегодня сохраняется потребность в длительно действующих GLP1-полипептидах для контроля высокого уровня глюкозы в крови или заболеваний, индуцируемых неконтролируемым уровнем глюкозы в крови, у животных-компаньонов, таких как собачьи, кошачьи и лошадиные.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Вариант осуществления изобретения 1. Полипептид, содержащий вариант полипептида IgG-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию относительно полипептида IgG-Fc дикого типа у одного вида животных-компаньонов, где вариант полипептида IgG-Fc имеет повышенную аффинность связывания с белком А относительно полипептида IgG-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 2. Полипептид, содержащий вариант полипептида IgG-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию относительно полипептида IgG-Fc дикого типа одного вида животных-компаньонов, где вариант полипептида IgG-Fc имеет пониженную аффинность связывания с C1q и/или CD16 относительно полипептида IgG-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 3. Полипептид по варианту осуществления 1 или варианту осуществления 2, где вариант полипептида IgG-Fc связывается с C1q и/или CD16 с константой диссоциации (Kd) выше 5×10-6 M, выше 1×10-5 M, выше 5×10-5 M, выше 1×10-4 M, выше 5×10-4 M или выше 1×10-3 M, измеренной методом биослойной интерферометрии.
Вариант осуществления изобретения 4. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc имеет повышенную аффинность связывания с белком А относительно полипептида IgG-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 5. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc связывается с белком А с константой диссоциации (Kd) ниже 5×10-6 M, ниже 1×10-6 M, ниже 5×10-7 M, ниже 1×10-7 M, ниже 5×10-8 M, ниже 1×10-8 M, ниже 5×10-9 M, ниже 1×10-9 M, ниже 5×10-10 M, ниже 1×10-10 M, ниже 5×10-11 M, ниже 1×10-11 M, ниже 5×10-12 M или ниже 1×10-12 M, измеренной методом биослойной интерферометрии.
Вариант осуществления изобретения 6. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где животное-компаньон принадлежит семейству кошачьих, собачьих или лошадиных.
Вариант осуществления изобретения 7. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где полипептид IgG-Fc дикого типа представляет собой:
а) IgG-A-Fc, IgG-B-Fc, IgG-C-Fc или IgG-D-Fc собачьих;
b) IgG1-Fc, IgG2-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc, IgG5-Fc, IgG6-Fc или IgG7-Fc лошадиных; или
c) IgG1a-Fc, IgG1b-Fc или IgG2-Fc кошачьих.
Вариант осуществления изобретения 8. Полипептид, содержащий вариант полипептида IgG-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию в шарнирной области относительно кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа или лошадиных, где вариант полипептида IgG-Fcа имеет увеличенную продукцию в рекомбинантной системе, и/или увеличенное образование дисульфидных связей в шарнирной области относительно полипептида IgG-Fc дикого типа, что определяется с помощью электрофоретического разделения в ДСН-ПААГ в восстановительных и/или невосстановительных условиях.
Вариант осуществления изобретения 9. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 16 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118;
b) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно лошадиного полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 3 в SEQ ID NO: 129; и/или
с) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно лошадиного полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 20 в SEQ ID NO: 129.
Вариант осуществления изобретения 10. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 16 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118;
b) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно лошадиного полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 3 в SEQ ID NO: 129; и/или
с) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно лошадиного полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 20 в SEQ ID NO: 129.
Вариант осуществления изобретения 11. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант IgG-Fc-полипептид содержит:
а) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении, соответствующем положению 16, или в положении 16 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118;
b) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно лошадиного полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 3, или в положении 3 в SEQ ID NO: 129; и/или
с) по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно лошадиного полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении, соответствующем положению 20, или в положении 20 в SEQ ID NO: 129.
Вариант осуществления изобретения 12. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит шарнирную область или участок шарнирной области из полипептида IgG-Fc другого изотипа.
Вариант осуществления изобретения 13. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит шарнирную область или участок шарнирной области из кошачьего полипептида IgG-1а-Fc дикого типа, из кошачьего полипептида IgG-1b-Fc дикого типа, или из лошадиного полипептида IgG1-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 14. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 125 или SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135.
Вариант осуществления изобретения 15. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 125 или SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135.
Вариант осуществления изобретения 16. Полипептид, содержащий вариант полипептида IgG2-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно кошачьего полипептида IgG2-Fc дикого типа, где по меньшей мере одна аминокислотная замена представляет собой цистеин, и где вариант полипептида IgG2-Fc способен к формированию по меньшей мере одной дополнительной межцепочечной дисульфидной связи относительно кошачьего полипептида IgG2-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 17. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит по меньшей мере одну аминокислотную замену относительно кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа, где по меньшей мере одна аминокислотная замена представляет собой цистеин, и где вариант полипептида IgG-Fc способен к формированию по меньшей мере одной дополнительной межцепочечной дисульфидной связи относительно кошачьего полипептида IgG2-Fc дикого типа.
Вариант осуществление изобретения 18. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит цистеин в положении, соответствующем положению 8, положению 9, положению 10, положению 11, положению 12, положению 13, положению 14, положению 15 или положению 16 в последовательности SEQ ID NO: 16.
Вариант осуществления изобретения 19. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит цистеин в положении, соответствующем положению 14 в SEQ ID NO: 16.
Вариант осуществления изобретения 20. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит цистеин в положении 14 в SEQ ID NO: 16.
Вариант осуществления изобретения 21. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc является по меньшей мере на 90% идентичным, по меньшей мере на 95% идентичным, по меньшей мере 97% идентичным или по меньшей мере на 99% идентичным аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156 или SEQ ID NO: 157.
Вариант осуществления изобретения 22. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит SEQ ID NO: 17.
Вариант осуществления изобретения 23. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17.
Вариант осуществления изобретения 24. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 205 в SEQ ID NO: 1, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 1;
b) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 3 и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 24 в SEQ ID NO: 3;
с) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 4, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 4;
d) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 15 в SEQ ID NO: 64 и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 203 в SEQ ID NO: 64;
е) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 199 в SEQ ID NO: 67 и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 200 в SEQ ID NO: 67; и/или
f) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 199 в SEQ ID NO: 68, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 200 в SEQ ID NO: 68, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 201 в SEQ ID NO: 68, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 202 в SEQ ID NO: 68.
Вариант осуществления изобретения 25. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аминокислотную замену в положении 21 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 23 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 25 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 80 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 205 в SEQ ID NO: 1 и/или аминокислотную замену в положении 207 в SEQ ID NO: 1;
b) аминокислотную замену в положении 21 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 23 в SEQ ID NO: 3 и/или аминокислотную замену в положении 24 в SEQ ID NO: 3;
c) аминокислотную замену в положении 21 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении 23 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении 25 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении 80 в SEQ ID NO: 4 и/или аминокислотную замену в положении 207 в SEQ ID NO: 4;
d) аминокислотную замену в положении 15 в SEQ ID NO: 64 и/или аминокислотную замену в положении 203 в SEQ ID NO: 64;
e) аминокислотную замену в положении 199 в SEQ ID NO: 67 и/или аминокислотную замену в положении 200 в SEQ ID NO: 67; и/или
f) аминокислотную замену в положении 199 в SEQ ID NO: 68, аминокислотную замену в положении 200 в SEQ ID NO: 68, аминокислотную замену в положении 201 в SEQ ID NO: 68 и/или аминокислотную замену в положении 202 в SEQ ID NO: 68.
Вариант осуществления изобретения 26. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 1, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 1, глицин в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении, соответствующем положению 205 в SEQ ID NO: 1, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 1;
b) треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 3, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 3 и/или изолейцин в положении, соответствующем положению 24 в SEQ ID NO: 3;
с) треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 4, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 4, аланин в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 4, глицин в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 4, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 4;
d) треонин или валин в положении, соответствующем положению 15 в SEQ ID NO: 64 и/или тирозин или валин в положении, соответствующем положению 203 в SEQ ID NO: 64;
е) лейцин в положении, соответствующем положению 199 в SEQ ID NO: 67 и/или гистидин в положении, соответствующем положению 200 в SEQ ID NO: 67; и/или
f) лейцин в положении, соответствующем положению 199 в SEQ ID NO: 68, гистидин в положении, соответствующем положению 200 в SEQ ID NO: 68, аспарагин в положении, соответствующем положению 201 в SEQ ID NO: 68, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 202 в SEQ ID NO: 68.
Вариант осуществления изобретения 27. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 1, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении 25 в SEQ ID NO: 1, глицин в положении 80 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении 205 в SEQ ID NO: 1 и/или гистидин в положении 207 в SEQ ID NO: 1;
b) треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 3, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 3 и/или изолейцин в положении 24 в SEQ ID NO: 3;
с) треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 4, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 4, аланин в положении 25 в SEQ ID NO: 4, глицин в положении 80 в SEQ ID NO: 4 и/или гистидин в положении 207 в SEQ ID NO: 4;
d) треонин или валин в положении 15 в SEQ ID NO: 64 и/или тирозин или валин в положении 203 в SEQ ID NO: 64;
e) лейцин в положении 199 в SEQ ID NO: 67 и/или гистидин в положении 200 в SEQ ID NO: 67; и/или
f) лейцин в положении 199 в SEQ ID NO: 68, гистидин в положении 200 в SEQ ID NO: 68, аспарагин в положении 201 в SEQ ID NO: 68 и/или гистидин в положении 202 в SEQ ID NO: 68.
Вариант осуществления изобретения 28. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc включает аминокислотную последовательность:
а) SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 или SEQ ID NO: 84; или
b) SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 75 или SEQ ID NO: 76.
Вариант осуществления изобретения 29. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 75 или SEQ ID NO: 76.
Вариант осуществления изобретения 30. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2, или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 3;
b) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 63, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 65, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 66, или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 69; или
с) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 80, или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 81.
Вариант осуществления изобретения 31. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аминокислотную замену в положении 93 в SEQ ID NO: 2, или аминокислотную замену в положении 93 в SEQ ID NO: 3;
b) аминокислотную замену в положении 87 в SEQ ID NO: 63, аминокислотную замену в положении 87 в SEQ ID NO: 65, аминокислотную замену в положении 87 в SEQ ID NO: 66, или аминокислотную замену в положении 87 в SEQ ID NO: 69; или
в) аминокислотную замену в положении 198 в SEQ ID NO: 80, или аминокислотную замену в положении 198 в SEQ ID NO: 81.
Вариант осуществления изобретения 32. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аргинин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2, или аргинин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 3;
b) серин в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 63, замену серином в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 65, серин в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 66, или серин в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 69; или
с) аланин в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 80, или аланин в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 81.
Вариант осуществления изобретения 33. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аргинин в положении 93 в SEQ ID NO: 2, или аргинин в положении 93 в SEQ ID NO: 3;
b) серин в положении 87 в SEQ ID NO: 63, серин в положении 87 в SEQ ID NO: 65, серин в положении 87 в SEQ ID NO: 66 или серин в положении 87 в SEQ ID NO: 69; или
с) аланин в положении 198 в SEQ ID NO: 80 или аланин в положении 198 в SEQ ID NO: 81.
Вариант осуществления изобретения 34. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность:
а) SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79 или SEQ ID NO: 84; или
b) SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 или SEQ ID NO: 77; или
c) SEQ ID NO: 82 или SEQ ID NO: 83.
Вариант осуществления изобретения 35. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 82 или SEQ ID NO: 83.
Вариант осуществления изобретения 36. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 2, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2; или
b) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 3, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 37. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) аминокислотную замену в положении 5 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 38 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 39 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 97 в SEQ ID NO: 2 и/или аминокислотную замену в положении 98 в SEQ ID NO: 2; или
b) аминокислотную замену в положении 5 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 38 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 39 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 97 в SEQ ID NO: 3 и/или аминокислотную замену в положении 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 38. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) пролин в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 2, глицин в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 2, аргинин в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 2, изолейцин в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 2, и/или глицин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2; или
b) пролин в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 3, глицин в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 3, аргинин в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 3, изолейцин в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 3, и/или глицин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 39. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) пролин в положении 5 в SEQ ID NO: 2, глицин в положении 38 в SEQ ID NO: 2, аргинин в положении 39 в SEQ ID NO: 2, изолейцин в положении 97 в SEQ ID NO: 2 и/или глицин в положении 98 из SEQ ID NO: 2; или
b) пролин в положении 5 в SEQ ID NO: 3, глицин в положении 38 в SEQ ID NO: 3, аргинин в положении 39 в SEQ ID NO: 3, изолейцин в положении 97 в SEQ ID NO: 3 и/или глицин в положении 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 40. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность:
а) SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146 или SEQ ID NO: 147; или
b) SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156 или SEQ ID NO: 157.
Вариант осуществления изобретения 41. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность из SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156 или SEQ ID NO: 157.
Вариант осуществления изобретения 42. Полипептид, содержащий вариант полипептида IgG-Fc, содержащий:
а) тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 1, тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 2, тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 3, или тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 4; или
b) тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 16, тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118.
Вариант осуществления изобретения 43. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) тирозин или триптофан в положении 138 в SEQ ID NO: 1, тирозин или триптофан в положении 137 в SEQ ID NO: 2, тирозин или триптофан в положении 137 в SEQ ID NO: 3, или тирозин или триптофан в положении 138 в SEQ ID NO: 4; или
b) тирозин или триптофан в положении 154 в SEQ ID NO: 16, тирозин или триптофан в положении 154 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118.
Вариант осуществления изобретения 44. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121 или SEQ ID NO: 123.
Вариант осуществления изобретения 45. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121 или SEQ ID NO: 123.
Вариант осуществления изобретения 46. Непрерывный полипептид, содержащий полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления и полипептид глюкагон-подобного пептида-1 (GLP-1).
Вариант осуществления изобретения 47. Непрерывный полипептид, содержащий полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления и глюкагоновый полипептид.
Вариант осуществления изобретения 48. Полипептид, содержащий вариант полипептида IgG-Fc, содержащий:
а) серин в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 1, серин в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 2, серин в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 3, серин в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 4, серин в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 16, серин в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или серин в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118;
b) аланин в положении, соответствующем положению 140, в SEQ ID NO: 1, аланин в положении, соответствующем положению 139 в SEQ ID NO: 2, аланин в положении, соответствующем положению 139 в SEQ ID NO: 3, аланин в положении, соответствующем положению 140, в SEQ ID NO: 4, аланин в положении, соответствующем положению 156 в SEQ ID NO: 16, аланин в положении, соответствующем положению 156 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или аланин в положении, соответствующем положению 156 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118; и/или
с) треонин в положении, соответствующем положению 181 в SEQ ID NO: 1, треонин в положении, соответствующем положению 180 в SEQ ID NO: 2, треонин в положении, соответствующем положению 180 в SEQ ID NO: 3, треонин в положении, соответствующем положению 181 в SEQ ID NO: 4, треонин в положении, соответствующем положению 197 в SEQ ID NO: 16, треонин в положении, соответствующем положению 197 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или треонин в положении, соответствующем положению 197 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118.
Вариант осуществления изобретения 49. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
а) серин в положении 138 в SEQ ID NO: 1, серин в положении 137 в SEQ ID NO: 2, серин в положении 137 в SEQ ID NO: 3, серин в положении 138 в SEQ ID NO: 4, серин в положении 154 в SEQ ID NO: 16, серин в положении 154 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или серин в положении 154 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118;
b) аланин в положении 140 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении 139 в SEQ ID NO: 2, аланин в положении 139 в SEQ ID NO: 3, аланин в положении 140 в SEQ ID NO: 4, аланин в положении 156 в SEQ ID NO: 16, аланин в положении 156 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или аланин в положении 156 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118; и/или;
c) треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 1, треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 2, треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 3, треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 4, треонин в положении 197 в SEQ ID NO: 16, треонин в положении 197 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117, или треонин в положении 197 в SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118.
Вариант осуществления изобретения 50. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122 или SEQ ID NO: 124.
Вариант осуществления изобретения 51. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122 или SEQ ID NO: 124.
Вариант осуществления изобретения 52. Полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где указанный полипептид является гликозилированным.
Вариант осуществления изобретения 53. Полипептид по любому из вариантов осуществления с 1 по 51, где полипептид является агликозилированным.
Вариант осуществления изобретения 54. Непрерывный полипептид, содержащий полипептид по любому из вариантов осуществления 48-53 и полипептид глюкагон-подобного пептида-1 (GLP1).
Вариант осуществления изобретения 55. Непрерывный полипептид, содержащий полипептид по любому из вариантов осуществления 48-53 и глюкагоновый полипептид.
Вариант осуществления изобретения 56. Гетеродимерный белок, содержащий непрерывный полипептид по варианту осуществления 46 и непрерывный полипептид по варианту осуществления 54.
Вариант осуществления изобретения 57. Гетеродимерный белок, содержащий непрерывный полипептид по варианту осуществления 47 и непрерывный полипептид по варианту осуществления 55.
Вариант осуществления изобретения 58. Непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 46, 47 или 54-57, где полипептид GLP1 представляет собой Полипептид GLP1 дикого типа, необязательно, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.
Вариант осуществления изобретения 59. Непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 46, 47 или 54-58, где полипептид GLP1 представляет собой вариант полипептида GLP1.
Вариант осуществления изобретения 60. Непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 46, 47 или 54-59, где полипептид GLP1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 98 или SEQ ID NO: 99.
Вариант осуществления изобретения 61. Непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 46, 47 или 54-60, где глюкагоновый полипептид представляет собой глюкагоновый полипептид дикого типа, необязательно, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
Вариант осуществления изобретения 62. Непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 46, 47 или 54-61, где глюкагоновый полипептид является вариантом глюкагонового полипептида.
Вариант осуществления изобретения 63. Гетеродимерный белок, содержащий:
i) первый вариант собачьего полипептида IgG-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию относительно первого собачьего полипептида IgG-Fc дикого типа, и второй вариант собачьего полипептида IgG-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию относительно второго собачьего полипептида IgG-Fc дикого типа; или
ii) первый вариант кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию относительно первого кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа, и второй вариант кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию относительно второго кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа, где:
а) первый вариант собачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 1, положению 137 в SEQ ID NO: 2, положению 137 в SEQ ID NO: 3 или положению 138 в SEQ ID NO: 4;
b) второй вариант собачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 138, положению 140 и/или положению 181 в SEQ ID NO: 1, положению 137, положению 139 и/или положению 180 в SEQ ID NO: 2, позиция 137, позиция 139 и/или положение 180 в SEQ ID NO: 3, или положению 138, положению 140 и/или положению 181 в SEQ ID NO: 4;
c) первый вариант кошачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117, или SEQ ID NO: 118; и/или
d) второй вариант кошачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 154, положению 156 и/или положению 197 в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
Вариант осуществления изобретения 64. Гетеродимерный белок по варианту осуществления 63, где первый собачий полипептид IgG-Fc дикого типа и второй собачий полипептид IgG-Fc дикого типа относятся к одному подтипу IgG, и/или первый кошачий полипептид IgG-Fc дикого типа и второй кошачий полипептид IgG-Fc дикого типа относятся к одному подтипу IgG.
Вариант осуществления изобретения 65. Гетеродимерный белок по варианту осуществления 63, где первый собачий полипептид IgG-Fc дикого типа и второй собачий полипептид IgG-Fc дикого типа относятся к разным подтипам IgG, и/или первый кошачий полипептид IgG-Fc дикого типа и второй кошачий полипептид IgG-Fc дикого типа относятся к одному подтипу IgG.
Вариант осуществления изобретения 66. Гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 63-65, где:
а) первый вариант собачьего полипептида IgG-Fc содержит тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 1, положению 137 в SEQ ID NO: 2, положению 137 в SEQ ID NO: 3 или положению 138 в SEQ ID NO: 4; и/или
b) первый вариант кошачьего полипептида IgG-Fc содержит триптофан в положении, соответствующем положению 154 в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
Вариант осуществления изобретения 67. Гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 63-66, где:
а) второй вариант собачьего полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 138, аланин в положении, соответствующем положению 140, и/или треонин в положении, соответствующем положению 181 в SEQ ID NO: 1, в серин в положении, соответствующем положению 137, аланин в положении, соответствующем положению 139 и/или треонин в положении, соответствующем положению 180 в SEQ ID NO: 2, серин в положении, соответствующем положению 137, аланин в положении, соответствующем положению 139 и/или треонин в положении, соответствующем положению 180 в SEQ ID NO: 3, и/или серин в положении, соответствующем положению 138, аланин в положении, соответствующем положению 140, и/или треонин в положении, соответствующем положению 181 в SEQ ID NO: 4; и/или
b) второй вариант кошачьего полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 154, аланин в положении, соответствующем положению 156 и/или треонин в положении, соответствующем положению 197 в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
Вариант осуществления изобретения 68. Гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 63-67, где:
а) первый вариант собачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113 или SEQ ID NO: 115; и/или
b) первый вариант кошачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121 или SEQ ID NO: 123.
Вариант осуществления изобретения 69. Гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 63-68, где:
а) второй вариант собачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114 или SEQ ID NO: 116; и/или
b) второй вариант кошачьего полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122 или SEQ ID NO: 123.
Вариант осуществления изобретения 70. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-69, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат по меньшей мере одну дополнительную аминокислотную модификацию относительно полипептида IgG-Fc дикого типа и имеют повышенную аффинность связывания с белком А относительно полипептида IgG-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 71. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42 до 70, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 205 в SEQ ID NO: 1, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 1;
b) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 3 и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 24 в SEQ ID NO: 3; или
с) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 4, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 4.
Вариант осуществления изобретения 72. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-71, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) аминокислотную замену в положении 21 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 23 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 25 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 80 в SEQ ID NO: 1, аминокислотную замену в положении 205 в SEQ ID NO: 1 и/или аминокислотную замену в положении 207 в SEQ ID NO: 1;
b) аминокислотную замену в положении 21 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 23 в SEQ ID NO: 3 и/или аминокислотную замену в положении 24 в SEQ ID NO: 3; или
c) аминокислотную замену в положении 21 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении 23 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении 25 в SEQ ID NO: 4, аминокислотную замену в положении 80 в SEQ ID NO: 4 и/или аминокислотную замену в положении 207 в SEQ ID NO: 4.
Вариант осуществления изобретения 73. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-72, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 1, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 1, глицин в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении, соответствующем положению 205 в SEQ ID NO: 1, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 1 ;
b) треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 3, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 3, и/или изолейцин в положении, соответствующем положению 24 в SEQ ID NO: 3; или
с) треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 4, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 4, аланин в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 4, глицин в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 4, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 4.
Вариант осуществления изобретения 74. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-73, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 1, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении 25 в SEQ ID NO: 1, глицин в положении 80 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении 205 в SEQ ID NO: 1 и/или гистидин в положении 207 в SEQ ID NO: 1;
b) треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 3, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 3 и/или изолейцин в положении 24 в SEQ ID NO: 3; или
с) треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 4, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 4, аланин в положении 25 в SEQ ID NO: 4, глицин в положении 80 в SEQ ID NO: 4 и/или гистидин в положении 207 в SEQ ID NO: 4.
Вариант осуществления изобретения 75. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-74, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат по меньшей мере одну дополнительную аминокислотную модификацию относительно полипептида IgG-Fc дикого типа и имеют пониженную аффинность связывания с CD16 относительно полипептида IgG-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 76. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-75, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 2, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2; или
b) аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 3, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 77. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-76, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) аминокислотную замену в положении 5 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 38 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 39 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 97 в SEQ ID NO: 2 и/или аминокислотную замену в положении 98 в SEQ ID NO: 2; или
b) аминокислотную замену в положении 5 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 38 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 39 в SEQ ID NO: 3, аминокислотную замену в положении 97 в SEQ ID NO: 3 и/или аминокислотную замену в положении 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 78. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-77, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) пролин в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 2, глицин в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 2, аргинин в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 2, изолейцин в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 2, и/или глицин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2; или
b) пролин в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 3, глицин в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 3, аргинин в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 3, изолейцин в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 3, и/или глицин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 79. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-78, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат:
а) пролин в положении 5 в SEQ ID NO: 2, глицин в положении 38 в SEQ ID NO: 2, аргинин в положении 39 в SEQ ID NO: 2, изолейцин в положении 97 в SEQ ID NO: 2 и/или глицин в положении 98 из SEQ ID NO: 2; или
b) пролин в положении 5 в SEQ ID NO: 3, глицин в положении 38 в SEQ ID NO: 3, аргинин в положении 39 в SEQ ID NO: 3, изолейцин в положении 97 в SEQ ID NO: 3 и/или глицин в положении 98 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 80. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-79, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат по меньшей мере одну дополнительную аминокислотную модификацию относительно собачьего полипептида IgG-Fc дикого типа и имеют сниженную аффинность связывания с C1q относительно собачьего полипептида IgG-Fc дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 81. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-80, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2, или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 82. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-81, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат аминокислотную замену в положении 93 в SEQ ID NO: 2, или аминокислотную замену в положении 93 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 83. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-82, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат аргинин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2, или аргинин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 84. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 42-83, где вариант полипептида IgG-Fc, первый вариант полипептида IgG-Fc и/или второй вариант полипептида IgG-Fc содержат аргинин в положении 93 в SEQ ID NO: 2, или аргинин в положении 93 в SEQ ID NO: 3.
Вариант осуществления изобретения 85. Полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов 1-84, где указанный полипептид представляет собой антитело, слитое антитело или слитый полипептид.
Вариант осуществления изобретения 86. Непрерывный полипептид, содержащий:
а) первый полипептид глюкагон-подобного пептида-1 (GLP1) (GLP1A);
b) первый линкер (L1);
c) Fc-полипептид (Fc) из одного вида животных-компаньонов;
d) необязательно, второй линкер (L2); и
е) необязательно, второй полипептид GLP-1 (GLP1B).
Вариант осуществления изобретения 87. Непрерывный полипептид по варианту 65, содержащий:
формулу (I): GLP1A-L1-Fc; или
формулу (II): Fc-L1-GLP1A.
Вариант осуществления изобретения 88. Непрерывный полипептид по варианту 65, содержащий:
формулу (III): GLP1A-L1-Fc-L2-GLP1B.
Вариант осуществления изобретения 89. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-88, где GLP1B, если он присутствует, содержит ту же аминокислотную последовательность, что и GLP1A.
Вариант осуществления изобретения 90. Непрерывный полипептид, содержащий:
а) полипептид глюкагон-подобного пептида-1 (GLP1);
b) первый линкер (L1);
c) Fc-полипептид (Fc);
d) второй линкер (L2); и
е) глюкагоновый полипептид (Gluc).
Вариант осуществления изобретения 91. Непрерывный полипептид по варианту 90, содержащий:
формулу (IV): GLP1-L1-Fc-L2-Gluc; или
формулу (V): Gluc-L1-Fc-L2-GLP1.
Вариант осуществления изобретения 92. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-91, где GLP1A, GLP-1 и/или GLP1B, если присутствуют, содержат полипептид GLP-1 дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 93. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-92, где GLP1A, GLP1 и/или GLP1B, если присутствуют, представляют собой вариант полипептида GLP1.
Вариант осуществления изобретения 94. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-93, где GLP1A, GLP1 и/или GLP1B, если присутствуют, содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 98 или SEQ ID NO: 99.
Вариант осуществления изобретения 95. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-94, где глюкагоновый полипептид содержит глюкагоновый полипептид дикого типа, необязательно, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
Вариант осуществления изобретения 96. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-95, где глюкагоновый полипептид является вариантом глюкагонового полипептида.
Вариант осуществления изобретения 97. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-96, где Fc-полипептид представляет собой IgG-Fc человека.
Вариант осуществления изобретения 98. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-97, где Fc-полипептид представляет собой IgG1-Fc, IgG2-Fc, IgG3-Fc или IgG4-Fc человека.
Вариант осуществления изобретения 99. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-98, где Fc-полипептид представляет собой Fc-область из одного вида животных-компаньонов.
Вариант осуществления изобретения 100. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-97 или 99, где Fc-полипептид содержит:
а) IgG-A-Fc, IgG-B-Fc, IgG-C-Fc или IgG-D-Fc собачьих;
b) IgG1-Fc, IgG2-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc, IgG5-Fc, IgG6-Fc или IgG7-Fc лошадиных; или
c) IgG1a-Fc, IgG1b-Fc или IgG2-Fc кошачьих.
Вариант 101. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86 до 100, где полипептид представляет собой Fc-дикий тип IgG, Fc-полипептид.
Вариант осуществления изобретения 102. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-100, где Fc-полипептид представляет собой вариант полипептида IgG-Fc.
Вариант осуществления изобретения 103. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-102, где полипептид содержит Fc-полипептид, непрерывный полипептид или гетеродимерный белок по любому из вариантов осуществления 1-84.
Вариант осуществления изобретения 104. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 85-102, где непрерывный полипептид имеет более продолжительное время полужизни в сыворотке, чем полипептид GLP1 дикого типа.
Вариант осуществления изобретения 105. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-104, где L1 и L2, если они присутствуют, каждый независимо, представляет собой гибкий линкер.
Вариант осуществления изобретения 106. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-105, где аминокислотные последовательности L1 и L2, если они присутствуют, каждая независимо, содержат 100%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 85% аминокислотных остатков серина и/или глицина.
Вариант осуществления изобретения 107. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-106, где непрерывный полипептид удлинен на своем С-конце.
Вариант осуществления изобретения 108. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-107, где непрерывный полипептид содержит остаток глицина, два остатка глицина, три остатка глицина, четыре остатка глицина, пять остатков глицина, шесть остатков глицина, семь остатков глицина, восемь остатков глицина или больше, чем восемь остатков глицина, на С-конце.
Вариант осуществления изобретения 109. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-108, где непрерывный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94 или SEQ ID NO: 95 на своем С-конце.
Вариант осуществления изобретения 110. Непрерывный полипептид по любому из вариантов осуществления 86-109, где непрерывный полипептид содержит:
а) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31; SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36; SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41; SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 10; или
b) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58 или SEQ ID NO: 59.
Вариант осуществления изобретения 111. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31; SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36; SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41; SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106.
Вариант осуществления изобретения 112. Полипептид, гетеродимерный белок или непрерывный полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления, где по меньшей мере одна аминокислотная модификация или замена содержит аминокислотную замену производным аминокислоты.
Вариант осуществления изобретения 113. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая полипептид, гетеродимерный белок или непрерывный полипептид по любому из предшествующих вариантов осуществления.
Вариант осуществления изобретения 114. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по варианту 113.
Вариант осуществления изобретения 115. Способ получения полипептида, включающий культивирование клетки-хозяина по варианту 114 и выделение полипептида.
Вариант осуществления изобретения 116. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид, гетеродимерный белок или непрерывный полипептид по любому из вариантов 1-112 и фармацевтически приемлемый носитель.
Вариант осуществления изобретения 117. Способ повышения продукции цАМФ в клетке, причем указанный способ включает воздействие на клетку полипептидом, гетеродимерным белком, непрерывным полипептидом или фармацевтической композицией по любому из вариантов осуществления 1-112 или 116 при условиях, позволяющих связывание полипептида, гетеродимерного белка или непрерывного полипептида с GLP1R.
Вариант осуществления изобретения 118. Способ по варианту 117, где клетка подвергается воздействию полипептида, гетеродимерного белка, непрерывного полипептида или фармацевтической композиции ex vivo.
Вариант осуществления изобретения 119. Способ по варианту 117, где клетка подвергается воздействию полипептида, гетеродимерного белка, непрерывного полипептида или фармацевтической композиции in vivo.
Вариант осуществления изобретения 120. Способ по любому из вариантов 118-119, где клетка представляет собой клетку человека, клетку представителя семейства собачьих, клетку представителя семейства кошачьих или клетку представителя семейства лошадиных.
Вариант осуществления изобретения 121. Способ доставки полипептида субъекту, включающий введение полипептида, гетеродимерного белка, непрерывного полипептида или фармацевтической композиции по любому из вариантов 1-112 или 116 парентерально.
Вариант осуществления изобретения 122. Способ доставки полипептида субъекту, включающий введение полипептида, гетеродимерного белка, непрерывного полипептида или фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществления 1-112 или 116 внутримышечным путем, внутрибрюшинным путем, интрацереброспинальным путем, подкожным путем, интра-артериальным путем, внутрисуставным путем, интратекальным путем или ингаляционным путем.
Вариант осуществления изобретения 123. Способ лечения субъекта, имеющего диабет или ожирение, причем способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества полипептида, гетеродимерного белка, непрерывного полипептида или фармацевтической композиции по любому из вариантов 1-112 или 116.
Вариант осуществления изобретения 124. Способ по варианту осуществления 123, включающий введение инсулина, ингибитора DPP4, ингибитора SGLT2, бигуанидов, сульфонилмочевин, производных меглитинида, ингибитора альфа-глюкозидазы, тиазолидинедиона (TZD), амилиномиметика, секвестранта желчных кислот, агониста допамина.
Вариант осуществления изобретения 125. Способ по любому из вариантов 121-124, где субъект является человеком.
Вариант осуществления изобретения 126. Способ по любому из вариантов 121-124, где субъект представляет собой животного-компаньона.
Вариант осуществления изобретения 127. Способ по варианту 126, где животное-компаньон принадлежит семейству кошачьих, собачьих или лошадиных.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0006] На фиг.1 показано выравнивание последовательностей Fc-областей IgG-A, B, C и D у представителей семейства собачьих. В рамку заключены области, вероятно, контактирующие с белком А.
[0007] На фигуре 2А показано электрофоретическое разделение в ДСН-ПААГ полипептидов GLP1-G8/GLP-2G_III_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 23; «вариант GLP1А» на этой фигуре) и GLP1-G8_I_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 24; «вариант GLP1В» на этой фигуре), имеющих шарнирную область кошачьего IgG2 дикого типа с одной дисульфидной связью, в отсутствие и в присутствии восстанавливающего агента (DTT).
[0008] На фигуре 2B показано электрофоретическое разделение в ДСН-ПААГ полипептидов GLP1-G8/GLP-2G_III_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 25; «вариант GLP1 MA» на этой фигуре) и GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26; «вариант GLP1 MB» на этой фигуре), имеющих вариант шарнирной области IgG2 кошачьих с двумя дисульфидными связями, в отсутствие и в присутствии восстанавливающего агента (DTT).
[0009] На фигуре 3 показаны результаты анализа с помощью набора cAMP CHO-K1 GLP1R для оценки активности GLP1-G8/GLP1-2G_III_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 25) и GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26) по сравнению с контрольными образцами (GLP1 (7-37) и Экстендином-4).
[0010] На фигуре 4 показаны результаты клеточного метода анализа для оценки активности GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26) («GLP1-B» на этой фигуре) после 1 года хранения с использованием клеток CHOK1-GLP1R и набора cAMP-glo (n=2).
[0011] На фигуре 5 показан результат анализа методом иммуноблоттинга для GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26) («GLP1B» на этой фигуре) после инкубации в сыворотке в течение 24 часов при 37°C (дорожка 1), в PBS в течение 24 часов при 37°C (дорожка 2), в PBS в течение 24 часов при температуре 4°С (дорожка 9). Использовали мышиные антитела против GLP1.
[0012] Фигура 6 представляет собой график зависимости концентрации GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO:26) в сыворотке крови от времени после подкожного введения 5 кошкам, которую измеряли количественным методом ELISA.
[0013] На фигуре 7 представлен график зависимости концентрации GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO:26) в сыворотке крови от времени после подкожного введения 5 кошкам, которую измеряли клеточным методом анализа активности. Средняя AUC за период от 0 до 168 часов составляла около 840 мкг(ч)/мл, и среднее t1/2 составляло 36 часов.
ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0014] В таблице 1 приведен список примеров последовательностей, указанных в настоящем документе.
Белок А -
C1q -
CD16 -
Белок А +
C1q +
CD16 +
Белок А +
C1q +
CD16 +
Белок А -
C1q +
CD16 +
Белок А -
C1q +
CD16 +
Белок А -
C1q -
CD16 -
C1q -
Белок А +
I(21)T
R(23)L
T(25)A
E(80)G
T(205)A
Q(207)H
C1q +
Белок А +
I(21)T
V(23)L
T(24)I
C1q -
Белок А +
I(21)T
R(23)L
T(25)A
E(80)G
Q(207)H
Гетеродимерная цепь 1 T(138)Y
Гетеродимерная цепь 2
Y(181)T
Гетеродимерная цепь 1 T(137)Y
Гетеродимерная цепь 2
Y(180)T
Гетеродимерная цепь 1 T(137)Y
Гетеродимерная цепь 2
Y(180)T
Гетеродимерная цепь 1 T(138)Y
Гетеродимерная цепь 2
Y(181)T
Гетеродимерная цепь 3
T(138)W
Гетеродимерная цепь 4
T(138)S
L(140)A
Y(181)T
Гетеродимерная цепь 3
T(137)W
Гетеродимерная цепь 4
T(137)S
L(139)A
Y(180)T
Гетеродимерная цепь 3
T(137)W
Гетеродимерная цепь 4
T(137)S
L(139)A
Y(180)T
Гетеродимерная цепь 3
T(138)W
Гетеродимерная цепь 4
T(138)S
L(140)A
Y(181)T
Белок А +
C1q -
Белок А +
C1q +
Белок А +
C1q +
Гетеродимерная цепь 1
T(154)W
Гетеродимерная цепь 2
T(154)S
L(156)A
Y(197)T
Гетеродимерная цепь 1
T(154)W
Гетеродимерная цепь 2
T(154)S
L(156)A
Y(197)T
Гетеродимерная цепь 1
T(154)W
Гетеродимерная цепь 2
T(154)S
L(156)A
Y(197)T
Hinge Cys
G(14)C
K(16)P
K(16)P
K(16)P
Белок А -
C1q -
C1q -
Белок А +
A(29)T
F(217)Y
X8 может быть G или S
C1q -
Белок А +
I(21)T
Q(207)H
C1q +
Белок А +
I(21)T
C1q -
Белок А +
I(21)T
Q(207)H
Белок А +
C1q +
Белок А -
C1q -
Белок А +
C1q+
Белок А +
C1q +
Белок А -
C1q -
Белок А -
C1q -
Белок А +
C1q +
Белок А +
C1q -
K(87)S
C1q -
Белок А +
F(203)Y
C1q -
Белок А +
A(15)T
F(203)Y
Белок А -
C1q -
Белок А -
C1q -
Q(20)P
Белок А -
C1q -
C(3)S
Белок А -
C1q -
C(3)S
Q(20)P
Белок А +
C1q -
A(45)T
F(233)Y
Белок А +
C1q -
Q(20)P
A(45)T
F(233)Y
Белок А +
C1q -
C(3)S
Q(20)P
A(45)T
F(233)Y
Белок А +
C1q -
K(87)S
Белок А +
C1q -
K(87)S
C1q -
Белок А +
V(199)L
E(200)H
C1q -
Белок А +
I(199)L
R(200)H
H(201)N
T(202)H
Белок А +
C1q -
K(87)S
Белок А +
C1q -
K(93)R
Белок А -
C1q -
K(93)R
Белок А +
C1q +
Белок А +
C1q +
Белок А +
C1q -
P(198)A
Белок А +
C1q -
P(198)A
Белок А +
C1q -
P(198)A
Белок А +
C1q -
P(198)A
C1q -
K(93)R
Белок А +
I(21)T
V(23)L
T(24)I
Белок А -
C1q -
Белок А +
C1q +
CD16 -
M(5)P
Белок А +
C1q +
CD16 -
P(39)R
Белок А +
C1q +
CD16 -
D(38)G
Белок А +
C1q +
CD16 -
K(97)I
Белок А +
C1q +
CD16 -
A(98)G
Белок А +
C1q +
CD16 -
D(38)G
K(97)I
A(98)G
Белок А +
C1q -
CD16 -
D(38)G
K(93)R
K(97)I
A(98)G
Белок А +
C1q +
CD16 -
M(5)P
P(39)R
Белок А +
C1q -
CD16 -
M(5)P
P(39)R
K(93)R
Белок А +
C1q +
CD16 -
L(5)P
Белок А +
C1q +
CD16 -
P(39)R
Белок А +
C1q +
CD16 -
D(38)G
Белок А +
C1q +
CD16 -
K(97)I
Белок А +
C1q +
CD16 -
A(98)G
Белок А +
C1q -
CD16 +
K(93)R
Белок А +
C1q +
CD16 -
D(38)G
K(97)I
A(98)G
Белок А +
C1q -
CD16 -
D(38)G
K(93)R
K(97)I
A(98)G
Белок А +
C1q +
CD16 -
L(5)P
P(39)R
Белок А +
C1q -
CD16 -
M(5)P
P(39)R
K(93)R
N(68)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
G(69)P
T(70)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(68)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
G(69)P
T(70)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(68)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
G(69)P
T(70)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(68)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(69)P
T(70)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(85)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(86)P
T(87)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(85)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(86)P
T(87)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(85)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(86)P
T(87)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(62)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(63)P
T(64)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(62)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(63)P
T(64)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(62)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(63)P
T(64)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(62)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(63)P
T(64)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(62)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(63)P
T(64)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(62)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(63)P
T(64)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
N(62)X1
X1= любая аминокислота, за исключением N
S(63)P
T(64)X2
X2=любая аминокислота, за исключением T или S
ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0015] Описаны варианты полипептидов IgG-Fc у животных-компаньонов, таких как собаки, лошади и кошки. В некоторых вариантах осуществления варианты полипептидов IgG-Fc имели повышенное связывание с белком А, пониженное связывание с C1q, пониженное связывание с CD16, повышенную стабильность, увеличенную продукцию в рекомбинантной системе, увеличенное образование дисульфидных связей в шарнирной области и/или увеличенную способность образовывать гетеродимерные полипептиды. В некоторых вариантах осуществления антитела, фрагменты антител или слитые белки содержат вариант полипептида IgG-Fc. Также предложены способы получения или очистки вариантов полипептидов IgG-Fc и способы введения вариантов полипептидов IgG-Fc домашним животным.
[0016] Также предложены различные варианты осуществления, относящиеся к непрерывным полипептидам и гетеродимерным полипептидам, содержащим один или более вариантов полипептида(ов) GLP-1, имеющих более продолжительное время полужизни в сыворотке крови. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения непрерывные полипептиды или гетеродимерные полипептиды содержат полипептид GLP1 и глюкагоновый полипептид в качестве двойного агониста рецептора GLP1 и рецептора глюкагона. В некоторых вариантах осуществления такие полипептиды могут быть использованы для лечения, например, диабета, ожирения или связанных с ними заболеваний у животных-компаньонов, такие как собаки, кошки и лошади.
[0017] Для удобства читателя приведены нижеследующие определения терминов, используемых в данном описании.
[0018] Используемые в данном описании численные термины, такие как KD, рассчитываются на основании научных измерений и, таким образом, могут иметь соответствующую погрешность измерения. В некоторых случаях численный термин может включать числовые значения, которые округлены до ближайшей значимой цифры.
[0019] Используемое в данном описании единственное число означает «по меньшей мере один» или «один или более», если не указано иное. Используемый в данном описании термин «или» означает «и/или», если не указано иное. В контексте множественной зависимости пункта формулы, использование «или» при указании на другие пункты формулы изобретения относится к таким пунктам только в качестве альтернативы.
Примеры вариантов полипептидов IgG-Fc
[0020] Предложены новые варианты полипептидов IgG-Fc, например, варианты полипептидов IgG-Fcо для увеличенного связывания с белком А, для уменьшенного связывания с C1q, для уменьшенного связывания с CD16, для повышения стабильности, для увеличения продукции в рекомбинантной системе, для увеличения образования дисульфидных связей в шарнирной области и/или для образования гетеродимерных белков.
[0021] «Аминокислотная последовательность» означает последовательность аминокислотных остатков в пептиде или белке. Термины «полипептид» и «белок» используются взаимозаменяемо для обозначения полимера из аминокислотных остатков, и не ограничены минимальной длиной. Такие полимеры из аминокислотных остатков могут содержать природные или неприродные аминокислотные остатки, и включают, но не ограничиваются ими, пептиды, олигопептиды, димеры, тримеры и мультимеры аминокислотных остатков. Как полноразмерные белки, так и их фрагменты, входят в определение. Термины также включают постэкспрессионные модификации полипептида, например, гликозилирование, ацетилирование, сиалилирование, фосфорилирование и т.п. Кроме того, в настоящем описании «полипептид» относится к белку, который включает модификации, такие как делеции, добавления и замены (обычно консервативные по природе), в нативной последовательности, до тех пор, пока белок сохраняет желаемую активность. Эти модификации могут быть направленными, например, с помощью сайт-направленного мутагенеза, или могут быть случайными, например, в результате мутаций в хозяевах, которые продуцируют белки, или ошибок при ПЦР-амплификации.
[0022] «Кристаллизующийся фрагмент» или «Fc-полипептид» представляет собой участок молекулы антитела, который взаимодействует с эффекторными молекулами и клетками. Он включает С-концевой участок тяжелых цепей иммуноглобулинов. В данном описании, Fc-полипептид включает фрагменты Fc-домена, имеющие один или более типов биологической активности полноразмерного Fc-полипептида. В некоторых вариантах осуществления биологической активностью Fc-полипептида является способность связываться с FcRn. В некоторых вариантах осуществления биологической активностью Fc-полипептида является способность связываться с C1q. В некоторых вариантах осуществления биологической активностью Fc-полипептида является способность связываться с CD16. В некоторых вариантах осуществления биологической активностью Fc-полипептида является способность связываться с белком A. «Эффекторная функция» Fc-полипептида представляет собой действие или активность, выполняемые полностью или частично любым антителом в ответ на стимул, и может включать фиксацию комплемента и/или индукцию ADCC (антителозависимой клеточной цитотоксичности).
[0023] «IgX-Fc» относится к Fc-полипептиду, полученному из определенного изотипа антитела (например, IgG, IgA, IgD, IgE, IgM и т.п.), где «X» обозначает изотип антитела. Таким образом, «IgG-Fc» означает, что Fc-полипептид получен из γ-цепи, «IgA-Fc» означает, что Fc-полипептид получен из α-цепи, «IgD-Fc» означает, что Fc-полипептид получен из β-цепи, «IgE-Fc» означает, что Fc-полипептид получен из ε-цепи, «IgM-Fc» означает, что Fc-полипептид получен из μ-цепи и т.д. В некоторых вариантах осуществления, полипептид IgG-Fc содержит шарнирную, СН2- и СН3-области, но не включает CH1 или CL. В некоторых вариантах осуществления, IgG-Fc полипептид содержит СН2 и СН3, но не включает CH1-, шарнирную или CL-области. В некоторых вариантах осуществления, IgG-Fc полипептид содержит CH1-, шарнирную, CH2-, CH3-области с или без CL. «IgX-N Fc» или «IgGXN Fc» означает, что полипептид Fc получен из определенного подкласса изотипа антител (такого как подклассы IgG собак: IgG-A, IgG-B, IgG-C или IgG-D; подклассы IgG кошек: IgG1a, IgG1b или IgG2; или подклассы IgG лошадей: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6 или IgG7 и т.п.), где «N» обозначает подкласс.
[0024] «Шарнирная область» относится к любому участку Fc-полипептида или варианта Fc-полипептида, который обогащен пролинами и содержит по меньшей мере один остаток цистеина, расположенный между CH1 и СН2 полноразмерной константной области тяжелой цепи.
[0025] В некоторых вариантах осуществления, шарнирная область способна образовывать дисульфидные связи в пределах той же шарнирной области, в пределах того же Fc-полипептида, с шарнирной областью отдельного Fc-полипептида или с отдельным Fc-полипептидом. В некоторых вариантах осуществления изобретения шарнирная область содержит по меньшей мере один, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по крайней мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять остатков пролина.
[0026] Термин «животные-компаньоны» относится к животным, подходящим для того, чтобы быть спутником человека. В некоторых вариантах осуществления изобретения, животное-компаньон является представителем семейства собачьих (или собакой), представителем семейства кошачьих (или кошкой) или представителем семейства лошадиных (или лошадью). В некоторых вариантах осуществления изобретения, животное-компаньон является мелким млекопитающим, таким как представитель семейства собачьих, представитель семейства кошачьих, собака, кошка, кролик, хорек, морская свинка, грызун и т.п. В некоторых вариантах осуществления изобретения, животное-компаньон являются сельскохозяйственным животным, таким как лошадь, корова, свинья, и т.п.
[0027] В некоторых вариантах осуществления полипептид IgX-Fc или полипептид IgX-N Fc получен из животного-компаньона, такого как собака, кошка или лошадь. В некоторых вариантах осуществления полипептиды IgG-Fc выделяют из тяжелых цепей гамма иммуноглобулинов собак, таких как IgG-A, IgG-B, IgG-C или IgG-D. В некоторых случаях, полипептиды IgG-Fc выделяют из тяжелых цепей гамма иммуноглобулинов кошек, таких как IgG1a, IgG1b или IgG2. В других случаях, полипептиды IgG-Fc выделяют из тяжелых цепей гамма иммуноглобулинов лошадей, таких как IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6 или IgG7.
[0028] Термины «IgX-Fc» и «IgX-Fc-полипептид» включают полипептиды IgX-Fc дикого типа и варианты полипептидов IgX-Fc, если не указано иное.
[0029] «Дикий тип» относится к немутированной версии полипептида, которая встречается в природе, или ее фрагменту. Полипептид дикого типа может быть получен рекомбинантно.
[0030] В некоторых вариантах осуществления полипептид IgG-Fc дикого типа содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118.
[0031] «Вариант» представляет собой полипептид, который отличается от эталонного полипептида одной или более ненативными аминокислотными заменами, делециями и/или добавлениями. В некоторых вариантах осуществления вариант сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность эталонного полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант (например, вариант собачьего IgG-А Fc, вариант собачьего IgG-С Fc, вариант собачьего IgG-D-Fc, вариант лошадиного IgG2-Fc, вариант лошадиного IgG5-Fc или вариант лошадиного IgG6-Fc) имеет активность, которая у эталонного полипептида по существу отсутствует. Например, в некоторых вариантах осуществления вариант собачьего IgG-А Fc, вариант собачьего IgG-С Fc, вариант собачьего IgG-D-Fc, вариант лошадиного IgG2-Fc, вариант лошадиного IgG5-Fc или вариант лошадиного IgG6-Fc связывается с белком А.
[0032] В данном документе «процент (%) идентичности аминокислотных последовательностей» и «гомология» в отношении молекулы нуклеиновой кислоты или полипептидной последовательности определяются как процент нуклеотидов или аминокислотных остатков в эталонной последовательности, которые идентичны нуклеотидным или аминокислотным остаткам в конкретной молекуле нуклеиновой кислоты или полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения разрывов, если это необходимо для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и не рассматривая консервативные замены как часть идентичности последовательностей. Выравнивание для определения процента идентичности последовательностей может быть осуществлено различными способами, которые известны специалистам в данной области техники, например, с использованием общедоступных компьютерных программ, таких как программы BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALINE™ (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определить соответствующие параметры для проведения выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.
[0033] На некоторых вариантах осуществления вариант имеет, по меньшей мере приблизительно 50% идентичности по последовательности с эталонной молекулой нуклеиновой кислоты или полипептида после выравнивания последовательностей и введения разрывов, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и без учета любых консервативных замен как части идентичности последовательностей. Такие варианты включают, например, полипептиды, в которых один или более аминокислотных остатков добавлены, удалены на N- или С-конце полипептида. В некоторых вариантах осуществления вариант имеет по меньшей мере примерно 50% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 60% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 65% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 70% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 75% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 80% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 85% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 90% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 95% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 97% идентичности по последовательности, по меньшей мере примерно 98% идентичности по последовательности или по меньшей мере примерно 99% идентичности по последовательности с эталонной последовательностью нуклеиновой кислоты или полипептида.
[0034] «Точечная мутация» представляет собой мутацию, которая включает один аминокислотный остаток. Мутацией может быть потеря аминокислоты, замена одного аминокислотного остатка на другой, или введение дополнительного аминокислотного остатка.
[0035] Термин «аминокислотная замена» относится к замене одной аминокислоты в полипептиде другой аминокислотой. В некоторых вариантах осуществления, аминокислотная замена является консервативной заменой. Неограничивающие примеры консервативных аминокислотных замен представлены в таблице 2. Аминокислотные замены могут быть введены в молекулу, представляющую интерес, и продукты проанализированы на желаемую активность, например, на сохранение/улучшение связывания антигена, снижение иммуногенности или улучшенные ADCC или CDC или улучшенные фармакокинетические параметры.
[0036] Таблица 2.
[0037] Аминокислоты могут быть сгруппированы в соответствии с общими свойствами боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислотные: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
[0038] Неконсервативные замены представляют собой замену члена одного из этих классов на аминокислоту из другого класса.
[0039] Термин «вариант IgG-Fc», используемый в настоящем документе, относится к полипептиду IgG-Fc, который отличается от эталонного полипептида IgG-Fc одной или более аминокислотными заменами, делециями и/или добавлениями и по существу сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность эталонного полипептида IgG-Fc.
[0040] Термин «производное аминокислоты», используемый в настоящем документе, относится к любой аминокислоте, модифицированной аминокислоте и/или аналогу аминокислоты, которые не являются одной из 20 общеизвестных природных аминокислот, найденных в организме человека. Примеры производных аминокислот включают природные аминокислоты, не встречающиеся в организме человека (например, селеноцистеин и пирролизин, которые могут встречаться в некоторых микроорганизмах) и неприродные аминокислоты. Типичные производные аминокислот, включают, но не ограничиваются ими, производные аминокислот, коммерчески доступные у производителей химической продукции (например, доступные по адресу sigmaaldrich.com/chemistry/chemistry-products.html?TablePage=16274965 на 6 мая 2017 года, который включен в данное описание путем ссылки). Одно или более производных аминокислот могут быть введены в полипептид в определенном месте с помощью системы трансляции, которая использует клетки-хозяева, ортогональные аминоацил-тРНК-синтетазы, полученные из синтетаз эубактерий, ортогональных тРНКа и производное аминокислоты. Более подробное описание см., например, в патенте США № 9624485.
[0041] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену производным аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления производное аминокислоты представляет собой производное аланина, производное цистеина, производное аспарагиновой кислоты, производное глутаминовой кислоты, производное фенилаланина, производное глицина, производное гистидина, производное изолейцина, производное лизина, производное лейцина, производное метионина, производное аспарагина, производное пролина, производное глутамина, производное аргинина, производное серина, производное треонина, производное валина, производное триптофана или производное тирозина.
[0042] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc включает вариант полипептида IgG-Fc животного-компаньона. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит вариант собачьего полипептида IgG-Fc, вариант лошадиного полипептида IgG-Fc или вариант кошачьего полипептида IgG-Fc.
Примеры вариантов полипептидов IgG-Fc с измененным связыванием с белком А
[0043] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет модифицированную аффинность связывания с белком А. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет увеличенную аффинность связывания с белком А. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc может быть очищен с использованием хроматографии на колонке с белком A.
[0044] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21, положению 23, положению 25, положению 80, положению 205 и/или положению 207 в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21, положению 23 и/или положению 24 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 21, положению 23, положению 25, положению 80 и/или положению 207 в SEQ ID NO: 4.
[0045] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 15 и/или положению 203 в SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 199 и/или положению 200 в SEQ ID NO: 67. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 199, положению 200, положению 201 и/или 202 в SEQ ID NO: 68.
[0046] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 21, положении 23, положении 25, положении 80, положении 205 и/или положении 207 в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения, вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 21, положении 23 и/или положении 24 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 21, положении 23, положении 25, положении 80 и/или положении 207 в SEQ ID NO: 3.
[0047] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 15 и/или положении 203 в SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 199 и/или положении 200 в SEQ ID NO: 67. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 199, положении 200, положении 201 и/или положении 202 в SEQ ID NO: 68.
[0048] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 1, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 1, глицин в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении, соответствующем положению 205 в SEQ ID NO: 1, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 3, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 3, и/или изолейцин в положении, соответствующем положению 24 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит треонин в положении, соответствующем положению 21 в SEQ ID NO: 4, лейцин в положении, соответствующем положению 23 в SEQ ID NO: 4, аланин в положении, соответствующем положению 25 в SEQ ID NO: 4, глицин в положении, соответствующем положению 80 в SEQ ID NO: 3, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 207 в SEQ ID NO: 4.
[0049] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит треонин или валин в положении, соответствующем положению 15 в SEQ ID NO: 64, и/или тирозин или валин в положении, соответствующем положению 203 в SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит лейцин в положении, соответствующем положению 199 в SEQ ID NO: 67, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 200 в SEQ ID NO: 67. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит изолейцин в положении, соответствующем положению 199 в SEQ ID NO: 68, гистидин в положении, соответствующем положению 200 в SEQ ID NO: 68, аспарагин в положении, соответствующем положению 201 в SEQ ID NO: 68, и/или гистидин в положении, соответствующем положению 202 в SEQ ID NO: 68.
[0050] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 1, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении 25 в SEQ ID NO: 1, глицин в положении 80 в SEQ ID NO: 1, аланин в положении 205 в SEQ ID NO: 1 и/или гистидин в положении 207 в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc включает треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 3, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 3 и/или изолейцин в положении 24 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит треонин в положении 21 в SEQ ID NO: 4, лейцин в положении 23 в SEQ ID NO: 4, аланин в положении 25 в SEQ ID NO: 4, глицин в положении 80 в SEQ ID NO: 4 и/или гистидин в положении 207 в SEQ ID NO: 4.
[0051] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит треонин или валин в положении 15 в SEQ ID NO: 64 и/или тирозин или валин в положении 203 в SEQ ID NO: 64. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит лейцин в положении 199 в SEQ ID NO: 67 и/или гистидин в положении 200 в SEQ ID NO: 67. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит изолейцин в положении 199 в SEQ ID NO: 68, гистидин в положении 200 в SEQ ID NO: 68, аспарагин в положении 201 в SEQ ID NO: 68 и/или гистидин в положении 202 в SEQ ID NO: 68.
[0052] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62 или SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 75, или SEQ ID NO: 76.
Примеры вариантов полипептидов IgG-Fc с модифицированным связыванием с CD16
[0053] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет модифицированную аффинность связывания с CD16. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет уменьшенную аффинность связывания с CD16. В некоторых вариантах осуществления вариант IgG-Fc может давать сниженную антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC).
[0054] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 5, положению 38, положению 39, положению 97 и/или положению 98 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 5, положению 38, положению 39, положению 97 и/или положению 98 в SEQ ID NO: 3.
[0055] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 5, положении 38, положении 39, положении 97 и/или положении 98 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 5, положении 38, положении 39, положении 97 и/или положении 98 в SEQ ID NO: 3.
[0056] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении, соответствующем положению 5, глицин в положении, соответствующем положению 38, аргинин в положении, соответствующем положению 39, изолейцин в положении, соответствующем положению 97, и/или глицин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении, соответствующем положению 5, глицин в положении, соответствующем положению 38, аргинин в положении, соответствующем положению 39, изолейцин в положении, соответствующем положению 97, и/или глицин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 3.
[0057] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении 5, глицин в положении 38, аргинин в положении 39, изолейцин в положении 97 и/или глицин в положении 98 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении 5, глицин в положении 38, аргинин в положении 39, изолейцин в положении 97 и/или глицин в положении 98 в SEQ ID NO: 3.
[0058] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID N: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 156 или SEQ ID NO: 157.
Примеры вариантов полипептидов IgG-Fc с модифицированным связыванием с C1q
[0059] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет модифицированную аффинность связывания с C1q. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет сниженную аффинность связывания с C1q. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc может иметь сниженную фиксацию комплемента. В некоторых вариантах осуществления вариант IgG-Fc может иметь сниженный комплемент-опосредованный иммунный ответ.
[0060] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем позиция 93 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 81.
[0061] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 93 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 93 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 87 в SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 87 в SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 87 в SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 198 в SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 198 в SEQ ID NO: 81.
[0062] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аргинин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аргинин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит замену серином в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аланин в положении, соответствующем в положение 198 из SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аланин в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 81.
[0063] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аргинин в положении 93 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 93 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 87 в SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 87 в SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 87 в SEQ ID NO: 66. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аланин в положении 198 в SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аланин в положении 198 в SEQ ID NO: 81.
[0064] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79 или SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 или SEQ ID NO: 77. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82 или SEQ ID NO: NO: 83.
Примеры вариантов полипептидов IgG-Fc с модифицированной межцепочечной дисульфидной связью
[0065] В некоторых вариантах осуществления вариант кошачьего полипептида IgG-Fc имеет по меньшей мере одну дополнительную межцепочечную дисульфидную связь относительно кошачьего полипептида IgG-Fc дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант кошачьего полипептида IgG-Fc имеет, по меньшей мере одну дополнительную межцепочечную дисульфидную связь в шарнирной области. В некоторых вариантах осуществления вариант кошачьего полипептида IgG2-Fc по меньшей мере с одной дополнительной межцепочечной дисульфидной связью имеет повышенную межцепочечную стабильность по сравнению с диким типом кошачьего полипептида IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG имеет по меньшей мере одну аминокислотную модификацию в шарнирной области относительно полипептида IgG-Fc дикого типа. В некоторых вариантах осуществления полипептид IgG-Fc дикого типа представляет собой кошачий или лошадиный полипептид IgG-Fc дикого типа. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит шарнирную область или участок шарнирной области из полипептида IgG-Fc другого изотипа. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит шарнирную область из кошачьего полипептида IgG-1a-Fc дикого типа, из кошачьего полипептида IgG-1b-Fc дикого типа или из лошадиного полипептида IgG1-Fc дикого типа. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG2-Fc имеет увеличенную продукцию в рекомбинантной систем и/или увеличенное образование дисульфидных связей в шарнирной области относительно полипептида IgG-Fc дикого типа. В некоторых вариантах осуществления увеличенная продукция в рекомбинантной системе и/или увеличенное образование дисульфидных связей в шарнирной области могут быть определены с помощью электрофоретического разделения в ДСН-ПААГ в восстановительных и/или невосстановительных условиях.
[0066] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит цистеин в положении, соответствующем положению 8, положению 9, положению 10, положению 11, положению 12, положению 13, положению 14, положению 15 или положению 16 в SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит цистеин в положении 8, положении 9, положении 10, положении 11, положении 12, положении 13, положении 14, положении 15 или положении 16 в SEQ ID NO: 16. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит последовательность SEQ ID NO: 17.
[0067] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 16 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 3, и/или в положении, соответствующем положению 20, в SEQ ID NO: 129.
[0068] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 16 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную замену в положении 3 и/или в положении, соответствующем положению 20, в SEQ ID NO: 129.
[0069] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении, соответствующем положению 16 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 3, и/или пролин в положении, соответствующем положению 20, в SEQ ID NO: 129.
[0070] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит пролин в положении 16 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 3 и/или пролин в положении 20 в SEQ ID NO: 129.
[0071] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит последовательность SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 125 или SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID N: 134, SEQ ID NO: 135.
Примеры вариантов полипептидов IgG-Fc для гетеродимерных полипептидов
[0072] В некоторых вариантах осуществления гетеродимерный полипептид, предложенный в настоящем изобретении, представляет собой биспецифичное антитело. Биспецифичное антитело специфично связывается с двумя различными эпитопами или молекулами-мишенями. В некоторых вариантах осуществления биспецифичные антитела связываются с двумя различными эпитопами одной и той же молекулы-мишени. Биспецифичные антитела могут представлять собой полноразмерные антитела или фрагменты антител.
[0073] В некоторых вариантах осуществления гетеродимерный полипептид содержит первый вариант полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «выступ», и второй вариант полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «впадина». Неограничивающие примеры мутаций «выступ-впадина» описаны, например, в статье Merchant, A. M. et al. An efficient route to human bispecific IgG. Nat Biotechnol, 16(7):677-81 (1998).
[0074] В некоторых вариантах осуществления вариант собачьего или вариант кошачьего полипептида IgG-Fc включает «выступающую» мутацию. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc включает тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc включает тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc включает тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 137 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc включает тирозин или триптофан в положении, соответствующем положению 138 в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит триптофан в положении, соответствующем положению 154 в S SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
[0075] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит тирозин или триптофан в положении 138 в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит тирозин или триптофан в положении 137 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит тирозин или триптофан в положении 137 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит тирозин или триптофан в положении 138 в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит триптофан в положении 154 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
[0076] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc, содержащий «выступающую» мутацию, содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121 или SEQ ID NO: 123.
[0077] В некоторых вариантах осуществления вариант собачьего или вариант кошачьего полипептида IgG-Fc содержит мутацию «впадина». В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 138, аланин в положении, соответствующем положению 140, и/или треонин в положении, соответствующем положению 181, в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 137, аланин в положении, соответствующем положению 139, и/или треонин в положении, соответствующем положению 180, в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 137, аланин в положении, соответствующем положению 139, и/или треонин в положении, соответствующем положению 180, в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 138, аланин в положении, соответствующем положению 140, и/или треонин в положении, соответствующем положению 181, в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении, соответствующем положению 154, аланин в положении, соответствующем положению 156, и/или треонин в положении, соответствующем положению 197, в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
[0078] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 138, аланин в положении 140 и/или треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 137, аланин в положении 139 и/или треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 137, аланин в положении 139 и/или треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 138, аланин в положении 140 и/или треонин в положении 181 в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc содержит серин в положении 154, аланин в положении 156 и/или треонин в положении 197 в SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 117 или SEQ ID NO: 118.
[0079] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «впадина», содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 120, в SEQ ID NO: 122 или SEQ ID NO: 124.
[0080] В некоторых вариантах осуществления непрерывный полипептид содержит полипептид GLP1 и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «выступ». В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит глюкагоновый полипептид и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «выступ». В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит полипептид GLP1 и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «впадина». В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит глюкагоновый полипептид и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «впадина».
[0081] В некоторых вариантах осуществления, гетеродимерный полипептид содержит первый непрерывный полипептид, содержащий полипептид GLP1 и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «выступ», и второй непрерывный полипептид, содержащий глюкагоновый полипептид и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «впадина». В некоторых вариантах осуществления, гетеродимерный полипептид содержит первый непрерывный полипептид, содержащий глюкагоновый полипептид и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «выступ», и второй непрерывный полипептид, содержащий полипептид GLP1 и вариант собачьего или кошачьего полипептида IgG-Fc, содержащий мутацию «впадина».
Примеры полипептидов GLP-1 и глюкагоновых полипептидов
[0082] «GLP1» или «полипептид GLP1» в контексте настоящего описания представляет собой полипептид, содержащий полноразмерный глюкагон-подобный пептид-1 или его фрагмент, который связывается с рецептором глюкагон-подобного пептида 1 (GLP1R).
[0083] Например, «GLP1» относится к полипептиду GLP1 любого из позвоночных животных, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди и яванские макаки), грызуны (например, мыши и крысы) и животные-компаньоны (например, собаки, кошки и лошади), если не указано иное. В некоторых вариантах осуществления полипептид GLP1 представляет собой полипептид GLP1 дикого типа, такой как GLP1 (7-37) (SEQ ID NO: N: 85). В некоторых вариантах осуществления полипептид GLP1 представляет собой вариант полипептида GLP1, такой как GLP1 (7-36) (SEQ ID NO: 98), GLP1 (7-35) (SEQ ID NO: 99), GLP1-S8 (7-35) (SEQ ID NO: 86) или GLP1-G8 (7-35) (SEQ ID NO: 87). В некоторых вариантах осуществления, GLP1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.
[0084] «GLP1R» в контексте настоящего описания представляет собой полипептид, содержащий полноразмерный рецептор глюкагон-подобного пептида-1 или его фрагмент, который способен связываться с GLP1 дикого типа.
[0085] Например, «GLP1R» относится к полипептиду GLP1R любого из позвоночных животных, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди и яванские макаки), грызуны (например, мыши и крысы) и животные-компаньоны (например, собаки, кошки и лошади), если не указано иное. В некоторых вариантах осуществления GLP1R является фрагментом внеклеточного домена, который связывает полипептид GLP1 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления, кошачий GLP1R содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49. В некоторых вариантах осуществления, кошачий GLP1R содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48.
[0086] «Внеклеточный домен» («ECD») представляет собой участок полипептида, который продолжается от трансмембранного домена во внеклеточное пространство. Термин «внеклеточный домен», используемый в данном описании, может включать полноразмерный внеклеточный домен или может включать усеченный внеклеточный домен с отсутствующей один или более аминокислотами, который связывается со своим лигандом. Состав внеклеточного домена, может зависеть от алгоритма, используемого для определения того, какие аминокислоты погружены в мембрану. С помощью различных алгоритмов могут быть предсказаны, и с помощью различных систем могут быть проэкспрессированы различные внеклеточные домены для данного белка.
[0087] «Глюкагон» или «глюкагоновый полипептид» в контексте данного описания представляет собой полипептид, содержащий полноразмерный глюкагон или его фрагмент, который связывается с глюкагоновым рецептором.
[0088] Например, «глюкагон» относится к глюкагоновому полипептиду любого из позвоночных животных, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди и яванские макаки), грызуны (например, мыши и крысы) и животные-компаньоны (например, собаки, кошки и лошади), если не указано иное. В некоторых вариантах осуществления глюкагоновый полипептид представляет собой глюкагоновый полипептид дикого типа, например, SEQ ID NO: 21.
Примеры вариантов полипептидов IgG-Fc и слитых молекул
[0089] Полипептиды и другие молекулы могут содержать вариант полипептида IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления слитая молекула содержит вариант полипептида IgG-Fc, такой как варианты полипептидов IgG-Fc, описанные в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, антитело или фрагмент антитела содержит вариант полипептида IgG-Fc, такой как варианты полипептидов IgG-Fc, описанные в настоящем документе.
[0090] «Слитая молекула» в контексте настоящего описания относится к молекуле, содержащей один или более «слитых партнеров». В некоторых вариантах осуществления, слитые партнеры являются ковалентно связанными («слитыми»). Если два слитых партнера оба являются полипептидами, слитые полипептиды-партнеры могут быть частью непрерывной аминокислотной последовательности (то есть, непрерывного полипептида). Первый слитый полипептид-партнер может быть связан с N-концом или C-концом второго слитого партнера. В некоторых вариантах осуществления, слитые партнеры транслируются в виде одного полипептида с кодирующей последовательности, которая кодирует оба слитых партнера. Слитые партнеры, помимо пептидной связи, могут быть ковалентно связаны с помощью других средств, таких, как, например, химическая связь. Могут быть использованы многие известные способы ковалентного связывания полипептидов с другими молекулами (например, слитых партнеров). В других вариантах осуществления, слитые партнеры соединяют через «линкер», который состоит по меньшей мере из одной аминокислоты или химического фрагмента. В некоторых вариантах осуществления, слитые партнеры являются нековалентно связанными между собой. В некоторых таких вариантах осуществления изобретения, они могут быть связаны, например, с использованием связывающих пар. Типичные связывающие пары включают, но не ограничиваются ими, биотин и авидин или стрептавидин, антитело и его антиген и т.п.
[0091] В некоторых вариантах осуществления, слитые партнеры содержат полипептид IgG-Fc, и по меньшей мере один полипептид GLP1. В некоторых вариантах осуществления, слитые партнеры содержат полипептид IgG-Fc, полипептид GLP1 и глюкагоновый полипептид. В некоторых вариантах осуществления полипептид GLP1 может быть связан с N-концом или C-концом полипептида IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления глюкагоновый полипептид может быть связан либо с N-концом или C-концом полипептида IgG-Fc.
[0092] Термин «непрерывный полипептид» в данном описании используется для обозначения непрерывной последовательности аминокислот. Непрерывный полипептид обычно транслируется с одной непрерывной последовательности ДНК. Это может быть осуществлено с помощью методов генной инженерии, например, путем удаления стоп-кодона из последовательности ДНК первого белка, а затем добавления ДНК-последовательности второго белка с сохранением рамки считывания, так что последовательности ДНК экспрессируются в виде одного белка. Как правило, это достигается путем клонирования кДНК в экспрессионный вектор в одной рамке считывания с существующим геном.
[0093] «Линкер» относится к одному или более аминокислотным остаткам, которые соединяют первый полипептид со вторым полипептидом.
[0094] В некоторых вариантах осуществления, линкер представляет собой гибкий, неструктурированный линкер. В некоторых вариантах осуществления, линкер представляет собой глицин-богатый, серин-богатый или глицин и серин-богатый линкер. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит 100%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 85% аминокислотных остатков серина и/или глицина.
[0095] «Удлинение» в контексте настоящего изобретение относится к одному или более аминокислотным остаткам, которые связаны с полипептидом на его С-конце или на его N-конце.
[0096] В некоторых вариантах осуществления, это удлинение является гибким. В некоторых вариантах осуществления изобретения удлинение придает гибкость полипептиду, не мешая биологической активности полипептида. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения удлинение повышает растворимость полипептида. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения удлинение включает один или более остатков глицина. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения удлинение включает остаток глицина (SEQ ID NO: 88), два остатка глицина (SEQ ID NO: 89), три остатка глицина (SEQ ID NO: 90), четыре остатка глицина (SEQ ID NO: 91), пять остатков глицина (SEQ ID NO: 92), шесть остатков глицина (SEQ ID NO: 93), семь остатков глицина (SEQ ID NO: 94), восемь остатков глицина (SEQ ID NO: 95) или большее число остатков глицина.
[0097] В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит полипептид IgG-Fc, содержащий аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 100, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 167, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198 или 199, и полипептид GLP1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85. В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит полипептид IgG-Fc, содержащий аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 100, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 167, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198 или 199, и полипептид GLP1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86. В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит полипептид IgG-Fc, содержащий аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 100, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 167, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198 или 199, и полипептид GLP1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87. В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит полипептид IgG-Fc, содержащий аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 100, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 167, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198 или 199, и полипептид GLP1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98. В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит полипептид IgG-Fc, содержащий аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 100, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 167, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198 или 199, и полипептид GLP1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99.
[0098] В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит полипептид IgG-Fc, содержащий аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 100, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 167, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198 или 199, и глюкагоновый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
[0099] В некоторых вариантах осуществления непрерывный полипептид содержит первый полипептид GLP1 (GLP1A), первый линкер (L1), Fc-полипептид животного-компаньона, необязательно, второй линкер (L2) и, необязательно, второй полипептид GLP1 (GLP1B). В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит:
формулу (I): GLP1A-L1-Fc;
формулу (II): Fc-L1-GLP1A; или
формулу (III): GLP1A-L1-Fc-L2-GLP1B.
[00100] В некоторых вариантах осуществления непрерывный полипептид содержит полипептид GLP1, первый линкер (L1), Fc-полипептид, второй линкер (L2) и глюкагоновый полипептид (Gluc). В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит:
формулу (IV): GLP1-L1-Fc-L2-Gluc; или
формулу (V): Gluc-L1-Fc-L2-GLP1.
[00101] В некоторых вариантах осуществления молекула слитого GLP1 имеет более продолжительное время полужизни в сыворотке крови по сравнению с полипептидом GLP1 дикого типа. Увеличенное время полужизни слитых молекул GLP1, описанных в настоящем документе, может потребовать меньших дозировок и менее частого введения, чем схема введения полипептидов GLP1 дикого типа.
[00102] В некоторых вариантах осуществления, GLP1B, если он присутствует, содержит такую же аминокислотную последовательность, как и GLP1A.
[00103] В некоторых вариантах осуществления, GLP1, GLP1A или GLP1B, если присутствуют, содержат полипептид GLP1 дикого типа. В некоторых вариантах осуществления, GLP1, GLP1A или GLP1B, если присутствуют, содержат вариант полипептида GLP1. В некоторых вариантах осуществления, GLP1, GLP1A или GLP1B, если присутствуют, содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 98 или SEQ ID NO: 99.
[00104] В некоторых вариантах осуществления, глюкагоновый полипептид содержит глюкагоновый полипептид дикого типа. В некоторых вариантах осуществления, глюкагоновый полипептид содержит аминокислотнную последовательность SEQ ID NO: 21. В некоторых вариантах осуществления изобретения глюкагоновый полипептид содержит вариант глюкагонового полипептида.
[00105] В некоторых вариантах осуществления Fc-полипептид, является IgG-Fc человека. В некоторых вариантах осуществления Fc-полипептид, является IgG1-Fc человека, IgG2-Fc человека, IgG3-Fc человека или IgG4-Fc человека. В некоторых вариантах осуществления Fc-полипептид представляет собой вариант IgG-Fc человека.
[00106] В некоторых вариантах осуществления, Fc-полипептид представляет собой IgG-Fc животного-компаньона. В некоторых вариантах осуществления, Fc-полипептид представляет собой IgG-A-Fc собачьих, IgG-B-Fc собачьих, IgG-C-Fc собачьих, IgG-D-Fc собачьих. В некоторых вариантах осуществления Fc представляет собой IgG1-Fc лошадиных, IgG2-Fc лошадиных, IgG3-Fc лошадиных, IgG4-Fc лошадиных, IgG5-Fc лошадиных, IgG6-Fc лошадиных или IgG7-Fc лошадиных. В некоторых вариантах осуществления Fc представляет собой IgG1a-Fc кошачьих, IgG1b-Fc кошачьих или IgG2-Fc кошачьих.
[00107] В некоторых вариантах осуществления Fc-полипептид представляет собой вариант IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления Fc-полипептид представляет собой вариант IgG-A-Fc собачьих, вариант IgG-B-Fc собачьих, вариант IgG-C-Fc собачьих, вариант IgG-D-Fc собачьих В некоторых вариантах осуществления Fc представляет собой вариант IgG1-Fc лошадиных, вариант IgG2-Fc лошадиных, вариант IgG3-Fc лошадиных, вариант IgG4-Fc лошадиных, вариант IgG5-Fc лошадиных, вариант IgG6-Fc лошадиных или вариант IgG7-Fc лошадиных. В некоторых вариантах осуществления Fc представляет собой вариант IgG1a-Fc кошачьих, вариант IgG1b-Fc кошачьих или вариант IgG2-Fc кошачьих.
[00108] В некоторых вариантах осуществления, L1 и L2, если они присутствуют, каждый независимо представляет собой гибкий линкер. В некоторых вариантах осуществления, аминокислотная последовательность L1 и L2, если они присутствуют, каждая независимо содержит 100%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 85% аминокислотных остатков серина и/или глицина.
[00109] В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит удлинение на своем С-конце. В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит остаток глицина, два остатка глицина, три остатка глицина, четыре остатка глицина, пять остатков глицина, шесть остатков глицина, семь остатков глицина, восемь остатков глицина, или больше восьми остатков глицина на своем C-конце. В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94 или SEQ ID NO: 95 на своем С-конце.
[00110] В некоторых вариантах осуществления, непрерывный полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26; SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31; SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36; SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41; SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 52; SEQ ID NO: 53; SEQ ID NO: 54; SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56; SEQ ID NO: 57; SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59; SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 104; SEQ ID NO: 105 или SEQ ID NO: 106.
[00111] Нуклеотидная последовательность, кодирующая представляющий интерес полипептид, такой как вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанные в настоящем документе, может быть вставлена в экспрессионный вектор, подходящий для экспрессии в выбранной клетке-хозяине. Вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанные в настоящем документе, могут быть проэкспрессированы посредством культивирования клетки-хозяина, трансфицированной экспрессионным вектором, содержащим нуклеотидную последовательность.
[00112] «Вектор» представляет собой плазмиду, которая может быть использована для переноса последовательности ДНК из одного организма в другой или для экспрессии представляющего интерес гена. Вектор обычно включает точку инициации репликации и регуляторные последовательности, которые регулируют экспрессию представляющего интерес гена, и может нести или нет селективный маркерный ген, такой как ген устойчивости к антибиотику. Вектор подходит для клетки-хозяина, в которой он должен экспрессироваться. Вектор может быть назван «рекомбинантным вектором», когда представляющий интерес ген присутствует в векторе.
[00113] Термин «клетка-хозяин» относится к клетке, которая может быть или является реципиентом вектора или выделенного полинуклеотида. Клетками-хозяевами могут быть прокариотические клетки или эукариотические клетки. Примеры эукариотических клеток включают клетки млекопитающих, такие как клетки приматов или других животных; грибковые клетки, такие как дрожжи; растительные клетки; и клеток насекомых. Неограничивающие примеры клеток млекопитающих включают, но не ограничиваются ими, клетки NS0, клетки PER.C6® (Crucell), клетки 293 и клетки СНО, и их производные, такие как клетки 293-6E, DG44, CHO-S и CHO-K. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и потомство не обязательно должно быть полностью идентичным (по морфологии или по совпадению с геномной ДНК) с исходной родительской клеткой из-за природных, случайных или направленных мутаций. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом(ами), кодирующим аминокислотную последовательность (аминокислотные последовательности), предложенные в настоящем описании.
[00114] Термин «выделенный», используемый в настоящем документе, относится к молекуле, которая была отделена по меньшей мере от некоторых из компонентов, с которыми она обычно встречается в природе или продуцируется. Например, полипептид, указывается как «выделенный», когда он отделен от по меньшей мере некоторых из компонентов клетки, в которой он был получен. Если полипептид секретируется клеткой после экспрессии, то физическое отделение надосадочной жидкости, содержащей полипептид, от клеток, которые продуцируют пептид, считается «выделением» полипептида. Аналогичным образом, полинуклеотид, указывается как «выделенный», когда он не является частью большего полинуклеотида (например, геномной ДНК или митохондриальной ДНК, в случае ДНК-полинуклеотида ДНК), в котором он обычно встречается в природе, или отделен по меньшей мере от некоторых из компонентов клетки, в которой он был получен, например, в случае РНК-полинуклеотида. Таким образом, ДНК-полинуклеотид, который содержится в векторе внутри клетки-хозяина, может быть отнесен к «выделенным».
[00115] Термин «сигнальная последовательность» относится к последовательности аминокислотных остатков или кодирующих ее полинуклеотида, которая облегчает секрецию полипептида, представляющего интерес, и, как правило, отщепляется после экспорта полипептида с наружной поверхности клеточной мембраны.
[00116] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc или непрерывный полипептид, содержащий вариант Fc-полипептида, выделяют с помощью хроматографии, например, гель-хроматографии, ионообменной хроматографии, хроматографии на колонке с белком А, гидрофобной хроматографии и CHT-хроматографии.
[00117] К вариантам полипептидов IgG-Fc или непрерывному полипептиду, содержащему вариант Fc-полипептида мЭтикетка может быть прикреплена. «Метка» означает группу, присоединенную к молекуле, чтобы обеспечить его обнаружение. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc или непрерывный полипептид, содержащий вариант Fc-полипептида, метят детектируемой группой, включая, но не ограничиваясь этим, радиоизотопы, флуоресцентные метки, а также различные фермент-субстратные метки, известные в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления метка представляет собой выявляемый маркер, который может производить сигнал, детектируемый с помощью визуальных или инструментальных средств, например, путем введения радиоактивно-меченой аминокислоты или присоединения к полипептиду фрагментов биотина, которые могут быть обнаружены с помощью меченого авидина (например, стрептавидина, содержащего флуоресцентный маркер или ферментативную активность, которые могут быть обнаружены с помощью оптических или колориметрических способов). Примеры меток для полипептидов включают, но не ограничиваются ими, следующие метки: радиоизотопы или радионуклиды (например, 33H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho или 153Sm); хромогены, флуоресцентные метки (например, FITC, родамин, лантаноидные люминофоры), ферментативные метки (например, β-галактозидазу, пероксидазу хрена, люциферазу, щелочную фосфатазу); хемилюминесцентный маркеры; биотинильные группы; заданные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, парные последовательности лейциновой молнии, сайты связывания вторичных антител, металл-связывающие доменые, эпитопные теги); и магнитные агенты, такие как хелаты гадолиния. Типичные примеры меток, обычно используемых для иммуноанализа, включают фрагменты, которые производят свет, например, соединения акридиния, а также фрагменты, которые производят флуоресценцию, например, флуоресцеин. Таким образом, сам фрагмент может не являться обнаруживаемой меткой, но может стать обнаруживаемым при реакции с еще одним фрагментом. Общие методики, которые должны использоваться при выполнении различных иммуноанализов, указанных выше, известны специалистам в данной области.
Примеры аффинности вариантов полипептида IgG-Fc к белку А и/или C1q, и/или CD16
[00118] Варианты полипептидов IgG-Fc, описанные в настоящем документе, могут иметь измененную аффинность связывания с белком А и/или C1q, и/или CD16. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет увеличенную аффинность связывания с белком А относительно полипептида IgG-Fc дикого типа. Такие варианты полипептидов IgG-Fc могут быть очищены с помощью хроматографии на колонке с белкоме A. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc имеет сниженную аффинность связывания с C1q относительно полипептида IgG-Fc дикого типа. Такие варианты полипептидов IgG-Fc могут иметь сниженный комплемент-опосредованный иммунный ответ. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc имеет сниженную аффинность связывания с CD16 относительно полипептида IgG-Fc дикого типа. Такие варианты полипептидов IgG-Fc могут иметь уменьшенную иммунную реакцию ADCC. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc увеличенную аффинность связывания с белком А относительно полипептида IgG-Fc дикого типа и/или сниженную аффинность связывания с C1q относительно полипептида IgG-Fc дикого типа, и/или сниженную аффинность связывания с CD16 относительно полипептида IgG-Fc дикого типа.
[00119] «Белок А» в контексте настоящего изобретения представляет собой полипептид, содержащий полноразмерный белок А или его участок, который способен связывать дикого типа IgG-B-Fc собачьих, дикого типа IgG1-Fc лошадиных, дикого типа IgG3-Fc лошадиных, дикого типа IgG4-Fc лошадиных, дикого типа IgG7-Fc лошадиных, дикого типа IgG1a-Fc кошачьих, дикого типа IgG1b-Fc кошачьих или дикого типа IgG2-Fc кошачьих.
[00120] Термины «C1q» или «C1q-комплекс» используются взаимозаменяемо для обозначения участвующего в системе комплемента белкового комплекса или его части, которые могут связываться с дикого типа IgG-B-Fc собачьих, дикого типа IgG-C-Fc собачьих, дикого типа IgG1-Fc лошадиных, дикого типа IgG3-Fc лошадиных, дикого типа IgG4-Fc лошадиных, дикого типа IgG7-Fc лошадиных, дикого типа IgG1a-Fc кошачьих или дикого типа IgG1b-Fc кошачьих.
[00121] «CD16» в контексте настоящего изобретения представляет собой полипептид, содержащий полноразмерный CD16 или его часть, который способен связывать дикого типа IgG-А-Fc собачьих или дикого типа IgG-Fc-D собачьих. Термин «связывается с веществом», это термин, который хорошо известен в данной области техники, и способы для определения такого связывания также хорошо известны в данной области техники. Говорят, что молекула проявляется «связывание», если она вступает в реакцию, ассоциирована с, или имеет сродство к конкретной клетке или веществу, и реакция, ассоциация или сродство обнаруживаются одним или более способами, известными в данной области техники, такими как, например, иммуноблоттинг, ИФА, KinEx A, биослойная интерферометрия (BLI), поверхностный плазмонный резонанс и т.п.
[00122] Термин «Белок А +», используемый в данном описании, означает, что Fc-полипептид имеет сродство к белку А. В некоторых вариантах осуществления изобретения, «Белок А +» Fc-полипептид содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, которая повышает аффинность связывания с белком А.
[00123] Термин «Белок А -», используемый в данном описании, означает, что Fc-полипептид низким или нулевым сродством к белку А.
[00124] Термин «C1q +», используемый в данном описании, означает, что Fc-полипептид имеет сродство к C1q.
[00125] Термин «C1q -», используемый в данном описании, означает, что Fc-полипептид, обладает низким или нулевым сродством к C1q. В некоторых вариантах осуществления, «C1q - Fc-полипептид имеет по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, которая уменьшает аффинность связывания с C1q.
[00126] Термин «CD16 +», используемый в данном описании, означает, что Fc-полипептид имеет сродство к CD16.
[00127] Термин «CD16 -», используемый в данном описании, означает, что Fc-полипептид низким или нулевым сродством к CD16. В некоторых вариантах осуществления «CD16 -» Fc-полипептид имеет по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, которая уменьшает аффинность связывания с CD16.
[00128] Термин «сродство/аффинность» означает силу общей суммы нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, рецептора) и его партнером по связыванию (например, лиганда). Аффинность молекулы X и ее партнера Y в общем случае может быть представлена константой диссоциации (KD). Аффинность может быть измерена обычными способами, известными в данной области техники, таких как, например, иммуноблоттинг, ИФА, KinEx A, биослойная интерферометрия (BLI) или поверхностный плазмонный резонанс.
[00129] Термин «поверхностный плазмонный резонанс» обозначает оптический феномен, который позволяет анализ биоспецифических взаимодействий в реальном времени путем обнаружения изменений концентраций белка в матриксе биосенсора, например, с использованием системы BIAcore™ (BIAcore International AB, a GE Healthcare company, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.). Более подробное описание приведено в Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26.
[00130] Термин «биослойная интерферометрия» относится к оптикоаналитическому методу, который анализирует интерференционную картину света, отраженного от слоя иммобилизованного белка на кончике биосенсора и внутреннего эталонного слоя. Изменение числа молекул, связанных с кончиком биосенсора, вызывает сдвиги в интерференционной картине, которые могут быть измерены в реальном времени. Неограничивающим примером устройства для биослойной интерферометрии является система Octet® (Pall ForteBio LLC). См., например, Abdiche et al., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277.
[00131] Термины «KD», «Kd», «Kd» или «величина Kd» используется взаимозаменяемо для обозначения константы равновесной диссоциации взаимодействия лиганда с рецептором или антитела с антигеном.
[00132] В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc связывается с белком А с константой диссоциации (KD) ниже 5×10-6 M, ниже 1×10-6 M, ниже 5×10-7 M, ниже 1×10-7 M, ниже 5×10-8 M, ниже 1×10-8 M, ниже 5×10-9 M, ниже 1×10-9 M, ниже 5×10-10 M, ниже 1×10-10 M, ниже 5×10-11 M, ниже 1×10-11 M, ниже 5×10-12 M или ниже 1×10-12 M, которую измеряют методом биослойной интерферометрии.
[00133] В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc связывается с C1q или CD16 с константой диссоциации (KD) выше 5×10-6 M, выше 1×10-5 M, выше 5×10-5 M, выше 1×10-4 M, выше 5×10-4 M или выше 1×10-3 M, которую измеряют методом биослойной интерферометрии.
[00134] В некоторых вариантах осуществления, KD связывания полипептида IgG-Fc, такого как вариант полипептида IgG-Fc, с белком А или C1q или CD16 измеряют с помощью метода анализа биослойной интерферометрии с использованием биосенсора, например, Octet® System (Pall ForteBio LLC, Fremont, CA), в соответствии инструкциями поставщика. Вкратце, биотинилированный белок А или C1q или CD16 связан с наконечником сенсора и ассоциацию полипептида IgG-Fc контролируют в течение определенного времени или до достижения равновесного состояния. Диссоциацию можно контролировать в течение определенного времени или до достижения равновесного состояния. Значения фоновой кривой, полученной с использованием буфера, вычитают, чтобы исключить влияние фона. Данные апроксимируют на модель связывания 2:1 с использованием аналитического программного обеспечения ForteBio для определения константы скорости ассоциации (kon), константы скорости диссоциации (koff) и Kd. Равновесная константа диссоциации (KD) вычисляется как отношение koff/kon. Термин «kon» относится к константе скорости ассоциации молекулы X и ее партнера Y, а термин «koff» относится к константе скорости диссоциации молекулы X и ее партнера Y из молекулы комплекса партнеров X/Y.
[00135] «Увеличение» или «стимулирование» означает увеличение, улучшение или усиление активности, функции или количества по сравнению с эталоном. В некоторых вариантах осуществления, под «увеличением» или «стимулированием» подразумевается способность вызывать общее увеличение примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более, примерно на 90% или более, примерно на 100% или более, примерно на 125% или более, примерно на 200% или более по сравнению с эталонным значением. В некоторых вариантах осуществления, под «увеличением» или «стимулированием» подразумевается способность вызывать общее увеличение примерно на 5-50%, примерно на 10-20%, примерно на 50-100%, примерно на 25-70% по сравнению с эталонным значением. В некоторых вариантах осуществления, под «увеличением» или «стимулированием» подразумевается способность вызывать общее увеличение на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления, п под «увеличением» или «стимулированием» подразумевается способность вызывать общее увеличение на 75%, 85%, 90%, 95% или более. В некоторых вариантах осуществления количество, указанное выше, стимулируется или увеличивается в течение периода времени по сравнению с контрольной дозой (например, плацебо) за тот же период времени.
[00136] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc способен связываться с белком А с аффинностью повышенной примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более, примерно на 90% или более, примерно на 100% или более, примерно на 125% или более, примерно на 150% или более, примерно на 200% или более относительно эталонного полипептида IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc способен связываться с белком А с аффинность повышенной примерно на 5-50%, примерно на 10-20%, примерно на 50-100%, примерно на 25-70% по сравнению с контрольным полипептидом IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления, эталонный полипептид IgG-Fc представляет собой полипептид IgG-Fc дикого типа. В некоторых вариантах осуществления эталонный полипептид IgG-Fc представляет собой другой вариант полипептида IgG-Fc.
[00137] «Уменьшение» или «ингибирование» означает уменьшение, снижение или остановку активности, функции или количества по сравнению с эталоном. В некоторых вариантах осуществления под «уменьшением» или «ингибированием» понимают способность вызывать общее снижение примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более или примерно на 90% или более по сравнению с эталонным полипептидом IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления, под «уменьшением» или «ингибированием» понимают способность вызывать общее снижение примерно на 5-50%, примерно на 10-20%, примерно на 50-100%, примерно на 25-70% по сравнению с эталонным значением. В некоторых вариантах осуществления под «уменьшением» или «ингибированием» понимают способность вызывать общее снижение на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления под «уменьшением» или «ингибированием» понимают способность вызывать общее снижение на 75%, 85%, 90%, 95% или больше. В некоторых вариантах осуществления количество, указанное выше, ингибируется или снижается в течение периода времени по сравнению с контрольной дозой (например, плацебо) за тот же период времени.
[00138] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc способен связываться с C1q или CD16 с аффинностью, сниженной примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 30% или больше, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более, примерно на 90% или более относительно эталонного полипептида IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc способен связываться с C1q или CD16 с аффинностью, сниженной примерно на 5-50%, примерно на 10-20%, примерно на 50-100%, примерно на 25-70% по сравнению с эталонным полипептидом IgG-Fc. В некоторых вариантах осуществления, эталонный полипептид IgG-Fc представляет собой полипептид IgG-Fc дикого типа. В некоторых вариантах осуществления эталонный полипептид IgG-Fc представляет собой другой вариант полипептида IgG-Fc.
[00139] Термин «эталон (эталонный»», используемый в настоящем документе, относится к любому образцу, стандарту или уровню, которые используются для целей сравнения. Эталон может представлять собой эталон дикого типа или вариант эталона. Эталон может быть получен из образца от здорового или небольного индивидуума. В некоторых примерах, эталон получают из образца от здорового или не являющимся больным животного-компаньона. В некоторых примерах, эталон получают от одного или более здоровых животных определенного вида, которые не подвергаются испытаниям или не проходят лечение.
Примеры биологическлй активности вариантов слитых молекул GLP1
[00140] В некоторых вариантах осуществления изобретения слитая молекула GLP1 связывается с GLP1R и активизирует выработку цАМФ. В некоторых вариантах осуществления слитый полипептид GLP1 увеличивает выработку цАМФ в клетке, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или на 100% по сравнению с сигналом при отсутствии слитого полипептида GLP1.
Примеры фармацевтических композиций
[00141] Термины «фармацевтический препарат» и «фармацевтическая композиция» относятся к препарату, который находится в такой форме, чтобы обеспечить проявление биологической активности действующего ингредиента (действующих ингредиентов), и который не содержит каких-либо дополнительных компонентов, которые являются неприемлемо токсичными для субъекта, которому будет вводиться композиция.
[00142] Термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному составу или носителю, стандартно применяющимся в данной области техники для использования с терапевтическим агентом, которые вместе образуют «фармацевтическую композицию» для введения субъекту. Фармацевтически приемлемый носитель является нетоксичным для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и совместим с другими ингредиентами композиции. Фармацевтически приемлемый носитель подходит для используемой композиции. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают оксид алюминия; стеарат алюминия; лецитин; сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, альбумин собачьих или других животных; буферы, такие как фосфатный, цитратный, трометаминовый или HEPES-буферы; глицин; сорбиновая кислота; сорбат калия; смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот; воду; соли или электролиты, такие как сульфат протамина, гидрофосфат натрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, или трисиликат магния; поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы; полиэтиленгликоль; сахарозу; маннит; или аминокислоты, включая, но не ограничиваясь ими, аргинин.
[00143] Фармацевтическая композиция может храниться в лиофилизированной форме. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ получения включает стадию лиофилизации. Лиофилизированная композиция затем может быть переведена в другую форму, как правило, в водную композицию, пригодную для парентерального введения, перед введением собаке, кошке или лошади. В других вариантах осуществления изобретения, в частности, если вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанный в настоящем документе, обладает высокой стабильностью к термической и окислительной денатурации, фармацевтическая композиция может быть представлена в виде жидкости, то есть, в виде водной композиции, которая может быть введена собаке, кошке или лошади напрямую, либо с соответствующим разбавлением. Лиофилизированная композиция может быть восстановлена стерильной водой для инъекций (WFI). Могут быть включены бактериостатические реагенты, такие как бензиловый спирт. Таким образом, изобретение относится к фармацевтическим композициям в твердой или жидкой форме.
[00144] При введении рН фармацевтических композиций может находиться в диапазоне примерно от рН 5 до примерно рН 8. Композиции по настоящему изобретению являются стерильными, если они должны быть использованы в терапевтических целях. Стерильность может быть достигнута любым из нескольких способов, известных данной области, в том числе путем фильтрации через стерильные фильтрационные мембраны (например, мембраны с размером пор 0,2 мкм). Стерильность может поддерживаться в присутствии и в отсутствие антибактериальных агентов.
Некоторые варианты применения Fc-полипептидов и фармацевтических композиций
[00145] Полипептид, содержащий вариант Fc-полипептида, такой как вариант полипептида IgG-Fc по изобретению, или фармацевтические композиции, содержащие вариант Fc-полипептида по настоящему изобретению, могут быть полезны для увеличения времени жизни продукта in vivo у животного-компаньона, включая, но не ограничиваясь этим, собачьих, кошачьих или лошадиных.
[00146] Используемый в данном описании термин «лечение» представляет собой подход для получения полезных или желаемых клинических результатов. Термин «лечение», используемый в настоящем документе, включает любое введение или применение терапевтического средства против заболевания у млекопитающего, включая животного-компаньона. Для целей данного описания, полезные или желаемые клинические результаты включают, но не ограничиваются ими, любые один или более из нижеперечисленного: облегчения одного или более симптомов, снижения выраженности заболевания, предотвращения или задержки распространения заболевания, предотвращения или задержки рецидива заболевания, задержки или замедления прогрессирования заболевания, улучшения состояния больного, ингибирования заболевания или развития заболевания, ингибирования или замедления заболевания или его развития, прекращения развития заболевания и ремиссии (частичной или полной). Также термин «лечение» охватывает уменьшение патологических последствий пролиферативного заболевания. Предлагаемые в настоящем документе способы предусматривают любой один или более из этих аспектов лечения. В связи с вышесказанным, термин лечение не требует стопроцентного устранения всех аспектов заболевания.
[00147] «Терапевтически эффективное количество» вещества/молекулы, агониста или антагониста может изменяться в зависимости от таких факторов, как тип подлежащего лечению заболевания, состояние заболевания, тяжесть и течение заболевания, тип терапевтических целей, любая предшествующая терапия, клиническая история, реакция на предшествующее лечение, решение лечащего ветеринарного врача, возраст, пол и вес животного, и способность вещества/молекулы, агониста или антагониста вызывать желаемый отклик у животного. Терапевтически эффективное количество также является таким, при котором любые токсические или вредные эффекты вещества/молекулы, агониста или антагониста перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами. Терапевтически эффективное количество может быть введено за один или более приемов. Терапевтически эффективное количество относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического или профилактического результата.
[00148] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанный в настоящем документе, или содержащую их фармацевтическую композицию, водят парентерально, с помощью подкожного введения, внутривенного вливания, или внутримышечной инъекции. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанный в настоящем документе, или содержащую их фармацевтическую композицию, водят в виде болюсной инъекции или с помощью непрерывной инфузии в течение определенного периода времени. В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанный в настоящем документе, или содержащую их фармацевтическую композицию, водят внутримышечным путем, внутрибрюшинным путем, интрацереброспинальным путем, подкожным путем, интра-артериальным путем, внутрисуставным путем, интратекальным путем или ингаляционным путем.
[00149] В некоторых вариантах осуществления слитый полипептид GLP1 или содержащие его фармацевтические композиции могут быть использованы в соответствии со способами по настоящему изобретению для лечения заболеваний, связанных с высоким уровнем глюкозы в крови. В некоторых вариантах осуществления изобретения, слитый полипептид GLP1 или фармацевтические композиции вводят животному-компаньону, такому как представитель семейства собачьих, кошачьих или лошадиных, для лечения заболевания, связанного с высоким уровнем глюкозы в крови.
[00150] В некоторых вариантах осуществления вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанный в настоящем документе, или содержащую их фармацевтическую композицию вводят в количестве в диапазоне от 0,0001 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела на одну дозу. В некоторых вариантах осуществления, аналог GLP1 может быть введен в количестве в диапазоне от 0,005 веса мг/кг массы тела до 20 мг/кг массы тела на одну дозу. В некоторых вариантах осуществления, аналог GLP1 может быть введен в количестве в диапазоне от 1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела на одну дозу. В некоторых вариантах осуществления, аналог GLP1 может быть введен в количестве в диапазоне от 0,5 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, в диапазоне от 1 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, в диапазоне от 5 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, в диапазоне от 10 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, в диапазоне от 20 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, в диапазоне от 50 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, в диапазоне от 1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, в диапазоне от 5 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, в диапазоне от 0,5 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела или в диапазоне от 5 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела.
[00151] В некоторых вариантах осуществления, вариант полипептида IgG-Fc или другой полипептид, описанный в настоящем документе, или содержащую их фармацевтическую композицию вводят животному-компаньону однократно или серийно. В некоторых вариантах осуществления дозы вводят один раз в неделю в течение по меньшей мере двух или трех недель, а в некоторых вариантах осуществления, этот цикл лечения повторяется два или более раз, необязательно, с интервалом в одну или более недель без лечения. В других вариантах осуществления изобретения, терапевтически эффективная доза вводится один раз в день в течение 2-5 дней, а в некоторых вариантах осуществления, этот цикл лечения повторяется два или более раз, необязательно, с интервалом в один или более дней или недель без лечения.
[00152] Введение «в сочетании с» одним или более дополнительными терапевтическими средствами включает одновременное (параллельное) и последовательное или поочередное введение в любом порядке. Термин «одновременно» используется в настоящем документе для обозначения введение двух или более терапевтических агентов, когда введения по меньшей частично перекрываются во времени, или когда введение одного терапевтического агента осуществляется в течение короткого периода времени относительно введения другого терапевтического агента. Например, два или более терапевтических агентов вводят с временным интервалом, не превышающим приблизительно заданное число минут. Термин «последовательно» используется в настоящем документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, где введение одного или более агентов продолжается после прекращения введения одного или более других агентов, или где введение одного или более других агентов начинается перед введением одного или более других агентов. Например, введение двух или более терапевтических агентов осуществляется с временным интервалом, превышающим приблизительно заданное число минут. Используемый в настоящем описании термин «в сочетании с» относится к использованию одного метода лечения в дополнение к другому способу лечения. Таким образом, «в сочетании с» относится к использованию одного метода лечения до, во время или после использования другого метода лечения животного.
[00153] В некоторых вариантах осуществления дозы вводит один раз в неделю в течение по меньшей мере двух или трех недель, а в некоторых вариантах осуществления, этот цикл лечения повторяется два или более раз, необязательно, с интервалом в одну или более недель без лечения. В других вариантах осуществления изобретения, терапевтически эффективная доза вводится один раз в день в течение 2-5 дней, а в некоторых вариантах осуществления, этот цикл лечения повторяется два или более раз, необязательно, с интервалом в один или более дней или недель без лечения.
[00154] Введение «в сочетании с» одним или более дополнительными терапевтическими средствами включает одновременное (параллельное) и последовательное или поочередное введение в любом порядке. Термин «одновременно» используется в настоящем документе для обозначения введение двух или более терапевтических агентов, когда введения по меньшей частично перекрываются во времени, или когда введение одного терапевтического агента осуществляется в течение короткого периода времени относительно введения другого терапевтического агента. Например, два или более терапевтических агентов вводят с временным интервалом, не превышающим приблизительно заданное число минут. Термин «последовательно» используется в настоящем документе для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, где введение одного или более агентов продолжается после прекращения введения одного или более других агентов, или где введение одного или более других агентов начинается перед введением одного или более других агентов. Например, введение двух или более терапевтических агентов осуществляется с временным интервалом, превышающим приблизительно заданное число минут. Используемый в настоящем описании термин «в сочетании с» относится к использованию одного метода лечения в дополнение к другому способу лечения. Таким образом, «в сочетании с» относится к использованию одного метода лечения до, во время или после использования другого метода лечения животного.
[00155] В некоторых вариантах осуществления способ включает введение в сочетании со слитым полипептидом GLP1 инсулина, ингибитора DPP4, ингибитора SGLT2, A бигуаниды, сульфонилмочевины, производное меглитинида, ингибитор альфа-глюкозидазы, тиазолидиндион (TZD), амилиномиметик, секвестрант желчных кислот, агонист допамина.
[00156] Следующие примеры иллюстрируют определенные аспекты изобретения и не предназначены каким-либо образом ограничить изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Вариант собачьего полипептида IgG-Fc с увеличенным связыванием белка А и/или уменьшенным связыванием комплемента и/или уменьшенным связыванием CD16
[00157] Очистка антител с использованием сродства к белку A является хорошо разработанным процессом. Однако среди четырех подтипов собачьих IgG, только IgG-B-Fc (например, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 107) имеет сродство к белку А. IgG-А Fc (например, SEQ ID NO: 1), IgG-С Fc (например, SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 108) и IgG-D-Fc (например, SEQ ID NO: 4) имеют слабое или недетектируемое связывание с белком А. Для получения полипептидов с измененным связыванием с белком А были разработаны варианты собачьих полипептидов IgG-A-Fc, IgG-C-Fc и IgG-D-Fc.
[00158] Кроме того, собачьи IgG-B-Fc и IgG-C-Fc активируют комплемент и связываются с C1q, в то время как собачьи IgG-A-Fc и IgG-D-Fc имеют слабое или недетектируемое связывание с C1q. Для того, чтобы потенциально уменьшить связывание с C1q и/или потенциально уменьшить опосредованный комплементом иммунный ответ, были разработаны варианты собачьих полипептидов IgG-B-Fc and IgG-C-Fc.
[00159] Кроме того, собачьи IgG-B-Fc и IgG-C-Fc способны связываться с CD16. Для того, чтобы потенциально снизить у IgG-B-Fc и IgG-C-Fc связывание с CD16 и/или потенциально уменьшить ADCC, были разработаны варианты собачьих полипептидов IgG-B-Fc и IgG-C-Fc.
[00160] В таблице 3 ниже приведены характеристики связывания с белком А и C1q для подтипов собачьих IgG-Fc. Примечательно, что ни у одного из подтипов собачьих IgG-Fc дикого типа одновременно не отсутствует связывание с C1q и присутствует связывание с белком А.
[00161] Таблица 3.
(-) обозначает низкую или недетектируемую связывающую активность.
[00162] С использованием трехмерного моделирования белка и анализа белковой последовательности были идентифицированы последовательности собачьего IgG-B-Fc, которые, вероятно, контактируют с белком А. На фиг.1 показано выравнивание последовательностей Fc-областей собачьих IgG-A, B, C и D. В рамке указаны области, вероятно, контактирующие с белком А.
[00163] Для создания вариантов собачьих полипептидов IgG-A-, IgG-C- и IgG-D-Fc с увеличенным связыванием с белком А были использованы два подхода. В первом подходе были созданы варианты собачьих полипептидов IgG-A-, IgG-C-, и IgG-D-Fc, которые имели одинаковую последовательность связывающего белок А мотива из собачьего IgG-B-Fc (например, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, соответственно). Во втором подходе были созданы вариант собачьего IgG-A-Fc I(21)T/Q(207)H (SEQ ID NO: 60), вариант собачьего IgG-C-Fc I(21)T (SEQ ID NO: 61) и вариант собачьего IgG-D-Fc I(21)T/Q(207)H (SEQ ID NO: 62), имеющие одну или две аминокислотные замены в области связывания белка А, чтобы соответствовать последовательности собачьего IgG-B-Fc.
[00164] Кроме того, могут быть получены варианты собачьих полипептидов IgG-A-Fc, IgG-C-Fc и IgG-D-Fc с повышенным связыванием с белком А, которые имеют одну или более из аминокислотных замен, перечисленных в таблице 4.
[00165] Таблица 4.
(SEQ ID NO: 1)
(SEQ ID NO: 3)
(SEQ ID NO: 4)
*Аминокислотные позиции указаны относительно приведенных SEQ ID NO.
[00166] Для того, чтобы потенциально снизить связывание C1q с собачьими IgG-B-Fc и IgG-C-Fc и/или потенциально уменьшить опосредованный комплементом иммунный ответ, могут быть получены варианты собачьих полипептидов IgG-B-Fc и IgG-C-Fc, имеющих замену Lys любой аминокислотой, за исключением Lys, в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, соответственно. Эти аминокислотные замены были идентифицированы после анализа последовательности белка и трехмерного моделирования структуры собачьих IgG-B-Fc и IgG-C-Fc по сравнению с собачьими IgG-A-Fc и IgG-D-Fc, которые не активируют комплемент. Например, могут быть получены вариант собачьего IgG-B-Fc K(93)R (SEQ ID NO: 78) и вариант собачьего IgG-C-Fc K(93)R (SEQ ID NO: 79). Наблюдалось снижение связывания между C1q человека и слитым белком, содержащим вариант собачьего I IgG-B-Fc K(93)R по сравнению со слитым белком, содержащим собачий IgG-Fc-B дикого типа.
[00167] Для того, чтобы потенциально снизить связывание CD16 с IgG-B-Fc и IgG-C-Fc и/или потенциально уменьшить ADCC, могут быть получены варианты собачьих полипептидов IgG-B-Fc и IgG-С-Fc, имеющие одну или более из аминокислотных замен, перечисленных в таблице 5. Аминокислотные замены были идентифицированы после анализа последовательности белка и трехмерного моделирования структуры собачьих IgG-B и IgG-C по сравнению с IgG-A и IgG-D, которые, как известно, не активируют ADCC.
[00168] Таблица 5.
(SEQ ID NO: 2)
(SEQ ID NO: 3)
*Аминокислотные позиции указаны относительно приведенных SEQ ID NO.
[00169] Поскольку у собачьего IgG-С-Fc дикого типа отсутствует связывание с белком А и есть связывание с C1q, то может быть получен двойной вариант собачьего IgG-С-Fc, который связывается с белком А и имеет сниженное связывание с C1q, путем комбинирования одной или более аминокислотных замен, перечисленных в таблице 4, с заменой K(93)R или K(93)X, где Х обозначает любую аминокислоту, кроме Lys. Двойные варианты собачьих IgG-B-Fc или IgG-С-Fc с уменьшенным связыванием с C1q и уменьшенным связывание с CD16, могут быть получены путем комбинирования одной или более из аминокислотных замен, перечисленных в таблице 5, с заменой K(93)R или K(93)X, где Х обозначает любую аминокислоту, кроме Lys. Тройной вариант собачьего IgG-C-Fc, который связывает белок A и имеет пониженное связывание с C1q и CD16, может быть получен путем объединения одной или более аминокислотных замен, перечисленных в таблице 4, и одной или более аминокислотных замен, перечисленных в таблице 5, с заменой K(93)R или K(93)X, где X обозначает любую аминокислоту, кроме Lys.
[00170] Связывание любого варианта собачьих IgG-Fc с белком А, CD16 и/или C1q может быть определено и проведено сравнение со связыванием другого IgG-Fc с белком А, CD16 и/или C1q (например, с диким типом соответствующего собачьего IgG-Fc, с диким типом или вариантом другого собачьего IgG-Fc или диким типом или вариантом IgG-Fc другого животного-компаньона, и т.д.).
[00171] Анализ связывания может быть осуществлен с использованием биосенсора Octet. Вкратце, молекулу-мишень (например, белок А, C1q, CD16 и т.д.) биотинилируют, и удаляют свободный непрореагировавший биотина (например, путем диализа). Биотинилированная молекула-мишени захватывается стрептавидином на наконечнике сенсора. Ассоциацию молекулы-мишени с различными концентрациями (например, 10 мкг/мл) полипептида IgG-Fc регистрируют в течение определенного времени или до достижения равновесного состояния. Диссоциацию можно контролировать в течение определенного времени или до достижения равновесного состояния. Значения фоновой кривой, полученной с использованием буфера, вычитают, чтобы исключить влияние фона. Данные апроксимируют на модель связывания 1:1 с использованием аналитического программного обеспечения ForteBio™ для определения kon, koff и Kd.
Пример 2
Варианты лошадиных полипептидов IgG-Fc для увеличения связывания с белком А и/или снижения связывания комплемента
[00172] Из семи подтипов лошадиных IgG, с белком А связываются IgG1-Fc (например, SEQ ID NO: 63), IgG3-Fc (например, SEQ ID NO: 65), IgG4-Fc (например, SEQ ID NO: 66), IgG7-Fc (например, SEQ ID NO: 69). Лошадиные IgG2-Fc (например, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 64), IgG5-Fc (например, SEQ ID NO: 67) и IgG6-Fc (например, SEQ ID NO: 68) имеют слабое или недетектируемое связывание с белком А. Были созданы варианты лошадиных полипептиды IgG2-Fc, IgG5-Fc и IgG-Fc, имеющие измененное связывание с белком А.
[00173] Кроме того, лошадиные IgG2-Fc, IgG5-Fc и IgG6-Fc имеют слабое или недетектируемое связывание с C1q, в то время как лошадиные IgG1-Fc, IgG-Fc3, IgG4-Fc и IgG7-Fc связываются с C1q. Для того, чтобы потенциально уменьшить связывание с C1q и/или потенциально уменьшить опосредованный комплементом иммунный ответ, были разработаны варианты лошадиных полипептидов IgG1-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc и IgG7-Fc.
[00174] В таблице 6, приведены характеристики связывания с белком А и C1q для подтипов лошадиных IgG-Fc. Примечательно, что ни один из подтипов лошадиных IgG-Fc дикого типа не имеет одновременного отсутствия связывания с C1q и связывания с белком А.
[00175] Таблица 6.
(-) обозначает низкую или недетектируемую связывающую активность.
[00176] С использованием трехмерного моделирования белка и анализа белковой последовательности были идентифицированы последовательности лошадиных IgG1-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc и IgG7-Fc, которые, вероятно, контактируют с белком А. Могут быть получены варианты лошадиных полипептидов IgG2-Fc, IgG5-Fc, and IgG6-Fc, имеющие одну или более аминокислотных замен, перечисленных в таблице 7.
[00177] Таблица 7.
(SEQ ID NO: 64)
(SEQ ID NO: 67)
(SEQ ID NO: 68)
*Аминокислотные позиции указаны относительно приведенных SEQ ID NO.
[00178] Например, были разработаны варианты полипептидов лошадиных IgG2-Fc, IgG5-Fc и IgG6-Fc с одной или более аминокислотными заменами в область связывания белка А, чтобы соответствовать последовательности лошадиного IgG-Fc дикого типа, который связывается с белком A. Могут быть получены вариант лошадиного IgG2-Fc F(203)Y (SEQ ID NO: 71); вариант лошадиного IgG2-Fc A(15)T/F(203)Y (SEQ ID NO: 72); вариант лошадиного IgG5-Fc V(199)L/E(200)Y (SEQ ID NO: 75); и вариант лошадиного IgG6-Fc I(199)L/R(200)H/H(201)N/T(202)H (SEQ ID NO: 76) с повышенным связыванием с белком А.
[00179] Для того, чтобы потенциально снизить связывание C1q с лошадиными IgG1-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc и IgG7-Fc, и/или потенциально уменьшить опосредованный комплементом иммунный ответ, могут быть получены варианты лошадиных полипептидов IgG1-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc и IgG7-Fc, имеющие замену Lys на любую аминокислоту, за исключением Lys, в положении, соответствующем положению 87 в SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 69, соответственно. Эти аминокислотные замены, были определены после анализа последовательности белка и трехмерного моделирований структуры лошадиных IgG1-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc и IgG7-Fc в сравнении с лошадинымы IgG2-Fc, IgG5-Fc и IgG6-Fc, которые, как известно, не активируют комплемент. Например, могут быть получены вариант лошадиного IgG1-Fc K(87)S (SEQ ID NO: 70), вариант лошадиного IgG 3-Fc K(87)S (SEQ ID NO: 73), вариант лошадиного IgG4-Fc K(87)S (SEQ ID NO: 74) и вариант лошадиного IgG7-Fc K(87)S (SEQ ID NO: 77).
[00180] Связывание любого варианта лошадиного IgG-Fc с белком А и/или C1q может быть определено и проведено сравнение со связыванием другого IgG-Fc с белком А и/или C1q (например, с диким типом соответствующего лошадиного IgG-Fc, с диким типом или вариантом другого лошадиного IgG-Fc или диким типом или вариантом IgG-Fc другого животного-компаньона, и т.д.). Может быть использован анализ связывания, описанный в примере 1.
Пример 3
Вариант кошачьих полипептидов IgG-Fc со сниженным связыванием комплемента
[00181] Каждый из трех подтипов кошачьих IgG, IgG1a-Fc (SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117), IgG1b-Fc (SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118) и IgG2-Fc (SEQ ID NO: 16) связывается с белком А. Однако, только кошачий IgG2-Fc имеет слабое или недетектируемое связывание с C1q, в то время как кошачьи IgG1a-Fc, IgG1b-Fc связываются с C1q. Для того, чтобы потенциально уменьшить связывание с C1q и/или потенциально уменьшить опосредованный комплементом иммунный ответ, были разработаны варианты кошачьих полипептидов IgG1a-Fc и IgG1b-Fc.
[00182] В таблице 8, ниже представлены характеристики связывания с белком А и C1q подтипов кошачьих IgG-Fc. Примечательно, что ни у одного из подтипов кошачьих IgG-Fc дикого типа одновременно не отсутствует связывание с C1q и присутствует связывание с белком А.
[00183] Таблица 8.
(-) обозначает низкую или недетектируемую связывающую активность.
[00184] Для того, чтобы потенциально снизить связывание C1q с кошачьими IgG1a-Fc и IgG1b-Fc и/или потенциально уменьшить опосредованный комплементом иммунный ответ, могут быть получены варианты кошачьих полипептидов IgG1a-Fc и IgG1b-Fc, имеющие заменой Pro на любую аминокислоту, за исключением Pro, в положении, соответствующем положению 198 в SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 81, соответственно. Эти аминокислотные замены были идентифицированы после анализа последовательности белка и трехмерного моделирования структуры кошачьих IgG1a-Fc и IgG1b-Fc в сравнении с кошачьим IgG2-Fc, который не активирует комплемент. Например, могут быть получены вариант кошачьего IgG1a-Fc Р(198)А (SEQ ID NO: 82) и вариант кошачьего IgG1b-Fc Р(198)А (SEQ ID NO: 83).
[00185] Связывание любого варианта кошачьих IgG-Fc с C1q может быть определена, и проведено его сравнение со связывание другого IgG-Fc с C1q (например, с диким типом соответствующего кошачьего IgG-Fc, с диким типом или вариантом другого кошачьего IgG-Fc или диким типом или вариантом IgG-Fc другого животного-компаньона, и т.д.). Может быть использован анализ связывания, описанный в примере 1.
Пример 4
Варианты собачьих и кошьих полипептидов IgG-Fc для гетеродимерных белков
[00186] Чтобы обеспечить возможность получения биспецифичного собачьего или кошачьего антитела или бифункционального белка, слитого с собачьим или кошачьим Fc, с использованием метода гетеродимеризации «выступ-впадина», было проведено исследование образования пар между вариантами собачьих и кошачьих полипептидов IgG-Fc.
[00187] Аминокислотная замена треонина в положении, соответствующем положению 138 собачьего IgG-A (SEQ ID NO: 1), в положении, соответствующем положению 137 собачьего IgG-B-Fc (SEQ ID NO: 2), в положении, соответствующем положению 137 собачьего IgG-C-Fc (SEQ ID NO: 3), или в положении, соответствующем положению 138 собачьего IgG-D-Fc (SEQ ID NO: 4), на тирозин (T138Y или T137Y) может быть введена в одну цепь Fc (гетеродимерная цепь 1). Примерами аминокислотных последовательностей для вариантов гетеродимерных цепей 1 собачьих IgG-A-Fc, IgG-B-Fc, IgG-C-Fc и IgG-D-Fc являются SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14, соответственно.
[00188] Аминокислотная замена тирозина в положении, соответствующем положению 181 собачьего IgG-A (SEQ ID NO: 1), в положении, соответствующем положению 180 собачьего IgG-B-Fc (SEQ ID NO: 2), в положении, соответствующем положению 180 собачьего IgG-C-Fc (SEQ ID NO: 3), или в положении, соответствующем положению 181 собачьего IgG-D-Fc (SEQ ID NO: 4), на треонин (Y181T или Y180T) может быть введена во вторую цепь Fc (гетеродимерная цепь 2). Примерами аминокислотных последовательностей для вариантов гетеродимерных цепей 2 собачьих IgG-A-Fc, IgG-B-Fc, IgG-C-Fc и IgG-D-Fc являются SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, и SEQ ID NO: 15, соответственно.
[00189] Также был исследован второй вариант образования пар между гетеродимерными цепями 3 и 4 собачьих IgG-Fc. Аминокислотная замена треонина на триптофан в положении, соответствующем положению 138 собачьего IgG-А (SEQ ID NO: 1) или собачьего IgG-D (SEQ ID NO: 4) (T138W), или в положении, соответствующем положению 137 собачьего IgG-Fc-B (SEQ ID NO: 2) или собачьего IgG-Fc-с (SEQ ID NO: 3) (T137W) могут быть введены в одну цепь Fc (гетеродимерная цепь 3). Примерами аминокислотных последовательностей для вариантов гетеродимерных цепей 3 собачьих IgG-A-Fc, IgG-B-Fc, IgG-C-Fc и IgG-D-Fc являются SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 113 и SEQ ID NO: 115.
[00190] Аминокислотная замена треонина на серин в положении, соответствующем положению 138, лейцина на аланин в положении, соответствующем положению 140, и тирозина в треонин в положении, соответствующем положению 181 собачьих IgG-А (SEQ ID NO: 1) или IgG-D (SEQ ID NO: 4) (T138S, L140A, Y181T), или треонина на серин в положении, соответствующем положению 137, лейцина на аланин в положении, соответствующем положению 139, и тирозина к треонин в положении, соответствующем положению 180 собачьих IgG-B-Fc (SEQ ID NO: 2) или IgG-C (SEQ ID NO: 3) (T137S, L139A, Y180T), может быть введена во вторую цепь Fc (гетеродимерная цепь 4). Примерами аминокислотных последовательностей вариантов гетеродимерных цепей 4 собачьих IgG-A-Fc, IgG-B-Fc, IgG-C-Fc и IgG-D-Fc являются собой SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 114 и SEQ ID NO: 116.
[00191] Аминокислотная замена треонина на триптофан в положении, соответствующем положению 154 кошачьего IgG2 (SEQ ID NO: 16), кошачьего IgG1a-Fc (SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117) или кошачьего IgG1b-Fc (SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118) (T154W), может быть введена в одну цепь Fc (гетеродимерная цепь 1). Примерами аминокислотных последовательностей вариантов гетеродимерной цепи 1 кошачьих IgG2-Fc, IgG1a-Fc и IgG1b-Fc являются SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121 и SEQ ID NO: 123, соответственно.
[00192] Аминокислотная замена треонина на серин в положении, соответствующем положению 154, лейцина на аланин в положении, соответствующем положению 156, и тирозина к треонин в положении, соответствующем положению 197 кошачьего IgG2-Fc (SEQ ID NO: 16), IgG-1a (SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117) или IgG-1b-Fc (SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118) (T154S, L156A, Y197T), может быть введена во вторую цепь Fc (гетеродимерная цепь 4). Примерами аминокислотных последовательностей вариантов гетеродимерной цепи 4 кошачьих IgG2-Fc, IgG1a-Fc и IgG1b-Fc являются SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122 и SEQ ID NO: 124.
[00193] Пары между вариантами гетеродимерных цепей 1 и 2 собачьих IgG-Fc, пары между вариантами гетеродимерных цепей 3 и 4 собачьих IgG-Fc или Пары между вариантами гетеродимерных цепей 1 и 2 кошачьих IgG-Fc может способствовать гетеродимеризации Fc-цепей и предотвращать или уменьшить гомодимеризацию Fc-цепей. Гетеродимерная цепь 1 одного подтипа собачьего IgG может быть объединена с гетеродимерной цепью 2 такого же или другого подтипа собачьего IgG. Гетеродимерная цепь 3 одного подтипа собачьего IgG может быть объединена с гетеродимерной цепью 4 такого же или другого подтипа собачьего IgG. Гетеродимерная цепь 1 одного подтипа кошачьего IgG может быть объединена с гетеродимерной цепью 2 такого же или другого подтипа кошачьего IgG. Конструкция может позволить димеризацию биспецифичных собачьих или кошачьих антител. Кроме того, два различных пептида или белка или комбинация различных белков могут быть слиты с гетеродимерными цепями Fc. Например, может быть создана двойная молекула GLP1 и глюкагона с использованием вариантов гетеродимерных цепей собачьих IgG-Fc или вариантами гетеродимерных цепей кошачьих IgG-Fc, например, молекула, в которой объединены полипептид GLP1 (например, SEQ ID NO: SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90 или SEQ ID NO: 91), слитый с вариантом гетеродимерной цепи 1 собачьего IgG-D-Fc (например, SEQ ID NO: 14), и глюкагоновый полипептид (например, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94 или SEQ ID NO: 95), слитый с вариантом гетеродимерной цепи 2 собачьего IgG-D-Fc (например, SEQ ID NO: 15).
Пример 5
Слитые белки GLP1
[00194] Аминокислотная последовательность GLP1 является консервативной у человека, кошек, собак и лошадей, а также среди других биологических видов. Продукты протеолиза GLP1 (например, GLP1 (аминокислоты 7-37) (SEQ ID NO: 85) быстро разрушаются в результате действия дипептидилпептидазы-4 (DPP-4) и, как известно, имеют короткое время полужизни в сыворотке, составляющее пару минут.
[00195] Было проведено исследование по созданию непрерывных полипептидов, содержащих по меньшей мере один полипептид GLP1 и кошачьи, собачьи или лошадиные полипептиды IgG-Fc, был исследован, чтобы с целью создания слитых белков GLP1, имеющих продолжительное время жизни. Были разработаны следующие конструкции:
формула (I): GLP1A-L1-Fc;
формула (II): Fc-L1-GLP1A; или
формула (III): GLP1A-L1-Fc-L2-GLP1B.
Где GLP1A представляет собой первый полипептид GLP1, GLP1B является вторым полипептидом GLP1, L1 и L2 представляют собой линкеры; и Fc представляет собой полипептид IgG-Fc из животного-компаньона.
[00196] GLP1 был модифицирован, для придания устойчивости к действию DPP-4, путем замены аланина глицином или серином в положении, соответствующем положению 8 дикого типа GLP1 (7-37) (SEQ ID NO: 85). Минимальная последовательность дикого типа GLP1 (7-37) (SEQ ID NO: 87) для связывания с N-концевым доменом кошачьего зрелого GLP1R (SEQ ID NO: 49) была проанализирована с помощью трехмерного моделирования белкового комплекса. На основе этого моделирования, две С-концевые аминокислоты были удалены из GLP1, резистентного к DPP-4, чтобы получить полипептиды GLP1-S8 (7-35) (SEQ ID NO: 86) и GLP1-G8 (7-35) (SEQ ID NO: 87).
[00197] Полипептиды GLP1, когда они расположены на С-конце конструкции, как, например, в формулах II и III, не подвержены деградации DPP-4. Таким образом, замена аланин на глицин или серин не является необходимой для полипептидов GLP1, расположенных на С-конце. Соответственно, GLP1 (7-37) дикого типа (SEQ ID NO: 85) может быть использован на С-конце конструкции.
[00198] Линкер может представлять собой гибкий, неструктурированный линкер, такой как глицин- и серин-богатый линкер. С-конец непрерывного полипептида может быть удлинен гибкой последовательностью. Удлинение может содержать остаток глицина (SEQ ID NO: 88), два остатка глицина (SEQ ID NO: 89), три остатка глицина (SEQ ID NO: 90), четыре остатка глицина (SEQ ID NO: 91), пять остатков глицина (SEQ ID NO: 92), шесть остатков глицина (SEQ ID NO: 93), семь остатков глицина (SEQ ID NO: 94), восемь остатков глицина (SEQ ID NO: 95) или большее число остатков глицина.
Пример 6
Слитые белки GLP1 и кошачьих IgG-Fc
[00199] Нуклеотидные последовательности, кодирующие (1) непрерывный полипептид по формуле I, содержащий сигнальную последовательность, GLP1-G8 (7-35) (SEQ ID NO: 87), гибкий линкер и кошачий IgG2-Fc дикого типа (ssGLP1-G8_I_WTfeIgG2; SEQ ID NO: 96); и (2) непрерывный полипептид по формуле III, содержащий сигнальную последовательность, GLP1-G8 (7-35) (SEQ ID NO: 87), GLP1 (7-35) (SEQ ID NO: 89), два гибких линкера, 2G-удлинение С-конца и кошачий IgG2-Fc дикого типа (ssGLP1-G8/GLP1-2G_III_WTfeIgG2; SEQ ID NO: 97), были синтезированы и клонированы в отдельные векторы для экспрессии в клетках млекопитающих. Кошачий IgG2-Fc дикого типа (SEQ ID NO: 16) был выбран на основании его низкого или отсутствующего связывания C1q для снижения активности комплемента и связывания с белком А для простоты очистки.
[00200] Полученными векторами по отдельности трансфицировали клетки СНО. Надосадочную жидкость, содержащую непрерывные полипептиды без сигнального пептида (SEQ ID NO: 24 и 23) собирали и фильтровали. Оба белка очищали аффинно с использованием колонки с белком A (CaptivA® Protein A Affinity Resin, Repligen). С помощью гель-фильтрационной ВЭЖХ было определено, что белки являются мономерными. Однако анализ электрофорезом в ДСН-ПААГ показал, что процент обоих непрерывных полипептидов мигрировал до одинакового положения в геле в отсутствие и в присутствии восстанавливающего агента (DTT) (фигура 2А). Этот результат наводит на мысль о том, что шарнирная область кошачьего IgG2-Fc дикого типа, которая имеет только одну пару остатков цистеина, может быть недостаточной, чтобы сформировать эффективную дисульфидную связь.
[00201] Анализ методом трехмерного моделирования белка нескольких ортологов шарнирных структур использовли для определения местоположения примерных модификаций шарнирной области кошачьего IgG2, чтобы увеличить образование дисульфидной связи. Для увеличения образования дисульфидных связей в шарнирной области кошачьего IgG2, ее последовательность может быть изменена путем замены какой-либо аминокислоты цистеином. Так, например, вариант кошачьего IgG2-Fc (SEQ ID NO: 17), имеющий модифицированную шарнирную область, получали при замещении Gly на Cys в положении, соответствующем положению 14 в SEQ ID NO: 16. Соответствующие непрерывные полипептиды ssGLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 39) и ssGLP1-G8/GLP1-2G _III_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 38), содержащие вариант кошачьего IgG-Fc SEQ ID NO: 17, были разработаны, проэкспрессированы в клетках СНО и очищены с помощью хроматографии на белке A. Аминокислотными последовательностями этих секретируемых белков после отщепления сигнальной последовательности являются SEQ ID NO: 26 и 25, соответственно. Анализ SDS-PAGE конструкций с вариантами кошачьих IgG2 показал уменьшение количества белка в полосе с меньшей молекулярной массой в отсутствии восстанавливающего агента по сравнению с конструкциями с диким типом кошачьих IgG2 (сравните фигуру 2B с фигурой 2А). Эти результаты свидетельствуют о том, что ковалентное образование пар между Fc-полипептидами улучшилось в случае обоих конструкций с вариантами кошачьих IgG2.
[00202] Кроме того, дифференциальную сканирующую флуориметрию использовали для оценки стабильности непрерывных полипептидов при различном рН по средней температуре точки плавления (n=3) (таблица 9, ниже). Повышенная стабильность варианта шарнирной области кошачьих IgG2 является наиболее выраженной при рН 6. Например, конструкции, содержащие вариант кошачьего IgG2 (SEQ ID NO: 25 и 26), имели более высокую Tm при рН 6 (56,9 и 59,7°C), чем соответствующие конструкции, содержащие кошачий IgG2 дикого типа (SEQ ID NO: 23 и 24), которые имели Tm 55,2 и 56,9°с соответственно.
[00203] Таблица 9.
НК=нет кривой, так как не было обнаружено никакой четко выраженной точки перехода.
[00204] Непрерывные полипептиды по формулам I, II, и III, содержащие GLP1-S8 (7-35) (SEQ ID NO: 86) вместо GLP1-G8 (7-35) (SEQ ID NO: 87), могут быть аналогичным образом разработаны и получены. Например, могут быть получены ssGLP1-S8_I_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 40), GLP1-S8_I_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 28), ssGLP1-S8/GLP1-3G_III_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 37) и GLP1-S8/GLP1-3G_III_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 27). Аналогичные конструкции, имеющие вариант вместо дикого типа кошачьих IgG-Fc, такие как GLP1-S8_I_VARfeIgG2, GLP1-S8_I_ VARfeIgG2, GLP1-S8/GLP1-2G_III_VARfeIgG2 и GLP1-S8/GLP1-3G_III_ VARfeIgG2, также могут быть получены.
[00205] Хотя в данном примере был использован кошачий IgG2-Fc, могут быть разработаны и получены непрерывные полипептиды по формулам I, II и III, содержащие кошачьи IgG1a-Fc или IgG1b-Fc вместо IgG2. Например, могут быть разработаны и получены аналогичные непрерывные полипептиды, содержащие кошачий IgG1a-Fc дикого типа, кошачий IgG1b-Fc дикого типа, вариант кошачьего IgG1a-Fc или вариант кошачьего IgG1b-Fc (SEQ ID NO: 80-83, соответственно).
Пример 7
Слитые белки GLP1 и собачьих IgG-Fc
[00206] Различные непрерывные полипептиды по формулам I, II, III, содержащие вариант GLP1 и собачьи IgG-Fc, могут быть разработаны и получены. Например, вариант собачьего IgG-D-Fc (например, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 62), может быть выбран на основании его низкого или нулевого связывания с C1q для снижения активности комплемента и связывания с белком А для простоты очистки. Кроме того, может быть использован гибкий, неструктурированный линкер, такой как глицин и/или серин-богатый линкер.
[00207] GLP1-G8_I_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 30) и GLP1-S8_I_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 32) являются примерами непрерывных полипептидов по формуле I, содержащих (1) GLP1-G8 (7-35) или GLP1-S8 (7-35), (2) гибкий линкер, и (3) вариант собачьего IgG-D-Fc (например, SEQ ID NO: 7). GLP1-G8/GLP1-3G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 29) и GLP1-S8/GLP1-3G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 31) являются непрерывных полипептидов по формуле III, содержащих (1) GLP1-G8 (SEQ ID NO: 87) или GLP1-S8 (SEQ ID NO: 86), (2) GLP1 (7-35) (SEQ ID NO: 61), (3) два гибких линкера, (4) С-концевое 3G-удлинение, и (5) вариант собачьего IgG-D-Fc.
[00208] Непрерывные полипептиды могут быть сконструированы с сигнальной последовательностью, другим полипептидом GLP1 (например, SEQ ID NO: 85, 86, 87, 98 или 99) или различными модификациями в собачьих IgG-Fc. Примеры с такими вариациями включают ssGLP1-S8/GLP1-2G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 41), ssGLP1-G8/GLP1-2G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 42), ssGLP1-S8/GLP1-3G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 43), GLP1-S8/GLP1-2G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 105), and GLP1-G8/GLP1-2G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 106).
[00209] Кроме того, непрерывные полипептиды по формулам I, II и III могут содержать собачьи IgG-D дикого типа или дикий тип или вариант собачьих IgG-A, IgG-B или IgG-C вместо варианта собачьего IgG-D. Например, аналогичные непрерывные полипептиды могут быть разработаны и получены с собачьими IgG-A-Fc, IgG-B-Fc, IgG-C-Fc дикого типа или IgG-D-Fc (например, SEQ ID NO: 1, 2, 3 или 4, соответственно). Дополнительные примеры включают непрерывные полипептиды, содержащего вариант собачьего IgG-A-Fc (например, SEQ ID NO: 5 или 60), вариант собачьего IgG-B-Fc (например, SEQ ID NO: 78), или вариант собачьего IgG-C-Fc (например, SEQ ID NO: 6, 61, 79 или 84).
[00210] GLP1-G8/GLP1-3G_III_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 29) и GLP1-G8_I_ VARcaIgGD (SEQ ID NO: 30) были проэкспрессированы по отдельности в клетках СНО, и надосадочную жидкость, содержащую белки, собирали и фильтровали. Оба непрерывных полипептида очищали с помощью аффинной хроматографии на колонке с белком А. Сравнивали профили электрофоретического разделения в ДСН-ПАПГ для двух непрерывных полипептидов в отсутствие и в присутствии восстанавливающего агента (DTT), и результаты свидетельствовали о том, что дисульфидные связи между Fc-полипептидами эффективно формировались у обоих полипептидов (данные не показаны).
Пример 8
Слитые белки GLP1 и лошадиных IgG-Fc
[00211] Различные непрерывные полипептиды по формулам I, II, III, содержащие вариант GLP1 и лошадиные IgG-Fc, могут быть разработаны и получены. Например, вариант собачьего IgG2-Fc (например, SEQ ID NO: 19, 71 или 72), может быть выбран на основании его низкого или нулевого связывания с C1q для снижения активности комплемента и связывания с белком А для простоты очистки. Кроме того, может быть использован гибкий, неструктурированный линкер, такой как глицин и/или серин-богатый линкер.
[00212] GLP1-G8_I_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 34) и GLP1-S8_I_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 36) являются примерами непрерывных полипептидов по формуле I, содержащих (1) GLP1-G8 или GLP1-S8, (2) гибкий линкер и (3) вариант лошадиного IgG2-Fc (например, SEQ ID NO: 19). GLP1-G8/GLP1-3G_III_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 33) и GLP1-S8/GLP1-3G_III_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 35) являются примерами непрерывных полипептидов по формуле III, содержащих (1) GLP1-G8 (7-35) (SEQ ID NO: 87) или GLP1-S8 (7-35) (SEQ ID NO: 86), (2) GLP1 (7-35) (SEQ ID NO: 61), (3) два гибких линкера, (4) С-концевое 3G-удлинение и (5) вариант лошадиного IgG-D-Fc.
[00213] Непрерывные полипептиды могут быть сконструированы с сигнальной последовательностью, другим аналогом GLP1 (например, SEQ ID NO: 85, 86, 87, 98 или 99) или различными модификациями в лошадиных IgG-Fc. Примеры с такими вариациями включают ssGLP1-G8/GLP1-3G_III_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 44), ssGLP1-G8_I_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 45), ssGLP1-S8/GLP1-3G_III_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 46) и ssGLP1-S8_I_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 47).
[00214] Кроме того, непрерывные полипептиды по формулам I, II, и III могут содержать лошадиные IgG2 дикого типа, или дикий тип или вариант лошадиных IgG1, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7 вместо варианта лошадиного IgG2. Например, аналогичные непрерывные полипептиды могут быть сконструированы и получены с диким типом лошадиных IgG1-Fc (например, SEQ ID NO: 63), IgG2-Fc (например, SEQ ID NO: 18 или 64), IgG3-Fc (например, SEQ ID NO: NO: 65), IgG4-Fc (например, SEQ ID NO: 66), IgG5-Fc (например, SEQ ID NO: 67), IgG6-Fc (например, SEQ ID NO: 68) или IgG7-Fc (например, SEQ ID NO: 69). Дополнительные примеры включают непрерывные полипептиды, содержащие вариант лошадиного IgG1-Fc (например, SEQ ID NO: 70), вариант лошадиного IgG3-Fc (например, SEQ ID NO: 73), вариант лошадиного IgG4-Fc (например, SEQ ID NO: 74), вариант лошадиного IgG5-Fc (например, SEQ ID NO: 75), вариант лошадиного IgG6-Fc (например, SEQ ID NO: 76) или вариант лошадиного IgG7-Fc (например, SEQ ID NO: 77).
[00215] Нуклеотидные последовательности, кодирующие ssGLP1-G8/GLP1-3G_III_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 44) и ssGLP1-G8_I_ VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 45), были синтезированы и клонированы в отдельные векторы для экспрессии в клетках млекопитающих. Полученными векторами по отдельности трансфицировали клетки СНО. Супернатант, содержащий непрерывные полипептиды после отщепления сигнального пептида (SEQ ID NO: 103 и 104), собирали и фильтровали. Оба белка аффинно очищали с использованием колонки с белком A (CaptivA® Protein A Affinity Resin, Repligen). Белки были проэкспрессированы по отдельности в клетках СНО, и надосадочную жидкость, содержащую белки, собирали и фильтровали. Оба непрерывных полипептида аффинно очищали на колонке с белком А. Сравнивали профили электрофоретического разделения в ДСН-ПАПГ для двух непрерывных полипептидов в отсутствие и в присутствии восстанавливающего агента (DTT), и результаты свидетельствовали о том, что дисульфидные связи между Fc-полипептидами эффективно формировались у обоих полипептидов (данные не показаны).
Пример 9
Экспрессия и очистка N-концевого растворимого домена кошачьего GLP1R
[00216] N-концевой домен кошачьего зрелого GLP1R (SEQ ID NO: 49), отвечающий за связывание с GLP1 с GLP1R, был идентифицирован в полноразмерной аминокислотной последовательности кошачьего GLP1R (SEQ ID NO: 48). Нуклеотидные последовательности, кодирующие (1) сигнальную последовательность, кошачий N-концевой домен GLP1R, Fc человека и поли-His тег (ssFeGLP1R-N-huFc_PolyHis; SEQ ID NO: 50) и (2) сигнальную последовательность, кошачий N-концевой домен GLP1R, и поли-His тег (ssFeGLP1R-N_polyHis; SEQ ID NO: 51), были синтезированы и клонированы в отдельные векторы для экспрессии в клетках млекопитающих. Полученными векторами по отдельности трансфицировали клетки СНО. Супернатант, содержащий полипептиды, собирали и фильтровали. Белки аффинно очищали с использованием Ni-сефарозы или колонки с белком А (CaptivA® Protein A Affinity Resin, Repligen) для конструкции huFc. Оба белка были использованы для функционального связывания GLP1 и ELISA.
Пример 10
Кинетика связывания слитого с GLP1 белка
[00217] Аффинность связывания GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26) с FeGLP1R-N-huFc_PolyHis оценивали с помощью биослойной интерферометрии (Octet). Вкратце, FeGLP1R-N-huFc_PolyHis биотинилировали, свободный непрореагировавший биотина удаляли, и биотинилированный белок захватывался стрептавидином на кончике сенсора. Ассоциацию с различными концентрациями GLP1-G8_I_VARfeIgG2 регистрировали в течение 90 секунд. Диссоциацию регистрировали в течение 600 секунд. БЗначения фоновой кривой, полученной с использованием буфера, вычитают, чтобы исключить влияние фона. Данные апроксимируют на модель связывания 1:1 с использованием аналитического программного обеспечения ForteBio™ для определения kon, koff и Kd Буфер для разведения и всех обязательных шагов был следующим: 20 мМ фосфат, 150 мМ NaCl, рН 7,2. Kd связывания кошачьего N-концевого домена GLP1R и GLP1-G8_I_VARfeIgG2 находилась в диапазоне между 8,0×10-9 и 16×10-9 M.
Пример 11
Биологическая активность слитого с GLP1 белка в клеточном анализе
[00218] Клеточная линия CHOK-1-GL1R (Discoverx, кат.№ 95-0062C2), клеточная линия яичников хомячка, которая сверхэкспрессирует Gs-связанные рецепторы человеческого глюкагонового лигандного пептида-1 (GLP1R) на поверхности клеток, была использована для измерения клеточной активности GLP1 с помощью набора cAMP Hunter Bioassay kit (Discoverx, кат.№ 95-0062Y2). Клетки высевали в 96-луночный планшет и инкубировали при 37°С, 5% CO2 в течение 24 часов. Затем клетки обрабатывали контролем агонистом, либо GLP1 человека (37 аа) (Prospec, кат.№ HOR-236) либо Экстендином-4 (Discoverx, кат.№ 92-1115), или непрерывным полипептидом, содержащим вариант GLP1, в сериях 3-кратных разбавлений, с последующей инкубацией при 37°с в течение 30 мин. Тестируемыми непрерывными полипептидами являлись GLP1-G8/GLP1-2G_III_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 25) and GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26).
[00219] При связывании GLP1 с Gs-связанным GLP1R, Gs стимулируют образование цАМФ аденилатциклазой. В конце инкубации, к клеткам добавляли цАМФ-антитело и рабочий раствор для детекции цАМФ, который содержит буфер для лизиса, конъюгированный с небольшим фрагментом β-галактозидазы (β-GAL) цАМФ и субстраты. Клетки инкубировали в темноте в течение 1 часа при комнатной температуре, чтобы позволить осуществиться иммуноконкуретной реакции между эндогенно образующимся цАМФ и конъюгированным с небольшим фрагментом β-галактозидазы (β-gal) цАМФ за связывания цАМФ-антитела.
[00220] В конце 1-часовой инкубации, к клеточному лизату добавляли цАМФ-раствор А, содержащий большой фрагмент β-gal, который может дополнить свободный (несвязанный с антителом) небольшой фрагмент β-gal, конъюгированный с цАМФ, с образованием функционального фермента. Лизат инкубировали в течение 3-6 ч в темноте при комнатной температуре, чтобы позволить β-gal гидролизовать субстрат и генерировать люминесцентный сигнал.
[00221] Чем больше остается несвязанного свободного небольшого фрагмента β-gal, конъюгированного с цАМФ, тем больше образуется функционального фермента β-gal. Таким образом, уровень полученного сигнала прямо пропорционален количеству цАМФ в клеточном лизате. В конце инкубации, люминесценцию считывали на микропланшетном ридере Synergy HT (Biotek, Winooski, VT). EC50s были рассчитаны с помощью программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc. La Jolla, USA).
[00222] На фигуре 3 показан график зависимости относительных световых единиц (RLU) от концентрации для каждого испытуемого образца. ЕС50 перечислены в таблице 10 ниже. Обе конструкции, GLP1-G8/GLP1-2G_III_ VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 25) и GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26), являются более активными, чем GLP1 (7-37) и Экстендин-4. GLP1-G8/GLP1-2G_III_ VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 25 является более сильной, чем GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26), что свидетельствует о том, что С-концевой GLP1 может придавать дополнительную активность.
[00223] Таблица 10.
(SEQ ID NO: 25)
(SEQ ID NO: 26)
Пример 12
Долговременная стабильность слитого с GLP1 белка
[00224] GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26) хранили в PBS, pH 7,2, в концентрации 1,3 мг/мл, помещенным в 1,5 мл пробирки Эппендорф, при температуре 2-8°С в течение одного года (партия 2-29-2016). GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26) также хранили в PBS, рН 7,2, в концентрации 10 мг/мл, помещенным в 1,5 мл пробирки Эппендорф, при температуре 2-8°С в течение одного дня (партия 2-2-2017). Для оценки стабильности, образцы после хранения анализировали с клеточного анализа с использованием той же клеточной линии CHOK-1-GL1R (Discoverx, кат.№ 95-0062C2), описанной в примере 11, но клеточную активность оценивали с использованием cAMP-Glo™ Max Assay (Promega, кат.№ PAV1682).
[00225] клетки CHOK-1-GL1R высевали в 96-луночный планшет (Corning, кат.№ 3610) с плотностью 20000 клеток на лунку в среде F-12K (АТСС, кат.№ 30-2004 ATCC®) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, инактивированной нагреванием (Sigma, кат.№ 2868) и инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 24 часов. Затем клетки стимулировали с контрольным агонистом GLP1 человека (37 аа) (Prospec, кат.№ HOR-236), партией 2-20-2016 или партией 2-2-2017 в серии из 3-кратного разведений в бессывороточной среде с последующим добавлением Complete Induction Buffer, который содержит MgCl2 до конечной концентрации 20 мМ, изобутил-л-метилксантин (IBMX) (Sigma-Aldrich, кат.№ 17018) до конечной концентрации 500 мкΜ и Ro 20-1724 [4-(3-бутокси-4-метокси-бензил)имидазолидон] (Sigma Aldrich, кат.# B8279) до конечной концентрации 100 мкΜ.
[00226] Клетки инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. В этом процессе, при связывании GLP1 с Gs-связанным GLP1R, Gs стимулирует продукцию цАМФ аденилатциклазой. В конце инкубации, к клеткам добавляют cAMP Detection Solution, который содержит неактивный холофермент протеинкиназы А, субстрат протеинкиназы А и буфер для лизиса. Планшеты помещали на орбитальный шейкер на 1-2 минуты, а затем инкубировали при комнатной температуре (23°C) в течение 20 минут. Клеточный цАМФ активирует протеинкиназу А путем связывания его регуляторной ингибирующей субъединицы и высвобождения каталитических субъединиц. Свободные каталитические субъединицы катализирует перенос концевого фосфата АТФ на субстрат протеинкиназы А, потребляя клеточный АТФ в этом процессе. В конце инкубации к клеточным лизатам добавляли реагент Kinase-Glo® на основе люциферазы, и планшеты встряхивали на орбитальном шейкере в течение 2 минут с последующей инкубацией в темноте при комнатной температуре в течение 10 минут.
[00227] Моноокисление люциферина катализировалось люциферазой в присутствии Mg2+ и АТФ, который присутствовал в клеточном лизате, что приводило к люминесцентному сигналу, пропорциональному количеству АТФ в клетках. В конце 10-минутной инкубации планшет считывали на считывающем устройстве для микропланшетов Synergy HT (Biotek, Winooski, VT). Люминесценция была пропорциональна уровню АТФ, но обратно пропорциональна уровню цАМФ. Таким образом, с увеличением концентрации цАМФ свечение уменьшается.
[00228] На фигуре 4 показаны результаты клеточного анализа в виде графика зависимости люминесценции от концентрации для партии 2-29-2016 по сравнению с партией 2-2-2017 и GLP1 (31 аа). Образец GLP1-G8_I_VARfeIgG2 сохранял клеточную активность после хранения в PBS при 2-8°C в течение одного года.
Пример 13
Стабильность в сыворотке крови слитого с GLP1 белка
[00229] GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26) хранили в PBS, рН 7,2 с кошачьей сывороткой при 37°C в течение 24 часов, чтобы протестировать стабильность в сыворотке крови in vitro. Клеточный анализ проводили, как описано в примере 12, и результаты свидетельствуют о том, что активность сохранялась (данные не показаны). Кроме того, никакой видимой деградации не наблюдалось с помощью Вестерн-блот-анализа (фигура 5).
Пример 14
Фармакокинетика in vivo слитого с GLP1 белка
[00230] GLP1-G8_I_VARfeIgG2 (SEQ ID NO: 26), вводили в виде однократной дозы (2 мг/кг) путем подкожной инъекции 5 кошкам. Образцы сыворотки отбирали перед введением (время 0) и через 4 часа, 8 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часов и 168 часов. Концентрацию GLP1-G8_I_VARfeIgG2 в образцах сыворотки измеряли с помощью количественного ELISA. В качестве эталона использовали полипептид GLP1-G8_I_VARfeIgG2 с пределом обнаружения 4 нг/мл. Концентрации GLP1-G8_I_VARfeIgG2 в сыворотке наносили на график в зависимости от времени (фигура 6). Среднее время полужизни в сыворотке (t½) GLP1-G8_I_VARfeIgG2 составляло 39 часов. Среднее Tmax составляло 22 часов, среднее Cmax составляло 12 мкг/мл, а средняя площадь под кривой (AUC) составляла около 950 мкг мкг(ч)/мл.
[00231] В количественном ELISA использовали анти-GLP1 антитела (4F3, Novus Biologicals, кат.№ NBP1-97413) и козьи антитела к кошачьим IgG-Fc, конъюгированные с HRP, (Bethyl Laboratories, Inc, кат.№ A20-117P) для количественного определения GLP1-G8_I_VARfeIgG2 в образцах сыворотки кошек в фармакокинетических исследованиях in vivo. 96-луночный планшет покрывали анти-GLP1 антителами (5 мкг/мл в буфере для покрытия, 100 мкл/лунку). Планшет закрывали и инкубировали в течение ночи при 4°С. Планшет промывали трехкратно 1хTBST (10X TBST, Teknova, № по каталогу T9511) и добавляли блокирующий буфер. После удаления блокирующего буфера, добавляли серийные разведения эталона и образцы в блокирующем буфере (100 лунку/лунке), и планшеты инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре. Планшет промывали трехкратно 1хTBST и добавляли козьи антитела к кошачьим IgG-Fc (0,1 мкг/мл в блокирующем буфере, 100 мкл/лунку). После инкубации в течение 1 часа при комнатной температуре, планшеты промывали 5 раз 1хTBST. Добавляли ТМВ-субстрат (ScyTek, кат.№ TM1999) (100 мкл/лунку) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 минуты. Реакцию останавливали добавлением 2М H2SO4 (50 мкл/лунку). Измеряли поглощение при 450 нм, и рассчитывали концентрацию GLP1-G8_I_ VARfeIgG2 в образцах сыворотки,.
[00232] Кроме того, концентрацию GLP1-G8_I_VARfeIgG2 в тех же образцах сыворотки (без добавления ингибитора DPP-4) оценивали с использованием анализа клеточной активности. Использовали ту же клеточную линию CHOK-1-GL1R (Discoverx, кат.№ 95-0062C2) и cAMP-Glo™ Max Assay (Promega, кат.№ PAV1682), описанные в примере 12. В этом примере, однако, эти клетки были стимулированы контрольным агонистом GLP1 человека (37 аа) (Prospec, кат.№ HOR-236) или образцами кошачьей сыворотки, отобранными перед введением (время 0) и через 4 часа, 8 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часов, 168 часов и разведенные в среде без сыворотки (разведение до 5%, 0,5% и 0,05%). Концентрацию GLP1-G8_I_VARfeIgG2 в каждом образце рассчитывали с использованием SoftMax Pro 7 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Среднюю концентрацию GLP1-G8_I_VARfeIgG2 для 5 кошек наносили на график в зависимости от времени (фигура 7). Средняя AUC составляла примерно 840 мкг(ч)/мл, а среднее T1/2 составляло 36 часов.
Пример 15
Слитые белки GLP1, глюкагона и IgG-Fc
[00233] Для исследования двойного агониста GLP1-рецептора и глюкагонового рецептора с продолжительным действием, были созданы непрерывные полипептиды, содержащие полипептид GLP1, глюкагоновый полипептид и полипептид IgG-Fc и имеющие следующие конструкции:
формула (IV): GLP1-L1-Fc-L2-Gluc; и
формула (V): Gluc-L1-Fc-L2-GLP1,
где GLP1 представляет собой полипептид GLP1, Gluc представляет собой глюкагоновый полипептид, L1 и L2 - линкеры, и Fc представляет собой Fc-полипептид.
[00234] Как описано выше, GLP1 был модифицирован, чтобы быть устойчивым к действию DPP-4, путем замены аланина глицином или серином в положении, соответствующем положению 8 дикого типа GLP1 (7-37) (SEQ ID NO: 85). Кроме того, GLP1, устойчивый к DPP-4, далее модифицировали, удалив две C-концевые аминокислоты, чтобы получить варианты полипептидов GLP1-S8 (7-35) (SEQ ID NO: 86) и вариант GLP1-G8 (7-35) (SEQ ID NO: 87).
[00235] GLP1 полипептиды, когда они расположены на С-конце конструкции, например, как в формуле (V), являются невосприимчивыми к деградации DPP-4. Таким образом, замена аланина на глицин или серин не является необходимой для полипептидов GLP1, расположенных на С-конце. Соответственно, на С-конце может быть использован GLP1 дикого типа (7-37) (SEQ ID NO: 85).
[00236] Линкер может представлять собой гибкий, неструктурированный линкер, такой как глицин- и серин-богатый линкер. С-конец непрерывного полипептида может быть удлинен гибкой последовательностью. Удлинение может содержать остаток глицина (SEQ ID NO: 88), два остатка глицина (SEQ ID NO: 89), три остатка глицина (SEQ ID NO: 90), четыре остатка глицина (SEQ ID NO: 91), пять остатков глицина (SEQ ID NO: 92), шесть остатков глицина (SEQ ID NO: 93), семь остатков глицина (SEQ ID NO: 94), восемь остатков глицина (SEQ ID NO: 95) или большее число остатков глицина.
[00237] Непрерывный полипептид может включать глюкагоновый полипептид дикого типа (например, SEQ ID NO: 21) или вариант глюкагонового полипептида.
[00238] Непрерывный полипептид может содержать IgG-Fc человека или животного-компаньона, такого как представитель семейства собачьих, кошачьих или лошадиных. Используемый подтип IgG-Fc может быть выбран на основании низкого или отсутствующего связывания с C1q и/или связывания с белком А. Например, могут использоваться дикий тип или вариант IgG-Fc человека, собаки, лошади или кошки, имеющие низкое или отсутствующее связывание с C1q и/или имеющие связывание с белком А (например, SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4 , 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69 , 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83 или 84).
[00239] Примеры непрерывных полипептидов, содержащих полипептид GLP1, глюкагоновый полипептид и кошачий полипептид IgG-Fc включают GLP1-G8/Gluc-3G_IV_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 52) и Gluc/GLP1-2G_V_WTfeIgG2 (SEQ ID NO: 53).
[00240] Примеры непрерывных полипептидов, содержащих полипептид GLP1, глюкагоновый полипептид и собачий полипептида IgG-Fc включают GLP1-G8/Gluc-4G_IV_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 54) и Gluc/GLP1-3G_V_VARcaIgGD (SEQ ID NO: 55).
[00241] Примеры непрерывных полипептидов, содержащих полипептид GLP1, глюкагоновый полипептид и лошадиный полипептид IgG-Fc, включают GLP1-G8/Gluc-4G_IV_VAReqIgGD (SEQ ID NO: 56) и Gluc/GLP1-3G_V_VAReqIgG2 (SEQ ID NO: 57).
[00242] Примеры непрерывных полипептидов, содержащих полипептид GLP1, глюкагоновый полипептид и полипептид IgG-Fc человека, включают GLP1-G8/Gluc-4G_IV_huIgG4 (SEQ ID NO: 8) и Gluc/GLP1-3G_V_huIgG4 (SEQ ID NO: 59).
Пример 16
Варианты полипептидов IgG-Fc для усиления образования дисульфидных связей в шарнирной области
[00243] Дополнительное трехмерное моделирование нескольких ортологов шарнирных структур использовали для изменения шарнирных областей кошачьего и лошадиного IgG для увеличения образования дисульфидных связей. Для усиления образования дисульфидных связей в шарнирной области кошачьего IgG, последовательность шарнирной области может быть изменена путем замены лизина на пролин в положении, соответствующем положению 16 кошачьего IgG2 (SEQ ID NO: 16), кошачьего IgG1a (SEQ ID NO: 80 или SEQ ID NO: 117) или кошачьего IgG1b (SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 118) (например, K16P). Примеры аминокислотных последовательностей вариантов полипептидов кошачьих IgG, имеющих модифицированную шарнирную область, включают SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 126 и SEQ ID NO: 127.
[00244] Для усиления образования дисульфидных связей в шарнирной области лошадиных IgG, последовательность шарнирной области может быть модифицирована путем замены цистеина на серин в положении, соответствующем положению 3 в лошадиных IgG (например, IgG2-Fc (SEQ ID NO: 129)) и/или замены глутамина на пролин в положении, соответствующем положению 20 в лошадиных IgG (например, IgG2-Fc (SEQ ID NO: 129) (например, C3S, Q20P) Примеры аминокислотных последовательностей вариантов полипептидов лошадиных IgG, имеющих модифицированную шарнирную область, включают в SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 134 и SEQ ID NO: 135.
Пример 17
Варианты полипептидов IgG-Fc для усиления рекомбинантной продукции и/или усиленного образования дисульфидных связей в шарнирной области
[00245] Трехмерное моделирование использовали для создания вариантов полипептидов кошачьих и лошадиных IgG-Fc, содержащих последовательности шарнирной области из другого изотипа IgG, для улучшения продукции в рекомбинантной системе и улучшения образования дисульфидной связи в шарнирной области. Могут быть получены варианты полипептидов кошачьих IgG2-Fc, которые содержат последовательности из шарнирной области кошачьего IgG1a или IgG1b (например, SEQ ID NO: 125). Кроме того, могут быть получены варианты полипептидов лошадиных IgG2-Fc, которые содержат последовательности из шарнирной области лошадиного IgG1 (например, SEQ ID NO: 19).
[00246] Уровень продукции в рекомбинантной системе вариантов полипептидов IgG-Fc и/или уровень образования дисульфидной связи в шарнирной области могут быть определены, и проведено их сравнение с другими IgG-Fc с помощью анализа SDS-PAGE в восстановительных и невосстановительных условиях (например, с соответствующим диким типом IgG-Fc из того же или другого изотипа, или диким типом или вариантом IgG-Fc другого животного-компаньона и т.д.).
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> KINDRED BIOSCIENCES, INC.
<120> ВАРИАНТЫ IGG-FC ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ
<130> 01157-0011-00PCT
<150> US 62/545,858
<151> 2017-08-15
<160> 199
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 221
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Собачий IgG-A-Fc дикого типа, Белок А -, C1q -, CD16
<400> 1
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 2
<211> 220
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Собачий IgG-В-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +, CD16 +
<400> 2
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 3
<211> 220
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Собачий IgG-С-Fc дикого типа, Белок А - , C1q +, CD16 +
<400> 3
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 4
<211> 221
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Собачий IgG-D-Fc дикого типа, Белок А -, C1q -, CD16
<400> 4
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 5
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-A-Fc,
C1q -, Белок А +, I(21)T,
R(23)L, T(25)A, E(80)G, T(205)A, Q(207)H
<400> 5
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 6
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-С-Fc,
C1q +, Белок А +, I(21)T,
V(23)L, T(24)I
<400> 6
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 7
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-D-Fc,
C1q -, Белок А +, I(21)T,
R(23)L, T(25)A, E(80)G, Q(207)H
<400> 7
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 8
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-A-Fc,
Гетеродимерная цепь 1 T(138)Y
<400> 8
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Tyr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 9
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-A-Fc,
Гетеродимерная цепь 2, Y(181)T
<400> 9
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 10
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-В-Fc,
Гетеродимерная цепь 1 T(137)Y
<400> 10
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Tyr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 11
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-В-Fc,
Гетеродимерная цепь 2, Y(180)T
<400> 11
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 12
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-С-Fc,
Гетеродимерная цепь 1 T(137)Y
<400> 12
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Tyr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 13
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-С-Fc,
Гетеродимерная цепь 2, Y(180)T
<400> 13
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 14
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-D-Fc,
Гетеродимерная цепь 1 T(138)Y
<400> 14
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Tyr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 15
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-D-Fc,
Гетеродимерная цепь 2, Y(181)T
<400> 15
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 16
<211> 237
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Кошачий IgG2-Fc дикого типа, Белок А +, C1q -
<400> 16
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 17
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант кошачьего IgG2-Fc,
Замена на Cys в шарнирной области, G(14)C
<400> 17
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 18
<211> 228
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG2-Fc
(с шарнирной областью из лошадиного IgG1),
Белок А - , C1q -
<400> 18
Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
1 5 10 15
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile
20 25 30
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
35 40 45
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
50 55 60
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
65 70 75 80
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
85 90 95
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
100 105 110
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
115 120 125
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
130 135 140
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
145 150 155 160
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
165 170 175
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
180 185 190
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys
225
<210> 19
<211> 228
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG2-Fc
(с шарнирной областью из лошадиного IgG1), C1q
-, Белок А +, A(29)T, F(217)Y
<400> 19
Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
1 5 10 15
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
20 25 30
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
35 40 45
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
50 55 60
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
65 70 75 80
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
85 90 95
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
100 105 110
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
115 120 125
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
130 135 140
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
145 150 155 160
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
165 170 175
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
180 185 190
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys
225
<210> 20
<211> 29
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант GLP1 (7-35)
<220>
<221> прочие признаки
<222> (2)..(2)
<223> X может представлять собой G или S
<400> 20
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
20 25
<210> 21
<211> 29
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Глюкагон (Gluc)
<400> 21
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
20 25
<210> 22
<211> 39
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Экстендин-4
<400> 22
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 23
<211> 325
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/GLP-2G_III_ WTfeIgG2
<400> 23
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
50 55 60
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
65 70 75 80
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
85 90 95
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
100 105 110
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
115 120 125
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
130 135 140
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
145 150 155 160
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
165 170 175
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
180 185 190
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
195 200 205
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
245 250 255
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
260 265 270
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly
275 280 285
Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val
290 295 300
Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu
305 310 315 320
Val Lys Gly Gly Gly
325
<210> 24
<211> 285
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8_I_WTfeIgG2
<400> 24
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
50 55 60
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
65 70 75 80
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
85 90 95
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
100 105 110
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
115 120 125
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
130 135 140
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
145 150 155 160
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
165 170 175
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
180 185 190
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
195 200 205
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
245 250 255
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
260 265 270
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
275 280 285
<210> 25
<211> 325
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/GLP1-2G_III_
VARfeIgG2
<400> 25
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Cys Pro Lys
50 55 60
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
65 70 75 80
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
85 90 95
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
100 105 110
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
115 120 125
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
130 135 140
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
145 150 155 160
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
165 170 175
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
180 185 190
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
195 200 205
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
245 250 255
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
260 265 270
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly
275 280 285
Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val
290 295 300
Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu
305 310 315 320
Val Lys Gly Gly Gly
325
<210> 26
<211> 285
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8_I_VARfeIgG2
<400> 26
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Cys Pro Lys
50 55 60
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
65 70 75 80
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
85 90 95
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
100 105 110
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
115 120 125
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
130 135 140
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
145 150 155 160
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
165 170 175
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
180 185 190
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
195 200 205
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
245 250 255
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
260 265 270
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
275 280 285
<210> 27
<211> 327
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-S8/GLP1-3G_III_
WTfeIgG2
<400> 27
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro
50 55 60
Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
65 70 75 80
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
85 90 95
Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile
100 105 110
Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro
115 120 125
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro
130 135 140
Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
145 150 155 160
Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala
165 170 175
Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln
180 185 190
Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly
195 200 205
Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro
210 215 220
Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp
225 230 235 240
Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp
245 250 255
Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His
260 265 270
Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys Gly Gly
275 280 285
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp
290 295 300
Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp
305 310 315 320
Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
325
<210> 28
<211> 286
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-S8_I_WTfeIgG2
<400> 28
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro
50 55 60
Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
65 70 75 80
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
85 90 95
Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile
100 105 110
Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro
115 120 125
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro
130 135 140
Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
145 150 155 160
Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala
165 170 175
Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln
180 185 190
Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly
195 200 205
Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro
210 215 220
Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp
225 230 235 240
Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp
245 250 255
Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His
260 265 270
Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
275 280 285
<210> 29
<211> 323
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/GLP1-3G_III_
VARcaIgGD
<400> 29
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Glu Ser Thr Ser Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro
50 55 60
Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu
85 90 95
Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp
100 105 110
Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe
115 120 125
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu
145 150 155 160
Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His
165 170 175
Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser
180 185 190
Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro
195 200 205
Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe
225 230 235 240
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp
245 250 255
Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
260 265 270
Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
290 295 300
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
305 310 315 320
Gly Gly Gly
<210> 30
<211> 282
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8_I_VARcaIgGD
<400> 30
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro
50 55 60
Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu
85 90 95
Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp
100 105 110
Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe
115 120 125
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu
145 150 155 160
Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His
165 170 175
Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser
180 185 190
Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro
195 200 205
Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe
225 230 235 240
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp
245 250 255
Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
260 265 270
Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
275 280
<210> 31
<211> 323
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-S8/GLP1-3G_III_
VARcaIgGD
<400> 31
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Glu Ser Thr Ser Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro
50 55 60
Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu
85 90 95
Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp
100 105 110
Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe
115 120 125
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu
145 150 155 160
Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His
165 170 175
Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser
180 185 190
Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro
195 200 205
Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe
225 230 235 240
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp
245 250 255
Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
260 265 270
Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
290 295 300
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
305 310 315 320
Gly Gly Gly
<210> 32
<211> 282
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-S8_I_VARcaIgGD
<400> 32
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro
50 55 60
Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu
85 90 95
Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp
100 105 110
Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe
115 120 125
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu
145 150 155 160
Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His
165 170 175
Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser
180 185 190
Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro
195 200 205
Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe
225 230 235 240
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp
245 250 255
Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
260 265 270
Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
275 280
<210> 33
<211> 318
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/GLPL1-3G_III_
VAReqIgG2
<400> 33
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met
65 70 75 80
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
85 90 95
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
100 105 110
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
115 120 125
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
130 135 140
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
145 150 155 160
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
165 170 175
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
180 185 190
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
195 200 205
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
210 215 220
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
225 230 235 240
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser
260 265 270
Glu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala
275 280 285
Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala
290 295 300
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
305 310 315
<210> 34
<211> 277
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8_I_VAReqIgG2
<400> 34
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met
65 70 75 80
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
85 90 95
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
100 105 110
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
115 120 125
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
130 135 140
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
145 150 155 160
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
165 170 175
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
180 185 190
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
195 200 205
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
210 215 220
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
225 230 235 240
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser
260 265 270
Glu Ser Leu Gly Lys
275
<210> 35
<211> 318
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-S8/GLP1-3G_III_
VAReqIgG2
<400> 35
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met
65 70 75 80
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
85 90 95
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
100 105 110
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
115 120 125
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
130 135 140
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
145 150 155 160
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
165 170 175
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
180 185 190
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
195 200 205
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
210 215 220
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
225 230 235 240
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser
260 265 270
Glu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala
275 280 285
Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala
290 295 300
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
305 310 315
<210> 36
<211> 277
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-S8_I_VAReqIgG2
<400> 36
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met
65 70 75 80
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
85 90 95
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
100 105 110
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
115 120 125
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
130 135 140
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
145 150 155 160
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
165 170 175
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
180 185 190
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
195 200 205
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
210 215 220
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
225 230 235 240
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser
260 265 270
Glu Ser Leu Gly Lys
275
<210> 37
<211> 346
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-S8/GLP1-3G_III_
WTfeIgG2
<400> 37
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly
65 70 75 80
Glu Gly Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val
85 90 95
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr
100 105 110
Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn
115 120 125
Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys
130 135 140
Thr Arg Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
145 150 155 160
Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys
165 170 175
Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile
180 185 190
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro
195 200 205
Pro Thr Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu
210 215 220
Ile Lys Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr
225 230 235 240
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu
245 250 255
Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg
260 265 270
Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu
275 280 285
Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly
290 295 300
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe
305 310 315 320
Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe
325 330 335
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
340 345
<210> 38
<211> 344
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8/GLP1-2G_III_
VARfeIgG2
<400> 38
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu
65 70 75 80
Cys Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe
85 90 95
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro
100 105 110
Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val
115 120 125
Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr
130 135 140
Arg Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
145 150 155 160
Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys
165 170 175
Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser
180 185 190
Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro
195 200 205
Thr Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile
210 215 220
Lys Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly
225 230 235 240
Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser
260 265 270
His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala
275 280 285
Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
290 295 300
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr
305 310 315 320
Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile
325 330 335
Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly
340
<210> 39
<211> 304
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8_I_VARfeIgG2
<400> 39
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu
65 70 75 80
Cys Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe
85 90 95
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro
100 105 110
Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val
115 120 125
Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr
130 135 140
Arg Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
145 150 155 160
Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys
165 170 175
Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser
180 185 190
Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro
195 200 205
Thr Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile
210 215 220
Lys Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly
225 230 235 240
Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp
245 250 255
Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser
260 265 270
His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala
275 280 285
Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
290 295 300
<210> 40
<211> 305
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-S8_I_WTfeIgG2
<400> 40
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly
65 70 75 80
Glu Gly Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val
85 90 95
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr
100 105 110
Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn
115 120 125
Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys
130 135 140
Thr Arg Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
145 150 155 160
Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys
165 170 175
Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile
180 185 190
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro
195 200 205
Pro Thr Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu
210 215 220
Ile Lys Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr
225 230 235 240
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu
245 250 255
Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg
260 265 270
Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu
275 280 285
Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly
290 295 300
Lys
305
<210> 41
<211> 340
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8/GLP1-2G_III_
VARcaIgGD
<400> 41
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro
65 70 75 80
Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
85 90 95
Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val
100 105 110
Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe
115 120 125
Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln
130 135 140
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His
145 150 155 160
Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln
180 185 190
Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu
195 200 205
Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
210 215 220
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro
225 230 235 240
Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
245 250 255
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
260 265 270
Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
275 280 285
Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly
290 295 300
Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser
305 310 315 320
Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val
325 330 335
Lys Gly Gly Gly
340
<210> 42
<211> 340
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8/GLP1-2G_III_
VARcaIgGD
<400> 42
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Pro Lys Glu Ser Thr Ser Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro
65 70 75 80
Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
85 90 95
Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val
100 105 110
Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe
115 120 125
Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln
130 135 140
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His
145 150 155 160
Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile
165 170 175
Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln
180 185 190
Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu
195 200 205
Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
210 215 220
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro
225 230 235 240
Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
245 250 255
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
260 265 270
Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
275 280 285
Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly
290 295 300
Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser
305 310 315 320
Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val
325 330 335
Lys Gly Gly Gly
340
<210> 43
<211> 342
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-S8/GLP1-3G_III_
VARcaIgGD
<400> 43
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Pro Lys Glu Ser Thr Ser Lys Cys Ile Ser Pro Cys
65 70 75 80
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
85 90 95
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
100 105 110
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
115 120 125
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
130 135 140
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
145 150 155 160
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
165 170 175
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
180 185 190
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
195 200 205
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
210 215 220
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
225 230 235 240
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
245 250 255
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
260 265 270
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn
275 280 285
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly
290 295 300
Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val
305 310 315 320
Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu
325 330 335
Val Lys Gly Gly Gly Gly
340
<210> 44
<211> 337
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8/GLP1-3G_III_
VAReqIgG2
<400> 44
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu
65 70 75 80
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp
85 90 95
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn
100 105 110
Leu Ser Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn
115 120 125
Thr Glu Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn
130 135 140
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp
145 150 155 160
Leu Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro
165 170 175
Gln Pro Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val
180 185 190
Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser
195 200 205
Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile
210 215 220
Ser Val Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr
225 230 235 240
Ser Thr Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe
260 265 270
Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr
275 280 285
Asp Ile Ser Glu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
290 295 300
Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
305 310 315 320
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly
325 330 335
Gly
<210> 45
<211> 298
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8_I_VAReqIgG2
<400> 45
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Ser Val Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His
65 70 75 80
Ser Lys Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asn Leu Ser Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Asn Thr Glu Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln
130 135 140
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly
165 170 175
Val Pro Gln Pro Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser
180 185 190
Arg Val Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala
195 200 205
Lys Ser Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro
210 215 220
Asp Ile Ser Val Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly
225 230 235 240
Lys Tyr Ser Thr Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe
245 250 255
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu
260 265 270
Ser Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
275 280 285
Lys Thr Asp Ile Ser Glu Ser Leu Gly Lys
290 295
<210> 46
<211> 337
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-S8/GLP1-3G_III_
VAReqIgG2
<400> 46
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu
65 70 75 80
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp
85 90 95
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn
100 105 110
Leu Ser Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn
115 120 125
Thr Glu Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn
130 135 140
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp
145 150 155 160
Leu Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro
165 170 175
Gln Pro Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val
180 185 190
Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser
195 200 205
Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile
210 215 220
Ser Val Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr
225 230 235 240
Ser Thr Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr
245 250 255
Ser Lys Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe
260 265 270
Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr
275 280 285
Asp Ile Ser Glu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
290 295 300
Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
305 310 315 320
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly
325 330 335
Gly
<210> 47
<211> 298
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-S8_I_VAReqIgG2
<400> 47
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Ser Val Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His
65 70 75 80
Ser Lys Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro
85 90 95
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val
100 105 110
Val Asn Leu Ser Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val
115 120 125
Asp Asn Thr Glu Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln
130 135 140
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln
145 150 155 160
Asp Trp Leu Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly
165 170 175
Val Pro Gln Pro Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser
180 185 190
Arg Val Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala
195 200 205
Lys Ser Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro
210 215 220
Asp Ile Ser Val Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly
225 230 235 240
Lys Tyr Ser Thr Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe
245 250 255
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu
260 265 270
Ser Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
275 280 285
Lys Thr Asp Ile Ser Glu Ser Leu Gly Lys
290 295
<210> 48
<211> 757
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Кошачий рецептор
глюкагон-подобного пептида-1 (GLP1R)
<400> 48
Met Gly Leu Val Ala Pro Val Val Leu Leu His Gln Asp Asp Glu Glu
1 5 10 15
His Gly Gln Asp Glu Gly Pro Glu Asp Gly Ser Gly Tyr Leu Leu Gly
20 25 30
Thr Leu Thr Arg Phe Ser Ser Asp Phe Asp Ser Ala Pro Glu Val Ile
35 40 45
Leu Ala Pro Asp Asp Gln Leu Gln Leu Pro His Pro Ser Ser Arg Glu
50 55 60
Asn Phe Trp Ala Arg Thr Gly Leu Cys Ala Glu Ser Phe Leu Leu Arg
65 70 75 80
Pro Val Gly Pro Val Gly Pro Val Met Gly Trp Ser Glu Gly Phe His
85 90 95
Lys Arg Asn Ser Arg Gln Glu Phe Leu Arg Arg Arg Leu Phe Ala Gly
100 105 110
Gly Leu Cys Ala Ala Ser Thr Gln Glu Ser Arg Asn Arg Cys Ser Ser
115 120 125
Arg Gly Cys Lys Ser Ser Pro Ala Asp Cys Pro Glu Leu Asp Arg Thr
130 135 140
Gln His Leu Gly Asn Ser Val Gly Pro Ile Gln Ala Ala His Gln Glu
145 150 155 160
Leu Ala Leu Gly Ala Gly Gly Pro Gly Asp Glu Cys Gln Cys Cys Ser
165 170 175
Val Ser Asn Ser Leu Phe Ile Pro Glu Pro Gln Ser Thr Cys Pro Tyr
180 185 190
Asn Gly Tyr Thr Ser Trp Pro Leu Glu Gly Asn Leu Arg Val Ala Cys
195 200 205
Ala Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Arg Thr Leu Phe Gly Gly Ser Arg
210 215 220
Arg Gly Ala Val Asp Lys Lys Ala Gly Gly Gly Asn Arg Ser Pro Gly
225 230 235 240
Gly Gly Ala Gly Thr Gly Glu Phe Gly Ala Pro Gly Ala Gly Gly Gly
245 250 255
Leu Gly Arg Arg Pro Glu Val Gly Ala Trp Thr Ala Ala Glu Gly Thr
260 265 270
Asn Pro Ala Asp Leu Ala Ser Ser Pro Pro Pro Pro Ser Thr Arg Pro
275 280 285
Pro Ala Ala Pro Arg Pro Pro Cys Ala Asp Phe Cys Ala Ala Ser Pro
290 295 300
Gln Thr Thr Phe Pro Thr Pro Ser Pro Arg Arg Pro Leu Pro Ala Ser
305 310 315 320
Gly Gly Ala Thr Val Ser Leu Ser Glu Thr Val Gln Lys Trp Arg Glu
325 330 335
Tyr Arg His Gln Cys Gln Arg Phe Leu Thr Glu Ala Pro Pro Pro Ala
340 345 350
Thr Gly Leu Phe Cys Asn Arg Thr Phe Asp Glu Tyr Ala Cys Trp Pro
355 360 365
Asp Gly Leu Pro Gly Ser Phe Val Asn Val Ser Cys Pro Trp Tyr Leu
370 375 380
Pro Trp Ala Ser Ser Val Leu Gln Gly His Val Tyr Arg Phe Cys Thr
385 390 395 400
Ala Glu Gly Leu Trp Leu Arg Gln Asp Asn Ser Ser Leu Pro Trp Arg
405 410 415
Asn Leu Ser Glu Cys Glu Glu Ser Lys Arg Gly Glu Arg Ser Ser Pro
420 425 430
Glu Glu Gln Leu Leu Ser Phe Ser Ile Ile Tyr Thr Val Gly Tyr Thr
435 440 445
Leu Ser Phe Ser Ala Leu Val Ile Ala Ser Ala Ile Leu Leu Ser Phe
450 455 460
Arg His Leu His Cys Thr Arg Asn Tyr Ile His Leu Asn Leu Phe Ala
465 470 475 480
Ser Phe Ile Leu Arg Ala Leu Ser Val Phe Ile Arg Asp Ala Val Leu
485 490 495
Lys Trp Met Tyr Ser Thr Ala Pro Gln Gln His Gln Trp Asp Gly Leu
500 505 510
Leu Ser Tyr Gln Asp Ser Leu Gly Cys Arg Leu Val Phe Leu Leu Met
515 520 525
Gln Tyr Cys Val Ala Ala Asn Tyr Tyr Trp Leu Leu Val Glu Gly Val
530 535 540
Tyr Leu Tyr Thr Leu Leu Ala Phe Ser Val Phe Ser Glu Gln Arg Ile
545 550 555 560
Phe Arg Leu Tyr Leu Ser Ile Gly Trp Gly Val Pro Leu Leu Phe Val
565 570 575
Ile Trp Gly Ile Val Lys Tyr Leu Tyr Glu Asp Glu Gly Cys Trp Thr
580 585 590
Arg Asn Ser Asn Met Asn Tyr Trp Leu Ile Ile Arg Leu Pro Ile Leu
595 600 605
Phe Ala Ile Gly Val Asn Phe Leu Ile Phe Val Arg Val Ile Cys Ile
610 615 620
Val Val Ser Lys Leu Lys Ala Asn Leu Met Cys Lys Thr Asp Ile Lys
625 630 635 640
Cys Arg Leu Ala Lys Ser Thr Leu Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Thr
645 650 655
His Glu Val Val Phe Ala Phe Val Met Asp Glu His Ala Arg Gly Thr
660 665 670
Leu Arg Phe Ile Lys Leu Phe Thr Glu Leu Ser Phe Thr Ser Phe Gln
675 680 685
Gly Leu Met Val Ala Ile Leu Tyr Cys Phe Val Asn Asn Glu Val Gln
690 695 700
Met Glu Phe Arg Arg Ser Trp Glu Arg Trp Arg Leu Lys His Leu His
705 710 715 720
Ile Gln Arg Asp Ser Ser Met Lys Pro Leu Lys Cys Pro Thr Ser Ser
725 730 735
Leu Thr Ser Gly Gly Thr Val Gly Ser Ser Val Tyr Ala Ala Ser Cys
740 745 750
Gln Ala Ser Cys Ser
755
<210> 49
<211> 126
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: N-концевой домен зрелого
кошачьего рецептора глюкагон-подобного пептида-1 (GLP1R-N)
<400> 49
Arg Pro Leu Pro Ala Ser Gly Gly Ala Thr Val Ser Leu Ser Glu Thr
1 5 10 15
Val Gln Lys Trp Arg Glu Tyr Arg His Gln Cys Gln Arg Phe Leu Thr
20 25 30
Glu Ala Pro Pro Pro Ala Thr Gly Leu Phe Cys Asn Arg Thr Phe Asp
35 40 45
Glu Tyr Ala Cys Trp Pro Asp Gly Leu Pro Gly Ser Phe Val Asn Val
50 55 60
Ser Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp Ala Ser Ser Val Leu Gln Gly His
65 70 75 80
Val Tyr Arg Phe Cys Thr Ala Glu Gly Leu Trp Leu Arg Gln Asp Asn
85 90 95
Ser Ser Leu Pro Trp Arg Asn Leu Ser Glu Cys Glu Glu Ser Lys Arg
100 105 110
Gly Glu Arg Ser Ser Pro Glu Glu Gln Leu Leu Ser Phe Ser
115 120 125
<210> 50
<211> 392
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssFeGLP1R-N_huFc_ PolyHis
<400> 50
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Arg Pro Leu Pro Ala Ser Gly Gly Ala Thr Val Ser
20 25 30
Leu Ser Glu Thr Val Gln Lys Trp Arg Glu Tyr Arg His Gln Cys Gln
35 40 45
Arg Phe Leu Thr Glu Ala Pro Pro Pro Ala Thr Gly Leu Phe Cys Asn
50 55 60
Arg Thr Phe Asp Glu Tyr Ala Cys Trp Pro Asp Gly Leu Pro Gly Ser
65 70 75 80
Phe Val Asn Val Ser Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp Ala Ser Ser Val
85 90 95
Leu Gln Gly His Val Tyr Arg Phe Cys Thr Ala Glu Gly Leu Trp Leu
100 105 110
Arg Gln Asp Asn Ser Ser Leu Pro Trp Arg Asn Leu Ser Glu Cys Glu
115 120 125
Glu Ser Lys Arg Gly Glu Arg Ser Ser Pro Glu Glu Gln Leu Leu Ser
130 135 140
Phe Ser Gly Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Pro Lys Ser Cys Asp
145 150 155 160
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
165 170 175
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
180 185 190
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
195 200 205
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
210 215 220
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
225 230 235 240
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
245 250 255
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
260 265 270
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
275 280 285
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
290 295 300
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
305 310 315 320
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
325 330 335
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
340 345 350
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
355 360 365
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
370 375 380
Gly Lys His His His His His His
385 390
<210> 51
<211> 156
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssFeGLP1R-N_PolyHis
<400> 51
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Arg Pro Leu Pro Ala Ser Gly Gly Ala Thr Val Ser
20 25 30
Leu Ser Glu Thr Val Gln Lys Trp Arg Glu Tyr Arg His Gln Cys Gln
35 40 45
Arg Phe Leu Thr Glu Ala Pro Pro Pro Ala Thr Gly Leu Phe Cys Asn
50 55 60
Arg Thr Phe Asp Glu Tyr Ala Cys Trp Pro Asp Gly Leu Pro Gly Ser
65 70 75 80
Phe Val Asn Val Ser Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp Ala Ser Ser Val
85 90 95
Leu Gln Gly His Val Tyr Arg Phe Cys Thr Ala Glu Gly Leu Trp Leu
100 105 110
Arg Gln Asp Asn Ser Ser Leu Pro Trp Arg Asn Leu Ser Glu Cys Glu
115 120 125
Glu Ser Lys Arg Gly Glu Arg Ser Ser Pro Glu Glu Gln Leu Leu Ser
130 135 140
Phe Ser Gly Gly Gly Ser His His His His His His
145 150 155
<210> 52
<211> 326
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/Gluc-3G_IV_ WTfeIgG2
<400> 52
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
50 55 60
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
65 70 75 80
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
85 90 95
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
100 105 110
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
115 120 125
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
130 135 140
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
145 150 155 160
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
165 170 175
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
180 185 190
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
195 200 205
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
210 215 220
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
225 230 235 240
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
245 250 255
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
260 265 270
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly
275 280 285
Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr
290 295 300
Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu
305 310 315 320
Met Asn Thr Gly Gly Gly
325
<210> 53
<211> 326
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Gluc/GLP1-2G_V_ WTfeIgG2
<400> 53
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro
50 55 60
Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
65 70 75 80
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
85 90 95
Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile
100 105 110
Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro
115 120 125
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro
130 135 140
Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
145 150 155 160
Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala
165 170 175
Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln
180 185 190
Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly
195 200 205
Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro
210 215 220
Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp
225 230 235 240
Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp
245 250 255
Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His
260 265 270
Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys Gly Gly
275 280 285
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp
290 295 300
Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp
305 310 315 320
Leu Val Lys Gly Gly Gly
325
<210> 54
<211> 324
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/Glu-4G_IV_ VARcaIgGD
<400> 54
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Glu Ser Thr Ser Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro
50 55 60
Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu
85 90 95
Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp
100 105 110
Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe
115 120 125
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu
145 150 155 160
Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His
165 170 175
Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser
180 185 190
Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro
195 200 205
Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe
225 230 235 240
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp
245 250 255
Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
260 265 270
Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Gly His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr
290 295 300
Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr
305 310 315 320
Gly Gly Gly Gly
<210> 55
<211> 323
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Gluc/GLP1-3G_V_ VARcaIgGD
<400> 55
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Pro Lys Glu Ser Thr Ser Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro
50 55 60
Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu
85 90 95
Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp
100 105 110
Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe
115 120 125
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu
145 150 155 160
Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His
165 170 175
Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser
180 185 190
Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro
195 200 205
Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe
225 230 235 240
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp
245 250 255
Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
260 265 270
Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
290 295 300
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
305 310 315 320
Gly Gly Gly
<210> 56
<211> 319
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/Gluc-4G_IV_
VAReqIgGD
<400> 56
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met
65 70 75 80
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
85 90 95
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
100 105 110
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
115 120 125
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
130 135 140
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
145 150 155 160
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
165 170 175
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
180 185 190
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
195 200 205
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
210 215 220
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
225 230 235 240
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser
260 265 270
Glu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ser
275 280 285
Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg
290 295 300
Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Gly Gly Gly
305 310 315
<210> 57
<211> 318
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Gluc/GLP1-3G_V_ VAReqIgG2
<400> 57
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met
65 70 75 80
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
85 90 95
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
100 105 110
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
115 120 125
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
130 135 140
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
145 150 155 160
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
165 170 175
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
180 185 190
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
195 200 205
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
210 215 220
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
225 230 235 240
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser
260 265 270
Glu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala
275 280 285
Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala
290 295 300
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
305 310 315
<210> 58
<211> 321
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/Glu-4G_IV_ huIgG4
<400> 58
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
50 55 60
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
65 70 75 80
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
85 90 95
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
100 105 110
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
115 120 125
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
130 135 140
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
145 150 155 160
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
165 170 175
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
180 185 190
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
195 200 205
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
210 215 220
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
225 230 235 240
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
245 250 255
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
260 265 270
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
275 280 285
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
290 295 300
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Gly Gly
305 310 315 320
Gly
<210> 59
<211> 321
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Gluc/GLP1-3G_V_huIgG4
<400> 59
His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser
1 5 10 15
Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Ser
35 40 45
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
65 70 75 80
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
85 90 95
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
100 105 110
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
115 120 125
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
130 135 140
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
145 150 155 160
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
165 170 175
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
180 185 190
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
195 200 205
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
210 215 220
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
225 230 235 240
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
260 265 270
Leu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala
275 280 285
Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala
290 295 300
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly Gly Gly
305 310 315 320
Gly
<210> 60
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-A-Fc,
C1q -, Белок А +, I(21)T,
Q(207)H
<400> 60
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 61
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-С-Fc,
C1q +, Белок А +, I(21)T
<400> 61
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 62
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-D-Fc,
C1q -, Белок А +, I(21)T,
Q(207)H
<400> 62
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 63
<211> 214
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG1-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +
<400> 63
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Met Asp Gly Val Glu
35 40 45
Val Arg Thr Ala Thr Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Glu Arg Thr Ile Thr Lys Thr Lys Gly Arg Ser Gln Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Ser Lys Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asn Ile
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Leu Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Gln Ala Gln Gln Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Asp Arg Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 64
<211> 214
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG2-Fc дикого типа, Белок А -, C1q -
<400> 64
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser
20 25 30
Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu
35 40 45
Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile
195 200 205
Ser Glu Ser Leu Gly Lys
210
<210> 65
<211> 214
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG3-Fc дикого типа,, Белок А +, C1q+
<400> 65
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Met Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Val Ser
20 25 30
His Asp Ser Ser Asp Val Leu Phe Thr Trp Tyr Val Asp Gly Thr Glu
35 40 45
Val Lys Thr Ala Lys Thr Met Pro Asn Glu Glu Gln Asn Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Asn
65 70 75 80
Gly Lys Lys Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Gln Thr Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Thr Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Arg Thr
145 150 155 160
Thr Glu Ala Gln Lys Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Lys Asp Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Val Met Gln Lys Asn Ile
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 66
<211> 214
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG4-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +
<400> 66
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Arg Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 67
<211> 214
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG5-Fc дикого типа, Белок А -, C1q -
<400> 67
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Lys Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Gly
20 25 30
His Asp Asp Pro Asp Val Gln Phe Thr Trp Phe Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Ser Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Leu Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asp Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asn Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Glu Thr Ser Arg Trp Lys Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Val Glu Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser His Ser Pro Gly Lys
210
<210> 68
<211> 214
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG6-Fc дикого типа, Белок А -, C1q -
<400> 68
Gly Arg Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Ala His Thr Ala Thr Thr Lys Ala Lys Glu Lys Gln Asp Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Arg Arg
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Arg Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Thr Lys Ala Lys Gly Glu Leu Gln Asp Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Ile Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Val Thr Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asn Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu Glu Pro Glu Pro Glu Val Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asp Arg Trp Glu Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Ile Arg His Thr Tyr Arg Gln Lys Ser Ile
195 200 205
Thr Asn Phe Pro Gly Lys
210
<210> 69
<211> 214
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG7-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +
<400> 69
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Asn Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Ile Leu Ala Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Gln Lys Thr Ile Ser Lys Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 70
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG1-Fc,
Белок А +, C1q - , K(87)S
<400> 70
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Met Asp Gly Val Glu
35 40 45
Val Arg Thr Ala Thr Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Glu Arg Thr Ile Thr Lys Thr Lys Gly Arg Ser Gln Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Ser Lys Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asn Ile
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Leu Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Gln Ala Gln Gln Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Asp Arg Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 71
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG2-Fc,
C1q -, Белок А +, F(203)Y
<400> 71
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser
20 25 30
Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu
35 40 45
Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile
195 200 205
Ser Glu Ser Leu Gly Lys
210
<210> 72
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG2-Fc,
C1q -, Белок А +, A(15)T,
F(203)Y
<400> 72
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser
20 25 30
Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu
35 40 45
Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile
195 200 205
Ser Glu Ser Leu Gly Lys
210
<210> 73
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG3-Fc,
Белок А +, C1q - , K(87)S
<400> 73
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Met Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Val Ser
20 25 30
His Asp Ser Ser Asp Val Leu Phe Thr Trp Tyr Val Asp Gly Thr Glu
35 40 45
Val Lys Thr Ala Lys Thr Met Pro Asn Glu Glu Gln Asn Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Asn
65 70 75 80
Gly Lys Lys Phe Lys Cys Ser Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Gln Thr Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Thr Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Arg Thr
145 150 155 160
Thr Glu Ala Gln Lys Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Lys Asp Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Val Met Gln Lys Asn Ile
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 74
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG4-Fc,
Белок А +, C1q - , K(87)S
<400> 74
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Arg Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 75
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG5-Fc,
C1q -, Белок А +, V(199)L,
E(200)H
<400> 75
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Lys Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Gly
20 25 30
His Asp Asp Pro Asp Val Gln Phe Thr Trp Phe Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Ser Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Leu Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asp Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asn Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Glu Thr Ser Arg Trp Lys Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser His Ser Pro Gly Lys
210
<210> 76
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG6-Fc,
C1q -, Белок А +, I(199)L ,
R(200)H, H(201)N, T(202)H
<400> 76
Gly Arg Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Ala His Thr Ala Thr Thr Lys Ala Lys Glu Lys Gln Asp Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Arg Arg
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Arg Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Thr Lys Ala Lys Gly Glu Leu Gln Asp Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Ile Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Val Thr Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asn Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu Glu Pro Glu Pro Glu Val Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asp Arg Trp Glu Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Arg Gln Lys Ser Ile
195 200 205
Thr Asn Phe Pro Gly Lys
210
<210> 77
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант лошадиного IgG7-Fc,
Белок А +, C1q - , K(87)S
<400> 77
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Asn Asn Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Ile Leu Ala Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Gln Lys Thr Ile Ser Lys Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 78
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgB-Fc,
Белок А +, C1q - , K(93)R
<400> 78
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 79
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgС-Fc,
Белок А -, C1q - , K(93)R
<400> 79
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 80
<211> 237
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Альтернативный кошачий IgG1a-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +
<400> 80
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 81
<211> 237
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Альтернативный кошачий IgG1b-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +
<400> 81
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 82
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант кошачьего IgG1a-Fc,
Белок А +, C1q -, P(198)A
<400> 82
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 83
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант кошачьего IgG1b-Fc,
Белок А +, C1q -, P(198)A
<400> 83
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 84
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант собачьего IgG-С-Fc,
C1q - , K(93)R , Белок А
+, I(21)T, V(23)L, T(24)I
<400> 84
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 85
<211> 31
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> GLP1 дикого типа (7-37)
<400> 85
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Ala Gly
20 25 30
<210> 86
<211> 29
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-S8 (7-35)
<400> 86
His Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
20 25
<210> 87
<211> 29
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8 (7-35)
<400> 87
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
20 25
<210> 88
<211> 1
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 1G-удлинение
<400> 88
Gly
1
<210> 89
<211> 2
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 2G-удлинение
<400> 89
Gly Gly
1
<210> 90
<211> 3
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 3G-удлинение
<400> 90
Gly Gly Gly
1
<210> 91
<211> 4
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 4G-удлинение
<400> 91
Gly Gly Gly Gly
1
<210> 92
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 5G-удлинение
<400> 92
Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 93
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 6G-удлинение
<400> 93
Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 94
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 7G-удлинение
<400> 94
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 95
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: 8G-удлинение
<400> 95
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 96
<211> 305
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8_I_WTfeIgG2
<400> 96
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly
65 70 75 80
Glu Gly Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val
85 90 95
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr
100 105 110
Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn
115 120 125
Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys
130 135 140
Thr Arg Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
145 150 155 160
Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys
165 170 175
Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile
180 185 190
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro
195 200 205
Pro Thr Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu
210 215 220
Ile Lys Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr
225 230 235 240
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu
245 250 255
Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg
260 265 270
Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu
275 280 285
Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly
290 295 300
Lys
305
<210> 97
<211> 346
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: ssGLP1-G8/GLP1-3G_III_
WTfeIgG2
<400> 97
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
35 40 45
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly
65 70 75 80
Glu Gly Pro Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val
85 90 95
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr
100 105 110
Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn
115 120 125
Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys
130 135 140
Thr Arg Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
145 150 155 160
Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys
165 170 175
Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile
180 185 190
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro
195 200 205
Pro Thr Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu
210 215 220
Ile Lys Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr
225 230 235 240
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu
245 250 255
Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg
260 265 270
Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu
275 280 285
Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly
290 295 300
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe
305 310 315 320
Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe
325 330 335
Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
340 345
<210> 98
<211> 30
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант GLP1 (7-36)
<400> 98
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Ala
20 25 30
<210> 99
<211> 29
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: Вариант GLP1 (7-35)
<400> 99
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly
20 25
<210> 100
<211> 229
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG2-Fc дикого типа (включая шарнирную область
лошадиного IgG2), Белок А
- , C1q -
<400> 100
Val Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
35 40 45
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
50 55 60
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
85 90 95
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
100 105 110
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
130 135 140
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
145 150 155 160
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
165 170 175
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
180 185 190
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile Ser
210 215 220
Glu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 101
<211> 14
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Шарнирная область лошадиного IgG1 дикого типа
<400> 101
Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
1 5 10
<210> 102
<211> 15
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Шарнирная область лошадиного IgG2 дикого типа
<400> 102
Val Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu
1 5 10 15
<210> 103
<211> 318
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/GLP1-3G_III_
VAReqIgG2
<400> 103
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Asp Met Ser Lys Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
50 55 60
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met
65 70 75 80
Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp
85 90 95
Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val
100 105 110
His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
115 120 125
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly
130 135 140
Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile
145 150 155 160
Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val
165 170 175
Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser
180 185 190
Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu
195 200 205
Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr
210 215 220
Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
225 230 235 240
Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala
245 250 255
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser
260 265 270
Glu Ser Leu Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly His Ala
275 280 285
Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala
290 295 300
Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
305 310 315
<210> 104
<211> 279
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8_I_VAReqIgG2
<400> 104
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Ala Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Ser Ser Val Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe
50 55 60
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr
65 70 75 80
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu
85 90 95
Ser Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr
100 105 110
Glu Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser
115 120 125
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu
130 135 140
Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln
145 150 155 160
Pro Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro
165 170 175
Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys
180 185 190
Val Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser
195 200 205
Val Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser
210 215 220
Thr Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser
225 230 235 240
Lys Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr
245 250 255
Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp
260 265 270
Ile Ser Glu Ser Leu Gly Lys
275
<210> 105
<211> 321
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/GLP1-2G_III_
VARcaIgGD
<400> 105
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro Glu
50 55 60
Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu Asp
85 90 95
Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly
100 105 110
Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln
165 170 175
Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser
180 185 190
Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu
195 200 205
Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser Lys
210 215 220
Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp Thr
245 250 255
Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Asp
260 265 270
Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu
290 295 300
Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
305 310 315 320
Gly
<210> 106
<211> 321
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая последовательность: GLP1-G8/GLP1-2G_III_
VARcaIgGD
<400> 106
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Pro Lys Glu Ser Thr Ser Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro Glu
50 55 60
Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
65 70 75 80
Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val Leu Asp
85 90 95
Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly
100 105 110
Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe Asn
115 120 125
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp
130 135 140
Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly Leu Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln
165 170 175
Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser
180 185 190
Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu
195 200 205
Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser Lys
210 215 220
Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp Thr
245 250 255
Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Asp
260 265 270
Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gly Gly His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu
290 295 300
Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly
305 310 315 320
Gly
<210> 107
<211> 237
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Собачий IgG-B-Fc дикого типа с шарнирной областью, Белок А +,
C1q +, CD16 +
<400> 107
Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser
50 55 60
Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn
100 105 110
Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg
115 120 125
Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
145 150 155 160
Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
165 170 175
Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
180 185 190
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn
210 215 220
His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 108
<211> 235
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Собачий IgG-С-Fc дикого типа с шарнирной областью, Белок А ,
C1q +, CD16 +
<400> 108
Ala Lys Glu Cys Glu Cys Lys Cys Asn Cys Asn Asn Cys Pro Cys Pro
1 5 10 15
Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
20 25 30
Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val
35 40 45
Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe
50 55 60
Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu Glu
65 70 75 80
Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His
85 90 95
Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys
100 105 110
Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly Gln
115 120 125
Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Met
130 135 140
Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe Pro
145 150 155 160
Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu
165 170 175
Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr
180 185 190
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly
195 200 205
Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
210 215 220
Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 109
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-A-Fc, Гетеродимерная цепь 3, T(138)W
<400> 109
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Trp Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 110
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-A-Fc, Гетеродимерная цепь 4, T(138)S,
L(140)A,
Y(181)T
<400> 110
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Ser Cys Ala Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 111
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-В-Fc, Гетеродимерная цепь 3, T(137)W
<400> 111
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Trp Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 112
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-В-Fc, Гетеродимерная цепь 4, T(137)S,
L(139)A,
Y(180)T
<400> 112
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Ser Cys Ala Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 113
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-С-Fc, Гетеродимерная цепь 3, T(137)W
<400> 113
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Trp Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 114
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-С-Fc, Гетеродимерная цепь 4, T(137)S,
L(139)A,
Y(180)T
<400> 114
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Ser Cys Ala Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 115
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-D-Fc, Гетеродимерная цепь 3, T(138)W
<400> 115
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Trp Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 116
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-D-Fc, Гетеродимерная цепь 4, T(138)S,
L(140)A,
Y(181)T
<400> 116
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Ser Cys Ala Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 117
<211> 237
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Кошачий IgG1a-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +
<400> 117
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 118
<211> 237
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Кошачий IgG1b-Fc дикого типа, Белок А +, C1q +
<400> 118
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 119
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG2-Fc, Гетеродимерная цепь 1, T(154)W
<400> 119
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Trp Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 120
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG2-Fc, Гетеродимерная цепь 2, T(154)S,
L(156)A,
Y(197)T
<400> 120
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Ser Cys Ala Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Thr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 121
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1a-Fc, Гетеродимерная цепь 1, T(154)W
<400> 121
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Trp Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 122
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1a-Fc, Гетеродимерная цепь 2, T(154)S,
L(156)A,
Y(197)T
<400> 122
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Ser Cys Ala Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Thr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 123
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1b-Fc, Гетеродимерная цепь 1, T(154)W
<400> 123
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Trp Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 124
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1b-Fc, Гетеродимерная цепь 2, T(154)S,
L(156)A,
Y(197)T
<400> 124
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Ser Cys Ala Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Thr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 125
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG2-Fc, с шарнирной областью из кошачьего
IgG1
<400> 125
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 126
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG2-Fc с модифицированной шарнирной
областью, K(16)P
<400> 126
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 127
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1a-Fc с модифицированной шарнирной
областью, K(16)P
<400> 127
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 128
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1b-Fc с модифицированной шарнирной
областью, K(16)P
<400> 128
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 129
<211> 244
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Лошадиный IgG2-Fc дикого типа с шарнирной областью, Белок А ,
C1q
<400> 129
Pro Pro Cys Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
50 55 60
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
65 70 75 80
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
115 120 125
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
180 185 190
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys
<210> 130
<211> 244
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант лошадиного IgG2-Fc с модифицированной шарнирной
областью, Белок А , C1q ,
Q(20)P
<400> 130
Pro Pro Cys Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Pro Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
50 55 60
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
65 70 75 80
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
115 120 125
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
180 185 190
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys
<210> 131
<211> 244
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант лошадиного IgG2-Fc с модифицированной шарнирной
областью, Белок А , C1q ,
C(3)S
<400> 131
Pro Pro Ser Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
50 55 60
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
65 70 75 80
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
115 120 125
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
180 185 190
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys
<210> 132
<211> 244
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант лошадиного IgG2-Fc с модифицированной шарнирной
областью, Белок А , C1q ,
C(3)S, Q(20)P
<400> 132
Pro Pro Ser Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Pro Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
50 55 60
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
65 70 75 80
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
115 120 125
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
180 185 190
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys
<210> 133
<211> 244
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант лошадиного IgG2-Fc с модифицированной шарнирной
областью, Белок А +, C1q , A(45)T,
F(233)Y
<400> 133
Pro Pro Cys Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
50 55 60
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
65 70 75 80
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
115 120 125
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
180 185 190
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys
<210> 134
<211> 244
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант лошадиного IgG2-Fc с модифицированной шарнирной
областью, Белок А +, C1q ,
Q(20)P, A(45)T, F(233)Y
<400> 134
Pro Pro Cys Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Pro Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
50 55 60
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
65 70 75 80
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
115 120 125
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
180 185 190
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys
<210> 135
<211> 244
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант лошадиного IgG2-Fc с модифицированной шарнирной
областью, Белок А +, C1q ,
C(3)S, Q(20)P, A(45)T, F(233)Y
<400> 135
Pro Pro Ser Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Pro Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser Asp Gln
50 55 60
Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu Val His
65 70 75 80
Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys
100 105 110
Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro Ile Ser
115 120 125
Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val Ser Val
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val Glu Trp
165 170 175
Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr Thr Pro
180 185 190
Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser
195 200 205
Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys Ala Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Lys Thr Asp Ile Ser Glu
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys
<210> 136
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1a-Fc, Белок А +, C1q , P(198)A
<400> 136
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 137
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант кошачьего IgG1b-Fc, Белок А +, C1q , P(198)A
<400> 137
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 138
<211> 30
<212> Белок
<213> Неизвестное происхождение
<220>
<223> Шарнирная область лошадиного IgG2 дикого типа
<400> 138
Pro Pro Cys Val Leu Ser Ala Glu Gly Val Ile Pro Ile Pro Ser Val
1 5 10 15
Pro Lys Pro Gln Cys Pro Pro Tyr Thr His Ser Lys Phe Leu
20 25 30
<210> 139
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , M(5)P
<400> 139
Pro Ala Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 140
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , P(39)R
<400> 140
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 141
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , D(38)G
<400> 141
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Gly Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 142
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , K(97)I
<400> 142
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Ile Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 143
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , A(98)G
<400> 143
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 144
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , D(38)G,
K(97)I, A(98)G
<400> 144
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Gly Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 145
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q , CD16 , D(38)G,
K(93)R, K(97)I, A(98)G
<400> 145
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Gly Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 146
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , M(5)P,
P(39)R
<400> 146
Pro Ala Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 147
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-B-Fc, Белок А +, C1q , CD16 , M(5)P,
P(39)R,
K(93)R
<400> 147
Pro Ala Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 148
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , L(5)P
<400> 148
Pro Gly Cys Gly Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 149
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , P(39)R
<400> 149
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Arg Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 150
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , D(38)G
<400> 150
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Gly Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 151
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , K(97)I
<400> 151
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Ile Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 152
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , A(98)G
<400> 152
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 153
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q , CD16 +, K(93)R
<400> 153
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 154
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , D(38)G,
K(97)I, A(98)G
<400> 154
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Gly Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 155
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q , CD16 , D(38)G,
K(93)R, K(97)I, A(98)G
<400> 155
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Gly Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 156
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q +, CD16 , L(5)P,
P(39)R
<400> 156
Pro Gly Cys Gly Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Arg Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 157
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант собачьего IgG-C-Fc, Белок А +, C1q . CD16 , M(5)P,
P(39)R,
K(93)R
<400> 157
Pro Gly Cys Gly Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Arg Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Arg Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 158
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-A-Fc, N(68)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (68)..(68)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 158
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Xaa Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 159
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-A-Fc, G(69)P
<400> 159
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Pro Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 160
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-A-Fc, T(70)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (70)..(70)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 160
Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Gly Xaa Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
145 150 155 160
Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 161
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-B-Fc, N(68)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (68)..(68)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 161
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Xaa Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 162
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-B-Fc, G(69)P
<400> 162
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Pro Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 163
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-B-Fc, T(70)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (70)..(70)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 163
Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Gly Xaa Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 164
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-C-Fc, N(68)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (68)..(68)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 164
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Xaa Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 165
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-C-Fc, G(69)P
<400> 165
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Pro Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 166
<211> 220
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-C-Fc, T(70)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (70)..(70)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 166
Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Ser Asn Gly Xaa Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
85 90 95
Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
115 120 125
Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe
130 135 140
Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro
145 150 155 160
Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser
165 170 175
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg
180 185 190
Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
195 200 205
Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 167
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-D-Fc, N(68)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (68)..(68)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 167
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 168
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-D-Fc, S(69)P
<400> 168
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Pro Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 169
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант собачьего IgG-D-Fc, T(70)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (70)..(70)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 169
Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys
20 25 30
Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp
35 40 45
Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu
50 55 60
Gln Gln Phe Asn Ser Xaa Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His
85 90 95
Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
100 105 110
Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu
115 120 125
Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe
130 135 140
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
165 170 175
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn
195 200 205
His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 170
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG1a-Fc, N(85)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (85)..(85)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 170
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 171
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG1a-Fc, S(86)P
<400> 171
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Pro Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 172
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG1a-Fc, T(87)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (87)..(87)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 172
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Xaa Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 173
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG1b-Fc, N(85)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (85)..(85)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 173
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 174
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG1b-Fc, S(86)P
<400> 174
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Pro Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 175
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG1b-Fc, T(87)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (87)..(87)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 175
Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Xaa Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Asp Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Glu Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 176
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG2-Fc, N(85)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (85)..(85)
<223> X= любая аминокислота, за исключением N
<400> 176
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Xaa Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 177
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG2-Fc, S(86)P
<400> 177
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Pro Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 178
<211> 237
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант кошачьего IgG2-Fc, T(87)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (87)..(87)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 178
Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Glu Gly Pro Lys
1 5 10 15
Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln Ile Thr
50 55 60
Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Xaa Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
85 90 95
Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn
100 105 110
Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys Gly Phe
145 150 155 160
His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly
180 185 190
Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln
195 200 205
Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu His Ser
210 215 220
His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 179
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG1-Fc, N(62)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (62)..(62)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 179
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Met Asp Gly Val Glu
35 40 45
Val Arg Thr Ala Thr Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln Phe Xaa Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Glu Arg Thr Ile Thr Lys Thr Lys Gly Arg Ser Gln Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Ser Lys Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asn Ile
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Leu Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Gln Ala Gln Gln Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Asp Arg Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 180
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG1-Fc, S(63)P
<400> 180
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Met Asp Gly Val Glu
35 40 45
Val Arg Thr Ala Thr Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Glu Arg Thr Ile Thr Lys Thr Lys Gly Arg Ser Gln Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Ser Lys Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asn Ile
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Leu Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Gln Ala Gln Gln Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Asp Arg Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 181
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG1-Fc, T(64)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (64)..(64)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 181
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Met Asp Gly Val Glu
35 40 45
Val Arg Thr Ala Thr Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Ser Xaa
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Glu Arg Thr Ile Thr Lys Thr Lys Gly Arg Ser Gln Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Ser Lys Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asn Ile
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Leu Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Gln Ala Gln Gln Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Asp Arg Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 182
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG2-Fc, N(62)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (62)..(62)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 182
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser
20 25 30
Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu
35 40 45
Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Xaa Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile
195 200 205
Ser Glu Ser Leu Gly Lys
210
<210> 183
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG2-Fc, S(63)P
<400> 183
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser
20 25 30
Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu
35 40 45
Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile
195 200 205
Ser Glu Ser Leu Gly Lys
210
<210> 184
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG2-Fc, T(64)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (64)..(64)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 184
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Ala Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Val Val Thr Cys Val Val Val Asn Leu Ser
20 25 30
Asp Gln Tyr Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Asn Thr Glu
35 40 45
Val His Ser Ala Ile Thr Lys Gln Arg Glu Ala Gln Phe Asn Ser Xaa
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Asn Val Gly Val Pro Gln Pro
85 90 95
Ile Ser Arg Ala Ile Ser Arg Gly Lys Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Pro Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Ser Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Ser Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Arg Trp Pro Glu Leu Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Glu Thr Ser Arg Trp Gln Gln Val Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Phe Thr Lys Thr Asp Ile
195 200 205
Ser Glu Ser Leu Gly Lys
210
<210> 185
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG3-Fc, N(62)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (62)..(62)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 185
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Met Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Val Ser
20 25 30
His Asp Ser Ser Asp Val Leu Phe Thr Trp Tyr Val Asp Gly Thr Glu
35 40 45
Val Lys Thr Ala Lys Thr Met Pro Asn Glu Glu Gln Asn Xaa Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Asn
65 70 75 80
Gly Lys Lys Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Gln Thr Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Thr Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Arg Thr
145 150 155 160
Thr Glu Ala Gln Lys Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Lys Asp Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Val Met Gln Lys Asn Ile
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 186
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG3-Fc, S(63)P
<400> 186
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Met Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Val Ser
20 25 30
His Asp Ser Ser Asp Val Leu Phe Thr Trp Tyr Val Asp Gly Thr Glu
35 40 45
Val Lys Thr Ala Lys Thr Met Pro Asn Glu Glu Gln Asn Asn Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Asn
65 70 75 80
Gly Lys Lys Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Gln Thr Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Thr Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Arg Thr
145 150 155 160
Thr Glu Ala Gln Lys Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Lys Asp Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Val Met Gln Lys Asn Ile
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 187
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG3-Fc, T(64)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (64)..(64)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 187
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Thr Arg Met Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Val Ser
20 25 30
His Asp Ser Ser Asp Val Leu Phe Thr Trp Tyr Val Asp Gly Thr Glu
35 40 45
Val Lys Thr Ala Lys Thr Met Pro Asn Glu Glu Gln Asn Asn Ser Xaa
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Arg Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Asn
65 70 75 80
Gly Lys Lys Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Gln Thr Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Thr Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Arg Thr
145 150 155 160
Thr Glu Ala Gln Lys Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Lys Asp Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Val Met Gln Lys Asn Ile
195 200 205
Ser Lys Asn Pro Gly Lys
210
<210> 188
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG4-Fc, N(62)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (62)..(62)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 188
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Phe Xaa Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Arg Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 189
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG4-Fc, S(63)P
<400> 189
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Phe Asn Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Arg Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 190
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG4-Fc, T(64)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (64)..(64)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 190
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Phe Asn Ser Xaa
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Arg Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 191
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG5-Fc,N(62)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (62)..(62)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 191
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Lys Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Gly
20 25 30
His Asp Asp Pro Asp Val Gln Phe Thr Trp Phe Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Glu Glu Gln Phe Xaa Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Ser Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Leu Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asp Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asn Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Glu Thr Ser Arg Trp Lys Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Val Glu Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser His Ser Pro Gly Lys
210
<210> 192
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG5-Fc, S(63)P
<400> 192
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Lys Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Gly
20 25 30
His Asp Asp Pro Asp Val Gln Phe Thr Trp Phe Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Ser Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Leu Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asp Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asn Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Glu Thr Ser Arg Trp Lys Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Val Glu Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser His Ser Pro Gly Lys
210
<210> 193
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG5-Fc, T(64)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (64)..(64)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 193
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Lys Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Gly
20 25 30
His Asp Asp Pro Asp Val Gln Phe Thr Trp Phe Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Glu Glu Gln Phe Asn Ser Xaa
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Ser Val Thr Ser Lys Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Leu Arg Val Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ala Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Glu Ile Asp Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu His Pro Glu Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asn Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Ser Val Glu Thr Ser Arg Trp Lys Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Gly Val Met His Glu Ala Val Glu Asn His Tyr Thr Gln Lys Asn Val
195 200 205
Ser His Ser Pro Gly Lys
210
<210> 194
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG6-Fc, N(62)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (62)..(62)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 194
Gly Arg Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Ala His Thr Ala Thr Thr Lys Ala Lys Glu Lys Gln Asp Xaa Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Arg Arg
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Arg Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Thr Lys Ala Lys Gly Glu Leu Gln Asp Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Ile Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Val Thr Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asn Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu Glu Pro Glu Pro Glu Val Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asp Arg Trp Glu Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Ile Arg His Thr Tyr Arg Gln Lys Ser Ile
195 200 205
Thr Asn Phe Pro Gly Lys
210
<210> 195
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG6-Fc, S(63)P
<400> 195
Gly Arg Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Ala His Thr Ala Thr Thr Lys Ala Lys Glu Lys Gln Asp Asn Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Arg Arg
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Arg Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Thr Lys Ala Lys Gly Glu Leu Gln Asp Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Ile Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Val Thr Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asn Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu Glu Pro Glu Pro Glu Val Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asp Arg Trp Glu Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Ile Arg His Thr Tyr Arg Gln Lys Ser Ile
195 200 205
Thr Asn Phe Pro Gly Lys
210
<210> 196
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG6-Fc, T(64)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (64)..(64)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 196
Gly Arg Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Pro Lys Asp Thr Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
20 25 30
Gln Glu Asn Pro Asp Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Ala His Thr Ala Thr Thr Lys Ala Lys Glu Lys Gln Asp Asn Ser Xaa
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Arg Arg
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Arg Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Glu Arg Thr Ile Thr Lys Ala Lys Gly Glu Leu Gln Asp Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Ile Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Val Thr Lys Asn Thr Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asn Val
130 135 140
Glu Trp Gln Ser Asn Glu Glu Pro Glu Pro Glu Val Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asp Arg Trp Glu Gln Gly Glu Ser Phe Thr Cys
180 185 190
Val Val Met His Glu Ala Ile Arg His Thr Tyr Arg Gln Lys Ser Ile
195 200 205
Thr Asn Phe Pro Gly Lys
210
<210> 197
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG7-Fc, N(62)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (62)..(62)
<223> X = любая аминокислота, за исключением N
<400> 197
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Asn Xaa Ser Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Ile Leu Ala Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Gln Lys Thr Ile Ser Lys Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 198
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG7-Fc, S(63)P
<400> 198
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Asn Asn Pro Thr
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Ile Leu Ala Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Gln Lys Thr Ile Ser Lys Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<210> 199
<211> 214
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Агликозилированный вариант лошадиного IgG7-Fc, T(64)X
<220>
<221> прочие признаки
<222> (64)..(64)
<223> X = любая аминокислота, за исключением T или S
<400> 199
Val Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
1 5 10 15
Met Ile Ser Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Gly
20 25 30
His Asp Phe Pro Asp Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
35 40 45
Thr His Thr Ala Thr Thr Glu Pro Lys Gln Glu Gln Asn Asn Ser Xaa
50 55 60
Tyr Arg Val Val Ser Ile Leu Ala Ile Gln His Lys Asp Trp Leu Ser
65 70 75 80
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Gln Ala Leu Pro Ala Pro
85 90 95
Val Gln Lys Thr Ile Ser Lys Pro Thr Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
100 105 110
Val Tyr Val Leu Ala Pro His Pro Asp Glu Leu Ser Lys Asn Lys Val
115 120 125
Ser Val Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Ile
130 135 140
Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Thr Lys Tyr Ser Thr
145 150 155 160
Thr Pro Ala Gln Leu Asp Gly Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys
165 170 175
Leu Thr Val Glu Thr Asn Arg Trp Gln Gln Gly Thr Thr Phe Thr Cys
180 185 190
Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu Lys Ser Val
195 200 205
Ser Lys Ser Pro Gly Lys
210
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| МОЛЕКУЛА РЕЦЕПТОРА IL4/IL13 ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНОГО ПРИМЕНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2795591C2 |
| CD47-АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩАЯ ЕДИНИЦА И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ | 2018 |
|
RU2780859C2 |
| АНТИ-IL31 АНТИТЕЛА ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ | 2018 |
|
RU2795485C2 |
| АНТИТЕЛО ПРОТИВ КЛАУДИНА 18A2 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2811431C2 |
| НОВЫЕ КОМПОЗИЦИИ АНТИТЕЛ ДЛЯ ИММУНОТЕРАПИИ РАКА | 2019 |
|
RU2804490C2 |
| Слитый белок человеческого фактора свертывания IХ (FIX), способ его получения и применения | 2017 |
|
RU2736339C1 |
| ПОЛИВАЛЕТНЫЕ И ПОЛИСПЕЦИФИЧНЫЕ GITR-СВЯЗЫВАЮЩИЕ СЛИТЫЕ БЕЛКИ | 2016 |
|
RU2753439C2 |
| ВЫСОКОГЛИКОЗИЛИРОВАННЫЙ СЛИТЫЙ БЕЛОК НА ОСНОВЕ ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА VIII, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2016 |
|
RU2722374C1 |
| СЛИТЫЕ СЕРПИНОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2728861C1 |
| БИСПЕЦИФИЧНЫЕ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2800779C2 |
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к вариантам полипептидов IgG-Fc домашних животных, и может быть использовано в ветеринарии для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением. Изобретение обеспечивает получение полипептидных IgG-Fc компонентов, обладающих пониженной аффинностью связывания с C1q и CD16 и/или пониженной антителозависимой клеточной цитотоксичностью (ADCC), а также слитых полипептидов на их основе с GLP-1 или глюкагоном, имеющих увеличенное время полужизни в сыворотке крови. 31 н. и 30 з.п. ф-лы, 7 ил., 10 табл., 17 пр.
1. Полипептидный IgG-Fc компонент, обладающий пониженной аффинностью связывания с C1q и CD16 и/или пониженной антителозависимой клеточной цитотоксичностью (ADCC), содержащий вариант полипептида собачьего IgG-B-Fc, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 145 или SEQ ID NO: 147; и при этом аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 90% идентичная аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 145 или SEQ ID NO: 147, содержит аргинин в положении, соответствующем положению 93 в SEQ ID NO: 2.
2. Полипептидный IgG-Fc компонент по п.1, где вариант полипептида IgG-Fc содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию в шарнирной области относительно кошачьего или лошадиного полипептида IgG-Fc дикого типа, где вариант полипептида IgG-Fc имеет увеличенную продукцию в рекомбинантной системе и/или увеличенное образование дисульфидных связей в шарнирной области относительно полипептида IgG-Fc дикого типа, что определяется с помощью электрофоретического разделения в ДСН-ПААГ в восстановительных и/или невосстановительных условиях.
3. Полипептидный IgG-Fc компонент по п.1 или 2, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 2, и/или аминокислотную замену в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2.
4. Полипептидный IgG-Fc компонент по любому из пп.1-3, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
аминокислотную замену в положении 5 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 38 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 39 в SEQ ID NO: 2, аминокислотную замену в положении 97 в SEQ ID NO: 2 и/или аминокислотную замену в положении 98 в SEQ ID NO: 2.
5. Полипептидный IgG-Fc компонент по любому из пп.1-4, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
пролин в положении, соответствующем положению 5 в SEQ ID NO: 2, глицин в положении, соответствующем положению 38 в SEQ ID NO: 2, аргинин в положении, соответствующем положению 39 в SEQ ID NO: 2, изолейцин в положении, соответствующем положению 97 в SEQ ID NO: 2, и/или глицин в положении, соответствующем положению 98 в SEQ ID NO: 2.
6. Полипептидный IgG-Fc компонент по любому из пп.1-5, где вариант полипептида IgG-Fc содержит:
пролин в положении 5 в SEQ ID NO: 2, глицин в положении 38 в SEQ ID NO: 2, аргинин в положении 39 в SEQ ID NO: 2, изолейцин в положении 97 в SEQ ID NO: 2 и/или глицин в положении 98 из SEQ ID NO: 2.
7. Полипептидный IgG-Fc компонент по любому из пп.1-6, где вариант полипептида IgG-Fc содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146 или SEQ ID NO: 147.
8. Полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащий полипептидный IgG-Fc компонент по п.1 и полипептид глюкагонподобного пептида-1 (GLP-1);
где полипептид включает от N- до C-конца: N-[GLP1]–L1–Fc–C или N-[GLP1]–L1–Fc–L2– [GLP1]; где [GLP1] включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 26, 85, 86, 98, 99; где L1 и L2 представляют собой линкеры, каждый независимо представляет собой гибкий линкер, содержащий одну или несколько аминокислот.
9. Полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащий полипептидный IgG-Fc компонент по п.1 и глюкагоновый полипептид (Gluc);
где полипептид включает от N-конца до C-конца: N-[Gluc]–L1–Fc–C или N-[Gluc]–L1–Fc–L2–[Gluc]; где [Gluc] включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ 21, 92, 93, 94, 95; где L1 и L2 представляют собой линкеры, каждый независимо представляет собой гибкий линкер, содержащий одну или несколько аминокислот.
10. Полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 8 или 9, где указанный полипептид является гликозилированным.
11. Полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 8 или 9, где полипептид является агликозилированным.
12. Непрерывный полипептид для лечения метаболического заболевания, содержащий вариант полипептидного IgG-Fc компонента по п. 1, содержащий:
серин в положении, соответствующем положению 137 SEQ ID NO: 2;
аланин в положении, соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 2;
треонин в положении, соответствующем положению 180 SEQ ID NO: 2;
где полипептидный IgG-Fc компонент является гликозилированным или агликозилированным; и при этом полипептидный IgG-Fc компонент связан с полипептидом глюкагоноподобного пептида-1 (GLP1) с помощью линкера, с функциональным фрагментом GLP-1 на N-конце слитой конструкции, за которым следует линкер, и иммуноглобулин на С-конце.
13. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащий вариант полипептидного IgG-Fc компонента по п.1, содержащий:
серин в положении, соответствующем положению 137 SEQ ID NO: 2;
аланин в положении, соответствующем положению 139 SEQ ID NO: 2;
треонин в положении, соответствующем положению 180 SEQ ID NO: 2;
где полипептидный IgG-Fc компонент является гликозилированным или агликозилированным; и при этом полипептидный IgG-Fc компонент связан с полипептидом глюкагона через линкер, с функциональным фрагментом Gluc на N-конце слитой конструкции, за которым следует линкер, и иммуноглобулин на С-конце.
14. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащий непрерывный полипептид по п.8 и непрерывный полипептид по п.12, где два указанных полипептида не являются одинаковыми.
15. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащий непрерывный полипептид по п.9 и непрерывный полипептид по п.13, где два указанных полипептида не являются одинаковыми.
16. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п.8, где полипептид GLP1 представляет собой Полипептид GLP1 дикого типа, необязательно, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.
17. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п.8, где полипептид GLP1 представляет собой вариант полипептида GLP1.
18. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п.8, где полипептид GLP1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 98 или SEQ ID NO: 99.
19. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п.9, где глюкагоновый полипептид представляет собой глюкагоновый полипептид дикого типа, необязательно, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
20. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п.19, где глюкагоновый полипептид является вариантом глюкагонового полипептида.
21. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п.18, где указанный полипептид представляет собой антитело, слитое антитело или слитый полипептид.
22. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п.18, где по меньшей мере одна аминокислотная модификация или замена содержит аминокислотную замену производным аминокислоты.
23. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 8.
24. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 9.
25. Клетка-хозяин для экспрессии непрерывного полипептида, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 8, встроенную в вектор экспрессии, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
26. Клетка-хозяин для экспрессии непрерывного полипептида, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 9, встроенную в вектор экспрессии, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
27. Способ получения полипептида для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, включающий культивирование клетки-хозяина, экспрессирующей непрерывный полипептид по п. 8, и выделение непрерывного полипептида, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
28. Способ получения полипептида для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, включающий культивирование клетки-хозяина, экспрессирующей непрерывный полипептид по п. 9, и выделение непрерывного полипептида, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
29. Фармацевтическая композиция для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащая непрерывный полипептид по п. 8 или 9 и фармацевтически приемлемый носитель.
30. Способ доставки непрерывного полипептида для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, субъекту, включающий введение непрерывного полипептида по п. 8 или 9 парентерально.
31. Способ доставки непрерывного полипептида для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, субъекту, включающий введение непрерывного полипептида по п. 8 или 9 внутримышечным путем, внутрибрюшинным путем, интрацереброспинальным путем, подкожным путем, интраартериальным путем, внутрисуставным путем, интратекальным путем или ингаляционным путем.
32. Способ лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, у субъекта, использующий непрерывный полипептид по п. 8 или 9, где субъект принадлежит к собачьим.
33. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 19, где полипептид глюкагона представляет собой вариант полипептида глюкагона.
34. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 19, где полипептид представляет собой антитело, слитое антитело или слитый полипептид.
35. Непрерывный полипептид для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 19, где по меньшей мере одна модификация или замена аминокислоты включает замену аминокислоты производным аминокислоты.
36. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, где полипептид GLP1 представляет собой полипептид GLP1 дикого типа, необязательно содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.
37. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, где полипептид GLP1 представляет собой вариант полипептида GLP1.
38. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 15, где полипептид глюкагона представляет собой вариант полипептида глюкагона.
39. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, где полипептид GLP1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 98 или SEQ ID NO: 99.
40. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, где полипептид GLP1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 98 или SEQ ID NO: 99.
41. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 15, где полипептид глюкагона представляет собой полипептид глюкагона дикого типа, необязательно содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
42. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, где полипептид GLP1 представляет собой вариант полипептида GLP1.
43. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 15, где полипептид глюкагона представляет собой вариант полипептида глюкагона.
44. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, где полипептид содержит антитело, слитое антитело или слитый полипептид.
45. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, где по меньшей мере одна модификация или замена аминокислоты включает замену аминокислоты производным аминокислоты.
46. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 15, где полипептид содержит антитело, слитое антитело или слитый полипептид.
47. Гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 15, где по меньшей мере одна модификация или замена аминокислоты включает замену аминокислоты производным аминокислоты.
48. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14.
49. Клетка-хозяин для экспрессии гетеродимерного белка, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 14, встроенную в вектор экспрессии, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
50. Способ получения полипептида для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, включающий культивирование клетки-хозяина, экспрессирующей гетеродимерный белок по п. 14, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
51. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 15.
52. Клетка-хозяин для экспрессии гетеродимерного белка, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую гетеродимерный белок для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, по п. 15, встроенную в вектор экспрессии, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
53. Способ получения полипептида для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, включающий культивирование клетки-хозяина, экспрессирующей гетеродимерный белок по п. 15, где клетка-хозяин не является эмбриональной клеткой человека.
54. Фармацевтическая композиция для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащая полипептид по п. 14 и фармацевтически приемлемый носитель.
55. Фармацевтическая композиция для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, содержащая гетеродимерный белок по п. 15 и фармацевтически приемлемый носитель.
56. Способ доставки гетеродимерного белка для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, субъекту, включающий парентеральное введение гетеродимерного белка по п. 14.
57. Способ доставки гетеродиморного белка для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, субъекту, включающий введение гетеродимерного белка по п. 14 внутримышечным путем, внутрибрюшинным путем, внутримозговым путем, подкожным путем, внутриартериальным путем, интрасиновиальным путем, интратекальным путем или ингаляционным путем.
58. Способ лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, у субъекта с использованием гетеродимерного белка по п. 14, где субъект принадлежит к собачьим.
59. Способ доставки гетеродимерного белка для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, субъекту, включающий парентеральное введение гетеродимерного белка по п. 15.
60. Способ доставки гетеродимерного белка для лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, субъекту, включающий введение гетеродимерного белка по п. 15 внутримышечным путем, внутрибрюшинным путем, внутримозговым путем, подкожным путем, внутриартериальным путем, интрасиновиальным путем, интратекальным путем или ингаляционным путем.
61. Способ лечения диабета, ожирения и метаболического заболевания, связанного с диабетом или ожирением, у субъекта с использованием гетеродимерного белка по п. 15, где субъект принадлежит к собачьим.
| NAGAOKA M | |||
| et.al., Single amino acid substitution in the mouse IgG1 Fc region induces drastic enhancement of the affinity to protein A, Protein engineering, 2003, v | |||
| Устройство для электрической сигнализации | 1918 |
|
SU16A1 |
| Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды | 1921 |
|
SU4A1 |
| А | |||
| и др., ВНУТРИВЕННЫЕ ИММУНОГЛОБУЛИНЫ: МЕХАНИЗМЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ, Медицинская иммунология, 2014, т | |||
| Устройство для электрической сигнализации | 1918 |
|
SU16A1 |
