ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки США № 62/893,799, поданной 29 августа 2019 г., и предварительной заявки США № 62/894,526, поданной 30 августа 2019 г., каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки для любых целей.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Настоящее изобретение относится к выделенным анти-IL31 антителам, например, с улучшенным связыванием с собачьим IL31 и кошачьим IL31, и к способам их применения, например, для лечения IL31-индуцированных состояний или снижения сигнальной функции IL31 в клетках, например, у животных-компаньонов, таких как псовые и кошачьи.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Интерлейкин 31 (IL31) представляет собой цитокин, в основном продуцируемый клетками Th2, и считается, что он участвует в развитии кожных заболеваний, таких как зуд и другие формы аллергических заболеваний (например, атопический дерматит). IL31 функционирует через связывание с рецепторным комплексом (комплексом субъединиц рецептора A IL31 (IL-31Ra) и рецептором онкостатина M (OSMR)) и активацию последующих видов активности, например активацию JAK киназ и последующее фосфорилирование и активацию STAT1, STAT3 и СТАТ5. Считается, что активация этого пути является причиной многих клинических проблем, связанных с дерматитом и другими расстройствами.
[0004] Животные-компаньоны, такие как кошки, собаки и лошади, страдают многими кожными заболеваниями, сходными с кожными заболеваниями человека, включая атопический дерматит. Однако последовательности IL31 различаются у человека, кошки, собаки и лошади. Таким образом, остается потребность в способах и соединениях, которые можно использовать специфически для связывания IL31 животного-компаньона для лечения IL31-индуцированных состояний и для снижения сигнализации IL31.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Вариант осуществления 1. Выделенное антитело, которое связывается с собачьим IL31 или кошачьим IL31, содержащее:
а) тяжелую цепь, содержащую последовательность CDR-H3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:14 или SEQ ID NO:15; и/или
b) легкую цепь, содержащую последовательность CDR-L1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:20; и/или
c) легкую цепь, содержащую последовательность CDR-L3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:23 или SEQ ID NO:24.
Вариант осуществления 2. Выделенное антитело, которое связывается с собачьим IL31 или кошачьим IL31, содержащее:
а) тяжелую цепь, содержащую последовательность CDR-H1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:11, последовательность CDR-H2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:12 и последовательность CDR-H3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14 или SEQ ID NO:15; и/или
b) легкую цепь, содержащую последовательность CDR-L1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:20, последовательность CDR-L2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:21 и последовательность CDR-L3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23 или SEQ ID NO:24.
Вариант осуществления 3. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое связывается с собачьим IL31 или кошачьим IL31 с константой диссоциации (Kd) менее чем менее 5×10-8 М, менее чем 1×10-8 М, менее 5×10-9 М, менее 1×10-9 М, менее 5×10-10 М, менее 1×10-10 М, менее 5×10-11 М, менее 1×10-11 М, менее 5×10-12 М или менее 1×10-12 М, измеренной методом биослойной интерферометрии.
Вариант осуществления 4. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое снижает сигнальную функцию IL31 у представителя вида животного-компаньона, как измерено по снижению фосфорилирования STAT-3.
Вариант осуществления 5. Антитело по варианту осуществления 4, где вид животного-компаньона относится к псовым или кошачьим.
Вариант осуществления 6. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое связывается с собачьим IL31 или кошачьим IL31 согласно результатам анализа методом иммуноблоттинга и/или биослойной интерферометрии.
Вариант осуществления 7. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое конкурирует с моноклональным антителом М14 за связывание с собачьим IL31.
Вариант осуществления 8. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое конкурирует с моноклональным антителом М14 за связывание с кошачьим IL31.
Вариант осуществления 9. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое не связывается с человеческим IL31, согласно результатам анализа методом иммуноблоттинга и/или биослойной интерферометрии.
Вариант осуществления 10. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое представляет собой моноклональное антитело.
Вариант осуществления 11. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое представляет собой канинизированное, фелинизированное или химерное антитело.
Вариант осуществления 12. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, дополнительно содержащее одну или более из (а) последовательности каркаса 1 вариабельной области тяжелой цепи (HC-FR1) SEQ ID NO:16; (b) последовательности HC-FR2 SEQ ID NO:17; (c) последовательности HC-FR3 SEQ ID NO:18; (d) последовательности HC-FR4 SEQ ID NO:19; (e) последовательности каркаса 1 вариабельной области легкой цепи (LC-FR1) SEQ ID NO:25; (f) последовательности LC-FR2 SEQ ID NO:26; (g) последовательности LC-FR3 SEQ ID NO:27; или (h) последовательности LC-FR4 SEQ ID NO:28.
Вариант осуществления 13. Антитело по любому из вариантов осуществления 1-11, дополнительно содержащее одну или более из (а) последовательности каркаса 1 вариабельной области тяжелой цепи (HC-FR1) SEQ ID NO:55 или SEQ ID NO:56; (b) последовательности HC-FR2 SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59; (c) последовательности HC-FR3 SEQ ID NO:60 или SEQ ID NO:61; (d) последовательности HC-FR4 SEQ ID NO:62 или SEQ ID NO:63; (e) последовательности каркаса 1 вариабельной области легкой цепи (LC-FR1) SEQ ID NO:64 или SEQ ID NO:65; (f) последовательности LC-FR2 SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67 или SEQ ID NO:68; (g) последовательности LC-FR3 SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:70; или (h) последовательности LC-FR4 SEQ ID NO:71 или SEQ ID NO:72.
Вариант осуществления 14. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащее:
а) (i) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:7; (ii) последовательность вариабельной области легкой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:10; или (iii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как указано в (i), и последовательность вариабельной области легкой цепи, как указано в (ii); или
b) (i) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51 или SEQ ID NO:90; (ii) последовательность вариабельной области легкой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53 или SEQ ID NO:54; или (iii) последовательность вариабельной области тяжелой цепи, как указано в (i), и последовательность вариабельной области легкой цепи, как указано в (ii).
Вариант осуществления 15. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащее последовательность вариабельной тяжелой цепи SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO : 50, SEQ ID NO:51 или SEQ ID NO:90.
Вариант осуществления 16. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащее последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53 или SEQ ID NO:54.
Вариант осуществления 17. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащее:
а) последовательность вариабельной тяжелой цепи SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7 или SEQ ID NO:8; и последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11; или
b) последовательность вариабельной тяжелой цепи SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51 или SEQ ID NO:90; и последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53 или SEQ ID NO:54.
Вариант осуществления 18. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащее собачью или кошачью константную область тяжелой цепи и/или собачью или кошачью константную область легкой цепи.
Вариант осуществления 19. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащее (а) собачью константную область тяжелой цепи, выбранную из константной области IgG-A, IgG-B, IgG-C и IgG-D; или (b) кошачью константную область тяжелой цепи, выбранную из константной области IgG1, IgG2a и IgG2b.
Вариант осуществления 20. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, содержащее:
а) (i) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44 или SEQ ID NO:45; (ii) аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:47 или SEQ ID NO:48; или (iii) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, как указано в (i), и аминокислотную последовательность легкой цепи, как указано в (ii); или
b) (i) аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75 или SEQ ID NO:91; (ii) аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:77 или SEQ ID NO:78; или (iii) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, как указано в (i), и аминокислотную последовательность легкой цепи, как указано в (ii).
Вариант осуществления 21. Выделенное антитело, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной тяжелой цепи SEQ ID NO:3 и/или аминокислотную последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:4.
Вариант осуществления 22. Выделенное антитело, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной тяжелой цепи SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:7.
Вариант осуществления 23. Выделенное антитело, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:10.
Вариант осуществления 24. Выделенное антитело по варианту осуществления 21, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:10.
Вариант осуществления 25. Выделенное антитело, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной тяжелой цепи SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51 или SEQ ID NO:90.
Вариант осуществления 26. Выделенное антитело, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53 или SEQ ID NO:54.
Вариант осуществления 27. Выделенное антитело по любому из вариантов осуществления 1-25, содержащее аминокислотную последовательность вариабельной легкой цепи SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53 или SEQ ID NO:54.
Вариант осуществления 28. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, представляющее собой фрагмент антитела, выбранный из Fv, scFv, Fab, Fab’, F(ab’)2 и Fab’-SH.
Вариант осуществления 29. Антитело по любому из предшествующих вариантов осуществления, которое является биспецифическим, причем антитело связывается с IL31 и одним или более антигенами, выбранными из IL17, TNFα, CD20, CD19, CD25, IL4, IL13, IL23, IgE, CD11α, IL6R, α4-интергрина, IL12, IL1β или BlyS.
Вариант осуществления 30. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело по любому из вариантов осуществления 1-29.
Вариант осуществления 31. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по варианту осуществления 30.
Вариант осуществления 32. Способ получения антитела, включающий культивирование клетки-хозяина по варианту осуществления 31 и выделение антитела.
Вариант осуществления 33. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из вариантов осуществления 1-29 и фармацевтически приемлемый носитель.
Вариант осуществления 34. Способ лечения представителя вида животного-компаньона, страдающего IL31-индуцированным состоянием, включающий введение представителю вида животного-компаньона терапевтически эффективного количества антитела по любому из вариантов осуществления 1-29 или фармацевтической композиции по варианту осуществления 33.
Вариант осуществления 35. Способ по варианту осуществления 33, где вид животного-компаньона относится к псовым или кошачьим.
Вариант осуществления 36. Способ по варианту осуществления 34 или варианту осуществления 35, где IL31-индуцированное состояние представляет собой зудящее или аллергическое состояние.
Вариант осуществления 37. Способ по любому из варианта осуществления 34-36, где IL31-индуцированное состояние выбирают из атопического дерматита, аллергического дерматита, зуда, астмы, псориаза, склеродермии и экземы.
Вариант осуществления 38. Способ по любому из вариантов осуществления 34-37, где антитело или фармацевтическую композицию вводят парентерально.
Вариант осуществления 39. Способ по любому из вариантов осуществления 34-38, где антитело или фармацевтическую композицию вводят внутримышечно, внутрибрюшинно, интрацереброспинально, подкожно, внутриартериально, интрасиновиально, интратекально или путем ингаляции.
Вариант осуществления 40. Способ по любому из вариантов осуществления 34-39, включащий введение антитела или фармацевтической композиции в комбинации с ингибитором Jak, ингибитором PI3K, ингибитором AKT или ингибитором MAPK.
Вариант осуществления 41. Способ по любому из вариантов осуществления 34-40, включающий введение антитела или фармацевтической композиции в комбинации с одним или более антител, выбранных из анти-IL17 антитела, анти-TNFα антитела, анти-CD20 антитела, анти-CD19 антитела, анти-CD25 антитела, анти-IL4 антитела, анти-IL13 антитела, анти-IL23 антитела, анти-IgE антитела, анти-CD11α антитела, анти-IL6R антитела, антитела к α4-интергрину, анти-IL12 антитела, анти-IL1β антитела и анти-BlyS антитела.
Вариант осуществления 42. Способ снижения сигнальной функции IL31 в клетке, включающий воздействие на клетку антителом по любому из вариантов осуществления 1-29 или фармацевтической композицией по варианту осуществления 33 в условиях, допускающих связывание антитела с внеклеточным IL31, тем самым снижая связывание с рецептором IL31 и/или снижая сигнальную функцию IL31 в клетке.
Вариант осуществления 43. Способ по варианту осуществления 42, где клетка подвергается воздействию антитела или фармацевтической композиции ex vivo.
Вариант осуществления 44. Способ по варианту осуществления 42, где клетка подвергается воздействию антитела или фармацевтической композиции in vivo.
Вариант осуществления 45. Способ по любому из вариантов осуществления 42-44, где клетка представляет собой собачью клетку или кошачью клетку.
Вариант осуществления 46. Способ детектирования IL31 в образце, полученном от представителя вида животного-компаньона, включающий приведение образца в контакт с антителом по любому из вариантов осуществления 1-29 или фармацевтической композицией по варианту осуществления 33 в условиях, допускающих связывание антитела с IL31, и детектирование образования в образце комплекса между антителом и IL31.
Вариант осуществления 47. Способ по варианту осуществления 46, где образец представляет собой биологический образец, полученный от представителя псовых или кошачьих.
Вариант осуществления 48. Способ идентификации антагониста IL31, включающий приведение в контакт сконструированной клеточной линии с кандидатом-антагонистом IL31, где сконструированная клеточная линия представляет собой клеточную линию млекопитающего, которая не происходит от псовых или кошачьих, и где сконструированная клеточная линия экспрессирует собачий IL31Ra и/или кошачий IL31Ra.
Вариант осуществления 49. Способ по варианту осуществления 48, где сконструированная клеточная линия представляет собой клеточную линию HeLa.
Вариант осуществления 50. Способ по варианту осуществления 48 или 49, в котором сконструированная клеточная линия экспрессирует собачий IL31Ra или кошачий IL31Ra.
Вариант осуществления 51. Способ по любому из вариантов осуществления 48-50, где сконструированная клеточная линия экспрессирует полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:92 или SEQ ID NO:93.
Вариант осуществления 52. Способ по любому из вариантов осуществления 48-51, где сконструированная клеточная линия не экспрессирует собачий или кошачий рецептор онкостатина М (OSMR).
Вариант осуществления 53. Способ по любому из вариантов осуществления 48-52, где кандидат-антагонист IL31 представляет собой анти-IL31 антитело, растворимый рецептор IL31, анти-IL31Ra антитело или малую молекулу, аптамер или пептид.
Вариант осуществления 54. Способ по любому из вариантов осуществления 48-53, где способ включает измерение сигнальной функции IL31.
Вариант осуществления 55. Способ по варианту осуществления 54, где сигнальную функцию IL31 измеряют по уровню фосфорилирования STAT-1, STAT-3 и/или STAT-5.
Вариант осуществления 56. Способ по варианту осуществления 48-55, где кандидат-антагонист IL31 идентифицируют путем детектирования снижения фосфорилирования STAT-1, STAT-3 и/или STAT-5.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0005] Фиг. 1 представляет собой анализ связывания шести химерных антител к кошачьему IL-31 согласно примеру 2.
ОПИСАНИЕ НЕКОТОРЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0006] В Таблице 1 представлен список некоторых последовательностей, указанных в настоящем описании.
N35K
N35K
G99P
N35K
G99A
N34R
N34R
Q93Y
N34R
Q93H
RNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
RNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
RNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
RNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
N35K
G99A
N35K
G99A
N35K
G99A
N35K
G99P
N34R
Q93H
N34R
Q93H
N34R
Q93H
NCBI ref: XP_011286140.1
[felis catus]
NCBI ref: NP_083870
[mus musculus]
NCBI номер кошачьего IL31Ra:
XP_019689862.2
ОПИСАНИЕ НЕКОТОРЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0007] Предложены антитела с улучшенным связыванием с собачьим IL31 и кошачьим IL31. Также представлены тяжелые цепи и легкие цепи антител, которые способны образовывать антитела, связывающие собачий и кошачий IL31. Кроме того, представлены антитела, тяжелые цепи и легкие цепи, содержащие одну или более конкретных определяющих комплементарность областей (CDR). Представлены полинуклеотиды, кодирующие антитела к собачьему и кошачьему IL31. Также представлены способы получения или очистки антител к собачьему и кошачьему IL31. Представлены способы лечения с использованием антител к собачьему и кошачьему IL31. Такие способы включают, без ограничения, способы лечения IL31-индуцированных состояний у животных-компаньонов. Представлены способы детектирования IL31 в образце, полученном от представителя вида животного-компаньона.
[0008] Для удобства читателя ниже приведены определения терминов, используемых в настоящем описании.
[0009] Используемые в настоящем описании числовые значения, такие как Kd, вычислены на основе научных измерений и, таким образом, включают соответствующую погрешность измерения. В некоторых случаях числовой термин может включать числовые значения, округленные до ближайшей значащей цифры.
[0010] Используемые в настоящем описании термины в единственном числе означают «по меньшей мере один» или «один или более», если не указано иное. В контексте настоящего описания термин «или» означает «и/или», если не указано иное. В контексте многочисленных зависимых пунктов формулы изобретения «или» при ссылке на предыдущие другие пункты формулы изобретения относятся только к этим пунктам формулы изобретения в качестве альтернативы.
Примеры анти-IL31 антител
[0011] Представлены антитела, обладающие повышенным сродством к собачьему IL31 и кошачьему IL31. Представленные в настоящем описании анти-IL31 антитела включают, без ограничения, моноклональные антитела, химерные антитела, канинизированные антитела и фелинизированные антитела.
[0012] В настоящем описании также представлены аминокислотные последовательности антител с созревшей аффинностью с улучшенным связыванием с собачьим и кошачьим IL-31. Например, для иллюстрации зрелых антител (канинизированных и фелинизированных) приведены CDR вариабельной тяжелой цепи (SEQ ID NO:11-15), CDR вариабельной легкой цепи (SEQ ID NO:20-24), каркасные последовательности вариабельной области тяжелой цепи (SEQ ID NO:16-19, 25-28, 55-72) и каркасные последовательности вариабельной области легкой цепи (SEQ ID NO:11-14). Представлены в качестве иллюстрации аминокислотные последовательности вариабельной легкой цепи, легкой цепи, вариабельной тяжелой цепи и тяжелой цепи иллюстративных зрелых антител (канинизированных и фелинизированных) (например, SEQ ID NO:5-10, 29-54, 73-78).
[0013] В контексте настоящего описания термин «антитело» используется в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая, без ограничения, моноклональные антитела, поликлональные антитела, полиспецифические антитела (например, биспецифические (такие как привлекающий Т-клетки биспецифический активатор) и триспецифические антитела) и фрагменты антител (такие как Fab, F(ab')2, ScFv, минитело, диатело, триатело и тетратело) при условии, что они проявляют желаемую антигенсвязывающую активность. Виды псовых, кошачьих и лошадиных отличаются разновидностью (классами) антител, которые являются общими для многих млекопитающих.
[0014] Термин антитело включает, без ограничения, фрагменты, способные связываться с антигеном, такие как Fv, одноцепочечный Fv (scFv), Fab, Fab', ди-scFv, sdAb (однодоменное антитело) и (Fab')2 (включая химически связанный F(ab')2). Расщепление антител папаином дает два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых Fab-фрагментами, каждый из которых имеет один антигенсвязывающий участок, и остаточный Fc-фрагмент, название которого отражает его способность легко кристаллизоваться. Обработка пепсином дает фрагмент F(ab’)2, который имеет два антигенсвязывающих участка и сохраняет способность связываться с антигеном. Термин «антитело» также включает, без ограничения, химерные антитела, гуманизированные антитела и антитела различных видов, таких как мышиные, человеческие, яванского макака, собачьи, кошачьи, лошадиные и т.д. Кроме того, для всех конструкций антител, представленных в настоящем описании, также предусмотрены варианты, имеющие последовательности, происходящие от других организмов. Таким образом, если описана мышиная версия антитела, специалисту в данной области будет понятно, как трансформировать антитело на основе мышиной последовательности в кошачью, собачью, лошадиную и т.п. последовательность. Фрагменты антител также включают любую ориентацию одноцепочечных scFv, тандемных di-scFv, диател, тандемных три-sdcFv, минител и т.д. Фрагменты антител также включают нанотела (sdAb, антитело, имеющее один мономерный домен, такой как пара вариабельных доменов тяжелых цепей, без легкой цепи). В некоторых вариантах осуществления фрагмент антитела может относиться к определенному виду (например, мышиному scFv или собачьему scFv). Это означает последовательности, по меньшей мере, части областей, отличных от CDR, а не источник конструкции. В некоторых вариантах осуществления антитела содержат метку или конъюгированы со вторым фрагментом.
[0015] Термины «метка» и «детектируемая метка» означают фрагмент, прикрепленный к антителу или его аналиту, что позволяет детектировать реакцию (например, связывание) между членами пары специфического связывания. Меченый член пары специфического связывания называется «детектируемо меченым». Таким образом, термин «меченый связывающий белок» относится к белку с включенной меткой, которая позволяет идентифицировать связывающий белок. В некоторых вариантах осуществления метка представляет собой детектируемый маркер, который способен генерировать сигнал, детектируемый с помощью визуальных или инструментальных средств, например, включение радиоактивно меченной аминокислоты или присоединение к полипептиду биотинильных фрагментов, которые можно детектировать с помощью меченого авидина (для например, стрептавидина, содержащего флуоресцентный маркер или имеющего ферментативную активность, которую можно обнаружить оптическими или колориметрическими методами). Примеры меток для полипептидов включают, без ограничения, следующие: радиоизотопы или радионуклиды (например, 3H, 14C, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho или 153Sm); хромогены, флуоресцентные метки (например, FITC, родамин, лантанидные люминофоры), ферментативные метки (например, пероксидазу хрена, люциферазу, щелочную фосфатазу); хемилюминесцентные маркеры; биотинильные группы; предопределенные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, парные последовательности лейциновой молнии, сайты связывания вторичных антител, домены связывания металлов, метки эпитопов); и магнитные агенты, такие как хелаты гадолиния. Репрезентативные примеры меток, обычно используемых для иммунологических анализов, включают фрагменты, которые генерируют свет, например соединения акридиния, и фрагменты, которые генерируют флуоресценцию, например флуоресцеин. В этом отношении сам фрагмент может не быть детектируемо меченным, но может стать детектируемым в результате реакции с еще одним фрагментом.
[0016] Термин «моноклональное антитело» относится к антителу из по существу однородной популяции антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, идентичны, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела обладают высокой специфичностью и направлены против одного антигенного участка. Более того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты антигена. Таким образом, образец моноклонального антитела может связываться с одним и тем же эпитопом на антигене. Модификатор «моноклональный» указывает на то, что антитело получено из практически однородной популяции антител, и его не следует толковать как требующий получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела могут быть получены методом гибридомы, впервые описанным Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495, или могут быть получены методами рекомбинантной ДНК, такими как описано в патенте США № 4,816,567. Моноклональные антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек, созданных методами, описанными, например, в McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554.
[0017] «Аминокислотная последовательность» означает последовательность аминокислотных остатков в пептиде или белке. Термины «полипептид» и «белок» используются взаимозаменяемо для обозначения полимера аминокислотных остатков и не ограничены минимальной длиной. Такие полимеры аминокислотных остатков могут содержать природные или неприродные аминокислотные остатки и включают, без ограничения, пептиды, олигопептиды, димеры, тримеры и мультимеры аминокислотных остатков. Это определение включает как полноразмерные белки, так и их фрагменты. Термины также включают модификации полипептида после экспрессии, например гликозилирование, сиалирование, ацетилирование, фосфорилирование и т.п. Кроме того, для целей настоящего изобретения «полипептид» относится к белку, нативная последовательности которого включает модификации, такие как делеции, добавления и замены (обычно консервативные по своей природе), при условии, что белок сохраняет желаемую активность. Эти модификации могут быть преднамеренными, например, результатом направленного мутагенеза, или могут быть случайными, например, результатом мутаций хозяев, которые продуцируют белки, или ошибок из-за амплификации ПЦР.
[0018] Термин «IL31», используемый в настоящем описании, относится к любому нативному IL31, полученному в результате экспрессии и процессинга IL31 в клетке. Термин включает IL31 из любого источника позвоночного, включая млекопитающих, таких как приматы (например, люди и яванские макаки) и грызуны (например, мыши и крысы), и животных-компаньонов (например, собак, кошек и лошадей), если не указано иное. Термин также включает встречающиеся в природе варианты IL31, например, варианты сплайсинга или аллельные варианты.
[0019] В некоторых вариантах осуществления собачий IL31 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:79 или SEQ ID NO:80. В некоторых вариантах осуществления кошачий IL31 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:81. В некоторых вариантах осуществления мышиный IL31 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:82.
[0020] Термин «IL31-связывающий домен» антитела означает связывающий домен, образованный легкой цепью и тяжелой цепью анти-IL31 антитела, который связывается с IL31.
[0021] В некоторых вариантах осуществления IL31-связывающий домен связывается с собачьим IL31 или кошачьим IL31 со сродством, более высоким чем сродство, с которым оно связывается с человеческим IL31. В некоторых вариантах осуществления IL31-связывающий домен связывается с IL31 других животных-компаньонов, например лошадиным IL31. В некоторых вариантах осуществления IL31-связывающий домен не связывается с человеческим IL31.
[0022] В контексте настоящего описания термин «эпитоп» относится к участку молекулы-мишени (например, антигена, такого как белок, нуклеиновая кислота, углевод или липид), к которому присоединяется антигенсвязывающая молекула (например, антитело, фрагмент антитела или белковый каркас, содержащий связывающие участки антитела). Эпитопы часто включают химически активную поверхностную группу молекул, таких как аминокислоты, полипептиды или боковые цепи сахаров, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Эпитопы могут быть образованы как из непрерывных, так и смежных не являющихся непрерывными остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента) молекулы-мишени. Эпитопы, образованные из непрерывных остатков (например, аминокислот, нуклеотидов, сахаров, липидного фрагмента), обычно сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, образованные в результате третичной укладки, обычно теряются при обработке денатурирующими растворителями. Эпитоп может включать, без ограничения, по меньшей мере 3, по меньшей мере 5 или 8-10 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов). В некоторых примерах эпитоп имеет длину менее 20 остатков (например, аминокислот или нуклеотидов), менее 15 остатков или менее 12 остатков. Два антитела могут связываться с одним и тем же эпитопом внутри антигена, если они проявляют конкурентное связывание с антигеном. В некоторых вариантах осуществления эпитоп можно идентифицировать по определенному минимальному расстоянию до остатка CDR на антигенсвязывающей молекуле. В некоторых вариантах осуществления эпитоп можно идентифицировать по указанному выше расстоянию и, кроме того, ограничить его остатками, участвующими в связи (например, водородной связи) между остатком антитела и остатком антигена. Эпитоп также можно идентифицировать с помощью различных сканирований, например, аланиновое или аргининовое сканирование может указывать на один или более остатков, с которыми может взаимодействовать антигенсвязывающая молекула. Если не указано иное, набор остатков в качестве эпитопа не исключает того, что другие остатки являются частью эпитопа конкретного антитела. Скорее наличие такого набора обозначает минимальную последовательность (или набор последовательностей) эпитопов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления набор остатков, идентифицированный как эпитоп, обозначает минимальный эпитоп, релевантный для антигена, а не исключительный список остатков для эпитопа на антигене.
[0023] Термин «CDR» означает определяющую комплементарность область, определенную специалистом в данной области по меньшей мере одним способом идентификации. В некоторых вариантах осуществления CDR могут быть определены в соответствии с любой из схем: схемы нумерации Чотиа, схемы нумерации Кабат, комбинации Кабат и Чотиа, определения AbM, определения контакта или комбинации определений по Кабат, Чотиа, AbM или контакт. Различные CDR в антителе могут быть обозначены соответствующим номером и типом цепи, включая, без ограничения, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3. Термин «CDR» используется в настоящем описании также для обозначения «гипервариабельной области» или HVR, включая гипервариабельные петли.
[0024] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело содержит:
а) тяжелую цепь, содержащую последовательность CDR-H3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:14 или SEQ ID NO:15; и/или
b) легкую цепь, содержащую последовательность CDR-L1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:20; и/или
c) легкую цепь, содержащую последовательность CDR-L3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:23 или SEQ ID NO:24.
[0025] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело содержит:
а) тяжелую цепь, содержащую последовательность CDR-H1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:11, последовательность CDR-H2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:12, и последовательность CDR-H3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14 или SEQ ID NO:15; и/или
b) легкую цепь, содержащую последовательность CDR-L1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:20, последовательность CDR-L2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:21, и последовательность CDR-L3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23 или SEQ ID NO:24.
[0026] В контексте настоящего описания термин «вариабельная область» относится к области, содержащей по меньшей мере три CDR. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область включает три CDR и по меньшей мере одну каркасную область («FR»). Термины «вариабельная область тяжелой цепи» или «вариабельная тяжелая цепь» используются взаимозаменяемо для обозначения области, содержащей по меньшей мере три CDR тяжелой цепи. Термины «вариабельная область легкой цепи» или «вариабельная легкая цепь» используются взаимозаменяемо для обозначения области, содержащей по меньшей мере три CDR легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи или вариабельная область легкой цепи содержат по меньшей мере одну каркасную область. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну каркасную область тяжелой цепи, выбранную из HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3 и HC-FR4. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит по меньшей мере одну каркасную область легкой цепи, выбранную из LC-FR1, LC-FR2, LC-FR3 и LC-FR4. Каркасные области могут располагаться рядом между CDR легкой цепи или между CDR тяжелой цепи. Например, антитело может содержать вариабельную тяжелую цепь, имеющую следующую структуру: (HC-FR1)-(CDR-H1)-(HC-FR2)-(CDR-H2)-(HC-FR3)-(CDR-H3)-(HC-FR4). Антитело может содержать вариабельную тяжелую цепь, имеющую следующую структуру: (CDR-H1)-(HC-FR2)-(CDR-H2)-(HC-FR3)-(CDR-H3). Антитело также может содержать вариабельную легкую цепь, имеющую следующую структуру: (LC-FR1)-(CDR-L1)-(LC-FR2)-(CDR-L2)-(LC-FR3)-(CDR-L3)-(LC-FR4). Антитело может также может содержать вариабельную легкую цепь, имеющую следующую структуру: (CDR-L1)-(LC-FR2)-(CDR-L2)-(LC-FR3)-(CDR-L3).
[0027] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело содержит одну или более из (а) последовательности каркаса 1 вариабельной области тяжелой цепи (HC-FR1) SEQ ID NO:16; (b) последовательности HC-FR2 SEQ ID NO:17; (c) последовательности HC-FR3 SEQ ID NO:18; (d) последовательности HC-FR4 SEQ ID NO:19; (e) последовательности каркаса 1 вариабельной области легкой цепи (LC-FR1) SEQ ID NO:25; (f) последовательности LC-FR2 SEQ ID NO:26; (g) последовательности LC FR3 SEQ ID NO:27; или (h) последовательности LC-FR4 SEQ ID NO:28.
[0028] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело содержит одну или более из (а) последовательности каркаса 1 вариабельной области тяжелой цепи (HC-FR1) SEQ ID NO:55 или SEQ ID NO:56; (b) последовательности HC-FR2 SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59; (c) последовательности HC-FR3 SEQ ID NO:60 или SEQ ID NO:61; (d) последовательности HC-FR4 SEQ ID NO:62 или SEQ ID NO:63; (e) последовательности каркаса 1 вариабельной области легкой цепи (LC-FR1) SEQ ID NO:64 или SEQ ID NO:65; (f) последовательности LC-FR2 SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67 или SEQ ID NO:68; (g) последовательности LC-FR3 SEQ ID NO:69 или SEQ ID NO:70; или (h) последовательности LC-FR4 SEQ ID NO:71 или SEQ ID NO:72.
[0029] В контексте настоящего описания термин «константная область» относится к области, содержащей по меньшей мере три константных домена. Термины «константная область тяжелой цепи» или «константная тяжелая цепь» используются взаимозаменяемо для обозначения области, содержащей по меньшей мере три константных домена тяжелой цепи, СН1, СН2 и СН3. Неограничивающие примеры константных областей тяжелой цепи включают γ, δ, α, ε и μ. Каждая константная область тяжелой цепи соответствует изотипу антитела. Например, антитело, содержащее константную область γ, представляет собой антитело IgG, антитело, содержащее константную область δ, представляет собой антитело IgD, антитело, содержащее константную область α, представляет собой антитело IgA, антитело, содержащее константную область μ, представляет собой антитело IgM, и антитело, содержащее константную область ε, представляет собой антитело IgE. Некоторые изотипы могут быть дополнительно подразделены на подклассы. Например, антитела IgG включают, без ограничения, антитела IgG1 (содержащее константную область γ1), IgG2 (содержащее константную область γ2), IgG3 (содержащее константную область γ3) и IgG4 (содержащее константную область γ4). Антитела IgA включают, без ограничения, антитела IgA1 (содержащее константную область α1) и IgA2 (содержащее константную область α2); и антитела IgM включают, без ограничения, IgM1 и IgM2. Термины «константная область легкой цепи» или «константная легкая цепь» используются взаимозаменяемо для обозначения области, содержащей константный домен легкой цепи, CL. Неограничивающие типичные константные области легкой цепи включают λ и κ. Делеции и изменения в пределах доменов, не изменяющие функцию, входят в объем термина «константная область», если не указано иное. У представителей псовых, кошачьих и лошадиных имеются классы антител, такие как IgG, IgA, IgD, IgE и IgM. В класс собачьих IgG антител входят IgG-A, IgG-B, IgG-C и IgG-D. В класс кошачьих IgG антител входят IgG1a, IgG1b и IgG2.
[0030] Термин «химерное антитело» или «химерный» относится к антителу, в котором часть тяжелой цепи или легкой цепи получена из конкретного источника или вида, в то время как по меньшей мере часть остатка тяжелой цепи или легкой цепи происходит из другого источника или вида. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело относится к антителу, содержащему по меньшей мере одну вариабельную область первого вида (например, мыши, крысы, яванского макака и т.д.) и по меньшей мере одну константную область второго вида (например, человека, собаки, кошки, лошади и др.).
[0031] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело содержит собачью константную область тяжелой цепи, выбранную из константной области IgG-A, IgG-B, IgG-C и IgG-D. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело представляет собой (а) собачье антитело IgG-A, содержащее аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:83; (b) собачье антитело IgG-B, содержащее аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:84; (c) собачье антитело IgG-C, содержащее аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:85; или (d) собачье антитело IgG-D, содержащее аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO:86.
[0032] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело содержит кошачью константную область тяжелой цепи, выбранную из константной области IgG1, IgG2a и IgG2b.
[0033] «Канинизированное антитело» означает антитело, в котором по меньшей мере одна аминокислота в части, не относящейся к собачьей вариабельной области, заменена соответствующей аминокислотой из собачьей вариабельной области. В некоторых вариантах осуществления канинизированное антитело содержит по меньшей мере одну собачью константную область (например, константную область γ, константную область α, константную область δ, константную область ε, константную область μ и т.д.) или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления канинизированное антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fab, scFv, (Fab')2 и т.д. Термин «канинизированный» также обозначает формы несобачьих (например, мышиных) антител, которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулина или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие антигенсвязывающие последовательности антител), которые содержат минимальную последовательность несобачьего иммуноглобулина. Канинизированные антитела могут включать собачьи иммуноглобулины (реципиентное антитело), в которых остатки из CDR реципиента заменены остатками из CDR не относящихся к собачьим видов (донорское антитело), таких как мыши, крысы или кролики, с желаемой специфичностью, сродством и емкостью. В некоторых случаях остатки каркасной области (FR) Fv собачьего иммуноглобулина заменены соответствующими не относящимися к собачьим остатками. Кроме того, канинизированное антитело может содержать остатки, которые не обнаруживаются ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях, но включены для дальнейшего уточнения и оптимизации характеристик антитела.
[0034] В некоторых вариантах осуществления канинизированная вариабельная цепь слита с собачьей константной тяжелой цепью или собачьей константной легкой цепью.
[0035] «Фелинизированное антитело» означает антитело, в котором по меньшей мере одна аминокислота в части, не относящейся к кошачьей вариабельной области, заменена соответствующей аминокислотой из кошачьей вариабельной области. В некоторых вариантах осуществления кошачье антитело содержит по меньшей мере одну кошачью константную область (например, константную область γ, константную область α, константную область δ, константную область ε, константную область μ и т.д.) или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления фелинизированное антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fab, scFv, (Fab')2 и т.д. Термин «фелинизированный» также обозначает формы некошачьих (например, мышиных) антител, которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулина или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие антигенсвязывающие последовательности антител), которые содержат минимальную последовательность некошачьего иммуноглобулина. Фелинизированные антитела могут включать кошачьи иммуноглобулины (реципиентное антитело), в которых остатки из CDR реципиента заменены остатками из CDR не относящегося к кошачьим вида (донорское антитело), такого как мышь, крыса или кролик, с желаемой специфичностью, сродством и емкостью. В некоторых случаях остатки каркасной области (FR) Fv кошачьего иммуноглобулина заменены соответствующими не относящимися к кошачьим остатками. Кроме того, фелинизированное антитело может содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях, но включены для дальнейшего уточнения и оптимизации характеристик антитела.
[0036] В некоторых вариантах осуществления кошачья вариабельная цепь слита с кошачьей константной тяжелой цепью или кошачьей константной легкой цепью. Термин «IgX Fc» означает, что Fc-участок получен из определенного изотипа антитела (например, IgG, IgA, IgD, IgE, IgM и т.д.), где «X» означает изотип антитела. Так, «Fc IgG» обозначает Fc-участок γ-цепи, «Fc IgA» означает Fc-участок α-цепи, «Fc IgD» означает Fc-участок δ-цепи, «Fc IgE» означает Fc-участок ε-цепи, «Fc IgM» означает Fc-участок μ-цепи и т.д. В некоторых вариантах осуществления Fc-участок IgG содержит CH1, шарнир, CH2, CH3 и CL1. «IgX-N-Fc» означает, что Fc-участок получен из конкретного подкласса изотипа антитела (например, собачьего IgG подкласса A, B, C или D; или кошачьего IgG подкласса 1, 2a или 2b и т. д.), где «N» означает подкласс. В некоторых вариантах осуществления области Fc IgX или IgX-N-Fc происходят от животного-компаньона, такого как собака или кошка. В некоторых вариантах осуществления Fc-области IgG выделяют из тяжелых γ-цепей собак, таких как IgG-A, IgG-B, IgG-C или IgG-D. В некоторых случаях Fc-участки IgG выделяют из тяжелых γ-цепей кошек, таких как IgG1, IgG2a или IgG2b. Антитела, содержащие Fc-участок IgG-A, IgG-B, IgG-C или IgG-D, могут обеспечивать более высокие уровни экспрессии в системах рекомбинационного продуцирования.
[0037] Термин «сродство (аффинность)» означает силу суммарной силы нековалентных взаимодействий между одним связывающим участком молекулы (например, антитела) и его партнером по связыванию (например, антигеном). Сродство молекулы X к ее партнеру Y обычно может быть представлено константой диссоциации (KD). Сродство можно измерить обычными способами, известными в данной области, такими как, например, иммуноблоттинг, ELISA KD, KinEx A, биослойная интерферометрия (BLI) или с помощью устройства поверхностного плазмонного резонанса.
[0038] Термины «KD», «Kd», «Kd» или «значение Kd», используемые взаимозаменяемо, относятся к равновесной константе диссоциации взаимодействия антитело-антиген. В некоторых вариантах осуществления Kd антитела измеряют методом биослойной интерферометрии с помощью биосенсора, такого как система Octet® (Pall ForteBio LLC, Fremont CA), в соответствии с инструкциями поставщика. Вкратце, биотинилированный антиген связывают с наконечником сенсора, и ассоциацию антител отслеживают в течение девяноста секунд, а диссоциацию отслеживают в течение 600 секунд. Буфер для разведения и связывания представляет собой 20 мМ фосфат, 150 мМ NaCl, рН 7,2. Пустую кривую, содержащую только буфер, вычитают, чтобы скорректировать любой дрейф. Данные подгоняют к 2:1 модели связывания с помощью программного обеспечения для анализа данных ForteBio для определения константы скорости ассоциации (kon), константы скорости диссоциации (koff) и Kd. Константу равновесной диссоциации (Kd) рассчитывают в виде отношения koff/kon. Термин «kon» относится к константе скорости ассоциации антитела с антигеном, а термин «koff» относится к константе скорости диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген.
[0039] Термин «связывается» с антигеном или эпитопом является термином, который хорошо известен в данной области, и способы определения такого связывания также хорошо известны в данной области. Говорят, что молекула проявляет «связывание», если она реагирует, связывается или имеет сродство к конкретной клетке или веществу, и эту реакцию, ассоциацию или сродство можно обнаружить одним или более методами, известными в данной области, такими как, например, иммуноблот, ELISA KD, KinEx A, биослойная интерферометрия (BLI), устройства поверхностного плазмонного резонанса и т.д.
[0040] «Поверхностный плазмонный резонанс» означает оптическое явление, которое позволяет проводить анализ биоспецифических взаимодействий в реальном времени путем обнаружения изменений концентрации белка в матрице биосенсора, например, с помощью системы BIAcore™ (BIAcore International AB, компании GE Healthcare, Uppsala, Sweden и Piscataway, N.J.). Дополнительное описание см. в Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26.
[0041] «Биослойная интерферометрия» относится к оптическому аналитическому методу, который позволяет анализировать интерференционную картину света, отраженного от слоя иммобилизованного белка на наконечнике биосенсора и внутреннем эталонном слое. Изменения количества молекул, связанных с наконечником биосенсора, вызывают сдвиги в интерференционной картине, которые можно измерить в режиме реального времени. Неограничивающим типичным устройством для биослойной интерферометрии является система Octet® (Pall ForteBio LLC). См., например, Abdiche et al., 2008, Anal. Биохим. 377:209-277.
[0042] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело связывается с собачьим IL31 или кошачьим IL31 с константой диссоциации (Kd) менее 5×10-6 М, менее 1×10-6 М, менее 5×10-7 М, менее 1×10-7 М, менее 5×10-8 М, менее 1×10-8 М, менее 5×10-9 М, менее 1×10-9 М, менее 5×10-10 М, менее 1×10-10 М, менее 5×10-11 М, менее 1×10-11 М, менее 5×10-12 М или менее 1×10-12 M, измеренной методом биослойной интерферометрии. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело связывается с собачьим IL31, кошачьим IL31 или лошадиным IL31 с Kd от 5×10-6 М до 1×10-6 М, от 5×10-6 М до 5×10-7 М, от 5×10-6 М до 1×10-7 М, от 5×10-6 М до 5×10-8 М, от 5×10-6 М до 1×10-8 М, от 5×10-6 М и 5×10-9 М, от 5×10-6 М до 1×10-9 М, от 5×10-6 М до 5×10-10 М, от 5×10-6 М до 1×10-10 М, от 5×10-6 М до 5×10-11 М, от 5×10-6 М до 1×10-11 М, от 5×10-6 М до 5×10-12 М, от 5×10-6 М до 1×10-12 М, от 1×10-6 М до 5×10-7 М, от 1×10-6 М до 1×10-7 М, от 1×10-6 М и 5×10-8 М, 1×10-6 М до 1×10-8 М, от 1×10-6 М до 5×10-9 М, от 1×10-6 М до 1×10-9 М, от 1×10-6 М до 5×10-10 М, от 1×10-6 М до 1×10-10 М, от 1×10-6 М до 5×10-11 М, от 1×10-6 М до 1×10-11 М, от 1×10-6 М до 5×10-12 М, от 1×10-6 М до 1×10-12 М, от 5×10-7 М до 1×10-7 М, от 5×10-7 М до 5×10-8 М, 5×10-7 М до 1×10-8 М, от 5×10-7 М до 5×10-9 М, от 5×10-7 М до 1×10-9 М, от 5×10-7 М до 5×10-10 М, от 5×10-7 М до 1×10-10 М, от 5×10-7 М до 5×10-11 М, от 5×10-7 М до 1×10-11 М, от 5×10-7 М до 5×10-12 М, от 5×10-7 М до 1×10-12 М, от 1×10-7 М до 5×10-8 М, от 1×10-7 М до 1×10-8 М, от 1×10-7 М до 5×10-9 М, от 1×10-7 М до 1×10-9 М, от 1×10-7 М до 5×10-10 М, от 1×10-7 М до 1 ×10-10 М, от 1×10-7 M до 5×10-11 M, от 1×10-7 M до 1×10-11 M, от 1×10-7 M до 5×10-12 M, от 1×10-7 M до 1×10-12 М, от 5×10-8 М до 1×10-8 М, от 5×10-8 М до 5×10-9 М, от 5×10-8 М до 1×10-9 М, от 5×10-8 М до 5×10-10 М, от 5×10-8 М до 1×10-10 М, от 5×10-8 М до 5×10-11 М, от 5×10-8 М до 1×10-11 М, от 5×10-8 М до 5×10-12 М, от 5×10-8 М до 1×10-12 М, от 1×10-8 М до 5×10-9 М, от 1×10-8 М до 1×10-9 М, от 1×10-8 М до 5×10-10 М, от 1×10-8 М до 1×10-10 М, от 1×10-8 М до 5×10-11 М, от 1×10-8 М до 1×10-11 М, от 1×10-8 М до 5×10-12 М, от 1×10-8 М до 1×10-12 М, от 5×10-9 М до 1×10-9 М, от 5×10-9 M до 5×10-10 M, от 5×10-9 M до 1×10-10 M, от 5×10-9 M до 5×10-11 M, от 5×10-9 M до 1×10-11 М, от 5×10-9 М до 5×10-12 М, от 5×10-9 М до 1×10-12 М, от 1×10-9 М до 5×10-10 М, от 1×10-9 М до 1×10-10 М, от 1×10-9 М до 5×10-11 М, от 1×10-9 М до 1×10-11 М, от 1×10-9 M до 5×10-12 M, от 1×10-9 M до 1×10-12 M, от 5×10-10 M до 1×10-10 M, от 5×10-10 M до 5×10-11 М, от 1×10-10 М до 5×10-11 М, от 1×10-10 М до 1×10-11 М, от 1×10-10 М до 5×10-12 М, от 1×10-10 М до 1×10-12 М, от 5×10-11 M до 1×10-12 M, от 5×10-11 M до 5×10-12 M, от 5×10-11 M до 1×10-12 M, от 1×10-11 М до 5×10-12 М или от 1×10-11 М до 1×10-12 М, измеренной методом биослойной интерферометрии. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело связывается с собачьим IL31 или кошачьим IL31, что определяют методом иммуноблоттинга.
[0043] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело не связывается с человеческим IL31 согласно результатам анализа методом иммуноблоттинга и/или биослойной интерферометрии.
[0044] В некоторых вариантах осуществления предложено анти-IL31 антитело, которое конкурирует с M14 за связывание с IL31.
[0045] «Вариант» означает биологически активный полипептид с аминокислотной последовательностью, который на по меньшей мере примерно 50% идентичен полипептиду с нативной последовательностью после выравнивания последовательностей и введения гэпов, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательности, и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Такие варианты включают, например, полипептиды, в которых один или более аминокислотных остатков добавлены или удалены на N- или С-конце полипептида.
[0046] В некоторых вариантах осуществления вариант имеет аминокислотную последовательность, на по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 65%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% идентичную полипептиду с нативной последовательностью.
[0047] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело содержит:
а) (i) последовательность вариабельной тяжелой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:7; (ii) последовательность вариабельной легкой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9 или SEQ ID NO:10; или (iii) последовательность вариабельной тяжелой цепи, как указано в (i), и последовательность вариабельной легкой цепи, как указано в (ii); или
b) (i) последовательность вариабельной тяжелой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51 или SEQ ID NO:90; (ii) последовательность вариабельной легкой цепи, на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53 или SEQ ID NO:54; или (iii) последовательность вариабельной тяжелой цепи, как указано в (i), и последовательность вариабельной легкой цепи, как указано в (ii).
[0048] В контексте настоящего описания термин «процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» и «гомология» по отношению к последовательности пептида, полипептида или антитела определяют как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной пептидной или полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения гэпов, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательности, и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, известными специалистам в данной области, например, с помощью общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEGALINE™ (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры для измерения выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.
[0049] Аминокислотная замена может включать, без ограничения, замену одной аминокислоты в полипептиде другой аминокислотой. Примеры замен показаны в таблице 2. Аминокислотные замены могут быть введены в представляющее интерес антитело, и продукты могут быть подвергнуты скринингу на наличие желаемой активности, например сохранение/улучшение связывания антигена, снижение иммуногенности или улучшение ADCC или CDC.
[0050] Таблица 2
[0051] Аминокислоты могут быть сгруппированы в соответствии с общими свойствами боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислые: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
[0052] Неконсервативные замены влекут за собой замену члена одного из этих классов на другой класс.
[0053] Термин «вектор» используется для описания полинуклеотида, который можно сконструировать таким образом, чтобы он содержал клонированный полинуклеотид или полинуклеотиды, которые можно размножать в клетке-хозяине. Вектор может включать один или более из следующих элементов: точку начала репликации, одну или более регуляторных последовательностей (таких как, например, промоторы или энхансеры), которые регулируют экспрессию представляющего интерес полипептида, или один или более селектируемых маркерных генов (такие как, например, гены устойчивости к антибиотикам и гены, которые можно использовать в колориметрических анализах, например, β-галактозидазу). Термин «вектор экспрессии» относится к вектору, который используется для экспрессии представляющего интерес полипептида в клетке-хозяине.
[0054] «Клетка-хозяин» относится к клетке, которая может быть или была реципиентом вектора или выделенного полинуклеотида. Клетки-хозяева могут представлять собой прокариотические клетки или эукариотические клетки. Примеры эукариотических клеток включают клетки млекопитающих, такие как клетки приматов или животных, не являющихся приматами; клетки грибов, таких как дрожжи; растительные клетки; и клетки насекомых. Неограничивающие примеры клеток млекопитающих включают, без ограничения, клетки NS0, клетки PER.C6® (Crucell), клетки 293 и клетки CHO и их производные, такие как клетки 293-6E, DG44, CHO-S и CHO-К. Клетки-хозяева включают потомство одной клетки-хозяина, и это потомство не обязательно может быть полностью идентичным (по морфологии или комплементарности геномной ДНК) исходной родительской клетке в связи с естественной, случайной или преднамеренной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные in vivo полинуклеотидом(ами), кодирующим(и) аминокислотную(ые) последовательность(и), представленную(ые) в настоящем описании.
[0055] В контексте настоящего описания термин «выделенный» относится к молекуле, которая была отделена по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми она обычно встречается в природе или продуцируется. Например, полипептид называется «выделенным», когда он отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой был продуцирован. Когда полипептид секретируется клеткой после экспрессии, физическое отделение супернатанта, содержащего полипептид, от клетки, которая его продуцирует, считается «выделением» полипептида. Точно так же полинуклеотид называется «выделенным», если он не является частью более крупного полинуклеотида (например, геномной ДНК или митохондриальной ДНК, в случае ДНК-полинуклеотида), в котором он обычно встречается в природе, или отделен по меньшей мере от некоторых компонентов клетки, в которой он был получен, например, в случае РНК-полинуклеотида. Таким образом, ДНК-полинуклеотид, содержащийся в векторе внутри клетки-хозяина, можно назвать «выделенным». В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело очищают с помощью хроматографии, такой как эксклюзионная хроматография, ионообменная хроматография, колоночная хроматография с белком А, хроматография гидрофобного взаимодействия и хроматография СНТ.
[0056] Термин «вид животного-компаньона» относится к животному, подходящему для человека в качестве компаньона. В некоторых вариантах осуществления вид животного-компаньона относится к мелкому млекопитающему, такому как представитель псовых, кошачьих, собака, кошка, лошадь, кролик, хорек, морская свинка, грызун и т.д. В некоторых вариантах осуществления вид животного-компаньона относится к сельскохозяйственному животному, например, лошади, корове, свинье и т.д.
[0057] Термин «сигнальная функция IL31» относится к любой одной из или комбинации последующих видов активности, которые возникают, когда IL31 связывается со своим рецептором или рецепторным комплексом. В некоторых вариантах осуществления сигнальная функция IL31 включает активацию сигнальных молекул янус-киназы (Jak) 1 или Jak 2. В некоторых вариантах осуществления сигнальная функция IL31 включает фосфорилирование белков STAT-3 или STAT-5. В некоторых вариантах осуществления сигнальная функция IL31 включает активацию сигнального пути MAP-киназы ERK1/2. В некоторых вариантах осуществления сигнальная функция IL31 включает активацию сигнального пути PI3K/AKT. В некоторых вариантах осуществления сигнальная функция IL31 включает активацию сигнального пути Jak1/2.
[0058] «Фосфорилирование STAT» означает постэкспрессионную модификацию белка STAT путем фосфорилирования. Например, «фосфорилирование STAT-3» относится к фосфорилированию STAT-3, а «фосфорилирование STAT-5» относится к фосфорилированию STAT-5. В некоторых вариантах осуществления фосфорилирование STAT-3 измеряют методом иммуноблоттинга.
[0059] Например, клетки (например, собачьи моноцитарные клетки DH82 или клетки млекопитающих (например, клетки HeLa), трансфицированные собачьим и/или кошачьим IL31Ra) высевают в 96-луночный планшет для культивирования клеток с плотностью 1×105 клеток на лунку в питательной среде (например, MEM, Life Technologies®), содержащей 15% термоинактивированной фетальной бычьей сыворотки, 2 ммоль/л GlutaMax, 1 ммоль/л пирувата натрия и 10 нм/мл собачьего интерферона-с (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) в течение 24 часов при 37°C в присутствии анти-IL31 антитела, как раскрыто в настоящем описании. Для определения концентраций фосфорилированного белка STAT и нефосфорилированного белка STAT относительно друг друга и по сравнению с бета-актином в качестве контроля можно использовать анализ клеточного лизата методом иммуноблоттинга с использованием анти-фосфо STAT-3, анти-STAT-3, анти-фосфо STAT-1, анти-STAT-1, анти-фосфо STAT-5 или анти-STAT-5 антител (R&D Systems). Специалистам в данной области известны способы либо качественного, либо количественного определения концентрации белков с помощью иммуноблота. В некоторых вариантах осуществления качественное определение относительной концентрации осуществляется путем визуального осмотра иммуноблота. В некоторых вариантах осуществления количественное определение концентрации фосфорилированного белка STAT и нефосфорилированного белка STAT осуществляется путем цифровой визуализации иммуноблота, определения интенсивности полос и использования линейной стандартной кривой известных концентраций белка STAT для обратного расчета концентрации фосфорилированного или нефосфорилированного белка STAT в образце.
[0060] «Уменьшать» или «ингибировать» означает снижать, уменьшать или устранять активность, функцию или количество по сравнению с эталоном. В некоторых вариантах осуществления под «снижением» или «ингибированием» подразумевается способность вызывать общее снижение на 20% или более. В некоторых вариантах осуществления под «снижением» или «ингибированием» подразумевается способность вызывать общее снижение на 50% или более. В некоторых вариантах осуществления под «снижением» или «ингибированием» подразумевается способность вызывать общее снижение на 75%, 85%, 90%, 95% или более. В некоторых вариантах осуществления количество, указанное выше, ингибируется или уменьшается в течение определенного периода времени по сравнению с ингибированием или уменьшением контрольной дозы (такой как плацебо) в течение того же периода времени. Используемый в настоящем описании термин «эталон» относится к любому образцу, стандарту или уровню, используемому с целью сравнения. Эталон может быть получен из здорового или не имеющего заболевания образца. В некоторых примерах эталон получают из не имеющего заболевания или не обработанного образца животного-компаньона. В некоторых примерах эталон получают от одного или более здоровых животных определенного вида, которые не являются тестируемыми или получающими лечение животными.
[0061] Термин «существенно уменьшенный», используемый в настоящем описании, обозначает степень уменьшения между числовым значением и эталонным числовым значением, достаточно высокую, чтобы специалист в данной области мог считать разницу между двумя значениями статистически значимой в контексте биологической характеристики, измеряемой указанными значениями. В некоторых вариантах осуществления значительно уменьшенные числовые значения уменьшены более чем на любое из следующих значений: 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% по сравнению с эталонным значением.
[0062] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело может снижать сигнальную функцию IL31 у животных-компаньонов на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или 100% по сравнению с сигнальной функцией IL31 в отсутствие антитела, как измерено по уменьшению фосфорилирования STAT-3. В некоторых вариантах осуществления снижение сигнальной функции IL31 или уменьшение фосфорилирования STAT-3 составляет от 10% до 15%, от 10% до 20%, от 10% до 25%, от 10% до 30%, от 10% до 35%, от 10% до 40%, от 10% до 45%, от 10% до 50%, от 10% до 60%, от 10% до 70%, от 10% до 80%, от 10% до 90%, от 10% до 100%, от 15% до 20%, от 15% до 25%, от 15% до 30%, от 15% до 35%, от 15% до 40%, от 15% до 45%, от 15% до 50%, от 15% до 60%, от 15% до 70%, от 15% до 80%, от 15% до 90%, от 15% до 100%, от 20% до 25%, от 20% до 30%, от 20% до 35%, от 20% до 40%, от 20% до 45%, от 20% до 50%, от 20% до 60%, от 20% до 70%, от 20% до 80%, от 20% до 90%, от 20% до 100%, от 25% до 30%, от 25% до 35%, от 25% до 40%, от 25% до 45%, от 25% до 50%, от 25% до 60%, от 25% до 70%, от 25% до 80%, от 25% до 90%, от 25% до 100%, от 30% до 35%, от 30% до 40%, от 30% до 45%, от 30% до 50%, от 30% до 60%, от 30% до 70%, от 30% до 80%, от 30% до 90%, от 30% до 100%, от 35% до 40%, от 35% до 45%, от 35% до 50%, от 35% до 60%, от 35% до 70%, от 35% до 80%, от 35% до 90%, от 35% до 100%, от 40% до 45%, от 40% до 50%, от 40% до 60%, от 40% до 70%, от 40% до 80%, от 40% до 90%, от 40% до 100%, от 45% до 50%, от 45% до 60%, от 45% до 70%, от 45% до 80%, от 45% до 90%, от 45% до 100%, от 50% до 60%, от 50% до 70%, от 50% до 80%, от 50% до 90%, от 50% до 100%, от 60% до 70%, от 60% до 80%, от 60% до 90%, от 60% до 100%, от 70% до 80%, от 70% до 90%, от 70% до 100%, от 80% до 90%, от 80% до 100% или от 90% до 100%.
Примеры фармацевтических композиций
[0063] Термины «фармацевтический состав» и «фармацевтическая композиция» относятся к препарату, который находится в форме, обеспечивающей эффективность биологической активности активного(ых) ингредиента(ов) и не содержащей дополнительных компонентов, неприемлемо токсичных для субъекта, которому будет вводиться состав.
[0064] «Фармацевтически приемлемый носитель» относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному веществу, используемому для приготовления состава, или носителю, общепринятому в данной области техники для применения с терапевтическим агентом, которые вместе содержат «фармацевтическую композицию», предназначенную для введения субъекту. Фармацевтически приемлемый носитель является нетоксичным для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и совместимым с другими ингредиентами препарата. Фармацевтически приемлемый носитель подходит для используемой композиции. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают оксид алюминия; стеарат алюминия; лецитин; сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, собачий или другой животный альбумин; буферы, такие как фосфатный, цитратный, трометаминовый или HEPES буферы; глицин; сорбиновую кислоту; сорбат калия; смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот; воду; соли или электролиты, такие как сульфат протамина, гидрофосфат динатрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный кремнезем или трисиликат магния; поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы; полиэтиленгликоль; сахарозу; маннит; или аминокислоты, включая, без ограничения, аргинин.
[0065] Фармацевтическая композиция может храниться в лиофилизированной форме. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления процесс приготовления включает этап лиофилизации. Затем перед введением собаке, кошке или лошади состав лиофилизированной композиции может быть изменен для получения, как правило, водной композиции, подходящей для парентерального введения. В других вариантах осуществления, в частности, когда антитело обладает высокой стабильностью к термической и окислительной денатурации, фармацевтическую композицию можно хранить в виде жидкости, т.е. в виде водной композиции, которую можно вводить непосредственно или после соответствующего разбавления собаке, кошке или лошади. Лиофилизированную композицию можно восстановить стерильной водой для инъекций (WFI). Могут быть включены антибактериальные агенты (например, бактериостатические реагенты, такие как бензиловый спирт). Таким образом, изобретение относится к фармацевтической композиции в твердой или жидкой форме.
[0066] Значение рН фармацевтических композиций при введении может находиться в диапазоне от примерно рН 5 до примерно рН 8. Композиции по изобретению являются стерильными, если они предназначены для использования в терапевтических целях. Стерильность может быть достигнута любым из нескольких способов, известных в данной области, включая фильтрацию через стерильные фильтрационные мембраны (например, 0,2-микронные мембраны). Стерильность можно поддерживать с помощью антибактериальных средств или без них.
Примеры применения антител и фармацевтических композиций
[0067] Антитела или фармацевтические композиции, содержащие антитела по изобретению, могут быть полезными для лечения IL-31-индуцированного состояния. В контексте настоящего описания термин «IL31-индуцированное состояние» означает заболевание, связанное, вызванное или характеризующееся повышенными уровнями или измененными градиентами концентрации IL31. Такие IL31-индуцированные состояния включают, без ограничения, зудящее или аллергическое заболевание. В некоторых вариантах осуществления IL31-индуцированное состояние представляет собой атопический дерматит, аллергический дерматит, зуд, астму, псориаз, склеродермию или экзему. IL31-индуцированное состояние может проявляться у животного-компаньона, включая, без ограничения, собаку или кошку.
[0068] В контексте настоящего описания термин «лечение» представляет собой подход для получения полезных или желаемых клинических результатов. В контексте настоящего описания термин «лечение» охватывает любое введение или применение терапевтического агента для лечения заболевания у млекопитающего, включая животное-компаньон. Для целей настоящего изобретения благоприятные или желаемые клинические результаты включают, без ограничения, любой один или более из следующих факторов: облегчение одного или более симптомов, уменьшение распространенности заболевания, предотвращение или замедление распространения заболевания, предотвращение или замедление рецидива заболевание, задержку или замедление прогрессирования заболевания, улучшение болезненного состояния, ингибирование заболевания или прогрессирования заболевания, ингибирование или замедление заболевания или его прогрессирования, остановку его развития и ремиссию (частичную или полную). Под «лечением» также понимают уменьшение патологических последствий пролиферативного заболевания. Предложенные в настоящем описании способы предусматривают любой один или более из этих аспектов лечения. В соответствии с вышеизложенным термин «лечение» не требует стопроцентного устранения всех аспектов расстройства.
[0069] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело или содержащие его фармацевтические композиции можно использовать в соответствии со способами, раскрытыми в настоящем описании, для лечения IL31-индуцированных состояний. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело или фармацевтические композиции вводят животному-компаньону, такому как представитель псовых или кошачьих, для лечения IL31-индуцированного состояния.
[0070] «Терапевтически эффективное количество» вещества/молекулы, агониста или антагониста может меняться в зависимости от таких факторов, как тип заболевания, подлежащего лечению, болезненное состояние, тяжесть и течение заболевания, тип терапевтической цели, любая предыдущая терапия, история болезни, ответ на предшествующее лечение, усмотрение лечащего ветеринара, возраст, пол и вес животного, а также способность вещества/молекулы, агониста или антагониста вызывать желаемый ответ у животное. Терапевтически эффективное количество также представляет собой такое количество, при котором терапевтически полезные эффекты перевешивают любые токсические или вредные эффекты вещества/молекулы, агониста или антагониста. Терапевтически эффективное количество может быть доставлено за одно или более введений. Терапевтически эффективное количество относится к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического или профилактического результата.
[0071] В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело или фармацевтическую композицию, содержащую анти-IL31 антитело, вводят парентерально, подкожно, путем внутривенной инфузии или внутримышечной инъекции. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело или фармацевтическую композицию, содержащую анти-IL31 антитело, вводят в виде болюсной инъекции или непрерывной инфузии в течение определенного периода времени. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело или фармацевтическую композицию, содержащую анти-IL31 антитело, вводят внутримышечно, внутрибрюшинно, интрацереброспинально, подкожно, внутриартериально, интрасиновиально, подоболочечно или путем ингаляции.
[0072] Представленные в настоящем описании анти-IL31 антитела можно вводить в количестве от 0,01 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитела можно вводить в количестве от 0,5 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитела можно вводить в количестве от 0,1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитела можно вводить в количестве от 0,1 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитела можно вводить в количестве от 1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитела можно вводить в количестве от 0,5 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, от 1 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, от 5 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, от 10 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, от 20 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, от 50 мг/кг массы тела до 100 мг/кг массы тела, от 1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, от 5 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, от 0,5 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, от 0,01 мг/кг массы тела до 0,5 мг/кг массы тела, от 0,01 мг/кг массы тела до 0,1 мг/кг массы тела или от 5 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела.
[0073] Анти-IL31 антитело или фармацевтическая композиция, содержащая анти-IL31 антитело, может быть введена животному-компаньону за один раз или в ходе нескольких процедур. Например, анти-IL31 антитело или фармацевтическую композицию, содержащую анти-IL31-антитело, можно вводить по меньшей мере один раз, более одного раза, по меньшей мере два раза, по меньшей мере три раза, по меньшей мере четыре раза или по меньшей мере пять раз.
[0074] В некоторых вариантах осуществления дозу вводят один раз в неделю в течение по меньшей мере двух или трех последовательных недель, и в некоторых вариантах осуществления этот цикл лечения повторяют два или более раз, необязательно чередуя с одной или более неделями без лечения. В других вариантах осуществления терапевтически эффективную дозу вводят один раз в сутки в течение двух-пяти дней подряд, и в некоторых вариантах осуществления этот цикл лечения повторяют два или более раз, необязательно чередуя с одним или более днями или неделями без лечения.
[0075] Введение «в комбинации с» одним или более дополнительными терапевтическими агентами включает одновременное (параллельное) и последовательное введение или следующие друг за другом введения в любом порядке. Термин «одновременно» используется в настоящем описании для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда по меньшей мере введения одного терапевтического агента частично перекрывается во времени с введением другого терапевтического агента или когда введение одного терапевтического агента приходится на короткий промежуток времени введения другого терапевтического агента. Например, два или более терапевтических агента вводят с временным интервалом не более чем примерно определенное количество минут. Термин «последовательно» используется в настоящем описании для обозначения введения двух или более терапевтических агентов, когда введение одного или более агентов продолжается после прекращения введения одного или более других агентов, или когда введение одного или более агентов начинается до введения одного или более других агентов. Например, введение двух или более терапевтических агентов осуществляется с временным интервалом, превышающим определенное количество минут. В контексте настоящего описания термин «в комбинации с» относится к применению одного лечебного воздействия в дополнение к другому лечебному действию. Таким образом, «в комбинации с» относится к применению одного лечебного воздействия до, во время или после оказания другого лечебного воздействия на организм животного.
[0076] В некоторых вариантах осуществления способ включает введение в комбинации с анти-IL31 антителом или фармацевтической композиции, содержащей анти-IL31 антитело, ингибитор Jak, ингибитор PI3K, ингибитор AKT или ингибитор MAPK. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение анти-IL31 антитела или фармацевтической композиции, содержащей анти-IL31 антитело, в комбинации с анти-IL17 антителом, анти-TNFα антителом, анти-CD20 антителом, анти-CD19 антителом, анти-CD25 антителом, анти-IL4 антителом, анти-IL13 антителом, анти-IL23 антителом, анти-IgE антителом, анти-CD11α антителом, анти-IL6R антителом, антителом к α4-интергрину, анти-IL12 антителом, анти-IL1β антителом или анти-BlyS антителом.
[0077] В настоящем описании представлены способы воздействия на клетку анти-IL31 антителом или фармацевтической композицией, содержащей анти-IL31 антитело, в условиях, допускающих связывание антитела с IL31. В некоторых вариантах осуществления клетка подвергается воздействию антитела или фармацевтической композиции ex vivo. В некоторых вариантах осуществления клетка подвергается воздействию антитела или фармацевтической композиции in vivo. В некоторых вариантах осуществления клетка подвергается воздействию анти-IL31 антитела или фармацевтической композиции в условиях, допускающих связывание антитела с внутриклеточным IL31. В некоторых вариантах осуществления клетка подвергается воздействию анти-IL31 антитела или фармацевтической композиции в условиях, допускающих связывание антитела с внеклеточным IL31. В некоторых вариантах осуществления клетка может подвергаться воздействию анти-IL31 антитела или фармацевтической композиции in vivo с помощью любого одного или нескольких способов введения, раскрытых в настоящем описании, включая, без ограничения, внутрибрюшинную, внутримышечную, внутривенную инъекцию субъекту. В некоторых вариантах осуществления клетка может подвергаться воздействию анти-IL31 антитела или фармацевтической композиции ex vivo путем воздействия на клетку культуральной среды, содержащей антитело или фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах осуществления перед воздействием на клетку в культуральной среде, содержащей антитело или фармацевтическую композицию, на проницаемость клеточной мембраны может быть оказано влияние любым количеством способов, известных специалистам в данной области (таких как электропорация клеток или воздействие на клетки раствора, содержащего хлорид кальция).
[0078] В некоторых вариантах осуществления связывание приводит к снижению сигнальной функции IL31 клеткой. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело может снижать сигнальную функцию IL31 в клетке на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 35%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или 100% по сравнению с сигнальной функцией IL31 в отсутствие антитела, как измерено по уменьшению фосфорилирования STAT-3. В некоторых вариантах осуществления снижение сигнальной функции IL31 или уменьшение фосфорилирования STAT-3 составляет от 10% до 15%, от 10% до 20%, от 10% до 25%, от 10% до 30%, от 10% до 35%, от 10% до 40%, от 10% до 45%, от 10% до 50%, от 10% до 60%, от 10% до 70%, от 10% до 80%, от 10% до 90%, от 10% до 100%, от 15% до 20%, от 15% до 25%, от 15% до 30%, от 15% до 35%, от 15% до 40%, от 15% до 45%, от 15% до 50%, от 15% до 60%, от 15% до 70%, от 15% до 80%, от 15% до 90%, от 15% до 100%, от 20% до 25%, от 20% до 30%, от 20% до 35%, от 20% до 40%, от 20% до 45%, от 20% до 50%, от 20% до 60%, от 20% до 70%, от 20% до 80%, от 20% до 90%, от 20% до 100%, от 25% до 30%, от 25% до 35%, от 25% до 40%, от 25% до 45%, от 25% до 50%, от 25% до 60%, от 25% до 70%, от 25% до 80%, от 25% до 90%, от 25% до 100%, от 30% до 35%, от 30% до 40%, от 30% до 45%, от 30% до 50%, от 30% до 60%, от 30% до 70%, от 30% до 80%, от 30% до 90%, от 30% до 100%, от 35% до 40%, от 35% до 45%, от 35% до 50%, от 35% до 60%, от 35% до 70%, от 35% до 80%, от 35% до 90%, от 35% до 100%, от 40% до 45%, от 40% до 50%, от 40% до 60%, от 40% до 70%, от 40% до 80%, от 40% до 90%, от 40% до 100%, от 45% до 50%, от 45% до 60%, от 45% до 70%, от 45% до 80%, от 45% до 90%, от 45% до 100%, от 50% до 60%, от 50% до 70%, от 50% до 80%, от 50% до 90%, от 50% до 100%, от 60% до 70%, от 60% до 80%, от 60% до 90%, от 60% до 100%, от 70% до 80%, от 70% до 90%, от 70% до 100%, от 80% до 90%, от 80% до 100% или от 90% до 100%.
[0079] В настоящем описании представлены способы применения анти-IL31 антител, полипептидов и полинуклеотидов для детектирования, диагностики и мониторинга IL31-индуцированного состояния. В настоящем описании представлены способы определения того, будет ли животное-компаньон реагировать на терапию анти-IL31 антителом. В некоторых вариантах осуществления способ включает определение с помощью анти-IL31 антитела наличия у животного клеток, экспрессирующих IL31. В некоторых вариантах осуществления способ детектирования включает приведение образца в контакт с антителом, полипептидом или полинуклеотидом и определение, отличается ли уровень связывания от уровня связывания эталонного или образца сравнения (такого как контроль). В некоторых вариантах осуществления способ может быть полезен для определения, являются ли антитела или полипептиды, представленные в настоящем описании, подходящим средством для лечения подлежащего воздействию животного.
[0080] В некоторых вариантах осуществления образец представляет собой биологический образец. Термин «биологический образец» означает некоторое количество вещества, полученное от живого или ранее живого существа. В некоторых вариантах осуществления биологический образец представляет собой лизат клеток или клеток/тканей. В некоторых вариантах осуществления биологический образец включает, без ограничения, кровь (например, цельную кровь), плазму, сыворотку, мочу, синовиальную жидкость и эпителиальные клетки.
[0081] В некоторых вариантах осуществления клетки или лизат клеток/тканей приводят в контакт с анти-IL31 антителом и определяют связывание между антителом и клеткой. Когда тестируемые клетки проявляют связывающую активность при сравнении с контрольной клеткой того же типа ткани, это может указывать на то, что субъекту будет полезно лечение анти-IL31 антителом. В некоторых вариантах осуществления тестируемые клетки получают из ткани животного-компаньона.
[0082] Для детектирования специфического связывания антитело-антиген можно использовать различные способы, известные в данной области техники. Типичные иммуноанализы, которые можно выполнять, включают флуоресцентный поляризационный иммуноанализ (FPIA), флуоресцентный иммуноанализ (FIA), иммуноферментный анализ (EIA), нефелометрический иммуноферментный анализ (NIA), твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и радиоиммуноанализ (RIA). К рассматриваемым антителам может быть присоединен индикаторный фрагмент или группа, содержащая метку, которую выбирают таким образом, чтобы она удовлетворяла потребности различных применений способа, которые часто диктуются наличием оборудования для анализа и совместимыми процедурами иммуноанализа. Соответствующие метки включают, без ограничения, радионуклиды (например, 125I, 131I, 35S, 3H или 32P), ферменты (например, щелочную фосфатазу, пероксидазу хрена, люциферазу или β-гликозидазу), флуоресцентные фрагменты или белки (например, флуоресцеин), родамин, фикоэритрин, GFP или BFP) или люминесцентные фрагменты (например, наночастицы Qdot™, поставляемые Quantum Dot Corporation, Palo Alto, CA). Общие методы, используемые при проведении упомянутых выше различных иммунологических анализов известны специалистам в данной области.
[0083] В целях диагностики антитела, включающие полипептид, могут быть меченным детектируемым фрагментом, включая, без ограничения, радиоизотопы, флуоресцентные метки и различные фермент-субстратные метки, известные в данной области. Способы конъюгации меток с антителом известны в данной области. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитела не нужно метить, и их присутствие можно обнаружить с помощью второго меченого антитела, которое связывается с первым анти-IL31 антителом. В некоторых вариантах осуществления анти-IL31 антитело можно использовать в любом известном методе анализа, таком как анализы конкурентного связывания, прямые и непрямые сэндвич-анализы и анализы иммунопреципитации. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, рр. 147-158 (CRC Press, Inc., 1987). Анти-IL31 антитела и полипептиды также можно использовать для диагностических анализов in vivo, таких как визуализация in vivo. Как правило, антитело или полипептид метят радионуклидом (таким как 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 3H или любой другой радионуклидной меткой, включая представленные в настоящем описании) для обеспечения возможности локализации представляющей интерес клетки или ткани с помощью иммуносцинтиографии. Антитело также можно использовать при патологии в качестве окрашивающего реагента, используя методы, хорошо известные в данной области техники.
[0084] В некоторых вариантах осуществления первое антитело используется для диагностики, а второе антитело используется в качестве терапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела различаются. В некоторых вариантах осуществления первое и второе антитела могут одновременно связываться с антигеном, связываясь с отдельными эпитопами.
[0085] Приведенные ниже примеры иллюстрируют отдельные аспекты изобретения и никоим образом не предназначены для его ограничения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Созревание аффинности in vitro для усиленного связывания с IL31
[0086] Идентифицировали последовательности вариабельной тяжелой цепи (VH) и вариабельной легкой цепи (VL) мышиного моноклонального антитела M14, индуцированного против IL-31 (SEQ ID NO:1 и 2). См. WO 2018/156367, которая полностью включена в настоящее описание посредством ссылки для любых целей. Последовательности VH и VL M14 канинизировали (SEQ ID NO:3 и 4) путем поиска и выбора подходящих последовательностей антител собачьей зародышевой линии в качестве матрицы для прививки CDR с последующим моделированием белка.
[0087] Фаговую библиотеку вариантов полипептидов Fab, имеющих мутации внутри и вокруг CDR канинизированных последовательностей VH и VL M14 (SEQ ID NO:3 и 4), получали и подвергали скринингу на более низкую скорость koff с помощью анализа диссоциации собачьего IL31. После трех раундов пэннинга фаговой библиотеки антител к собачьему IL31 идентифицировали фаговые колонии, экспрессирующие вариантные полипептиды Fab, потенциально обладающие повышенным связыванием собачьего IL31, и эти полипептиды секвенировали.
[0088] Отдельные колонии E. coli, экспрессирующие каждый из идентифицированных вариантных полипептидов Fab с меткой SASA, культивировали и индуцировали для экспрессии полипептидов. Среду для культивирования клеток, содержащую варианты полипептидов Fab, подвергали воздействию иммобилизованного BSA либо на планшете, либо на чипе Biacore. Планшеты или чипы со связанными вариантными полипептидами Fab подвергали воздействию растворимого собачьего IL31 для скрининга на низкую скорость koff.
[0089] Были отобраны три ведущих канинизированных зрелых вариабельных полипептида тяжелой цепи (cmVH1 (SEQ ID NO:5), cmVH2 (SEQ ID NO:6) и cmVH3 (SEQ ID NO:7)) и три канинизированных зрелых полипептида легкой цепи (cmVL1 (SEQ ID NO:8), cmVL2 (SEQ ID NO:9) и cmVL3 (SEQ ID NO:10)). Примеры последовательностей CDR ведущих канинизированных зрелых вариабельных цепей приведены в SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15, 20, 21, 22, 23 и 24, а последовательности каркасной области приведены в SEQ ID NO:16, 17, 18, 19, 25, 26, 27 и 28.
[0090] Создавали химерные антитела, состоящие из различных комбинаций cmVH1, cmVH2 или cmVH3, слитых с тяжелой цепью человеческого IgG1, и cmVL1, cmVL2 и cmVL3, слитых с человеческой константной легкой цепью каппа. Также создавали канинизированные VH М14 (SEQ ID NO:3), слитые с тяжелой цепью человеческого IgG1, и канинизированные VL М14 (SEQ ID NO:4), слитые с человеческой константной легкой цепью каппа. Сродство собачьего IL31 к различным химерным антителам измеряли с помощью BIAcore 8K, как описано в таблице 3 ниже:
[0091] Таблица 3.
2. cmVH1+cmVL1
3. cmVH2+cmVL2
4. cmVH2+cmVL3
5. cmVH3+cmVL2
6. cmVH3+cmVL3
[0092] Сродство и кинетика каждого из протестированных химерных антител к собачьему IL31 суммированы в таблице 4 ниже. Каждое из протестированных антител с созревшей аффинностью (аналиты 2-6) продемонстрировало более высокое сродство (о чем свидетельствует более низкое значение Kd) и более медленную скорость диссоциации (о чем свидетельствует более низкое значение koff) по сравнению с контрольным канинизированным антителом VH-VL M14 (аналит 1).
[0093] Таблица 4.
Пример 2: Мутации с усиленным связыванием с кошачьим IL31
[0094] Шесть химерных антител, протестированных на сродство к собачьему IL-31 в таблицах 3 и 4 (выше), также были протестированы на сродство к кошачьему IL31. Анализ связывания выполняли с помощью биосенсора OctetRed следующим образом. Вкратце, кошачий IL31 биотинилировали. Свободный непрореагировавший биотин удаляли из биотинилированного IL31 путем интенсивного диализа. Биотинилированный кошачий IL31 захватывали покрытыми стрептавидином наконечниками сенсора. Ассоциацию антитела (20 мкг/мл) и кошачьего IL31 отслеживали в течение 300 секунд. Диссоциацию контролировали в течение 300 секунд. Буфер для разведений и всех этапов связывания был следующим: 20 мМ фосфат, 150 мМ NaCl, рН 7,2. Результаты анализа связывания представлены на фиг. 2. Сродство тестируемых антител ранжировали следующим образом: (cmVH3+cmVL2) или (cmVH3+cmVL3) > (cmVH2+cmVL3) > (cmVH2+cmVL2) > (cmVH1+cmVL1) > (канинизированное VH-VL M14).
Пример 3: Канинизированные зрелые вариабельные цепи с собачьими константными доменами
[0095] Канинизированные зрелые VH (например, SEQ ID NO:5, 6 и 7) и VL (например, SEQ ID NO:8, 9 и 10) могут быть слиты с константным доменом тяжелой цепи собачьего IgG-A, IgG-В, IgG-C или IgG-D (например, SEQ ID NO:83, 84, 85 и 86) и собачьим константным доменом легкой цепи каппа (например, SEQ ID NO:87), соответственно. Примеры канинизированных, зрелых последовательностей тяжелой и легкой цепей, содержащих собачий константный домен, включают SEQ ID NO:34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 и 48.
Пример 4: Фелинизация и экспрессия вариабельных тяжелых и легких цепей с повышенным сродством
[0096] Вариабельные области тяжелой и легкой цепей с повышенным сродством (например, cmVH1-3 и cmVL1-3) могут быть фелинизированы способами, известными в данной области. Например, cmVH2 (SEQ ID NO:6) фелинизировали до иллюстративной SEQ ID NO:90; cmVH3 (SEQ ID NO:7) фелинизировали до иллюстративных SEQ ID NO:49, 50 и 51; и cmVL3 (SEQ ID NO:10) фелинизировали в любую из SEQ ID NO:52, 53 и 54. Фелинизированные VH и VL могут быть экспрессированы с кошачьим константным доменом тяжелой цепи IgG (например, SEQ ID NO:88) и кошачьим константным доменом легкой цепи каппа (например, SEQ ID NO:89), соответственно. Примеры фелинизированных, зрелых последовательностей тяжелой и легкой цепей, имеющих кошачью константную область, включают SEQ ID NO:73, 74, 75, 91, 76, 77 и 78.
[0097] Последовательности ДНК, кодирующие фелинизированное анти-IL-31 антитело, имеющее тяжелую цепь SEQ ID NO:91 (VH2) и легкую цепь SEQ ID NO:78 (VL3c), экспрессировали в клетках млекопитающих и очищали. С помощью клеточного анализа из примера 5 было показано, что фелинизированное VH2-VL3 анти-IL31-антитело дозозависимым образом блокировало индуцированное кошачьим IL31 фосфорилирование STAT3 в клетках HeLa, трансфицированных как кошачьим IL31R, так и собачьим IL31R.
Пример 5: Разработка клеточного анализа передачи сигнала собачьего IL31
[0098] Приобретали клеточную линию HeLa, линию человеческих эпителиальных клеток (Американская коллекция типовых культур (ATCC), № по каталогу CCL 2), которую культивировали в минимальной основной среде Игла, разработанной ATCC (ATCC, № по каталогу 30-2033), дополненной 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) (АТСС, № по каталогу 30-2020). Клетки HeLa, стабильно трансфицированные экспрессионной плазмидой, несущей собачий/кошачий IL31Ra-FLAG (pcDNA3.1_canine IL31Ra_FLAG (SEQ ID NO:92), или pcDNA3.1_feline IL31Ra-FLAG экспрессионной плазмидой (SEQ ID NO:93), получали с помощью липофектаминового метода (Thermo Fisher, № по каталогу 11668027) и отбирали на наличие устойчивых к G418 трансфектантов (Thermo Fisher, № по каталогу 10131035) с использованием G418 в конечной концентрации 400 мкг/мл. Устойчивые к G418 клоны подвергали скринингу методом вестерн-блоттинга на фосфорилирование STAT1, STAT3 и STAT5 в ответ на индукцию собачьим IL31 или кошачьим IL31. Для последующих исследований использовали клоны HeLa, стабильно трансфицированные IL31Ra, которые реагировали на индукции IL31.
[0099] Фосфорилирование белка STAT, опосредованное собачьим или кошачьим IL31, осуществляли путем посева клеток HeLa/IL31Ra по 10e5 клеток на лунку в 96-луночные планшеты и инкубирования при 37°C, 5% CO2 в течение ночи (в 10% FBS D-MEM в соответствии с рекомендациями ATCC). Сывороточного голодания клеток достигали заменой среды в каждой лунке средой без добавления FBS на 1 час при 5% CO2, 37°C. Серийно разведенное анти-IL31 антитело предварительно инкубировали в течение 1 часа с цитокином IL31 перед добавлением к лишенным сыворотки клеткам в каждую лунку 96-луночного планшета на 5 минут при комнатной температуре. Затем в каждую лунку добавляли по 20 мкл стоп-раствора (M-PER от Thermo Fisher, № по каталогу 78501) для лизиса клеток. Клеточные лизаты разделяли с помощью SDS-PAGE (4-12% Bis-Tris Gel, Invitrogen, № по каталогу NP0329). IL31-индуцированное фосфорилирование STAT анализировали вестерн-блоттингом, используя либо анти-фосфо-STAT3 антитело (RnD, № по каталогу AF 4607), либо анти-фосфо-STAT1 антитело (Cell Signaling, № по каталогу 7649), либо анти-фосфо-STAT5 антитело (Cell Signaling, № по каталогу 9359).
[00100] Неожиданно оказалось, что для передачи сигнала IL31 экспрессия собачьего или кошачьего корецептора OSMR не является необходимой.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> КИНДРЕД БАЙОСАЙЕНСИЗ, ИНК.
<120> АНТИ-IL31 АНТИТЕЛА ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ
<130> 01157-0031-00PCT
<140> PCT/US2020/048618
<141> 2020-08-28
<150> US 62/893,799
<151> 2019-08-29
<150> US 62/894,526
<151> 2019-08-30
<160> 93
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Аминокислотная последовательность вариабельной
легкой цепи клона мышиного антитела M14
<400> 1
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 2
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Аминокислотная последовательность вариабельной
тяжелой цепи клона мышиного антитела M14
<400> 2
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 3
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная аминокислотная
последовательность вариабельной тяжелой цепи клона мышиного
антитела M14
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная аминокислотная
последовательность вариабельной легкой цепи клона мышиного
антитела M14
<400> 4
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 5
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH1 N35K
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH2 N35K G99P
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 7
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH3 N35K G99A
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи cmVL1 N34R
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи cmVL2 N34R Q93Y
<400> 9
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 10
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи cmVL3 N34R Q93H
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-H1 cmVH1, cmVH2 и cmVH3
<400> 11
Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Trp
1 5
<210> 12
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-H2 cmVH1, cmVH2 и cmVH3
<400> 12
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-H3 cmVH1
<400> 13
Ala Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 14
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-H3 cmVH2
<400> 14
Ala Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 15
<211> 12
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-H3 cmVH3
<400> 15
Ala Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 25
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: HC-FR1 cmVH1, cmVH2 и cmVH3
<400> 16
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr
20 25
<210> 17
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: HC-FR2 cmVH1, cmVH2 и cmVH3
<400> 17
Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met Gly
1 5 10 15
<210> 18
<211> 36
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: HC-FR3 cmVH1, cmVH2 и cmVH3
<400> 18
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys
1 5 10 15
Asn Gln Tyr Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 19
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: HC-FR4 cmVH1, cmVH2 и cmVH3
<400> 19
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 20
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-L1 cmVL1, cmVL2 и cmVL3
<400> 20
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr Gly Arg Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 21
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-L2 cmVL1, cmVL2 и cmVL3
<400> 21
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-L3 cmVL1
<400> 22
Gln Gln Ser Tyr Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
<210> 23
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-L3 cmVL2
<400> 23
Tyr Gln Ser Tyr Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
<210> 24
<211> 9
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: CDR-L3 cmVL3
<400> 24
His Gln Ser Tyr Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
<210> 25
<211> 23
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: LC-FR1 cmVL1, cmVL2 и cmVL3
<400> 25
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys
20
<210> 26
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: LC-FR2 cmVL1, cmVL2 и cmVL3
<400> 26
Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 27
<211> 32
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: LC-FR3 cmVL1, cmVL2 и cmVL3
<400> 27
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 28
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: LC-FR4 cmVL1, cmVL2 и cmVL3
<400> 28
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 29
<211> 448
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная последовательность
вариабельной тяжелой цепи из клона мышиного антитела M14 и
собачьего IgG-A
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu His Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp
210 215 220
Thr Pro Cys Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln
275 280 285
Ser Arg Glu Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
305 310 315 320
Val Asn His Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Arg Gly Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile
355 360 365
Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Gln Glu Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp
385 390 395 400
Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr
420 425 430
Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 30
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная последовательность
вариабельной тяжелой цепи из клона мышиного антитела M14 и
собачьего IgG-B
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val
210 215 220
Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu
245 250 255
Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met
275 280 285
Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu
370 375 380
Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser
435 440 445
His Ser Pro Gly Lys
450
<210> 31
<211> 451
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная последовательность
вариабельной тяжелой цепи из клона мышиного антитела M14 и
собачьего IgG-C
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Gln Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Ala Lys Glu Cys Glu Cys Lys Cys
210 215 220
Asn Cys Asn Asn Cys Pro Cys Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala
245 250 255
Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn
260 265 270
Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr
275 280 285
Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu
325 330 335
Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro
385 390 395 400
Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 32
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная последовательность
вариабельной тяжелой цепи из клона мышиного антитела M14 и
собачьего IgG-D
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys
210 215 220
Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Ile Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Arg Val Asn His Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu
385 390 395 400
Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 33
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная последовательность
вариабельной легкой цепи из клона мышиного антитела M14 и
собачьей константной области легкой цепи
<400> 33
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp
145 150 155 160
Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His
180 185 190
Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu
195 200 205
Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp
210 215 220
<210> 34
<211> 448
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH1 и собачьего
IgG-A
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu His Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp
210 215 220
Thr Pro Cys Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln
275 280 285
Ser Arg Glu Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
305 310 315 320
Val Asn His Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Arg Gly Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile
355 360 365
Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Gln Glu Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp
385 390 395 400
Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr
420 425 430
Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 35
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH1 и собачьего
IgG-B
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val
210 215 220
Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu
245 250 255
Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met
275 280 285
Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu
370 375 380
Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser
435 440 445
His Ser Pro Gly Lys
450
<210> 36
<211> 451
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH1 и собачьего
IgG-C
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Gln Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Ala Lys Glu Cys Glu Cys Lys Cys
210 215 220
Asn Cys Asn Asn Cys Pro Cys Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala
245 250 255
Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn
260 265 270
Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr
275 280 285
Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu
325 330 335
Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro
385 390 395 400
Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 37
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH1 и собачьего
IgG-D
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Gly Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys
210 215 220
Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Ile Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Arg Val Asn His Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu
385 390 395 400
Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 38
<211> 448
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH2 и собачьего
IgG-A
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu His Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp
210 215 220
Thr Pro Cys Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln
275 280 285
Ser Arg Glu Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
305 310 315 320
Val Asn His Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Arg Gly Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile
355 360 365
Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Gln Glu Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp
385 390 395 400
Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr
420 425 430
Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 39
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH2 и собачьего
IgG-B
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val
210 215 220
Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu
245 250 255
Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met
275 280 285
Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu
370 375 380
Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser
435 440 445
His Ser Pro Gly Lys
450
<210> 40
<211> 451
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH2 и собачьего
IgG-C
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Gln Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Ala Lys Glu Cys Glu Cys Lys Cys
210 215 220
Asn Cys Asn Asn Cys Pro Cys Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala
245 250 255
Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn
260 265 270
Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr
275 280 285
Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu
325 330 335
Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro
385 390 395 400
Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 41
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH2 и собачьего
IgG-D
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys
210 215 220
Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Ile Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Arg Val Asn His Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu
385 390 395 400
Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 42
<211> 448
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH3 и собачьего
IgG-A
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu His Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp
210 215 220
Thr Pro Cys Pro Val Pro Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln
275 280 285
Ser Arg Glu Gln Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
305 310 315 320
Val Asn His Ile Asp Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Arg Gly Arg Ala His Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile
355 360 365
Lys Asp Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Gln Glu Pro Glu Arg Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp
385 390 395 400
Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asp Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr
420 425 430
Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 43
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH3 и собачьего
IgG-B
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Lys Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val
210 215 220
Pro Arg Pro Pro Asp Cys Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu
245 250 255
Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met
275 280 285
Gln Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Gln Phe Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu
370 375 380
Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser
435 440 445
His Ser Pro Gly Lys
450
<210> 44
<211> 451
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH3 и собачьего
IgG-C
<400> 44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Gln Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Val Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Ala Lys Glu Cys Glu Cys Lys Cys
210 215 220
Asn Cys Asn Asn Cys Pro Cys Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala
245 250 255
Arg Thr Pro Thr Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn
260 265 270
Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr
275 280 285
Ala Asn Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu
325 330 335
Ile Ile Ser Lys Thr Pro Gly Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro
385 390 395 400
Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 45
<211> 449
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи cmVH3 и собачьего
IgG-D
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Ser Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ser Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Pro Ser Glu Thr Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Pro Val Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys
210 215 220
Ile Ser Pro Cys Pro Val Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Ile Thr Cys Val Val Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Pro Ile Glu His Gln Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys
305 310 315 320
Arg Val Asn His Ile Gly Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Pro Glu Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu
385 390 395 400
Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu Gln Asn His Tyr Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 46
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи cmVL1 и собачьей
константной области легкой цепи
<400> 46
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp
145 150 155 160
Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His
180 185 190
Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu
195 200 205
Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp
210 215 220
<210> 47
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи cmVL1 и собачьей
константной области легкой цепи
<400> 47
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp
145 150 155 160
Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His
180 185 190
Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu
195 200 205
Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp
210 215 220
<210> 48
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная канинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи cmVL1 и собачьей
константной области легкой цепи
<400> 48
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Gly Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Gln Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp Gln
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln Asp
145 150 155 160
Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser His
180 185 190
Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr Leu
195 200 205
Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp
210 215 220
<210> 49
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH3a N35K G99A
<400> 49
Gln Leu Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ala Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Ala
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH3b N35K G99A
<400> 50
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH3c N35K G99A
<400> 51
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 52
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи fmVL3a N34R Q93H
<400> 52
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Arg Arg Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 53
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи fmVL3b N34R Q93H
<400> 53
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys
100 105 110
<210> 54
<211> 111
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи fmVL3c N34R Q93H
<400> 54
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 55
<211> 25
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR1
<400> 55
Gln Leu Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr
20 25
<210> 56
<211> 25
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR1
<400> 56
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr
20 25
<210> 57
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR2
<400> 57
Lys Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly
1 5 10 15
<210> 58
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR2
<400> 58
Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val Ala
1 5 10 15
<210> 59
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR2
<400> 59
Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met Gly
1 5 10 15
<210> 60
<211> 36
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR3
<400> 60
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ala Gln
1 5 10 15
Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 61
<211> 36
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR3
<400> 61
Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
1 5 10 15
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 62
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR4
<400> 62
Trp Gly Pro Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 63
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая HCFR4
<400> 63
Trp Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 64
<211> 23
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR1
<400> 64
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 65
<211> 23
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR1
<400> 65
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 66
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR2
<400> 66
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 67
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR2
<400> 67
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 68
<211> 15
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR2
<400> 68
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 69
<211> 32
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR3
<400> 69
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 70
<211> 32
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR3
<400> 70
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 71
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR4
<400> 71
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 72
<211> 10
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая LCFR4
<400> 72
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys
1 5 10
<210> 73
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH3a и кошачьей
константной области тяжелой цепи
<400> 73
Gln Leu Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ala Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Ala
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Leu Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ala Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Leu Ser Asp Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly
210 215 220
Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro
260 265 270
Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val
275 280 285
Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu Glu Leu Ser Arg Asn Lys Val Ser
355 360 365
Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser
420 425 430
Val Ser His Glu Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr
435 440 445
Gln Ser Pro Gly Lys
450
<210> 74
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH3b и кошачьей
константной области тяжелой цепи
<400> 74
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Leu Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ala Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Leu Ser Asp Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly
210 215 220
Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro
260 265 270
Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val
275 280 285
Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu Glu Leu Ser Arg Asn Lys Val Ser
355 360 365
Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser
420 425 430
Val Ser His Glu Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr
435 440 445
Gln Ser Pro Gly Lys
450
<210> 75
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH3c и кошачьей
константной области тяжелой цепи
<400> 75
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Ala Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Leu Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ala Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Leu Ser Asp Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly
210 215 220
Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro
260 265 270
Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val
275 280 285
Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu Glu Leu Ser Arg Asn Lys Val Ser
355 360 365
Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser
420 425 430
Val Ser His Glu Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr
435 440 445
Gln Ser Pro Gly Lys
450
<210> 76
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи fmVL3a и кошачьей
константной области легкой цепи
<400> 76
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Arg Arg Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ser Asp Ala Gln Pro Ser Val Phe Leu Phe Gln Pro Ser Leu Asp Glu
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Ile Val Cys Ile Leu Asn Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Glu Val Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Val Gln Asn
145 150 155 160
Lys Gly Ile Gln Glu Ser Thr Thr Glu Gln Asn Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Gln Ser
180 185 190
His Glu Lys Phe Ser Cys Glu Val Thr His Lys Ser Leu Ala Ser Thr
195 200 205
Leu Val Lys Ser Phe Asn Arg Ser Glu Cys Gln Arg Glu
210 215 220
<210> 77
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи fmVL3b and кошачьей
константной области легкой цепи
<400> 77
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Arg
100 105 110
Ser Asp Ala Gln Pro Ser Val Phe Leu Phe Gln Pro Ser Leu Asp Glu
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Ile Val Cys Ile Leu Asn Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Glu Val Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Val Gln Asn
145 150 155 160
Lys Gly Ile Gln Glu Ser Thr Thr Glu Gln Asn Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Gln Ser
180 185 190
His Glu Lys Phe Ser Cys Glu Val Thr His Lys Ser Leu Ala Ser Thr
195 200 205
Leu Val Lys Ser Phe Asn Arg Ser Glu Cys Gln Arg Glu
210 215 220
<210> 78
<211> 221
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной легкой цепи fmVL3c и кошачьей
константной области легкой цепи
<400> 78
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Tyr
20 25 30
Gly Arg Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys His Gln Ser Tyr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ser Asp Ala Gln Pro Ser Val Phe Leu Phe Gln Pro Ser Leu Asp Glu
115 120 125
Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Ile Val Cys Ile Leu Asn Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Glu Val Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Val Gln Asn
145 150 155 160
Lys Gly Ile Gln Glu Ser Thr Thr Glu Gln Asn Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Gln Ser
180 185 190
His Glu Lys Phe Ser Cys Glu Val Thr His Lys Ser Leu Ala Ser Thr
195 200 205
Leu Val Lys Ser Phe Asn Arg Ser Glu Cys Gln Arg Glu
210 215 220
<210> 79
<211> 159
<212> Белок
<213> Canis lupus familiaris
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(159)
<223> Аминокислотная последовательность собачьего IL31
<400> 79
Met Leu Ser His Thr Gly Pro Ser Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ser Met Glu Thr Leu Leu Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu
20 25 30
Pro Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser
35 40 45
Arg Gly Leu Leu Glu Asp Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu
50 55 60
Ser Asn Arg Thr Leu Leu Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Ile Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln His Glu Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp
115 120 125
Thr Phe Glu Cys Lys Ser Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu Ser Val Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
145 150 155
<210> 80
<211> 137
<212> Белок
<213> Canis lupus familiaris
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(137)
<223> Зрелая аминокислотная последовательность собачьего IL31
<400> 80
Ser Ser His Met Ala Pro Thr His Gln Leu Pro Pro Ser Asp Val Arg
1 5 10 15
Lys Ile Ile Leu Glu Leu Gln Pro Leu Ser Arg Gly Leu Leu Glu Asp
20 25 30
Tyr Gln Lys Lys Glu Thr Gly Val Pro Glu Ser Asn Arg Thr Leu Leu
35 40 45
Leu Cys Leu Thr Ser Asp Ser Gln Pro Pro Arg Leu Asn Ser Ser Ala
50 55 60
Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro Leu Ser Asp Lys Asn Ile
65 70 75 80
Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys Leu Lys Phe Gln His Glu
85 90 95
Pro Glu Thr Glu Ile Ser Val Pro Ala Asp Thr Phe Glu Cys Lys Ser
100 105 110
Phe Ile Leu Thr Ile Leu Gln Gln Phe Ser Ala Cys Leu Glu Ser Val
115 120 125
Phe Lys Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
130 135
<210> 81
<211> 159
<212> Белок
<213> Felis catus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(159)
<223> Аминокислотная последовательность кошачьего IL31
<400> 81
Met Leu Ser His Ala Gly Pro Ala Arg Phe Ala Leu Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Cys Met Glu Thr Leu Leu Pro Ser His Met Ala Pro Ala His Arg Leu
20 25 30
Gln Pro Ser Asp Val Arg Lys Ile Ile Leu Glu Leu Arg Pro Met Ser
35 40 45
Lys Gly Leu Leu Gln Asp Tyr Leu Lys Lys Glu Ile Gly Leu Pro Glu
50 55 60
Ser Asn His Ser Ser Leu Pro Cys Leu Ser Ser Asp Ser Gln Leu Pro
65 70 75 80
His Ile Asn Gly Ser Ala Ile Leu Pro Tyr Phe Arg Ala Ile Arg Pro
85 90 95
Leu Ser Asp Lys Asn Thr Ile Asp Lys Ile Ile Glu Gln Leu Asp Lys
100 105 110
Leu Lys Phe Gln Arg Glu Pro Glu Ala Lys Val Ser Met Pro Ala Asp
115 120 125
Asn Phe Glu Arg Lys Asn Phe Ile Leu Ala Val Leu Gln Gln Phe Ser
130 135 140
Ala Cys Leu Glu His Val Leu Gln Ser Leu Asn Ser Gly Pro Gln
145 150 155
<210> 82
<211> 163
<212> Белок
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(163)
<223> Зрелая аминокислотная последовательность предшественника IL31
<400> 82
Met Ile Phe His Thr Gly Thr Thr Lys Pro Thr Leu Val Leu Leu Cys
1 5 10 15
Cys Ile Gly Thr Trp Leu Ala Thr Cys Ser Leu Ser Phe Gly Ala Pro
20 25 30
Ile Ser Lys Glu Asp Leu Arg Thr Thr Ile Asp Leu Leu Lys Gln Glu
35 40 45
Ser Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Tyr Ser Ile Lys Gln Ala Ser Gly Met
50 55 60
Ser Ala Asp Glu Ser Ile Gln Leu Pro Cys Phe Ser Leu Asp Arg Glu
65 70 75 80
Ala Leu Thr Asn Ile Ser Val Ile Ile Ala His Leu Glu Lys Val Lys
85 90 95
Val Leu Ser Glu Asn Thr Val Asp Thr Ser Trp Val Ile Arg Trp Leu
100 105 110
Thr Asn Ile Ser Cys Phe Asn Pro Leu Asn Leu Asn Ile Ser Val Pro
115 120 125
Gly Asn Thr Asp Glu Ser Tyr Asp Cys Lys Val Phe Val Leu Thr Val
130 135 140
Leu Lys Gln Phe Ser Asn Cys Met Ala Glu Leu Gln Ala Lys Asp Asn
145 150 155 160
Thr Thr Cys
<210> 83
<211> 330
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная константная тяжелая цепь
собачьего IgG-A
<400> 83
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu His Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Pro Val Phe Asn Glu Cys Arg Cys Thr Asp Thr Pro Cys Pro Val Pro
100 105 110
Glu Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val Leu Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Leu
130 135 140
Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp
145 150 155 160
Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Ser Arg Glu Gln Gln Phe
165 170 175
Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Asp Leu
195 200 205
Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Arg Ala His
210 215 220
Lys Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser Ser
225 230 235 240
Ser Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Tyr Pro Pro
245 250 255
Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Arg
260 265 270
Lys His Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asp
290 295 300
Pro Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Thr Leu Gln Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 84
<211> 335
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная константная тяжелая цепь
собачьего IgG-B
<400> 84
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Lys Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Pro Val Pro Lys Arg Glu Asn Gly Arg Val Pro Arg Pro Pro Asp Cys
100 105 110
Pro Lys Cys Pro Ala Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile
115 120 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg Thr Pro Glu
130 135 140
Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro Glu Val Gln
145 150 155 160
Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala Lys Thr Gln
165 170 175
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
180 185 190
Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe Thr Cys Lys
195 200 205
Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
210 215 220
Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser
225 230 235 240
Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys Leu Ile Lys
245 250 255
Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln
260 265 270
Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu
275 280 285
Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 85
<211> 333
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная константная тяжелая цепь
собачьего IgG-C
<400> 85
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 15
Ser Gln Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 30
Ile Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Val Ser Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Pro Val Ala Lys Glu Cys Glu Cys Lys Cys Asn Cys Asn Asn Cys Pro
100 105 110
Cys Pro Gly Cys Gly Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
115 120 125
Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Val Thr Ala Arg Thr Pro Thr Val Thr
130 135 140
Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asn Pro Glu Val Gln Ile Ser
145 150 155 160
Trp Phe Val Asp Ser Lys Gln Val Gln Thr Ala Asn Thr Gln Pro Arg
165 170 175
Glu Glu Gln Ser Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile
180 185 190
Gly His Gln Asp Trp Leu Ser Gly Lys Gln Phe Lys Cys Lys Val Asn
195 200 205
Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Glu Ile Ile Ser Lys Thr Pro
210 215 220
Gly Gln Ala His Gln Pro Asn Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Asp
225 230 235 240
Glu Met Ser Lys Asn Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Asp Phe
245 250 255
Phe Pro Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu
260 265 270
Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Met Thr Pro Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly
275 280 285
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
290 295 300
Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn
305 310 315 320
His Tyr Thr Gln Ile Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 86
<211> 331
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная константная тяжелая цепь
собачьего IgG-D
<400> 86
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Ser Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ser Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Thr Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Pro Ser Glu Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Val His Pro Ala Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Pro Val Pro Lys Glu Ser Thr Cys Lys Cys Ile Ser Pro Cys Pro Val
100 105 110
Pro Glu Ser Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro
115 120 125
Lys Asp Ile Leu Arg Ile Thr Arg Thr Pro Glu Ile Thr Cys Val Val
130 135 140
Leu Asp Leu Gly Arg Glu Asp Pro Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
145 150 155 160
Asp Gly Lys Glu Val His Thr Ala Lys Thr Gln Pro Arg Glu Gln Gln
165 170 175
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Glu His Gln
180 185 190
Asp Trp Leu Thr Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn His Ile Gly
195 200 205
Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala
210 215 220
His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Pro Lys Glu Leu Ser
225 230 235 240
Ser Ser Asp Thr Val Thr Leu Thr Cys Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro
245 250 255
Pro Glu Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu
260 265 270
Ser Lys Tyr His Thr Thr Ala Pro Gln Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr
275 280 285
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
290 295 300
Asp Thr Phe Thr Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu Gln Asn His Tyr
305 310 315 320
Thr Asp Leu Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 87
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная собачья константная легкая цепь
<400> 87
Arg Asn Asp Ala Gln Pro Ala Val Tyr Leu Phe Gln Pro Ser Pro Asp
1 5 10 15
Gln Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Ser Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Ile Gln
35 40 45
Asp Thr Gly Ile Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Leu Ser
65 70 75 80
His Glu Leu Tyr Ser Cys Glu Ile Thr His Lys Ser Leu Pro Ser Thr
85 90 95
Leu Ile Lys Ser Phe Gln Arg Ser Glu Cys Gln Arg Val Asp
100 105 110
<210> 88
<211> 335
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная константная тяжелая цепь
кошачьего IgG
<400> 88
Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly
1 5 10 15
Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Leu Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ala Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Leu Ser Asp Thr
65 70 75 80
Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys
100 105 110
Pro Lys Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile
115 120 125
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu
130 135 140
Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln
145 150 155 160
Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser
165 170 175
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
180 185 190
Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys
195 200 205
Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
210 215 220
Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala
225 230 235 240
Gln Glu Glu Leu Ser Arg Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys
245 250 255
Ser Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln
260 265 270
Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp Arg Ser His
290 295 300
Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 89
<211> 110
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная кошачья константная легкая цепь
<400> 89
Arg Ser Asp Ala Gln Pro Ser Val Phe Leu Phe Gln Pro Ser Leu Asp
1 5 10 15
Glu Leu His Thr Gly Ser Ala Ser Ile Val Cys Ile Leu Asn Asp Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Glu Val Asn Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Val Gln
35 40 45
Asn Lys Gly Ile Gln Glu Ser Thr Thr Glu Gln Asn Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Met Ser Ser Thr Glu Tyr Gln
65 70 75 80
Ser His Glu Lys Phe Ser Cys Glu Val Thr His Lys Ser Leu Ala Ser
85 90 95
Thr Leu Val Lys Ser Phe Asn Arg Ser Glu Cys Gln Arg Glu
100 105 110
<210> 90
<211> 118
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH2 N35K G99P
<400> 90
Gln Leu Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ala Phe Gln
50 55 60
Gly Arg Ile Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ala Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 91
<211> 453
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Иллюстративная фелинизированная, зрелая
последовательность вариабельной тяжелой цепи fmVH2 и кошачьей
константной области тяжелой цепи
<400> 91
Gln Leu Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Lys Trp Ile Arg Gln Arg Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Pro Ala Phe Gln
50 55 60
Gly Arg Ile Ser Ile Thr Ala Asp Thr Ala Gln Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Met Thr Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Tyr Pro Asn Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Cys Gly Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala
130 135 140
Cys Leu Val Leu Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ala Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Arg Trp Leu Ser Asp Thr Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly
210 215 220
Pro Lys Pro Cys Asp Cys Pro Lys Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Ile Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr
245 250 255
Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro
260 265 270
Asp Asp Ser Asp Val Gln Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val
275 280 285
Tyr Thr Ala Lys Thr Ser Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly
305 310 315 320
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile
325 330 335
Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Val Leu Pro Pro Ala Gln Glu Glu Leu Ser Arg Asn Lys Val Ser
355 360 365
Val Thr Cys Leu Ile Lys Ser Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ile Thr Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Gln Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Ser Val Asp Arg Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser
420 425 430
Val Ser His Glu Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr
435 440 445
Gln Ser Pro Gly Lys
450
<210> 92
<211> 722
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Аминокислотная последовательность собачьего IL31Ra
с линкером, FLAG (маркером) и сигнальной последовательностью
<400> 92
Met Met Trp Ala Lys Val Leu Trp Met Leu Leu Leu Leu Cys Lys Leu
1 5 10 15
Ser Leu Ala Val Leu Pro Ala Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Ile Phe
20 25 30
Tyr Tyr Glu Glu Asn Phe Thr Cys Thr Trp Ser Pro Glu Lys Glu Ala
35 40 45
Ser Tyr Thr Trp Tyr Lys Val Lys Arg Thr Tyr Ser Tyr Gly Tyr Lys
50 55 60
Ser Asp Ile Cys Ser Thr Asp Asn Ser Thr Arg Gly Asn His Ala Ser
65 70 75 80
Cys Ser Phe Leu Pro Pro Thr Ile Thr Asn Pro Asp Asn Tyr Thr Ile
85 90 95
Gln Val Glu Ala Gln Asn Ala Asp Gly Ile Met Lys Ser Asp Ile Thr
100 105 110
Tyr Trp Asn Leu Asp Ala Ile Met Lys Ile Glu Pro Pro Glu Ile Phe
115 120 125
Ser Val Lys Ser Val Leu Gly Ile Lys Arg Met Leu Gln Ile Lys Trp
130 135 140
Ile Arg Pro Val Leu Ala Pro His Ser Ser Thr Leu Lys Tyr Thr Leu
145 150 155 160
Arg Phe Arg Thr Ile Asn Ser Ala Tyr Trp Met Glu Val Asn Phe Thr
165 170 175
Lys Glu Asp Ile Asp Arg Asp Glu Thr Tyr Asn Leu Thr Glu Leu Gln
180 185 190
Ala Phe Thr Glu Tyr Val Met Thr Leu Arg Cys Ala Pro Ala Glu Ser
195 200 205
Met Phe Trp Ser Gly Trp Ser Gln Glu Lys Val Gly Thr Thr Glu Glu
210 215 220
Glu Ala Pro Tyr Gly Leu Asp Leu Trp Arg Val Leu Lys Pro Ala Met
225 230 235 240
Val Asp Gly Arg Arg Pro Val Gln Leu Met Trp Lys Lys Ala Thr Gly
245 250 255
Ala Pro Val Leu Glu Lys Ala Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Phe Pro
260 265 270
Glu Asn Asn Thr Asn Leu Thr Glu Thr Val Asn Thr Thr Asn Gln Thr
275 280 285
His Glu Leu Tyr Leu Gly Gly Lys Thr Tyr Trp Val Tyr Val Val Ser
290 295 300
Tyr Asn Ser Leu Gly Glu Ser Pro Val Ala Thr Leu Arg Ile Pro Ala
305 310 315 320
Leu Asn Glu Lys Thr Phe Gln Cys Ile Glu Ala Met Gln Ala Cys Leu
325 330 335
Thr Gln Asp Gln Leu Val Val Glu Trp Gln Ser Ser Ala Pro Glu Val
340 345 350
Asp Thr Trp Met Val Glu Trp Phe Pro Asp Val Asp Ser Glu Pro Ser
355 360 365
Ser Phe Ser Trp Glu Ser Val Ser Gln Ala Arg Asn Trp Thr Ile Gln
370 375 380
Lys Asp Glu Leu Lys Pro Leu Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro
385 390 395 400
Val Leu Arg Asp Arg Val Gly Gln Pro Tyr Ser Thr Gln Ala Tyr Val
405 410 415
Gln Glu Gly Ile Pro Ser Ala Gly Pro Val Thr Gln Ala Asp Ser Ile
420 425 430
Gly Val Lys Thr Val Thr Ile Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Lys
435 440 445
Arg Asn Gly Phe Ile Lys Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu Asp
450 455 460
Gly Lys Glu Phe Ser Lys Thr Val Asn Ser Asn Ile Leu Gln Tyr Arg
465 470 475 480
Leu Glu Ser Leu Thr Arg Arg Thr Ser Tyr Ser Leu Gln Val Met Ala
485 490 495
Ser Thr Asn Ala Gly Gly Thr Asn Gly Thr Lys Ile Asn Phe Lys Thr
500 505 510
Leu Ser Ile Ser Val Leu Glu Ile Phe Phe Ile Thr Ser Leu Val Gly
515 520 525
Gly Gly Phe Leu Ile Leu Ile Met Leu Thr Val Ala Tyr Gly Leu Lys
530 535 540
Lys Pro Asn Lys Leu Lys His Leu Cys Trp Pro Asp Val Pro Asn Pro
545 550 555 560
Ala Glu Ser Ser Ile Ala Thr Trp Arg Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys
565 570 575
Leu Asn Leu Lys Glu Ser Asp Asp Pro Val Asn Met Glu Glu Asp Gln
580 585 590
Val Leu Lys Pro Tyr Ser Ala Pro Thr Asp Phe Ile Asp Lys Leu Val
595 600 605
Val Asn Phe Glu Asn Phe Leu Glu Glu Val Ser Thr Glu Glu Leu Gly
610 615 620
Lys Ser Gln Glu Asn Ile Leu Lys Glu Glu Lys Asn Lys His Val Thr
625 630 635 640
Ser Pro Tyr Cys Leu His His Pro Pro Ile Ser Thr Glu Ile Pro Gln
645 650 655
Arg Lys Pro Gln Gln Leu Cys Ser Arg Ile Pro Glu Gly Thr Cys Ser
660 665 670
Glu Thr Lys Glu Gln Leu Phe Ser Ser Val Gln Ser Leu Gly Pro Asp
675 680 685
His Leu Cys Glu Glu Gly Glu Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val
690 695 700
Thr Thr Arg Glu Phe Val Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp
705 710 715 720
Asp Lys
<210> 93
<211> 808
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая: Аминокислотная последовательность кошачьего IL31Ra
с линкером, FLAG (маркером) и сигнальной последовательностью
<400> 93
Met Lys Glu Phe Ala Leu Gln Phe Ser His Ile Gly Arg Pro Pro Asn
1 5 10 15
Gly Val Thr Trp Ala Arg Val Leu Tyr Cys Asn Ser Phe Gln Arg Leu
20 25 30
Gln Cys Thr Gly Cys Thr Pro Asn Trp Met Trp Gly Gly Gln Leu Ser
35 40 45
Pro Val Arg Pro Ala Arg Thr Ser Ser Gly Tyr His Arg Glu Phe Ser
50 55 60
Pro Gln Pro Ala Cys Ile Asp Leu Gly Met Met Trp Ala His Ala Leu
65 70 75 80
Trp Thr Leu Leu Leu Leu Cys Lys Phe Ser Leu Ala Val Leu Pro Ala
85 90 95
Lys Pro Glu Asn Ile Ser Cys Val Phe Tyr Tyr Glu Glu Asn Phe Thr
100 105 110
Cys Thr Trp Ser Pro Glu Lys Glu Ala Ser Tyr Thr Trp Tyr Lys Val
115 120 125
Lys Arg Thr Tyr Ser Tyr Gly Tyr Lys Ser Asp Ile Cys Pro Ser Asp
130 135 140
Asn Ser Thr Arg Gly Asn His Thr Phe Cys Ser Phe Leu Pro Pro Thr
145 150 155 160
Ile Thr Asn Pro Asp Asn Tyr Thr Ile Gln Val Glu Ala Gln Asn Ala
165 170 175
Asp Gly Ile Ile Lys Ser Asp Ile Thr His Trp Ser Leu Asp Ala Ile
180 185 190
Thr Lys Ile Glu Pro Pro Glu Ile Phe Ser Val Lys Pro Val Leu Gly
195 200 205
Val Lys Arg Met Val Gln Ile Lys Trp Ile Arg Pro Val Leu Ala Pro
210 215 220
Val Ser Ser Thr Leu Lys Tyr Thr Leu Arg Phe Lys Thr Val Asn Ser
225 230 235 240
Ala Tyr Trp Met Glu Val Asn Phe Thr Lys Glu Asp Ile Asp Arg Asp
245 250 255
Glu Thr Tyr Asn Leu Thr Gly Leu Gln Ala Phe Thr Glu Tyr Val Leu
260 265 270
Ala Leu Arg Cys Ala Thr Lys Glu Ser Met Phe Trp Ser Gly Trp Ser
275 280 285
Gln Glu Lys Met Gly Thr Thr Glu Glu Glu Ala Pro His Gly Leu Asp
290 295 300
Leu Trp Arg Val Leu Arg Pro Ala Thr Val Asp Gly Arg Arg Leu Val
305 310 315 320
Gln Leu Met Trp Lys Lys Ala Ser Gly Ala Pro Val Leu Glu Lys Ala
325 330 335
Leu Gly Tyr Asn Ile Trp Tyr Phe Pro Glu Asn Ser Thr Asn Leu Thr
340 345 350
Lys Thr Leu Asn Thr Thr Asn Glu Lys Leu Glu Leu Tyr Leu Gly Gly
355 360 365
Lys Thr Tyr Trp Val Cys Val Val Ser Tyr Asn Ser Leu Gly Glu Ser
370 375 380
Pro Val Ala Thr Leu Arg Ile Pro Ala Ile Asp Glu Lys Ser Phe Gln
385 390 395 400
Cys Ile Glu Ala Met Gln Ala Cys Leu Thr Gln Asp Gln Leu Val Val
405 410 415
Glu Trp Arg Ser Ser Ala Pro Glu Val Asp Thr Trp Met Val Glu Trp
420 425 430
Phe Pro Asp Leu Asp Ser Glu Pro Ser Thr Phe Ser Trp Glu Ser Val
435 440 445
Ser Gln Ala Thr Asn Trp Thr Ile Lys Gln Asp Glu Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Trp Cys Tyr Asn Ile Ser Val Tyr Pro Val Leu Gln Asp Arg Val Gly
465 470 475 480
Lys Pro Phe Ser Ile Gln Ala Tyr Val Arg Glu Gly Ile Pro Ser Ala
485 490 495
Gly Pro Val Thr Gln Val Asp Asn Ile Gly Val Lys Thr Val Thr Ile
500 505 510
Thr Trp Lys Glu Ile Pro Lys Ser Gln Arg Asn Gly Phe Ile Thr Asn
515 520 525
Tyr Thr Ile Phe Tyr Gln Ala Glu Asp Gly Lys Glu Phe Ser Lys Thr
530 535 540
Val Asn Ser Asn Ile Leu Gln Tyr Asp Leu Glu Ser Leu Thr Arg Lys
545 550 555 560
Thr Ser Tyr Ser Leu Gln Val Met Ala Ser Thr Ser Ala Gly Gly Ile
565 570 575
Asn Gly Thr Thr Met Asn Phe Lys Thr Leu Ser Ile Ser Ile Leu Glu
580 585 590
Ile Phe Leu Ile Ile Ser Leu Val Gly Gly Gly Leu Leu Ile Leu Ile
595 600 605
Ile Leu Ser Val Ala Tyr Gly Leu Lys Lys Pro Asn Arg Leu Lys His
610 615 620
Leu Cys Trp Pro Asp Val Pro Asn Pro Ala Glu Ser Ser Ile Ala Thr
625 630 635 640
Trp Arg Gly Asp Asp Phe Lys Asp Lys Ile Asn Leu Lys Glu Ser Asp
645 650 655
Asp Pro Val Asn Met Glu Glu Asp Arg Val Leu Lys Pro Tyr Ser Ser
660 665 670
Pro Arg Asp Leu Ile Asp Lys Leu Val Val Asn Phe Glu Thr Phe Leu
675 680 685
Glu Asp Val Ser Thr Glu Glu Leu Gly Lys Gly Gln Glu Asn Ile Leu
690 695 700
Arg Glu Glu Lys Asn Glu Tyr Val Thr Ser Pro Tyr Arg Pro Tyr Cys
705 710 715 720
Pro Pro Ile Ser Thr Glu Ile Pro Gln Arg Lys Ser Gln Gln Leu Cys
725 730 735
Ser Arg Ile Pro Glu Gly Ile Cys Leu Glu Thr Thr Glu Gln Leu Leu
740 745 750
Ser Ser Val Pro Asn Leu Gly Arg Asp Arg Ile Cys Glu Glu Gly Glu
755 760 765
Pro Asn Pro Tyr Leu Lys Asn Ser Val Thr Thr Arg Glu Phe Leu Thr
770 775 780
Ser Glu Lys Leu Pro Glu Gln Thr Lys Arg Glu Val Gly Ser Gly Ser
785 790 795 800
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
805
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| АНТИ-IL31 АНТИТЕЛА ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ | 2018 |
|
RU2795485C2 |
| ВАРИАНТЫ FC-ОБЛАСТИ С ИЗМЕНЕННЫМ СВЯЗЫВАНИЕМ С НЕОНАТАЛЬНЫМ FC-РЕЦЕПТОРОМ (FCRN) ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ВЕТЕРИНАРИИ | 2019 |
|
RU2830231C2 |
| МОЛЕКУЛА РЕЦЕПТОРА IL4/IL13 ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНОГО ПРИМЕНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2795591C2 |
| СЛИТЫЙ БЕЛОК, ВКЛЮЧАЮЩИЙ IL-12 И АНТИТЕЛО ПРОТИВ FAP, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2021 |
|
RU2831612C1 |
| КОНСТРУКЦИИ СЛИТОГО БЕЛКА ДЛЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, СВЯЗАННОГО С КОМПЛЕМЕНТОМ | 2019 |
|
RU2824402C2 |
| АНТИТЕЛО ПРОТИВ ФАКТОРА РОСТА СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2819228C2 |
| БИСПЕЦИФИЧЕСКОЕ АНТИТЕЛО ПРОТИВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2764740C1 |
| ИММУНОЦИТОКИНЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2021 |
|
RU2818371C1 |
| ИНДУЦИРУЮЩИЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ АГЕНТ | 2015 |
|
RU2743464C2 |
| АНТИТЕЛО, СПОСОБНОЕ СВЯЗЫВАТЬСЯ С ТИМИЧЕСКИМ СТРОМАЛЬНЫМ ЛИМФОПОЭТИНОМ, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2020 |
|
RU2825304C2 |
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к антителу, которое связывается с собачьим IL31, а также к способу его получения. Также раскрыты выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вышеуказанное антитело, а также клетка-хозяин, ее содержащая. Изобретение эффективно для лечения животного-компаньона с IL31-индуцированным состоянием. 5 н. и 13 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 5 пр.
1. Антитело, которое связывается с собачьим IL31, где антитело содержит:
а) тяжелую цепь, содержащую:
(i) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11;
(ii) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; и
(iii) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и
b) легкую цепь, содержащую:
(i) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20;
(ii) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21; и
(iii) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.
2. Антитело по п.1, где
последовательность тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30; и
последовательность легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 33.
3. Антитело по п.1 или 2, где
последовательность тяжелой цепи по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30; и
последовательность легкой цепи по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 33.
4. Антитело по любому из предыдущих пунктов, где
последовательность тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 30; и
последовательность легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 33.
5. Антитело по любому из предыдущих пунктов, где
последовательность вариабельной области тяжелой цепи по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7; и
последовательность вариабельной области легкой цепи по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
6. Антитело по любому из предыдущих пунктов, где
последовательность вариабельной области тяжелой цепи по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7; и
последовательность вариабельной области легкой цепи по меньшей мере на 95% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
7. Антитело по любому из предыдущих пунктов, где
последовательность вариабельной области тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7; и
последовательность вариабельной области легкой цепи представляет собой SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10.
8. Антитело по любому из предыдущих пунктов, где
последовательность вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7, каждая необязательно имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен; и
последовательность вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 10, каждая необязательно имеет 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных замен.
9. Антитело по п.8, где указанные аминокислотные замены являются консервативными заменами.
10. Антитело по любому из предшествующих пунктов, где антитело связывается с собачьим IL31 с константой диссоциации (Kd) менее чем 5×10-8 М, менее чем 1×10-8 М, менее чем 5×10-9 М, менее чем 1×10-9 М, менее чем 5×10-10 М, менее чем 1×10-10 М, менее чем 5×10-11 М, менее чем 1×10-11 М, менее чем 5×10-12 М или менее чем 1×10-12 М, как измерено методом биослойной интерферометрии.
11. Антитело по любому из предшествующих пунктов, где:
(а) антитело снижает сигнальную функцию IL31 у животных-компаньонов, как измерено по уменьшению фосфорилирования STAT-1, STAT-3 и/или STAT-5;
(b) животные-компаньоны относятся к собачьим;
(c) антитело связывается с собачьим IL31, как измерено анализом иммуноблоттинга и/или биослойной интерферометрии;
(d) антитело не связывается с IL31 человека, как измерено анализом иммуноблоттинга и/или биослойной интерферометрии;
(e) антитело представляет собой моноклональное антитело;
(f) антитело представляет собой канинизированное или химерное антитело.
12. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело, которое связывается с собачьим IL31, по любому из пп.1-11.
13. Клетка-хозяин для экспрессии антитела, которое связывается с собачьим IL31, по любому из пп.1-11, содержащая нуклеиновую кислоту по п.12.
14. Способ получения антитела, которое связывается с собачьим IL31, включающий
культивирование клетки-хозяина по п.13 и
выделение антитела.
15. Способ лечения животного-компаньона с IL31-индуцированным состоянием, включающий введение животному-компаньону терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп.1-11.
16. Способ по п.15, где животное-компаньон относится к псовым.
17. Способ по п.15 или 16, где IL31-индуцированное состояние представляет собой зуд или аллергию.
18. Способ по любому из пп.15-17, где IL31-индуцированное состояние выбрано из атопического дерматита, аллергического дерматита, зуда, астмы, псориаза, склеродермии и экземы.
| WO 2018156180 A1, 30.08.2018 | |||
| US 2018079817 A1, 22.03.2018 | |||
| WO 2008028192 A3, 15.05.2008 | |||
| GINA M MICHELS et al., A blinded, randomized, placebo-controlled, dose determination trial of lokivetmab (ZTS-00103289), a caninized, anti-canine IL-31 monoclonal antibody in client owned dogs with atopic dermatitis, Randomized Controlled Trial Vet Dermatol, |
