КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОТИВОРАКОВОГО ЛЕЧЕНИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ NK-КЛЕТКИ И СЛИТЫЙ БЕЛОК, КОТОРЫЙ СОДЕРЖИТ БЕЛОК IL-2 И БЕЛОК CD80 Российский патент 2024 года по МПК A61K38/17 A61K38/20 A61K35/17 C12N5/783 C07K14/55 C07K14/705 A61P35/00 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения рака, включающей в качестве активных ингредиентов слитый белок, содержащий белок CD80 и вариант IL-2, и NK-клетку (от англ. Natural killer cell -естественная клетка-киллер).

Предшествующий уровень техники

IL-2, также называемый фактором роста Т-клеток (TCGF - от англ. T-cell growth factor), представляет собой глобулярный гликопротеин, который играет центральную роль в продукции, выживаемости и гомеостазе лимфоцита. Белок IL-2 имеет размер 15,5 кДа - 16 кДа белка и состоит из 133 аминокислот.IL-2 опосредует разные иммунные ответы посредством связывания с рецептором IL-2, который имеет три отличающихся субъединицы. Кроме того, IL-2 синтезируется главным образом активированными Т-клетками, в частности, CD4+ хэлперными Т-клетками. IL-2 стимулирует пролиферацию и дифференцировку Т-клеток и индуцирует продукцию цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL - от англ. cytotoxic Т lymphocyte) и дифференцировку лимфоцитов периферической крови в цитотоксические клетки и лимфокин-активированные клетки - киллеры (клетки LAK (от англ. lymphokine-activated killer)).

Тем не менее, CD80, также известный как В7-1, представляет собой член семейства В7 мембраносвязанных белков, которые участвуют в иммунной регуляции посредством связывания со своим лигандом посредством доставки костимулирующих ответов и коингибирующих ответов. CD80 представляет собой трансмембранный белок, экспрессируемый на поверхности Т-клеток, В-клеток, дендритных клеток и моноцитов. Известно, что CD80 связывает CD28, CTLA4 (CD152) и PD-L1. CD80, CD86, CTLA4 и CD28 участвуют в системе костимуляции-коингибирования. Например, они регулируют активность Т-клеток и участвуют в их пролиферации, дифференцировки и выживаемости.

Кроме того, известно, что естественные клетки-киллеры (ниже в данном документе, NK-клетки) демонстрируют противораковую активность за счет удаления раковых клеток (Loris Zamai et al., J. Immunol., 178:4011-4016, 2007). Активность NK-клеток регулируется балансом сигнализации на основе разных активирующих и ингибирующих рецепторов. Известно, что противораковая активность NK-клеток также достигается посредством распознавания раковых клеток за счет разных иммунных рецепторов, находящихся на поверхности. Благодаря главному комплексу гистосовместимости (МНС - от англ. histocompatibility complex) класса I, находящемуся в нормальных клетках, нормальные клетки распознаются ингибирующими рецепторами NK-клеток и, таким образом, не подвергаются атаке, но раковые клетки или некоторые инфицированные клетки устраняются NK-клетками, благодаря редуцированному МНС класса I или лигандам для активирующих рецепторов NK-клеток. NK-клетки могут устранять раковые стволовые клетки помимо раковых клеток и, таким образом, находятся в центре внимания в качестве источника терапевтических средств, которые не только могли бы ингибировать развитие, пролиферацию и метастазирование рака, но также уменьшать рецидив рака после полного выздоровления.

Подробное описание изобретения

Техническая проблема

Соответственно, в результате исследования для разработки безопасного и эффективного IL-2, авторы настоящего изобретения обнаружили, что совместное введение нового димера слитого белка, содержащего белок IL-2 и белок CD80 в одной молекуле, в комбинации с естественными клетками-киллерами демонстрирует превосходный противораковый эффект, и завершили настоящее изобретение.

Решение проблемы

Для достижения указанной выше цели в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предложено противораковое средство, включающее в качестве активных ингредиентов димер слитого белка, содержащий белок IL-2 и белок CD80, и естественную клетку-киллер.

Эффекты изобретения

Подтвердили, что димер слитого белка, содержащий белок IL-2 и белок CD80, может не только активировать клетки иммунной системы, но также демонстрировать синергические эффекты при введении в комбинации с естественными клетками-киллерами. Таким образом, такую комбинированную терапию можно полезным образом применять для лечения рака.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 представляет собой схематичное изображение воплощения димера слитого белка, используемого в настоящем изобретении;

На Фиг. 2 показано изображение SDS-PAGE (от англ. sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия), подтверждающее полученный димер слитого белка (GI-101);

На Фиг. 3 показан анализ полученного димера слитого белка (GI-101) на основе эксклюзионной хроматографии (SEC - от англ. size exclusion chromatography);

На Фиг. 4 показано изображение SDS-PAGE, подтверждающее полученный слитый белок Fc-IL2v2;

На Фиг. 5 показан анализ полученного слитого белка Fc-IL2v2 на основе эксклюзионной хроматографии (SEC);

На Фиг. 6 показано изображение SDS-PAGE, подтверждающее полученный слитый белок hCD80-Fc;

На Фиг. 7 показан анализ полученного димера слитого белка hCD80-Fc на основе эксклюзионной хроматографии (SEC);

На Фиг. 8 показаны результаты жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при культивировании линии K562 клеток отдельно без естественных-клеток-киллеров (отношение Е/Т равно 0/1). В данном случае, Е показывает NK-клетку в качестве эффекторной клетки, и Т показывает линию раковых клеток K562 в качестве клетки-мишени.

На Фиг. 9 показаны результаты жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при культивировании линии клеток MDA-MB-231 отдельно без естественных клеток-киллеров (отношение Е/Т равно 0/1). В данном случае Е указывает на NK-клетку в качестве эффекторной клетки и Т указывает на линию раковых клеток MDA-MB-231 в качестве клетки-мишени.

На Фиг. 10 показаны результаты жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при культивировании линии клеток НСТ-116 отдельно без естественных клеток-киллеров (отношение Е/Т равно 0/1). В данном случае Е указывает на NK-клетку в качестве эффекторной клетки, и Т указывает на линию раковых клеток НСТ-116 в качестве клетки-мишени.

На Фиг. 11 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при культивировании линии клеток А549 отдельно без естественных клеток-киллеров (отношение Е/Т равно 0/1). В данном случае Е показывает NK-клетку в качестве эффекторной клетки и Т показывает линию раковых клеток А549 в качестве клетки-мишени.

На Фиг. 12 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании линии клеток K562 (клетка-мишень) с естественными клетками-киллерами (эффекторная клетка) в соотношении Е/Т, равном 1/3.

В данном документе, Y-ось=0 указывает на то, что интервал сигнала жизнеспособности (красный сигнал) раковых клеток в момент исходного посева установлен на уровне 0. Y-ось>0 представляет собой случай, когда интервал сигнала жизнеспособности раковых клеток, обнаруженного после момента посева, увеличивается, что указывает на то, что скорость пролиферации клеток быстрее, чем скорость гибели клеток (скорость пролиферации клеток больше скорости гибели клеток). То есть, видно увеличение числа раковых клеток. Однако, полагают, что чем ниже значение увеличения количества, тем больше ингибировалась пролиферация раковых клеток. Между тем, если измеренная площадь жизнеспособных раковых клеток меньше, чем площадь жизнеспособных раковых клеток, измеренная в момент исходного посева, она выражена как отрицательное значение, которое указывает на то, что скорость пролиферации клеток медленнее, чем скорость гибели клеток (скорость пролиферации клеток меньше скорости гибели клеток). А именно, уменьшение площади, по сравнению с площадью, измеренной в момент исходного посева, выражено отрицательным значением. Таким образом, полагают, что большее отрицательное значение может быть связано не только с ингибированием пролиферации раковых клеток, но также с гибелью раковых клеток.

На Фиг. 13 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании линии клеток K562 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 1/1.

На Фиг. 14 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании линии клеток K562 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 3/1.

На Фиг. 15 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании линии клеток K562 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 10/1.

На Фиг. 16 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии MDA-MB231 (клетка - мишень) с естественными клетками-киллерами (эффекторная клетка) в соотношении Е/Т, равном 1/3.

На Фиг. 17 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии MDA-MB231 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 1/1.

На Фиг. 18 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии MDA-MB231 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 3/1.

На Фиг. 19 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии MDA-MB231 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 10/1.

На Фиг. 20 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии НСТ-116 (клетка-мишень) с естественными клетками-киллерами (эффекторная клетка) в соотношении Е/Т, равном 1/3.

На Фиг. 21 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии НСТ-116 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 1/1.

На Фиг. 22 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии НСТ-116 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 3/1.

На Фиг. 23 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии НСТ-116 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 10/1.

На Фиг. 24 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии А549 (клетка-мишень) с естественными клетками-киллерами (эффекторная клетки) в соотношении Е/Т, равном 1/3.

На Фиг. 25 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии А549 с естественными клетками - киллерами в соотношении Е/Т, равном 1/1.

На Фиг. 26 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии А549 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 3/1.

На Фиг. 27 показаны результаты по жизнеспособности раковых клеток в соответствии с обработкой комбинацией материала GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 при совместном культивировании клеточной линии А549 с естественными клетками-киллерами в соотношении Е/Т, равном 10/1.

Фиг. 28 представляет собой схематичное изображение, показывающее схему введения комбинированных терапий на основе mGI-101 и/или NK-клеток мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

На Фиг. 29 показаны результаты эффекта ингибирования роста опухоли в соответствии с совместным введением естественных клеток-киллеров и mGI-101 мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

На Фиг. 30 показан процент ингибирования роста опухоли в соответствии с совместным введением естественных клеток-киллеров и mGI-101 мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

На Фиг. 31 показаны измерения роста опухоли отдельных лабораторных животных в каждой экспериментальной группе (носитель, NK-клетка, mGI-101, NK-клетка + mGI-101) в мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

На Фиг. 32 показаны измерения роста опухоли отдельных лабораторных животных в группе носителя в мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

На Фиг. 33 показаны измерения роста опухоли отдельных лабораторных животных в группе обработки NK-клетками в мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

На Фиг. 34 показаны измерения роста опухоли отдельных лабораторных животных в группе обработки mGI-101 в мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

На Фиг. 35 показаны измерения роста опухоли отдельных лабораторных животных в группе совместного введения естественных клеток-киллеров и mGI-101 в мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26.

Наилучший способ осуществления изобретения

Согласно аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, включающая в качестве активных ингредиентов слитый белок, содержащий белок CD80 и белок IL-2, и NK-клетки.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая в качестве активных ингредиентов слитый белок, содержащий белок CD80 и белок IL-2, и NK-клетки.

Естественная клетка-киллер

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «NK-клетка» относится к естественной клетке-киллеру (ниже в данном документе NK-клетка) и представляет собой одну из клеток врожденного иммунитета, которая непосредственно взаимодействует с разными макрофагами и Т-клетками или генерирует цитокины для регуляции иммунных ответов и, таким образом, играя важную роль в аутоиммунных заболеваниях. В настоящем изобретении NK-клетки могут быть выделены из селезенки или костного мозга, но не ограничиваются ими. В частности, NK-клетки могут быть получены из аутологичных или гетерологичных клеток.

Кроме того, NK-клетки могут происходить из млекопитающих или человека. Предпочтительно, они могут быть получены от индивида, который собирается получить лечение NK-клетками. В данном случае, NK-клетки можно непосредственно выделять из крови индивида и использовать, или незрелые NK-клетки или стволовые клетки, полученные от индивида, могут быть дифференцированы и использованы.

Кроме того, естественные клетки-киллеры могут быть получены посредством следующих стадий, включая i): отделение клеток, которые не экспрессируют CD3, от мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС - от англ. peripheral blood mononuclear cell); ii) отделение клеток, которые экспрессируют CD56, от клеток, которые не экспрессируют CD3, выделенных на указанной выше стадии; и ii) культивирование выделенных клеток в присутствии димера слитого белка, содержащего IL-2 или его вариант и CD80 или его фрагмент.

Корме того, естественные клетки-киллеры могут быть получены посредством следующих стадий, включая: i) отделение клеток, которые не экспрессируют CD3, от РВМС; и ii) культивирование выделенных клеток в присутствии димера слитого белка, содержащего IL-2 или его вариант и CD80 или его фрагмент.

Кроме того, естественные клетки-киллеры могут быть получены посредством следующих стадий, включая: i) отделение клеток, которые не экспрессируют CD56, от РВМС; и ii) культивирование выделенных клеток в присутствии димера слитого белка, содержащего IL-2 или его вариант и CD80 или его фрагмент.

Димер слитого белка, содержащий белок IL-2 и белок CD80

Термин «IL-2» или «интерлейкин-2» в том виде, как он используется в данном документе, если не утверждается иное, относится к любому IL-2 дикого типа, полученному из любого источника-позвоночного, включая млекопитающих, например, приматов (таких как человек) и грызунов (таких как мыши и крысы). IL-2 может быть получен из животных клеток и также включает IL-2, полученный из рекомбинантных клеток, способных к продукции IL-2. Кроме того, IL-2 может представлять собой IL-2 дикого типа или его вариант.

В настоящем описании изобретения IL-2 или его вариант могут быть совместно выражены термином «белок IL-2» или «полипептид IL-2». IL-2, белок IL-2, полипептид IL-2 и вариант IL-2 специфично связываются, например, с рецептором IL-2. Это специфичное связывание может быть идентифицировано способами, известными специалистам в данной области.

В одном из воплощений IL-2 может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35 или SEQ ID NO: 36. Здесь IL-2 также может находиться в зрелой форме. В частности, зрелый IL-2 может не содержать сигнальную последовательность и может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. Здесь IL-2 может использоваться согласно конфигурации, охватывающей фрагмент IL-2 дикого типа, в котором усечена часть N-конца или С-конца IL-2 дикого типа.

Кроме того, данный фрагмент IL-2 может находиться в форме, в которой 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 смежных аминокислот усечены с N-конца белка, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35 или SEQ ID NO: 36. Кроме того, фрагмент IL-2 может находиться в форме, в которой 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 смежных аминокислот усечены с С-конца белка, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35 или SEQ ID NO: 36.

Термин «вариант IL-2» в том виде, как он используется в данном документе, относится к форме, в которой часть аминокислот в полноразмерном IL-2 или вышеописанном фрагменте IL-2 заменена. То есть, вариант IL-2 может иметь отличную аминокислотную последовательность от IL-2 дикого типа или его фрагмента. Однако вариант IL-2 может иметь эквивалентную или аналогичную активность относительно IL-2 дикого типа. Здесь «активность IL-2» может, например, относиться к специфичному связыванию с рецептором IL-2, причем данное специфичное связывание можно измерять способами, известными специалистам в данной области.

В частности, вариант IL-2 можно получать заменой части аминокислот в IL-2 дикого типа. Одно воплощение варианта IL-2, полученного аминокислотной заменой, может быть получено заменой по меньшей мере одной из 38-ой, 42-ой, 45-ой, 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.

В частности, вариант IL-2 может быть получен заменой по меньшей мере одной из 38-ой, 42-ой, 45-ой, 61-ой или 72-ой аминокислоты в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10 другой аминокислотой. Кроме того, когда IL-2 находится в форме, в которой часть N-конца аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35 усечена, аминокислота в положении, комплементарно соответствующем положению в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, может быть заменена другой аминокислотой. Например, когда IL-2 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, его вариант IL-2 может быть получен заменой по меньшей мере одной из 58-ой, 62-ой, 65-ой, 81-ой или 92-ой аминокислоты в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35 другой аминокислотой. Данные аминокислотные остатки соответствуют 38-му, 42-му, 45-му, 61-му и 72-му аминокислотному остатку в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10 соответственно. Согласно одному воплощению могут быть заменены одна, две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять аминокислот, при условии, что такой вариант IL-2 сохраняет активность IL-2. Согласно другому воплощению могут быть заменены от одной до пяти аминокислот.

В одном воплощении вариант IL-2 может находиться в форме, в которой заменены две аминокислоты. В частности, вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой и 42-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой и 45-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой и 61-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 42-ой и 45-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 42-ой и 61-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 42-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 45-ой и 61-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 45-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.

Кроме того, вариант IL-2 может находится в форме, в которой заменены три аминокислоты. В частности, вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 42-ой и 45-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 42-ой и 61-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 42-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 45-ой и 61-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 45-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 42-ой, 45-ой и 61-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 42-ой, 45-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 45-ой, 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.

Кроме того, вариант IL-2 может находится в форме, в которой заменены четыре аминокислоты. В частности, вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 42-ой, 45-ой и 61-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 42-ой, 45-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 45-ой, 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 38-ой, 42-ой, 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменой 42-ой, 45-ой, 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.

Кроме того, вариант IL-2 может находится в форме, в которой заменены пять аминокислот.В частности, вариант IL-2 может быть получен заменой каждой из 38-ой, 42-ой, 45-ой, 61-ой и 72-ой аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10 другой аминокислотой.

Здесь «другая аминокислота», вводимая заменой, может представлять собой любую аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутаминовой кислоты, глутамина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, пролина, серина, треонина, триптофана, тирозина и валина. Однако относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 38-ая аминокислота не может быть заменена аргинином, 42-ая аминокислота не может быть заменена фенилаланином, 45-ая аминокислота не может быть заменена тирозином, 61-ая аминокислота не может быть заменена глутаминовой кислотой, и 72-ая аминокислота не может быть заменена лейцином.

Относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 38-ая аминокислота - аргинин - может быть заменена аминокислотой, отличной от аргинина. Предпочтительно относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 38-ая аминокислота - аргинин - может быть заменена аланином (R38A).

Относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 42-ая аминокислота - фенилаланин - может быть заменена аминокислотой, отличной от фенилаланина. Предпочтительно относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 42-ая аминокислота - фенилаланин - может быть заменена аланином (F42A).

Относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 45-ая аминокислота - тирозин - может быть заменена аминокислотой, отличной от тирозина. Предпочтительно относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 45-ая аминокислота - тирозин - может быть заменена аланином (Y45A).

Относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 61-ая аминокислота - глутаминовая кислота -может быть заменена аминокислотой, отличной от глутаминовой кислоты. Предпочтительно относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 61-ая аминокислота - глутаминовая кислота - может быть заменена аргинином (E61R).

Относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 72-ая аминокислота - лейцин - может быть заменена аминокислотой, отличной от лейцина. Предпочтительно относительно аминокислотной замены для варианта IL-2 в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, 72-ая аминокислота - лейцин - может быть заменена глицином (L72G).

В частности, вариант IL-2 может быть получен по меньшей мере одной заменой, выбранной из группы, состоящей из R38A, F42A, Y45A, E61R и L72G в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.

В частности, вариант IL-2 может быть получен аминокислотными заменами в двух, трех, четырех или пяти положениях среди положений, выбранных в группе, состоящей из R38A, F42A, Y45A, Е61 R и L72G.

Кроме того, вариант IL-2 может находиться в форме, в которой заменены две аминокислоты. В частности, вариант IL-2 может быть получен заменами R38A и F42A. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A и Y45A. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A и E61R. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами F42A и Y45A. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами F42A и E61R. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами F42A и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами E61R и L72G.

Кроме того, вариант IL-2 может находиться в форме, в которой заменены три аминокислоты. В частности, вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, F42A и Y45A. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, F42A и E61R. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, F42A и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, Y45A и E61R. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, Y45A и E61R. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, Y45A и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами F42A, Y45A и E61R. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами F42A, Y45A и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами F42A, E61R и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами Y45A, E61R и L72G.

Кроме того, вариант IL-2 может находиться в форме, в которой заменены четыре аминокислоты. В частности, вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, F42A, Y45A и E61R. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, F42A, Y45A и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, F42A, E61R и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, Y45A, E61R и L72G. Кроме того, в одном воплощении вариант IL-2 может быть получен заменами F42A, Y45A, E61R и L72G.

Кроме того, вариант IL-2 может быть получен заменами R38A, F42A, Y45A, E61R и L72G.

Предпочтительно одно воплощение варианта IL-2 может содержать замену, которая представляет собой любую замену, выбранную из следующих комбинаций замен (a)-(d) в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10:

(a) R38A/F42A

(b) R38A/F42A/Y45A

(c) R38A/F42A/E61 R

(d) R38A/F42A/L72G

Здесь, когда IL-2 имеет аминокислотную замену SEQ ID NO: 35, аминокислотная замена может присутствовать в положении, комплементарно соответствующем положению в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10. Кроме того, даже когда IL-2 представляет собой фрагмент аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 35, аминокислотная замена может присутствовать в положении, комплементарно соответствующем положению в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.

В частности, вариант IL-2 может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, 22, 23 или 24.

Кроме того, вариант IL-2 может отличаться низкой токсичностью in vivo. Здесь низкая токсичность in vivo может представлять собой побочный эффект, вызванный связыванием IL-2 с альфа цепью рецептора IL-2 (IL-2Rα). Были разработаны разные варианты IL-2 для уменьшения интенсивности побочного эффекта, вызванного связыванием IL-2 с IL-2Rα, и такие варианты IL-2 могут представлять собой варианты, раскрытые в патенте США №5229109 и корейском патенте №1667096. В частности, варианты IL-2, описанные в настоящей заявке, имеют низкую аффинность связывания в отношении альфа цепи рецептора IL-2 (IL-2Rα) и, таким образом, имеют более низкую токсичность in vivo, чем IL-2 дикого типа.

Термин «CD80» в том виде, в котором он используется в данном документе, также именуемый «В7-1», относится к мембранному белку, присутствующему в дендритных клетках, активированных В-клетках и моноцитах. CD80 предоставляет костимулирующие сигналы, важные для активации и выживания Т-клеток. CD80 известен в качестве лиганда двух разных белков - CD28 и CTLA-4, присутствующих на поверхности Т-клеток. CD80 состоит из 288 аминокислот и может, в частности, иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11. Кроме того, термин «белок CD80» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к полноразмерному CD80 или к фрагменту CD80.

Термин «фрагмент CD80» в том виде, в котором он используется в данном документе, относится к усеченной форме CD80. Кроме того, фрагмент CD80 может представлять собой внеклеточный домен CD80. Одно воплощение фрагмента CD80 может быть получено делецией с 1-ой по 34-ую аминокислоты с N-конца, которые представляют собой сигнальную последовательность CD80. В частности, одно воплощение фрагмента CD80 может представлять собой белок, состоящий из 35-ой - 288-ой аминокислот в SEQ ID NO: 11. Кроме того, одно воплощение фрагмента CD80 может представлять собой белок, состоящий из 35-ой - 242-ой аминокислот в SEQ ID NO: 11. Кроме того, одно воплощение фрагмента CD80 может представлять собой белок, состоящий из 35-ой - 232-ой аминокислот в SEQ ID NO: 11. Кроме того, одно воплощение фрагмента CD80 может представлять собой белок, состоящий из 35-ой - 139-ой аминокислот в SEQ ID NO: 11. Кроме того, одно воплощение фрагмента CD80 может представлять собой белок, состоящий из 142-ой - 242-ой аминокислот в SEQ ID NO: 11. В одном воплощении фрагмент CD80 может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

Кроме того, белок IL-2 и белок CD80 могут быть присоединены друг к другу через линкер или носитель. В частности, IL-2 или его вариант и CD80 (В7-1) или его фрагмент могут присоединяться друг к другу через линкер или носитель. В настоящем описании термины «линкер» и «носитель» могут использоваться взаимозаменяемо.

Линкер связывает два белка. Одно воплощение линкера может содержать от 1 до 50 аминокислот, альбумин или его фрагмент, Fc-домен иммуноглобулина или тому подобное. Здесь Fc-домен иммуноглобулина относится к белку, который содержит константную область 2 тяжелой цепи (СН2) и константную область 3 тяжелой цепи (СН3) иммуноглобулина, и не содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, и константную область 1 легкой цепи (СН1) иммуноглобулина. Данный иммуноглобулин может представлять собой IgG, IgA, IgE, IgD или IgM и предпочтительно может представлять собой IgG4. Здесь Fc-домен иммуноглобулина G4 дикого типа может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.

Кроме того, Fc-домен иммуноглобулина может представлять собой вариант Fc-домена, а также Fc-домен дикого типа. Кроме того, термин «вариант Fc-домена» в том виде, как он используется в данном документе, может относиться к форме, которая отличается от Fc-домена дикого типа в показателях картины гликозилирования, имеет высокое гликозилирование по сравнению с доменом Fc дикого типа или имеет низкое гликозилирование по сравнению с доменом Fc дикого типа, или представляет собой дегликозилированную форму. Кроме того, в данный документ включается негликозилированный Fc-домен. Fc-домен или его вариант может быть адаптирован для наличия скорректированного числа сиаловых кислот, фукозилирований или гликозилирований посредством культуральных условий или генетических манипуляций с хозяином.

Кроме того, гликозилирование Fc-домена иммуноглобулина может быть модифицировано традиционными способами, такими как химические способы, ферментативные способы и способы генной инженерии с использованием микроорганизмов. Кроме того, вариант Fc-домена может находиться в смешанной форме соответствующих областей Fc иммуноглобулинов - IgG, IgA, IgE, IgD и IgM. Кроме того, вариант Fc-домена может находиться в форме, в которой некоторые аминокислоты Fc-домена заменены другими аминокислотами. Одно воплощение варианта Fc-домена может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.

Данный слитый белок может иметь структуру, в которой с использованием Fc-домена в качестве линкера (или носителя) белок CD80 и белок IL-2 или белок IL-2 и белок CD80 связываются с N-концом и С-концом линкера или носителя соответственно (Фиг. 1А). Связь между N-концом или С-концом Fc-домена и CD-80 или IL-2 возможно может достигаться посредством линкерного пептида.

В частности, слитый белок может состоять из следующей структурной формулы (I) или (II):

N'-X-[линкер (1)]_n-Fc-домен-[линкер (2)]_m-Y-C' (I)

N'-Y-[линкер (1)]_n-Fc-домен-[линкер (2)]_m-X-C' (II)

Здесь в структурных формулах (I) и (II)

N' представляет собой N-конец слитого белка,

С' представляет собой С-конец слитого белка,

X представляет собой белок CD80,

Y представляет собой белок IL-2,

линкеры (1) и (2) представляют собой пептидные линкеры и n и m каждый независимо равен 0 или 1.

Предпочтительно данный слитый белок может состоять из структурной формулы (I). Белок IL-2 является таким, как описано выше. Кроме того, белок CD80 является таким, как описано выше. Согласно одному воплощению белок IL-2 может представлять собой вариант IL-2 с одной-пятью аминокислотными заменами по сравнению с IL-2 дикого типа. Белок CD80 может представлять собой фрагмент, полученный усечением вплоть до примерно 34 смежных аминокислотных остатков от N-конца или С-конца CD80 дикого типа. В качестве альтернативы, белок CD может представлять собой внеклеточный иммуноглобулиноподобный домен, имеющий активность связывания с рецепторами поверхности Т-клеток CTLA-4 и CD28.

В частности, данный слитый белок может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 26, 28 или 30. Согласно другому воплощению данный слитый белок содержит полипептид, имеющий идентичность последовательности 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 9, 26, 28 или 30. Здесь идентичность представляет собой, например, процент гомологии и может определяться посредством программы для сравнения гомологии, такой как программа BlastN Национального центра биотехнологической информации (NCBI).

Пептидный линкер (1) может содержаться между белком CD80 и доменом Fc. Пептидный линкер (1) может состоять из 5-80 смежных аминокислот, 20-60 смежных аминокислот, 25-50 смежных аминокислот или 30-40 смежных аминокислот. В одном воплощении пептидный линкер (1) может состоять из 30 аминокислот. Кроме того, пептидный линкер (1) может содержать по меньшей мере один цистеин. В частности, пептидный линкер (1) может содержать один, два или три цистеина. Кроме того, пептидный линкер (1) может происходить из шарнира иммуноглобулина. В одном воплощении пептидный линкер (1) может представлять собой пептидный линкер, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3.

Пептидный линкер (2) может состоять из 1-50 смежных аминокислот, 3-30 смежных аминокислот или 5-15 смежных аминокислот.В одном воплощении пептидный линкер (2) может представлять собой (G4S)_n (где n представляет собой целое число от 1 до 10). Здесь в (G4S)_n n может быть равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. В одном воплощении пептидный линкер (2) может представлять собой пептидный линкер, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5.

В другом аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента димер, полученный путем связывания двух слитых белков, каждый из которых содержит белок IL-2 и белок CD80, и NK-клетку. Слитый белок, содержащий IL-2 или его вариант и CD80 или его фрагмент, является таким, как описано выше.

Здесь связывание между слитыми белками, составляющими димер, может быть достигнуто в том числе за счет дисульфидной связи, образованной цистеинами, присутствующими в линкере. Слитые белки, составляющие димер, могут быть одинаковыми или отличными друг от друга слитыми белками. Предпочтительно димер может быть гомодимером. Вариант осуществления слитого белка, составляющего димер, может представлять собой белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.

В настоящем изобретении рак может представлять собой любой рак, выбранный из группы, состоящей из рака желудка, рака печени, рака легкого, колоректального рака, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака шейки матки, рака щитовидной железы, рака гортани, острого лимфобластного лейкоза, опухоли головного мозга, нейробластомы, ретинобластомы, рака головы и шеи, рака слюнной железы и лимфомы.

Предпочтительная доза фармацевтической композиции варьирует в зависимости от состояния пациента и массы тела, тяжести заболевания, формы лекарственного средства, пути и продолжительности введения и может быть приблизительно выбрана специалистами в данной области. В фармацевтической композиции для лечения и предупреждения рака по настоящему изобретению активный ингредиент может содержаться в любом количестве (эффективном количестве) в зависимости от применения, использования, формы дозировки, цели смешивания и т.п., при условии, что активный ингредиент может демонстрировать противораковую активность. Его общепринятое эффективное количество будет определено в интервале от 0,001 масс. % до 20,0 масс. % в расчете на общую массу композиции. В данном документе, термин «эффективное количество» относится к количеству активного ингредиента, способному вызывать противораковое действие. Такое эффективное количество можно экспериментально определить в объеме общего знания специалистов в данной области.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «лечение» может быть использован для обозначения как терапевтического, так и профилактического лечения. В данном документе, профилактика может использоваться для обозначения того, что патологическое состояние или заболевание индивида облегчено или ослаблено. В одном воплощении термин «лечение» включает как нанесение, так и любую форму введения для лечения заболевания у животного, включая человека. Кроме того, термин включает ингибирование или замедление заболевания или прогрессирования заболевания; и включает значения восстановления или исправления нарушенной или потерянной функции таким образом, что заболевание частично или полностью облегчено; стимуляцию неэффективных процессов; или облегчение серьезного заболевания.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «эффективность» относится к способности, которую можно определить по одному из параметров, например, выживаемости или выживаемости без признаков заболевания на протяжении определенного периода времени, такого как один год, пять лет или десять лет.Кроме того, параметр может включать заболевание размером по меньшей мере в одну опухоль у индивида.

Фармакокинетические параметры, такие как биодоступность, и основополагающие параметры, такие как скорость клиренса, могут также влиять на эффективность. Таким образом, «усиленная эффективность» (например, улучшение в эффективности) может быть обусловлена усиленными фармакокинетическими параметрами и улучшенной эффективностью, которые могут быть измерены посредством сравнения скорости клиренса и роста опухоли у лабораторных животных или у субъектов, являющихся человеком, или посредством сравнения параметров, таких как выживаемость, возникновение рецидива или выживаемость без признаков заболевания.

В том виде, в котором он используется в данном документе, термин «терапевтически эффективное количество» или «фармацевтически эффективное количество» относится к количеству соединения или композиции, эффективному для предупреждения или лечения рассматриваемого заболевания, которое является достаточным для лечения заболевания при разумном соотношении польза/риск, применимом для медицинского лечения, и не вызывает негативных последствий. Уровень эффективного количества можно определять в зависимости от факторов, включая состояние здоровья пациента, виды и тяжесть заболевания, активность лекарственного средства, чувствительность пациента к лекарственному средству, способ введения, время введения, путь введения и скорость выведения, продолжительность лечения, состав или одновременно используемые лекарственные средства, и другие факторы, хорошо известные в области медицины. В одном воплощении терапевтически эффективное количество означает количество лекарственного средства, эффективное для лечения рака.

В данном документе, фармацевтическая композиция может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемый носитель может представлять собой любой носитель, при условии, что носитель является нетоксичным веществом, подходящим для доставки пациенту. Дистиллированная вода, спирт, жир, воск и инертное твердое вещество могут содержаться в качестве носителя. Фармацевтически приемлемый адъювант (буфер, диспергирующее средство) может также содержаться в фармацевтической композиции.

В частности, посредством включения фармацевтически приемлемого носителя помимо активного ингредиента, фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде парентерального препарата, в зависимости от пути его введения с использованием традиционных способов, известных в данной области. В данном документе, термин «фармацевтически приемлемый» означает, что носитель не обладает токсичностью большей, чем токсичность, к которой субъект, предназначенный для применения (назначения), может адаптироваться, без одновременного ингибирования активности активного ингредиента.

Когда фармацевтическая композиция приготовлена в виде парентерального препарата, ее можно получить в виде препаратов в форме инъекций, трансдермальных пластырей, назальных средств для ингаляций или суппозиториев с подходящими носителями согласно способам, известным в данной области. В случае приготовления в виде инъекций, стерильную воду, этанол, полиол, такой как глицерин или пропиленгликоль или их смесь, можно использовать в качестве подходящего носителя; и предпочтительно можно использовать изотонический раствор, такой как раствор Рингера, фосфатно-солевой буферный раствор (PBS - от англ. phosphate buffered saline), содержащий триэтаноламин, или стерильную воду для инъекций, и 5%-ную декстрозу или т.п. Состав фармацевтических композиций известен в данной области, и ссылка может быть, в частности, сделана на Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995) и т.п.Данный документ считается частью настоящего описания.

Предпочтительная доза димера в фармацевтической композиции может находиться в интервале от 0,01 мкг/кг до 10 г/кг, или от 0,01 мг/кг до 1 г/кг, в сутки, в зависимости от состояния пациента, массы тела, пола, возраста, тяжести пациента и пути введения. Дозу можно вводить один раз в сутки или она может быть разделена на несколько раз в сутки. Такую дозу не следует считать ограничивающей объем настоящего изобретения в любом аспекте. Кроме того, NK-клетки в фармацевтической композиции могут быть введены в количестве 1×10² - 1×10¹³ клеток, от 1×10⁷ до 1,5×10¹¹ клеток, при регуляции соответствующим образом в интервале, показывающем фармакологический эффект.

Субъекты, для которых может быть применена (назначена) данная фармацевтическая композиция, представляют собой млекопитающих и человека, причем человек является особенно предпочтительным. Помимо активного ингредиента, фармацевтическая композиция по настоящей заявке может дополнительно включать любое соединение или природный экстракт, который уже проверен в отношении безопасности и, как известно, обладает противораковой активностью, таким образом, чтобы простимулировать или усилить противораковую активность.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение димера слитого белка, содержащего белок IL-2 и белок CD80, и NK-клетки для лечения рака.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение димера слитого белка, содержащего белок IL-2 и белок CD80, и NK-клеток для усиления терапевтического эффекта, оказываемого на рак.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение димера слитого белка, содержащего белок IL-2 и белок CD80, и NK-клеток для изготовления лекарственного средства для лечения рака.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения рака и/или способ усиления терапевтического эффекта, оказываемого на рак, включающий введение субъекту слитого белка, содержащего белок IL-2 и белок CD80, или димер слитого белка, где связаны два слитых белка, и NK-клетки.

В данном документе, димер слитого белка и NK-клетки можно вводить одновременно или последовательно. В данном случае порядок введения может быть определен таким образом, что за введением димера слитого белка может следовать введение NK-клеток или за введением NK-клеток может следовать введение димера слитого белка.

Субъект может являться индивидом, страдающим раком или инфекционным заболеванием. Корме того, субъект может представлять собой млекопитающее, предпочтительно человека. Слитый белок, содержащий белок IL-2 и белок CD80, или димер слитого белка, где связаны два слитых белка, представляет собой такой, как описано выше.

Путь введения, доза и частота введения слитого белка или димера слитого белка и NK-клеток может варьировать в зависимости от состояния пациента и наличия или отсутствия побочных эффектов, и таким образом слитый белок или димер слитого белка можно вводить субъекту разными путями и в разных количествах. Оптимальный способ введения, доза и частота введения могут быть выбраны в соответствующем диапазоне специалистами в данной области. Кроме того, слитый белок или димер слитого белка можно вводить в комбинации с другими лекарственными средствами или физиологически активными веществами, чей терапевтический эффект известен в отношении заболевания, подлежащего лечению, или можно приготовить в форме комбинированных препаратов с другими лекарственными средствами.

Благодаря активности IL-2, слитый белок в воплощении настоящего изобретения может активировать клетки иммунной системы, такие как естественные клетки-киллеры. Таким образом, слитый белок может эффективно использоваться для раковых и инфекционных заболеваний. В частности, было идентифицировано, что, по сравнению с диким типом, вариант IL-2 с двумя-пятью заменами аминокислот, в частности, вариант IL-2, который содержит замены аминокислот в двух, трех, четырех или пяти положениях среди положений, выбранных из группы, состоящей из R38A, F42A, Y45A, E61R и L72G, имеет низкую способность к связыванию в отношении цепи альфа рецептора IL-2 и, таким образом, демонстрирует улучшенные характеристики в отношении фармакологических побочных эффектов общепринятого IL-2. Таким образом, такой вариант IL-2, при использовании отдельно или в форме слитого белка, может уменьшать встречаемость синдрома сосудистой (или капиллярной) утечки (VLS - от англ. vascular leakage syndrome), широко известной проблемы с IL-2.

Способ по изобретению

Ниже в данном документе, настоящее изобретение будет описано более подробно посредством следующих примеров. Однако, следующие примеры предназначены лишь для иллюстрации настоящего изобретения, и объем настоящего изобретения не ограничивается ими.

I. Получение димера слитого белка, содержащего IL-2 и CD80 Пример получения 1. Получение варианта hCD80-Fc-IL-2 (2М): GI-101 Для получения слитого белка, содержащего фрагмент человеческого CD80, Fc-домен и вариант IL-2, полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 8), кодирующую слитый белок, содержащий сигнальный пептид (SEQ ID NO: 1), фрагмент CD80 (SEQ ID NO: 2), шарнир Ig, конъюгированный с линкером (SEQ ID NO: 3), Fc-домен (SEQ ID NO: 4), линкер (SEQ ID NO: 5) и вариант IL-2 (2M), в котором две аминокислоты заменены (R38A, F42A) (SEQ ID NO: 6), в данном порядке от N-конца синтезировали посредством службы синтеза генов Invitrogen GeneArt ThermoFisher Scientific Inc. и клонировали в вектор pcDNA3_4. Кроме того, вектор вводили в клетки СНО (от англ. Chinese Hamster Ovary - яичник китайского хомяка) (EXPI-CHO™) для экспрессии слитого белка SEQ ID NO: 9. После введения вектора клетки СНО культивировали в окружающей среде с 37°С, 125 об./мин. и 8% CO₂ в течение 7 суток и затем собирали для очистки слитого белка. Очищенный димер слитого белка был назван «GI-101».

Очистку проводили, используя хроматографию, включая смолу с белком А MabSelect SuRe. Слитый белок связывался в условиях 25 мМ Tris, 25 мМ NaCl и рН 7,4. Затем, его элюировали 100 мМ NaCl и 100 мМ уксусной кислотой при рН 3. После помещения 20% 1М Tris-HCI при рН 9 в пробирку для сбора собирали слитый белок. Собранный слитый белок подвергали диализу в буфер PBS в течение 16 часов для замены.

Затем, поглощение при длине волны 280 нм со временем измеряли посредством использования эксклюзионной хроматографии с помощью колонки TSKgel G3000SWXL (TOSOH Bioscience) с получением высокой концентрации слитого белка. При этом, выделенный и очищенный слитый белок подвергали SDS-PAGE в восстанавливающих (R) или невосстанавливающих (NR) условиях и окрашивали кумасси синим для подтверждения его чистоты (Фиг. 2). Подтверждали, что слитый белок содержался в концентрации 2,78 мг/мл, как выявлено с использованием NanoDrop.Также, результат, анализируемый с использованием эксклюзионной хроматографии, представляет собой такой, как показано на Фиг. 3.

Пример получения 2. Получение димера варианта Fc-IL-2 (2М): Fc-IL-2v2 Для получения слитого белка, содержащего Fc-домен и вариант IL-2, полинуклеотид, включающий нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 45), кодирующую слитый белок, содержащий сигнальный пептид (SEQ ID NO: 1), шарнир Ig (SEQ ID NO: 38), Fc-домен (SEQ ID NO: 4), линкер (SEQ ID NO: 5) и вариант IL-2 (2M), в котором две аминокислоты заменены (R38A, F42A) (SEQ ID NO: 6), в данном порядке от N-конца синтезировали посредством службы синтеза генов Invitrogen GeneArt ThermoFisher Scientific Inc. и клонировали в вектор pcDNA3_4. Кроме того, вектор вводили в клетки СНО (EXPI-CHO™) для экспрессии слитого белка SEQ ID NO: 44. После введения вектора клетки СНО культивировали в окружающей среде с 37°С, 125 об./мин. и 8% CO₂ в течение 7 суток и затем собирали для очистки димера слитого белка. Очищенный димер слитого белка был назван «Fc-IL2v2».

Очистку и сбор слитого белка осуществляли тем же образом, как в Примере получения 1. Выделенный и очищенный слитый белок подвергали SDS-PAGE в восстанавливающих (R) или невосстанавливающих (NR) условиях и окрашивали кумасси синим для подтверждения его чистоты (Фиг. 4). В результате, подтверждали, что слитый белок образует димер. Также, результат, анализируемый с использованием эксклюзионной хроматографии, представляет собой такой, как показано на Фиг. 5.

Пример получения 3. Получение димера hCD80-Fc: hCD80-Fc

Для получения слитого белка, содержащего фрагмент человеческого CD80 и Fc-домен, полинуклеотид (SEQ ID NO: 39), включающий нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок, содержащий сигнальный пептид (SEQ ID NO: 1), фрагмент CD80 (SEQ ID NO: 2), шарнир Ig, связанный с линкером (SEQ ID NO: 3), и Fc-домен (SEQ ID NO: 4), в данном порядке от N-конца синтезировали посредством службы синтеза генов Invitrogen GeneArt ThermoFisher Scientific Inc. и клонировали в вектор pcDNA3_4. Кроме того, вектор вводили в клетки СНО (EXPI-CHO™) для экспрессии слитого белка SEQ ID NO: 40. После введения вектора клетки СНО культивировали в окружающей среде с 37°С, 125 об./мин. и 8% CO₂ в течение 7 суток и затем собирали для очистки димера слитого белка. Очищенный димер слитого белка был назван «hCD80-Fc».

Очистку осуществляли с использованием хроматографии, включающей смолу с белком A MabSelect SuRe. Слитый белок связывался в условиях 25 мМ Tris, 25 мМ NaCl и рН 7,4. Затем, его элюировали 100 мМ NaCl и 100 мМ уксусной кислотой при рН 3. После помещения 20% 1М Tris-HCI при рН 9 в пробирку для сбора слитый белок собирали. Собранный слитый белок подвергали диализу в буфер PBS в течение 16 часов для замены.

Затем, поглощение при длине волны 280 нм со временем измеряли посредством использования эксклюзионной хроматографии с помощью колонки TSKgel G3000SWXL (TOSOH Bioscience) с получением высокой концентрации слитого белка. При этом, выделенный и очищенный слитый белок подвергали SDS-PAGE в восстанавливающих (R) или невосстанавливающих (NR) условиях и окрашивали кумасси синим для подтверждения его чистоты (Фиг. 6). В результате, подтверждали, что слитый белок образует димер. Также, результат, анализируемый с использованием эксклюзионной хроматографии, представляет собой такой, как показано на Фиг. 7.

Пример получения 4. Получение варианта mCD80-Fc-IL-2 (2М): mGI101 В соответствии с тем же способом, как в Примере получения 1, изготавливали GI-101 мышиного типа, содержащий CD80 мышиного происхождения и IL-2. В частности, для получения слитого белка, содержащего мышиный CD80, Fc-домен и вариант IL-2, полинуклеотид синтезировали посредством службы синтеза генов Invitrogen GeneArt ThermoFisher Scientific. Полинуклеотид включает нуклеотидную последовательность (SEQ ID NO: 14), которая кодирует слитый белок, который содержит сигнальный пептид (SEQ ID NO: 1), mCD80 (SEQ ID NO: 13), шарнир Ig, связанный с линкером (SEQ ID NO: 3), Fc-домен (SEQ ID NO: 4), линкер (SEQ ID NO: 5) и вариант IL-2 (2M) (R38A, F42A) (SEQ ID NO: 6) с двумя заменами аминокислот в данном порядке с N-конца. Полинуклеотид вставляли в вектор pcDNA3_4. Корме того, вектор вводили в клетки СНО (EXPI-CHO™) для экспрессии слитого белка SEQ ID NO: 47. После введения вектора, культивирование проводили в течение 7 суток в окружающей среде с 37°С, 125 об./мин. и 8% CO₂. Затем, культуру собирали, и слитый белок очищали от нее. Очищенный слитый белок обозначали «mGI101».

II. Получение и культивирование NK-клеток

Пример получения 1. Выделение CD3(-)CD56(+) естественных клеток-киллеров, происходящих из мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС)

Для получения CD3(-) клеток число РВМС (мононуклеарные клетки периферической крови, Zen-Bio. Inc, NC 27709, США, кат. №: SER-PBMC-200-F) подсчитывали с использованием автоматического счетчика клеток ADAM-MC2 (NanoEnTek, приобретенный у Cosmo Genetech Co., Ltd.). РВМС переносили в новую пробирку и затем центрифугировали при 300 х g в течение 5 минут при температуре 4°С. 0,5% (об./об.) бычьего сывороточного альбумина (BSA - от англ. bovine serum albumin) и 2 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) включали в PBS для получения буфера MACS (рН 7,2). После завершения центрифугирования осадок клеток обрабатывали 80 мкл буфера MACS и 20 мкл магнитных шариков с CD3 (Miltenyi biotech, 130-050-101) на 1×10⁷ клеток для суспендирования и затем приводили во взаимодействие при температуре 4°С в течение 15 минут.10 мл буфера MACS добавляли для промывки и центрифугировали при 300 х g в течение 10 минут при температуре 4°С, и затем осадок клеток ресуспендировали в 0,5 мл буфера MACS.

2 мл буфера MACS сначала наливали в колонку LD (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия, кат. №: 130-042-901), и затем наливали клеточную суспензию. Затем, получали CD3(-) клетки, проходящие через колонку LD. При этом, CD3(-) клетки получали посредством протекания 2 мл буфера MACS три раза таким образом, чтобы можно было достаточно отделить клетки, остающиеся в колонке LD. Полученные CD3(-) клетки подсчитывали с использованием счетчика клеток и затем помещали в новую пробирку и центрифугировали при 300 х g в течение 5 минут при температуре 4°С. Затем, супернатант удаляли, и затем 80 мкл буфера MACS и 20 мкл магнитных шариков с CD56 (Miltenyi biotech, кат. №: 130-050-401) добавляли на 1×10⁷ клеток с последующим взаимодействием при температуре 4°С в течение 15 минут. 10 мл буфера MACS добавляли для промывки и центрифугировали при 300 х g в течение 10 минут при температуре 4°С, и затем осадок клеток ресуспендировали в 0,5 мл буфера MACS.

Сначала 3 мл буфера MACS наливали в колонку LS (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия, кат. №: 130-042-901), и затем наливали суспензию клеток. При этом, 2 мл буфера MACS три раза наливали таким образом, чтобы клетки, остающиеся в колонке LS, можно было достаточным образом отделить. Затем, после отделения колонки LS от магнитного держателя, добавляли 5 мл буфера MACS, и давление прикладывали посредством поршня с получением CD3(-)CD56(+) естественных клеток-киллеров. Полученные CD3(-)CD56(+) естественные клетки-киллеры помещали в новую пробирку и центрифугировали при 300 х g в течение 5 минут при температуре 4°С. После удаления супернатанта клетки суспендировали в культуральных средах, и число суспендированных клеток измеряли с использованием счетчика клеток.

Пример получения 2. Культивирование и получение CD3-CD56+ естественных клеток-киллеров 100 мкл CD335 (NKp46)-биотина и 100 мкл CD2-биотина, включенных в набор для активации/размножения NK-клеток (кат. №: 130-112-968) (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Германия), помещали в микропробирку, объемом 1,5 мл, и перемешивали. Добавляли 500 мкл частиц с антителами против биотина MACSiBead и перемешивали. Затем, добавляли 300 мкл буфера MACS и перемешивали при 2°С - 8°С в течение 2 часов с использованием ротора для микропробирок.

Затем, 5 мкл шариков для активации NK на 1×10⁶ клеток переносили в новую пробирку. 1 мл PBS добавляли и центрифугировали при 300 х g в течение 5 минут. После удаления супернатанта среду RPMI1640 с добавлением 5%-ной сыворотки АВ человека (кат.№: H4522)(Sigma, St. Louis, Missouri, США), подлежащую использованию, добавляли из расчета 5 мкл на 106 NK-клеток и суспендировали шарики с последующей инокуляцией в CD3(-)CD56(+) естественные клетки-киллеры, выделенные в Примере получения 1.

Далее, CD3-CD56+ естественные клетки-киллеры засевали в 24-луночный планшет, и туда добавляли среду RPMI1640, в которую добавляли 5%-ную сыворотку АВ человека (кат. №:Н4522) (Sigma, St. Louis, Missouri, США), и rhIL-2 (500 МЕд/мл) с последующей культивацией в условиях 37°С и 5% CO₂. Затем, число клеток определяли каждые 2 суток для субкультивирования в следующем порядке: 12-луночный планшет, 6-луночный планшет и колба 25Т, когда клетки занимали 80% или больше сосуда для культивирования (конфлюентность), и, в конечном итоге, все клетки собирали в сутки 21.

Пример получения 3. Культивирование и сбор естественных клеток-киллеров мышиного происхождения

Пример получения 3.1. Получение клеток селезенки и костного мозга мыши

Для получения естественных клеток-киллеров мышиного происхождения сначала получали клетки селезенки и костный мозг мыши. В частности, селезенку и бедренную кость выделяли из самок Balb/c в возрасте 6 недель (ORIENT BIO Inc.), и удаляли жир и мышцы, насколько возможно, одновременно, стараясь не сломать бедренную кость. Выделенную бедренную кость помещали в 70%-ный этанол с последующим помещением в пробирку, объемом 50 мл, содержащую 5 мл PBS, и селезенку сразу переносили в пробирку, объемом 50 мл, содержащую 5 мл PBS, и затем хранили на льду. 70 мкм сетчатым фильтром перекрывали пробирку, объемом 50 мл, содержащую 5 мл буфера FACS (от англ. fluorescence-activated cell sorting - сортировка клеток с активированной флуоресценцией), и готовили для селезенки и костного мозга, соответственно. Состав буфера FACS А представляет собой такой, как описано ниже в Таблице 1.

После раздавливания ткани рукояткой поршня шприца 5 мл буфера FACS А добавляли для сбора клеток. Затем, проводили центрифугирование при 1300 об./мин. в течение 5 минут при 4°С, и супернатант удаляли. Селезенку растворяли посредством 3 мл лизирующего буфера АСК для удаления красных кровяных клеток и затем инкубировали на льду в течение 3 минут.Спустя 3 минуты, добавляли буфер FACS А с получением общего объема 20 мл. Полученный продукт перемешивали на вибромешалке и затем центрифугировали при 1300 об./мин. в течение 5 минут при 4°С, и супернатант удаляли. Красные клетки крови удаляли посредством повторения указанного выше процесса до тех пор, пока цвет осадка не станет розовым, и растворяли посредством 10 мл буфера FACS А для подсчета клеток.

Обе стороны бедренной кости на сетчатом фильтрее 70 мкм для костного мозга разрезали, и буфер FACS А заливали в отверстия кости с использованием иглы 1 мл шприца, заполненного 10 мл буфера FACS А, одновременно двигая назад и вперед, и затем также клетки собирали при одновременной заливки буфера FACS А в нарезанную ткань. Клетки собирали, и затем центрифугировали при 1300 об./мин. в течение 5 минут при 4°С. Затем, супернатант удаляли и растворяли 10 мл буфера FACS А с последующим подсчетом клеток.

Пример получения 3.2. Выделение и культивирование мышиных NK-клеток

Используя набор для выделения NK-клеток (#130-115-818), NK-клетки выделяли из селезенки и костного мозга, которые выделяли из самки мыши Balb/c 6-недельного возраста (ORIENT BIO Inc.) в Примере получения 3.1, указанном выше. После выделения проводили центрифугирование при 1300 х g при 4°С, и удаляли супернатант.

40 мкл буфера MACS на 107 клеток (600 мкл в случае селезенки, 200 мкл в случае костного мозга) добавляли для ресуспендирования осадка клеток, и добавляли 40 мкл смеси NK-клеток на 107 клеток (150 мкл для селезенки, 50 мкл для костного мозга). Однако, в данном случае, более чем 5×10⁷ клеток демонстрировали явление агрегирования, таким образом, их разделяли и смешивали. Затем, проводили центрифугирование при 300 х g при 4°С, и удаляли супернатант.

Добавляли 2 мл промывочного буфера на 107 клеток (30 мл для селезенки, 10 мл для костного мозга), промывали, центрифугировали при 4°С при 300 х g, и удаляли супернатант. Затем, добавляли 80 мкл буфера MACS на 107 клеток (1,2 мл для селезенки, 400 мкл для костного мозга), и затем добавляли 20 мкл микрошариков с антителами против биотина на 107 клеток (300 мкл для селезенки, 100 мкл для костного мозга), смешивали и культивировали в холодильнике в течение 10 минут.

500 мкл клеток, смешанных с микрошариками с антителами против биотина, наливали в колонку MS с получением супернатанта, который проходил через колонку. Такой же процесс повторяли с получением супернатанта, который проходил через колонку, и центрифугировали при 4°С при 300 х g. Затем, супернатант удаляли. Клетки подсчитывали посредством ресуспендирования в среде GC-RPMI (1х) (селезенка: 6,95×10⁵/мл с жизнеспособностью 59%, костный мозг: 1,58×10⁶/мл с жизнеспособностью 64%). Состав среды GC-RPMI представляет собой такой, как описано в нижеуказанной Таблице 2.

После посева 3,5×10⁵ NK-клеток, выделенных из селезенки и костного мозга в 60 мм сосуде для культивирования, 50 нг/мл rmIL-2 обрабатывали и культивировали в течение 14 суток.

III. Получение раковых клеток и конструирование мышиной модели Пример получения 4. Получение линии клеток карциномы, происходящей из человека, и среды для ее культивирования

Культуральный раствор, подходящий для каждой линии раковых клеток, использовали со ссылкой на указанную ниже Таблицу 3.

В частности, 2×10⁶ клеток линий раковых клеток ресуспендировали в 8 мл каждого культурального раствора и культивировали в колбе 25Т. При выделении клеток 1 мл трипсина-ЭДТА (0,25%) подвергали обработке и затем проводили реакцию в 5% CO₂ в течение 2 минут в отношении клеток адгезивного типа. Затем, 5 мл культурального раствора добавляли для выделения клеток, которые отсоединялись от колбы, и центрифугировали при 300 x g течение 5 минут.

В указанной ниже Таблице 4 показаны конкретные составы культурального раствора для каждой линии раковых клеток.

Пример получения 5. Получение линии клеток карциномы мышиного происхождения и среды для ее культивирования

CT26.WT, клетки карциномы толстой кишки Mus musculus (домовая мышь) приобретали из АТСС (от англ. American Type Culture Collection - Американская коллекция типовых культур, США) (Таблица 5). Клетки карциномы, подлежащие использованию в эксперименте, размораживали, помещали в колбу для культивирования клеток и культивировали при 37°С, в инкубаторе 5% CO₂ (МСО-170М, Panasonic, Япония). Клетки, культивируемые в сутки трансплантации линии клеток, помещали в центрифужную пробирку и собирали, и затем центрифугировали при 125 х g в течение 5 минут для удаления супернатанта. Затем, PBS добавляли для получения клеточной суспензии (5×10⁷ клеток/мл), дозировали на аликвоты для 9 мышей и хранили на льду до введения.

Фетальную телячью сыворотку (FBS; 16000-044, Thermofisher scientific, США), пенициллин-стрептомицин (10000 единиц/мл пенициллина и 10000 мкг/мл стрептомицина; 15140122, Thermofisher scientific, США) и RPMI1640 (А1049101, Thermofisher scientific, США) смешивали для получения композиции, описанной в нижеуказанной Таблице 6, на 100 мл и использовали в качестве среды для клеток карциномы.

Пример получения 6. Получение мышиной модели карциномы Пример получения 6.1. Карантин и процесс акклиматизации экспериментальной мыши

36 самок мышей BALB/c в возрасте 12 недель приобретали у ORIENT BIO Inc. Мышей приносили в лабораторию для животных и подвергали акклиматизации в течение 5 суток перед использованием в эксперименте. При получении мыши их оценивали в отношении внешнего вида и взвешивали для измерения массы тела. За общими симптомами наблюдали один раз в сутки на протяжении периода акклиматизации в течение 5 суток, и массу тела измеряли в конце периода акклиматизации, и затем общие симптомы и изменения массы проверяли для оценки для оценки состояния здоровья мышей. Мышей с патологией безболезненно умерщвляли при анестезии на основе газа CO₂.

Информация о лабораторных мышах кратко изложена и показана ниже в Таблице 7.

Пример получения 6.2. Трансплантация линии клеток карциномы

Для модели ингибирования роста опухоли массу тела измеряли на следующие сутки после конца карантина и периода акклиматизации, и затем суспензию клеток СТ26 (5×10⁵ клеток/0,1 мл), полученную для здоровых животных, дозировали, наполняли ими одноразовый шприц и вводили подкожно (0,1 мл/голова) в правую часть спины мыши для трансплантации. За общими симптомами наблюдали один раз в сутки на протяжении приживления трансплантата и периода роста после трансплантации линии клеток.

Пример получения 6.3. Распределение по группам мышиных моделей ингибирования роста опухоли

После определенного периода трансплантации клеток СТ26 объем опухоли и массу тела измеряли для мышей без патологического состояния здоровья и делили на 4 группы (9 мышей на группу) таким образом, что среднее каждой группы достигало 50 мм³.

IV. Определение противораковой активности NK-клеток и димера слитого белка: In vitro

Пример 1. Определение эффекта ингибирования роста раковых клеток NK-клетками и/или димером слитого белка в отношении разных карцином

Ссылаясь на схему планшета, используемую для 96-луночного планшета, 50 мкл 0,01%-ного раствора поли-L-орнитина (кат. №. Р4957) (Sigma Aldrich, США), соответственно, дозировали в лунку и осуществляли покрытие. Затем, его оставляли при комнатной температуре на 1 час. Спустя 1 час, дозированный 0,01%-ный раствор поли-L-орнитина удаляли и полностью сушили при комнатной температуре в течение 1 часа. 2 мкл темно-красного красителя CELLTRACKER™ (кат. №С34565) (Thermo Scientific, Waltham, MA, США) добавляли к раковым клеткам (клетка-мишень), полученными в количестве 4×10⁵ клеток/мл, и давали взаимодействовать в течение 60 минут при 37°С и в условиях 5% CO₂.

После реакции полученный в результате продукт центрифугировали при 300 x g в течение 5 минут.Супернатант удаляли, и затем растворяли в культуральном растворе RPMI1640 + 5% hABS до 4×10⁵ клеток/мл. 50 мкл полученных раковых клеток дозировали в лунку в покрытом 96-луночном планшете, соответственно. Затем, поученный планшет помещали в систему анализа живых клеток INCUCYTE® (Satorius, Германия), и затем давали стабилизироваться в течение 10 минут.Культуральный раствор, содержащий тестируемый материал, получали в RPMI1640 + 5% hABS со ссылкой на указанную ниже Таблицу 8.

Естественные клетки-киллеры (эффекторные клетки) получали посредством суспендирования в культуральном растворе RPMI1640 + 5% hABS до 4×10⁵ клеток/мл. Ссылаясь на указанную ниже Таблицу 9, естественные клетки-киллеры, полученные в примерах Получения 1 и 2, добавляли в каждую лунку в планшете, имеющую дозированные раковые клетки, и затем добавляли 100 мкл культурального раствора, обработанного INCUCYTE® CytoTox (250 нМ).

Затем, его помещали в систему анализа живых клеток INCUCYTE® и анализировали в течение 3 суток с временным интервалом 30 минут.

Пример 1.1. Определение эффективности димера слитого белка в отдельности в присутствии раковой клетки-мишени без NK-клетки

Как описано выше в Примере 1, наблюдали, что соответствующий тестируемый материал GI-101 и CD80-Fc+Fc-IL2v2 значимо не влиял на жизнеспособность раковых клеток при культивировании клеточных линий для разных типов рака (клеточные линии К562, MDA-MB-231, НСТ-116 и А549) в присутствии раковых клеток-мишеней в отдельности без NK-клеток (см. Таблица 9, отношение Е/Т равно 0/1) (Фиг. 8-11).

Пример 1.2. Эффект ингибирования пролиферации раковых клеток NK-клетками и димером слитого белка в отношении клетки K562 (лимфобласт)

Подтверждали способность уничтожения раковых клеток естественными клетками-киллерами в клеточной линии K562, линии раковых клеток лейкоза. В частности, подтверждали жизнеспособность раковых клеток в соответствии с обработкой тестируемым материалом GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 в качестве материала комбинации при совместном культивировании линий клеток K562 в качестве клеток-мишеней (Т) и естественных клеток-киллеров в качестве эффекторных клеток (Е) при отношении Е/Т, равном 1/3, 1/1, 3/1 и 10/1, соответственно.

Результат показал, что при уничтожении раковых клеток K562, обработка GI-101 в качестве материала комбинации с естественной клеткой-киллером, который является формой слитого белка IL2-Fc-CD80, ингибировала жизнеспособность раковых клеток, более, чем обработка CD80-Fc+Fc-IL2v2 (Фиг. 16 - 19).

Пример 1.3. Эффект ингибирования пролиферации раковых клеток NK-клеткой и димером слитого белка в отношении клетки MDA-MB231

Подтверждали способность естественных клеток-киллеров уничтожать раковые клетки в линии клеток MDA-MB231, линии клеток рака молочной железы. В частности, подтверждали жизнеспособность раковых клеток в соответствии с обработкой тестируемым материалом GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 в качестве материала комбинации при совместном культивировании линий клеток MDA-MB231 в качестве клеток-мишеней (Т) и естественных клеток-киллеров в качестве эффекторных клеток (Е) при отношении Е/Т, равном 1/3, 1/1, 3/1 и 10/1, соответственно.

Результат показал, что при уничтожении раковых клеток MDA-MB231 обработка GI-101 в качестве материала комбинации с естественной клеткой-киллером, который является формой слитого белка IL2-Fc-CD80, ингибировала жизнеспособность раковых клеток больше, чем обработка CD80-Fc+Fc-IL2v2 (Фиг. 16- 19).

Пример 1.4. Эффект ингибирования пролиферации раковых клеток NK-клеткой и димером слитого белка в отношении клетки НСТ-116

Подтверждали способность естественных клеток-киллеров уничтожать раковые клетки в линии клеток НСТ-116, линии клеток рака толстой кишки. В частности, подтверждали жизнеспособность раковых клеток в соответствии с обработкой тестируемым материалом GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 в качестве материала комбинации при совместном культивировании линий клеток НСТ-116 в качестве клеток-мишеней (Т) и естественных клеток-киллеров в качестве эффекторных клеток (Е) при отношении Е/Т, равном 1/3, 1/1, 3/1 и 10/1, соответственно.

Результат показал, что при уничтожении раковых клеток НСТ-116 обработка GI-101 в качестве материала комбинации с естественной клеткой-киллером, который является формой слитого белка IL2-Fc-CD80, ингибировала жизнеспособность раковых клеток больше, чем обработка CD80-Fc+Fc-IL2v2 (Фиг. 20 - 23).

Пример 1.5. Эффект ингибирования пролиферации раковых клеток NK-клеткой и димером слитого белка в отношении клетки А549

Подтверждали способность естественных клеток-киллеров уничтожать раковые клетки в линии клеток А549, линии клеток рака толстой кишки. В частности, подтверждали жизнеспособность раковых клеток в соответствии с обработкой тестируемым материалом GI-101 или CD80-Fc+Fc-IL2v2 в качестве материала комбинации при совместном культивировании линий клеток А549 в качестве клеток-мишеней (Т) и естественных клеток-киллеров в качестве эффекторных клеток (Е) при отношении Е/Т, равном 1/3, 1/1, 3/1 и 10/1, соответственно.

Результат показал, что при уничтожении раковых клеток А549 обработка GI-101 в качестве материала комбинации с естественной клеткой-киллером, который является формой слитого белка IL2-Fc-CD80, ингибировала жизнеспособность раковых клеток больше, чем обработка CD80-Fc+Fc-IL2v2 (Фиг. 24 - 27).

V. Определение способности NK-клетки и димера слитого белка уничтожать раковые клетки в мышиной модели карциномы: In vivo

Пример 2. Введение mGI-101 и NK-клетки

В случае мышиной модели карциномы, mGI-101, полученный в Примере получения 4, вводили внутрибрюшинным путем, и NK-клетки мышиного происхождения, полученные в Примере получения 3, вводили внутривенным путем. Введение проводили в общей сложности три раза один раз в сутки введения (сутки 6, сутки 10 и сутки 13 после трансплантации опухоли) с использованием одноразового шприца (31G, 1 мл). В случае модели ингибирования роста опухоли, как показано ниже в Таблице 10, клетки, подлежащие введению, и дозы введения четырех групп отличались (Фиг. 28).

Пример 3. Измерение объема опухоли мышиной модели карциномы

Максимальную длину (L) и перпендикулярную ширину (W) опухоли измеряли два раза в неделю с использованием цифрового штангенциркуля (mitutoyo, Япония) и применяли для Уравнения 1, указанного ниже, для расчета объема опухоли (TV-от англ. tumor volume).

Уравнение 1

TV (мм³)=W×W×L×0,5

Процент ингибирования роста опухоли рассчитывали посредством использования следующего уравнения 2:

Уравнение 2

Ингибирование роста опухоли (%)=(1-(Ti-T0)/(Vi-V0))×100

Ti = объем опухоли перед введением в опытной группе

Т0 = объем опухоли после введения в опытной группе

Vi = объем опухоли перед введением в контрольной группе

V0 = объем опухоли после введения в контрольной группе

Объем опухоли каждого индивида перед введением устанавливали как значение, измеренное в момент разделения на группы.

Пример 4. Определение эффекта ингибирования роста опухоли в мышиной модели трансплантируемой карциномы СТ26

Пример 4.1. Измерение объема опухоли

Суспензию клеток рака толстой и прямой кишки СТ26 (5×10⁵ клеток/0,1 мл), полученную для здоровых мышей Balb/c, отмеряли, и полученным раствором наполняли одноразовый шприц и вводили подкожно (0,1 мл/голова) в правую часть спины животного для трансплантации. После трансплантации опухоли лекарственные средства, показанные в Таблице 10, вводили, соответственно. Затем, размер опухоли измеряли в сутки 10, сутки 13 и сутки 17. Рост опухоли был ингибирован в группах, обработанных естественными клетками-киллерами (NK-клетками) или только mGI-101, по сравнению с контрольной группой (носитель). Рост опухоли ингибировался в группе, обрабатываемой естественной клеткой-киллером (NK-клетка) в комбинации с mGI-101, по сравнению с контрольной группой (носитель). Рост опухоли группы, обрабатываемой естественными клетками-киллерами в комбинации с mGI-101, ингибировался, по сравнению с группами, обрабатываемыми естественными клетками-киллерами или mGI-101 в отдельности (Фиг. 29).

Пример 4.2. Анализ ингибирования роста опухоли

Степень ингибирования роста опухоли рассчитывали в конце эксперимента (после трансплантации опухоли, сутки 17), по сравнению с сутками обработки лекарственным средством 1 (после трансплантации опухоли, сутки 10). В контрольной группе (носитель) было 3 мыши, имеющих степень ингибирования роста опухоли 30% или больше, 3 мыши, имеющих степень ингибирования роста опухоли 50% или больше, и 2 мыши, имеющих степень ингибирования роста опухоли 80%. В группе обработки естественными клетками-киллерами было 6 мышей, имеющих степень ингибирования роста опухоли 30% или больше, 5 мышей, имеющих степень ингибирования роста опухоли 50% или больше, и 2 мыши, имеющих степень ингибирования роста опухоли 80%. В группе обработки mGI-101 было 5 мышей, имеющих степень ингибирования роста опухоли 30% или больше, 5 мышей, имеющих степень ингибирования роста опухоли 50% или больше, и 1 мышь, имеющая степень ингибирования роста опухоли 80%. В группе обработки комбинацией естественных клеток-киллеров и mGI-101, было 7 мышей, имеющих степень ингибирования роста опухоли 30% или больше, 6 мышей, имеющих степень ингибирования роста опухоли 50% или больше, и 3 мыши, имеющих степень ингибирования роста опухоли 80% (Фиг. 30). На Фиг. 30, черный столбец показывает степень ингибирования роста опухоли 30% или больше, светло-серый столбец показывает степень ингибирования роста опухоли 50% или больше и темно-серый столбец показывает степень ингибирования роста опухоли 80% или больше.

Пример 4.3. Измерение объема опухоли для отдельных лабораторных животных

В каждой экспериментальной группе определяли рост опухоли отдельных лабораторных животных. В частности, определяли рост опухоли отдельных лабораторных животных в контрольной группе (носитель), группах обработки естественными клетками-киллерами (NK-клетками), mGI-101 и естественными клетками-киллерами + mGI-101, и он показан на Фиг. 31. На Фиг. 31 пунктирная линия показывает размер опухоли 500 мм³ и сплошная линия показывает размер опухоли 250 мм³.

Более конкретно, определяли степень роста опухоли отдельных лабораторных животных контрольной группы, и она показана на Фиг. 32, и определяли степень роста опухоли отдельных лабораторных животных группы обработки естественными клетками-киллерами, и она показана на Фиг 33. Кроме того, определяли степень роста опухоли отдельных лабораторных животных группы обработки mGI-101, и она показана на Фиг. 34, и определяли степень роста опухоли отдельных лабораторных животных группы обработки комбинацией естественных клеток-киллеров и mGI-101, и она показана на Фиг. 35.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> GI CELL, INC.

<120> КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОТИВОРАКОВОГО ЛЕЧЕНИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ NK-КЛЕТКИ И СЛИТЫЙ

БЕЛОК, КОТОРЫЙ СОДЕРЖИТ БЕЛОК IL-2 И БЕЛОК CD80

<130> PF-B2649

<140> PCT/KR2020/016949

<141> 2020-11-26

<150> 10-2019-0154631

<151> 2019-11-27

<150> 10-2020-0015802

<151> 2020-02-10

<160> 47

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 25

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> сигнальный пептид (TPA)

<400> 1

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala

20 25

<210> 2

<211> 208

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hB7-1:35-242

<400> 2

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

<210> 3

<211> 30

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир с линкером

<400> 3

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

20 25 30

<210> 4

<211> 216

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> fc иммуноглобулина

<400> 4

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

100 105 110

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met

115 120 125

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

130 135 140

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

145 150 155 160

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

165 170 175

Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val

180 185 190

Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

195 200 205

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

210 215

<210> 5

<211> 5

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> linker

<400> 5

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 6

<211> 133

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hIL-2M

<400> 6

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 7

<211> 617

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок, содержащий варианты IL-2 и фрагменты CD80

<400> 7

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala Val Ile His Val Thr Lys Glu

20 25 30

Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu

35 40 45

Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val

50 55 60

Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn

65 70 75 80

Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala

85 90 95

Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr

100 105 110

Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser

115 120 125

Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro

130 135 140

Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro

145 150 155 160

Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile

165 170 175

Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser

180 185 190

Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys Leu

195 200 205

Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr

210 215 220

Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

225 230 235 240

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly

245 250 255

Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser

260 265 270

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg

275 280 285

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

290 295 300

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

305 310 315 320

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

325 330 335

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

340 345 350

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

355 360 365

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

370 375 380

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

385 390 395 400

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

405 410 415

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

420 425 430

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

435 440 445

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala

450 455 460

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly

465 470 475 480

Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu

485 490 495

Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile

500 505 510

Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe

515 520 525

Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu

530 535 540

Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys

545 550 555 560

Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile

565 570 575

Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala

580 585 590

Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe

595 600 605

Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

610 615

<210> 8

<211> 1857

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (GI101)

<400> 8

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgat ccacgtgacc aaagaagtga aagaggtcgc cacactgtcc 120

tgcggccaca acgtttcagt ggaagaactg gcccagacca ggatctactg gcagaaagaa 180

aagaaaatgg tgctgaccat gatgtccggc gacatgaaca tctggcctga gtacaagaac 240

cggaccatct tcgacatcac caacaacctg tccatcgtga ttctggccct gaggccttct 300

gatgagggca cctatgagtg cgtggtgctg aagtacgaga aggacgcctt caagcgcgag 360

cacctggctg aagtgacact gtccgtgaag gccgactttc ccacaccttc catctccgac 420

ttcgagatcc ctacctccaa catccggcgg atcatctgtt ctacctctgg cggctttcct 480

gagcctcacc tgtcttggct ggaaaacggc gaggaactga acgccatcaa caccaccgtg 540

tctcaggacc ccgaaaccga gctgtacgct gtgtcctcca agctggactt caacatgacc 600

accaaccaca gcttcatgtg cctgattaag tacggccacc tgagagtgaa ccagaccttc 660

aactggaaca ccaccaagca agagcacttc cctgacaatg gatctggcgg cggaggttct 720

ggcggaggtg gaagcggagg cggaggatct gctgagtcta agtatggccc tccttgtcct 780

ccatgtcctg ctccagaagc tgctggcgga ccctctgtgt tcctgtttcc tccaaagcct 840

aaggaccagc tcatgatctc tcggacaccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct 900

caagaggacc ctgaggtgca gttcaattgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 960

aagaccaagc ctagagagga acagttcaac tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc 1020

gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa gagtacaagt gcaaggtgtc caacaagggc 1080

ctgccttcca gcatcgaaaa gaccatctcc aaggctaagg gccagcctag ggaaccccag 1140

gtttacaccc tgcctccaag ccaagaggaa atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc 1200

ctggtcaagg gcttctaccc ttccgacatt gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct 1260

gagaacaact acaagaccac acctcctgtg ctggactccg acggctcctt ctttctgtac 1320

tctcgcctga ccgtggacaa gtctagatgg caagagggca acgtgttctc ctgctctgtg 1380

ctgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagtccc tgtctctgtc tcttggaggt 1440

ggtggcggtt ctgcccctac cagctcctct accaagaaaa cccagctcca gttggagcat 1500

ctgctgctgg acctccagat gattctgaac gggatcaaca actataagaa ccccaagctg 1560

accgccatgc tgaccgctaa gttctacatg cccaagaagg ccaccgagct gaagcacctc 1620

cagtgcctgg aagaagaact gaagcccctg gaagaggtgc tgaatctggc ccagtccaag 1680

aacttccacc tgaggccacg ggacctgatc agcaacatca acgtgatcgt gctggaactg 1740

aagggctccg agacaacctt tatgtgcgag tacgccgacg agacagccac catcgtggaa 1800

tttctgaacc ggtggatcac cttctgccag agcatcatct ccacactgac ctgatga 1857

<210> 9

<211> 592

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (GI101)

<400> 9

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

325 330 335

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

450 455 460

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

465 470 475 480

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

485 490 495

Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

500 505 510

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

515 520 525

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

530 535 540

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

545 550 555 560

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

565 570 575

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

580 585 590

<210> 10

<211> 133

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hIL-2

<400> 10

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 11

<211> 288

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CD80

<400> 11

Met Gly His Thr Arg Arg Gln Gly Thr Ser Pro Ser Lys Cys Pro Tyr

1 5 10 15

Leu Asn Phe Phe Gln Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Ser His Phe Cys

20 25 30

Ser Gly Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu

35 40 45

Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile

50 55 60

Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp

65 70 75 80

Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr

85 90 95

Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly

100 105 110

Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg

115 120 125

Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr

130 135 140

Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile

145 150 155 160

Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu

165 170 175

Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp

180 185 190

Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met

195 200 205

Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg

210 215 220

Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro

225 230 235 240

Asp Asn Leu Leu Pro Ser Trp Ala Ile Thr Leu Ile Ser Val Asn Gly

245 250 255

Ile Phe Val Ile Cys Cys Leu Thr Tyr Cys Phe Ala Pro Arg Cys Arg

260 265 270

Glu Arg Arg Arg Asn Glu Arg Leu Arg Arg Glu Ser Val Arg Pro Val

275 280 285

<210> 12

<211> 215

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> модифицированный Fc

<400> 12

Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

1 5 10 15

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

20 25 30

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

35 40 45

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

50 55 60

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

65 70 75 80

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

85 90 95

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

100 105 110

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

115 120 125

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

130 135 140

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

145 150 155 160

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

165 170 175

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

180 185 190

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

195 200 205

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

210 215

<210> 13

<211> 306

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mCD80

<400> 13

Met Ala Cys Asn Cys Gln Leu Met Gln Asp Thr Pro Leu Leu Lys Phe

1 5 10 15

Pro Cys Pro Arg Leu Ile Leu Leu Phe Val Leu Leu Ile Arg Leu Ser

20 25 30

Gln Val Ser Ser Asp Val Asp Glu Gln Leu Ser Lys Ser Val Lys Asp

35 40 45

Lys Val Leu Leu Pro Cys Arg Tyr Asn Ser Pro His Glu Asp Glu Ser

50 55 60

Glu Asp Arg Ile Tyr Trp Gln Lys His Asp Lys Val Val Leu Ser Val

65 70 75 80

Ile Ala Gly Lys Leu Lys Val Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Leu

85 90 95

Tyr Asp Asn Thr Thr Tyr Ser Leu Ile Ile Leu Gly Leu Val Leu Ser

100 105 110

Asp Arg Gly Thr Tyr Ser Cys Val Val Gln Lys Lys Glu Arg Gly Thr

115 120 125

Tyr Glu Val Lys His Leu Ala Leu Val Lys Leu Ser Ile Lys Ala Asp

130 135 140

Phe Ser Thr Pro Asn Ile Thr Glu Ser Gly Asn Pro Ser Ala Asp Thr

145 150 155 160

Lys Arg Ile Thr Cys Phe Ala Ser Gly Gly Phe Pro Lys Pro Arg Phe

165 170 175

Ser Trp Leu Glu Asn Gly Arg Glu Leu Pro Gly Ile Asn Thr Thr Ile

180 185 190

Ser Gln Asp Pro Glu Ser Glu Leu Tyr Thr Ile Ser Ser Gln Leu Asp

195 200 205

Phe Asn Thr Thr Arg Asn His Thr Ile Lys Cys Leu Ile Lys Tyr Gly

210 215 220

Asp Ala His Val Ser Glu Asp Phe Thr Trp Glu Lys Pro Pro Glu Asp

225 230 235 240

Pro Pro Asp Ser Lys Asn Thr Leu Val Leu Phe Gly Ala Gly Phe Gly

245 250 255

Ala Val Ile Thr Val Val Val Ile Val Val Ile Ile Lys Cys Phe Cys

260 265 270

Lys His Arg Ser Cys Phe Arg Arg Asn Glu Ala Ser Arg Glu Thr Asn

275 280 285

Asn Ser Leu Thr Phe Gly Pro Glu Glu Ala Leu Ala Glu Gln Thr Val

290 295 300

Phe Leu

305

<210> 14

<211> 1848

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (mGI101)

<400> 14

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgga cgagcagctc tccaagtccg tgaaggataa ggtcctgctg 120

ccttgccggt acaactctcc tcacgaggac gagtctgagg accggatcta ctggcagaaa 180

cacgacaagg tggtgctgtc cgtgatcgcc ggaaagctga aagtgtggcc tgagtacaag 240

aacaggaccc tgtacgacaa caccacctac agcctgatca tcctgggcct cgtgctgagc 300

gatagaggca cctattcttg cgtggtgcag aagaaagagc ggggcaccta cgaagtgaag 360

cacctggctc tggtcaagct gtccatcaag gccgacttca gcacccctaa catcaccgag 420

tctggcaacc cttccgccga caccaagaga atcacctgtt tcgcctctgg cggcttccct 480

aagcctcggt tctcttggct ggaaaacggc agagagctgc ccggcatcaa taccaccatt 540

tctcaggacc cagagtccga gctgtacacc atctccagcc agctcgactt taacaccacc 600

agaaaccaca ccatcaagtg cctgattaag tacggcgacg cccacgtgtc cgaggacttt 660

acttgggaga aacctcctga ggaccctcct gactctggat ctggcggcgg aggttctggc 720

ggaggtggaa gcggaggcgg aggatctgct gagtctaagt atggccctcc ttgtcctcca 780

tgtcctgctc cagaagctgc tggcggaccc tctgtgttcc tgtttcctcc aaagcctaag 840

gaccagctca tgatctctcg gacccctgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtctcaa 900

gaggaccctg aggtgcagtt caattggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 960

accaagccta gagaggaaca gttcaactcc acctatagag tggtgtccgt gctgaccgtg 1020

ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg 1080

ccttccagca tcgaaaagac catcagcaag gctaagggcc agcctaggga accccaggtt 1140

tacaccctgc ctccaagcca agaggaaatg accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg 1200

gtcaagggct tctacccttc cgacattgcc gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag 1260

aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg gactccgacg gctccttctt tctgtactct 1320

cgcctgaccg tggacaagtc taggtggcaa gagggcaacg tgttctcctg ctctgtgctg 1380

cacgaggctc tgcacaacca ctacacccag aagtccctgt ctctgtctct tggaggtggt 1440

ggcggttctg cccctacctc cagctctacc aagaaaaccc agctccagtt ggagcatctg 1500

ctgctggacc tccagatgat cctgaatggc atcaacaatt acaagaaccc caagctgacc 1560

gccatgctga ccgctaagtt ctacatgccc aagaaggcca ccgagctgaa gcacttgcag 1620

tgcctggaag aggaactgaa gcccctggaa gaagtgctga atctggccca gtccaagaac 1680

ttccacctga ggcctaggga cctgatctcc aacatcaacg tgatcgtgct ggaactgaaa 1740

ggctccgaga caaccttcat gtgcgagtac gccgacgaga cagccaccat cgtggaattt 1800

ctgaaccggt ggatcacctt ctgccagagc atcatctcca cactgacc 1848

<210> 15

<211> 616

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (mGI101) с сигнальным пептидом

<400> 15

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala Val Asp Glu Gln Leu Ser Lys

20 25 30

Ser Val Lys Asp Lys Val Leu Leu Pro Cys Arg Tyr Asn Ser Pro His

35 40 45

Glu Asp Glu Ser Glu Asp Arg Ile Tyr Trp Gln Lys His Asp Lys Val

50 55 60

Val Leu Ser Val Ile Ala Gly Lys Leu Lys Val Trp Pro Glu Tyr Lys

65 70 75 80

Asn Arg Thr Leu Tyr Asp Asn Thr Thr Tyr Ser Leu Ile Ile Leu Gly

85 90 95

Leu Val Leu Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Ser Cys Val Val Gln Lys Lys

100 105 110

Glu Arg Gly Thr Tyr Glu Val Lys His Leu Ala Leu Val Lys Leu Ser

115 120 125

Ile Lys Ala Asp Phe Ser Thr Pro Asn Ile Thr Glu Ser Gly Asn Pro

130 135 140

Ser Ala Asp Thr Lys Arg Ile Thr Cys Phe Ala Ser Gly Gly Phe Pro

145 150 155 160

Lys Pro Arg Phe Ser Trp Leu Glu Asn Gly Arg Glu Leu Pro Gly Ile

165 170 175

Asn Thr Thr Ile Ser Gln Asp Pro Glu Ser Glu Leu Tyr Thr Ile Ser

180 185 190

Ser Gln Leu Asp Phe Asn Thr Thr Arg Asn His Thr Ile Lys Cys Leu

195 200 205

Ile Lys Tyr Gly Asp Ala His Val Ser Glu Asp Phe Thr Trp Glu Lys

210 215 220

Pro Pro Glu Asp Pro Pro Asp Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

225 230 235 240

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

245 250 255

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val

260 265 270

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr

275 280 285

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

290 295 300

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

305 310 315 320

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

325 330 335

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

340 345 350

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

355 360 365

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

370 375 380

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

385 390 395 400

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

405 410 415

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

420 425 430

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

435 440 445

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu

450 455 460

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly

465 470 475 480

Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln

485 490 495

Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn

500 505 510

Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr

515 520 525

Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu

530 535 540

Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn

545 550 555 560

Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val

565 570 575

Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp

580 585 590

Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys

595 600 605

Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

610 615

<210> 16

<211> 1437

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (GI101C1)

<400> 16

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgat ccacgtgacc aaagaagtga aagaggtcgc cacactgtcc 120

tgcggccaca acgtttcagt ggaagaactg gcccagacca ggatctactg gcagaaagaa 180

aagaaaatgg tgctgaccat gatgtccggc gacatgaaca tctggcctga gtacaagaac 240

cggaccatct tcgacatcac caacaacctg tccatcgtga ttctggccct gaggccttct 300

gatgagggca cctatgagtg cgtggtgctg aagtacgaga aggacgcctt caagcgcgag 360

cacctggctg aagtgacact gtccgtgaag gccgactttc ccacaccttc catctccgac 420

ttcgagatcc ctacctccaa catccggcgg atcatctgtt ctacctctgg cggctttcct 480

gagcctcacc tgtcttggct ggaaaacggc gaggaactga acgccatcaa caccaccgtg 540

tctcaggacc ccgaaaccga gctgtacgct gtgtcctcca agctggactt caacatgacc 600

accaaccaca gcttcatgtg cctgattaag tacggccacc tgagagtgaa ccagaccttc 660

aactggaaca ccaccaagca agagcacttc cctgacaatg gatctggcgg cggaggttct 720

ggcggaggtg gaagcggagg cggaggatct gctgagtcta agtatggccc tccttgtcct 780

ccatgtcctg ctccagaagc tgctggcgga ccctctgtgt tcctgtttcc tccaaagcct 840

aaggaccagc tcatgatctc tcggacaccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct 900

caagaggacc ctgaggtgca gttcaattgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 960

aagaccaagc ctagagagga acagttcaac tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc 1020

gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa gagtacaagt gcaaggtgtc caacaagggc 1080

ctgccttcca gcatcgaaaa gaccatctcc aaggctaagg gccagcctag ggaaccccag 1140

gtttacaccc tgcctccaag ccaagaggaa atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc 1200

ctggtcaagg gcttctaccc ttccgacatt gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct 1260

gagaacaact acaagaccac acctcctgtg ctggactccg acggctcctt ctttctgtac 1320

tctcgcctga ccgtggacaa gtctaggtgg caagagggca acgtgttctc ctgctctgtg 1380

ctgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagtccc tgtctctgtc cctgggc 1437

<210> 17

<211> 454

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (GI101C1)

<400> 17

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

325 330 335

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Leu Gly

450

<210> 18

<211> 1176

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (GI101C2)

<400> 18

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccatctc acgccgctga gtctaagtac ggccctcctt gtcctccatg tcctgctcca 120

gaagctgctg gcggaccctc tgtgttcctg tttcctccaa agcctaagga ccagctcatg 180

atctctcgga cccctgaagt gacctgcgtg gtggtggatg tgtctcaaga ggaccctgag 240

gtgcagttca attggtacgt ggacggcgtg gaagtgcaca acgccaagac caagcctaga 300

gaggaacagt tcaactccac ctacagagtg gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat 360

tggctgaacg gcaaagagta caagtgcaag gtgtccaaca agggcctgcc ttccagcatc 420

gaaaagacca tctccaaggc taagggccag cctagggaac cccaggttta caccctgcct 480

ccaagccaag aggaaatgac caagaaccag gtgtccctga cctgcctggt caagggcttc 540

tacccttccg acattgccgt ggaatgggag tccaatggcc agcctgagaa caactacaag 600

accacacctc ctgtgctgga ctccgacggc tccttctttc tgtactctcg cctgaccgtg 660

gacaagtcta ggtggcaaga gggcaacgtg ttctcctgct ctgtgctgca cgaggccctg 720

cacaatcact acacccagaa gtccctgtct ctgtctcttg gcggaggcgg aggatctgct 780

cctacctcca gctccaccaa gaaaacccag ctccagttgg agcatctgct gctggacctc 840

cagatgatcc tgaatggcat caacaattac aagaacccca agctgaccgc catgctgacc 900

gctaagttct acatgcccaa gaaggccacc gagctgaagc acctccagtg cctggaagag 960

gaactgaagc ccctggaaga agtgctgaat ctggcccagt ccaagaactt ccacctgagg 1020

cctagggacc tgatctccaa catcaacgtg atcgtgctgg aactgaaagg ctccgagaca 1080

accttcatgt gcgagtacgc cgacgagaca gccaccatcg tggaatttct gaaccggtgg 1140

atcaccttct gccagtccat catctccaca ctgacc 1176

<210> 19

<211> 367

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (GI101C2)

<400> 19

Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

20 25 30

Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

35 40 45

Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

50 55 60

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

65 70 75 80

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

85 90 95

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

100 105 110

Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

115 120 125

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn

130 135 140

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

145 150 155 160

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg

180 185 190

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

195 200 205

Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser

225 230 235 240

Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln

245 250 255

Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala

260 265 270

Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys

275 280 285

His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu

290 295 300

Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile

305 310 315 320

Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr

325 330 335

Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu

340 345 350

Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

355 360 365

<210> 20

<211> 1434

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (mGI101C1)

<400> 20

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgga cgagcagctc tccaagtccg tgaaggataa ggtcctgctg 120

ccttgccggt acaactctcc tcacgaggac gagtctgagg accggatcta ctggcagaaa 180

cacgacaagg tggtgctgtc cgtgatcgcc ggaaagctga aagtgtggcc tgagtacaag 240

aacaggaccc tgtacgacaa caccacctac agcctgatca tcctgggcct cgtgctgagc 300

gatagaggca cctattcttg cgtggtgcag aagaaagagc ggggcaccta cgaagtgaag 360

cacctggctc tggtcaagct gtccatcaag gccgacttca gcacccctaa catcaccgag 420

tctggcaacc cttccgccga caccaagaga atcacctgtt tcgcctctgg cggcttccct 480

aagcctcggt tctcttggct ggaaaacggc agagagctgc ccggcatcaa taccaccatt 540

tctcaggacc cagagtccga gctgtacacc atctccagcc agctcgactt taacaccacc 600

agaaaccaca ccatcaagtg cctgattaag tacggcgacg cccacgtgtc cgaggacttt 660

acttgggaga aacctcctga ggaccctcct gactctggat ctggcggcgg aggttctggc 720

ggaggtggaa gcggaggcgg aggatctgct gagtctaagt atggccctcc ttgtcctcca 780

tgtcctgctc cagaagctgc tggcggaccc tctgtgttcc tgtttcctcc aaagcctaag 840

gaccagctca tgatctctcg gacccctgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtctcaa 900

gaggaccctg aggtgcagtt caattggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 960

accaagccta gagaggaaca gttcaactcc acctatagag tggtgtccgt gctgaccgtg 1020

ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg 1080

ccttccagca tcgaaaagac catcagcaag gctaagggcc agcctaggga accccaggtt 1140

tacaccctgc ctccaagcca agaggaaatg accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg 1200

gtcaagggct tctacccttc cgacattgcc gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag 1260

aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg gactccgacg gctccttctt tctgtactct 1320

cgcctgaccg tggacaagtc taggtggcaa gagggcaacg tgttctcctg ctctgtgctg 1380

cacgaggctc tgcacaacca ctacacccag aagtccctgt ctctgtccct gggc 1434

<210> 21

<211> 478

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (mGI101C1)

<400> 21

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala Val Asp Glu Gln Leu Ser Lys

20 25 30

Ser Val Lys Asp Lys Val Leu Leu Pro Cys Arg Tyr Asn Ser Pro His

35 40 45

Glu Asp Glu Ser Glu Asp Arg Ile Tyr Trp Gln Lys His Asp Lys Val

50 55 60

Val Leu Ser Val Ile Ala Gly Lys Leu Lys Val Trp Pro Glu Tyr Lys

65 70 75 80

Asn Arg Thr Leu Tyr Asp Asn Thr Thr Tyr Ser Leu Ile Ile Leu Gly

85 90 95

Leu Val Leu Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Ser Cys Val Val Gln Lys Lys

100 105 110

Glu Arg Gly Thr Tyr Glu Val Lys His Leu Ala Leu Val Lys Leu Ser

115 120 125

Ile Lys Ala Asp Phe Ser Thr Pro Asn Ile Thr Glu Ser Gly Asn Pro

130 135 140

Ser Ala Asp Thr Lys Arg Ile Thr Cys Phe Ala Ser Gly Gly Phe Pro

145 150 155 160

Lys Pro Arg Phe Ser Trp Leu Glu Asn Gly Arg Glu Leu Pro Gly Ile

165 170 175

Asn Thr Thr Ile Ser Gln Asp Pro Glu Ser Glu Leu Tyr Thr Ile Ser

180 185 190

Ser Gln Leu Asp Phe Asn Thr Thr Arg Asn His Thr Ile Lys Cys Leu

195 200 205

Ile Lys Tyr Gly Asp Ala His Val Ser Glu Asp Phe Thr Trp Glu Lys

210 215 220

Pro Pro Glu Asp Pro Pro Asp Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

225 230 235 240

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

245 250 255

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val

260 265 270

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr

275 280 285

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

290 295 300

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

305 310 315 320

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

325 330 335

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

340 345 350

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

355 360 365

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

370 375 380

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

385 390 395 400

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

405 410 415

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

420 425 430

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

435 440 445

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu

450 455 460

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

465 470 475

<210> 22

<211> 133

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> варианты IL-2 (3M, M45)

<400> 22

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Ala Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 23

<211> 133

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> варианты IL-2 (3M, M61)

<400> 23

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 24

<211> 133

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> варианты IL-2 (3M, M72)

<400> 24

Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His

1 5 10 15

Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys

20 25 30

Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys

35 40 45

Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys

50 55 60

Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Gly Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu

65 70 75 80

Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu

85 90 95

Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala

100 105 110

Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile

115 120 125

Ile Ser Thr Leu Thr

130

<210> 25

<211> 1851

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (GI102-M45)

<400> 25

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgat ccacgtgacc aaagaagtga aagaggtcgc cacactgtcc 120

tgcggccaca acgtttcagt ggaagaactg gcccagacca ggatctactg gcagaaagaa 180

aagaaaatgg tgctgaccat gatgtccggc gacatgaaca tctggcctga gtacaagaac 240

cggaccatct tcgacatcac caacaacctg tccatcgtga ttctggccct gaggccttct 300

gatgagggca cctatgagtg cgtggtgctg aagtacgaga aggacgcctt caagcgcgag 360

cacctggctg aagtgacact gtccgtgaag gccgactttc ccacaccttc catctccgac 420

ttcgagatcc ctacctccaa catccggcgg atcatctgtt ctacctctgg cggctttcct 480

gagcctcacc tgtcttggct ggaaaacggc gaggaactga acgccatcaa caccaccgtg 540

tctcaggacc ccgaaaccga gctgtacgct gtgtcctcca agctggactt caacatgacc 600

accaaccaca gcttcatgtg cctgattaag tacggccacc tgagagtgaa ccagaccttc 660

aactggaaca ccaccaagca agagcacttc cctgacaatg gatctggcgg cggaggttct 720

ggcggaggtg gaagcggagg cggaggatct gctgagtcta agtatggccc tccttgtcct 780

ccatgtcctg ctccagaagc tgctggcgga ccctctgtgt tcctgtttcc tccaaagcct 840

aaggaccagc tcatgatctc tcggacaccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct 900

caagaggacc ctgaggtgca gttcaattgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 960

aagaccaagc ctagagagga acagttcaac tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc 1020

gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa gagtacaagt gcaaggtgtc caacaagggc 1080

ctgccttcca gcatcgaaaa gaccatctcc aaggctaagg gccagcctag ggaaccccag 1140

gtttacaccc tgcctccaag ccaagaggaa atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc 1200

ctggtcaagg gcttctaccc ttccgacatt gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct 1260

gagaacaact acaagaccac acctcctgtg ctggactccg acggctcctt ctttctgtac 1320

tctcgcctga ccgtggacaa gtctagatgg caagagggca acgtgttctc ctgctctgtg 1380

ctgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagtccc tgtctctgtc tcttggaggt 1440

ggtggcggtt ctgcccctac cagctcctct accaagaaaa cccagctcca gttggagcat 1500

ctgctgctgg acctccagat gattctgaac gggatcaaca actataagaa ccccaagctg 1560

accgccatgc tgaccgctaa gttcgccatg cccaagaagg ccaccgagct gaagcacctc 1620

cagtgcctgg aagaagaact gaagcccctg gaagaggtgc tgaatctggc ccagtccaag 1680

aacttccacc tgaggccacg ggacctgatc agcaacatca acgtgatcgt gctggaactg 1740

aagggctccg agacaacctt tatgtgcgag tacgccgacg agacagccac catcgtggaa 1800

tttctgaacc ggtggatcac cttctgccag agcatcatct ccacactgac c 1851

<210> 26

<211> 592

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (GI102-M45)

<400> 26

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

325 330 335

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

450 455 460

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

465 470 475 480

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

485 490 495

Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Ala Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

500 505 510

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

515 520 525

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

530 535 540

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

545 550 555 560

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

565 570 575

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

580 585 590

<210> 27

<211> 1851

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (GI102-M61)

<400> 27

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgat ccacgtgacc aaagaagtga aagaggtcgc cacactgtcc 120

tgcggccaca acgtttcagt ggaagaactg gcccagacca ggatctactg gcagaaagaa 180

aagaaaatgg tgctgaccat gatgtccggc gacatgaaca tctggcctga gtacaagaac 240

cggaccatct tcgacatcac caacaacctg tccatcgtga ttctggccct gaggccttct 300

gatgagggca cctatgagtg cgtggtgctg aagtacgaga aggacgcctt caagcgcgag 360

cacctggctg aagtgacact gtccgtgaag gccgactttc ccacaccttc catctccgac 420

ttcgagatcc ctacctccaa catccggcgg atcatctgtt ctacctctgg cggctttcct 480

gagcctcacc tgtcttggct ggaaaacggc gaggaactga acgccatcaa caccaccgtg 540

tctcaggacc ccgaaaccga gctgtacgct gtgtcctcca agctggactt caacatgacc 600

accaaccaca gcttcatgtg cctgattaag tacggccacc tgagagtgaa ccagaccttc 660

aactggaaca ccaccaagca agagcacttc cctgacaatg gatctggcgg cggaggttct 720

ggcggaggtg gaagcggagg cggaggatct gctgagtcta agtatggccc tccttgtcct 780

ccatgtcctg ctccagaagc tgctggcgga ccctctgtgt tcctgtttcc tccaaagcct 840

aaggaccagc tcatgatctc tcggacaccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct 900

caagaggacc ctgaggtgca gttcaattgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 960

aagaccaagc ctagagagga acagttcaac tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc 1020

gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa gagtacaagt gcaaggtgtc caacaagggc 1080

ctgccttcca gcatcgaaaa gaccatctcc aaggctaagg gccagcctag ggaaccccag 1140

gtttacaccc tgcctccaag ccaagaggaa atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc 1200

ctggtcaagg gcttctaccc ttccgacatt gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct 1260

gagaacaact acaagaccac acctcctgtg ctggactccg acggctcctt ctttctgtac 1320

tctcgcctga ccgtggacaa gtctagatgg caagagggca acgtgttctc ctgctctgtg 1380

ctgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagtccc tgtctctgtc tcttggaggt 1440

ggtggcggtt ctgcccctac cagctcctct accaagaaaa cccagctcca gttggagcat 1500

ctgctgctgg acctccagat gattctgaac gggatcaaca actataagaa ccccaagctg 1560

accgccatgc tgaccgctaa gttctacatg cccaagaagg ccaccgagct gaagcacctc 1620

cagtgcctgg aaagggaact gaagcccctg gaagaggtgc tgaatctggc ccagtccaag 1680

aacttccacc tgaggccacg ggacctgatc agcaacatca acgtgatcgt gctggaactg 1740

aagggctccg agacaacctt tatgtgcgag tacgccgacg agacagccac catcgtggaa 1800

tttctgaacc ggtggatcac cttctgccag agcatcatct ccacactgac c 1851

<210> 28

<211> 592

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (GI102-M61)

<400> 28

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

325 330 335

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

450 455 460

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

465 470 475 480

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

485 490 495

Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

500 505 510

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

515 520 525

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

530 535 540

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

545 550 555 560

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

565 570 575

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

580 585 590

<210> 29

<211> 1857

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (GI102-M72)

<400> 29

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgat ccacgtgacc aaagaagtga aagaggtcgc cacactgtcc 120

tgcggccaca acgtttcagt ggaagaactg gcccagacca ggatctactg gcagaaagaa 180

aagaaaatgg tgctgaccat gatgtccggc gacatgaaca tctggcctga gtacaagaac 240

cggaccatct tcgacatcac caacaacctg tccatcgtga ttctggccct gaggccttct 300

gatgagggca cctatgagtg cgtggtgctg aagtacgaga aggacgcctt caagcgcgag 360

cacctggctg aagtgacact gtccgtgaag gccgactttc ccacaccttc catctccgac 420

ttcgagatcc ctacctccaa catccggcgg atcatctgtt ctacctctgg cggctttcct 480

gagcctcacc tgtcttggct ggaaaacggc gaggaactga acgccatcaa caccaccgtg 540

tctcaggacc ccgaaaccga gctgtacgct gtgtcctcca agctggactt caacatgacc 600

accaaccaca gcttcatgtg cctgattaag tacggccacc tgagagtgaa ccagaccttc 660

aactggaaca ccaccaagca agagcacttc cctgacaatg gatctggcgg cggaggttct 720

ggcggaggtg gaagcggagg cggaggatct gctgagtcta agtatggccc tccttgtcct 780

ccatgtcctg ctccagaagc tgctggcgga ccctctgtgt tcctgtttcc tccaaagcct 840

aaggaccagc tcatgatctc tcggacaccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct 900

caagaggacc ctgaggtgca gttcaattgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 960

aagaccaagc ctagagagga acagttcaac tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc 1020

gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa gagtacaagt gcaaggtgtc caacaagggc 1080

ctgccttcca gcatcgaaaa gaccatctcc aaggctaagg gccagcctag ggaaccccag 1140

gtttacaccc tgcctccaag ccaagaggaa atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc 1200

ctggtcaagg gcttctaccc ttccgacatt gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct 1260

gagaacaact acaagaccac acctcctgtg ctggactccg acggctcctt ctttctgtac 1320

tctcgcctga ccgtggacaa gtctagatgg caagagggca acgtgttctc ctgctctgtg 1380

ctgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagtccc tgtctctgtc tcttggaggt 1440

ggtggcggtt ctgcccctac cagctcctct accaagaaaa cccagctcca gttggagcat 1500

ctgctgctgg acctccagat gattctgaac gggatcaaca actataagaa ccccaagctg 1560

accgccatgc tgaccgctaa gttctacatg cccaagaagg ccaccgagct gaagcacctc 1620

cagtgcctgg aagaagaact gaagcccctg gaagaggtgc tgaatggggc ccagtccaag 1680

aacttccacc tgaggccacg ggacctgatc agcaacatca acgtgatcgt gctggaactg 1740

aagggctccg agacaacctt tatgtgcgag tacgccgacg agacagccac catcgtggaa 1800

tttctgaacc ggtggatcac cttctgccag agcatcatct ccacactgac ctgatga 1857

<210> 30

<211> 592

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (GI102-M72)

<400> 30

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

325 330 335

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

450 455 460

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

465 470 475 480

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

485 490 495

Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

500 505 510

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

515 520 525

Leu Asn Gly Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

530 535 540

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

545 550 555 560

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

565 570 575

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

580 585 590

<210> 31

<211> 1851

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (GI101w)

<400> 31

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgat ccacgtgacc aaagaagtga aagaggtcgc cacactgtcc 120

tgcggccaca acgtttcagt ggaagaactg gcccagacca ggatctactg gcagaaagaa 180

aagaaaatgg tgctgaccat gatgtccggc gacatgaaca tctggcctga gtacaagaac 240

cggaccatct tcgacatcac caacaacctg tccatcgtga ttctggccct gaggccttct 300

gatgagggca cctatgagtg cgtggtgctg aagtacgaga aggacgcctt caagcgcgag 360

cacctggctg aagtgacact gtccgtgaag gccgactttc ccacaccttc catctccgac 420

ttcgagatcc ctacctccaa catccggcgg atcatctgtt ctacctctgg cggctttcct 480

gagcctcacc tgtcttggct ggaaaacggc gaggaactga acgccatcaa caccaccgtg 540

tctcaggacc ccgaaaccga gctgtacgct gtgtcctcca agctggactt caacatgacc 600

accaaccaca gcttcatgtg cctgattaag tacggccacc tgagagtgaa ccagaccttc 660

aactggaaca ccaccaagca agagcacttc cctgacaatg gatctggcgg cggaggttct 720

ggcggaggtg gaagcggagg cggaggatct gctgagtcta agtatggccc tccttgtcct 780

ccatgtcctg ctccagaagc tgctggcgga ccctctgtgt tcctgtttcc tccaaagcct 840

aaggaccagc tcatgatctc tcggacaccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct 900

caagaggacc ctgaggtgca gttcaattgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 960

aagaccaagc ctagagagga acagttcaac tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc 1020

gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa gagtacaagt gcaaggtgtc caacaagggc 1080

ctgccttcca gcatcgaaaa gaccatctcc aaggctaagg gccagcctag ggaaccccag 1140

gtttacaccc tgcctccaag ccaagaggaa atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc 1200

ctggtcaagg gcttctaccc ttccgacatt gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct 1260

gagaacaact acaagaccac acctcctgtg ctggactccg acggctcctt ctttctgtac 1320

tctcgcctga ccgtggacaa gtctagatgg caagagggca acgtgttctc ctgctctgtg 1380

ctgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagtccc tgtctctgtc tcttggaggt 1440

ggtggcggtt ctgcccctac cagctcctct accaagaaaa cccagctcca gttggagcat 1500

ctgctgctgg acctccagat gattctgaac gggatcaaca actataagaa ccccaagctg 1560

acccgcatgc tgacctttaa gttctacatg cccaagaagg ccaccgagct gaagcacctc 1620

cagtgcctgg aagaagaact gaagcccctg gaagaggtgc tgaatctggc ccagtccaag 1680

aacttccacc tgaggccacg ggacctgatc agcaacatca acgtgatcgt gctggaactg 1740

aagggctccg agacaacctt tatgtgcgag tacgccgacg agacagccac catcgtggaa 1800

tttctgaacc ggtggatcac cttctgccag agcatcatct ccacactgac c 1851

<210> 32

<211> 592

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (GI101w)

<400> 32

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

325 330 335

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

450 455 460

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

465 470 475 480

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

485 490 495

Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

500 505 510

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

515 520 525

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

530 535 540

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

545 550 555 560

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

565 570 575

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

580 585 590

<210> 33

<211> 1848

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (mGI102-M61)

<400> 33

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgga cgagcagctc tccaagtccg tgaaggataa ggtcctgctg 120

ccttgccggt acaactctcc tcacgaggac gagtctgagg accggatcta ctggcagaaa 180

cacgacaagg tggtgctgtc cgtgatcgcc ggaaagctga aagtgtggcc tgagtacaag 240

aacaggaccc tgtacgacaa caccacctac agcctgatca tcctgggcct cgtgctgagc 300

gatagaggca cctattcttg cgtggtgcag aagaaagagc ggggcaccta cgaagtgaag 360

cacctggctc tggtcaagct gtccatcaag gccgacttca gcacccctaa catcaccgag 420

tctggcaacc cttccgccga caccaagaga atcacctgtt tcgcctctgg cggcttccct 480

aagcctcggt tctcttggct ggaaaacggc agagagctgc ccggcatcaa taccaccatt 540

tctcaggacc cagagtccga gctgtacacc atctccagcc agctcgactt taacaccacc 600

agaaaccaca ccatcaagtg cctgattaag tacggcgacg cccacgtgtc cgaggacttt 660

acttgggaga aacctcctga ggaccctcct gactctggat ctggcggcgg aggttctggc 720

ggaggtggaa gcggaggcgg aggatctgct gagtctaagt atggccctcc ttgtcctcca 780

tgtcctgctc cagaagctgc tggcggaccc tctgtgttcc tgtttcctcc aaagcctaag 840

gaccagctca tgatctctcg gacccctgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtctcaa 900

gaggaccctg aggtgcagtt caattggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 960

accaagccta gagaggaaca gttcaactcc acctatagag tggtgtccgt gctgaccgtg 1020

ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg 1080

ccttccagca tcgaaaagac catcagcaag gctaagggcc agcctaggga accccaggtt 1140

tacaccctgc ctccaagcca agaggaaatg accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg 1200

gtcaagggct tctacccttc cgacattgcc gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag 1260

aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg gactccgacg gctccttctt tctgtactct 1320

cgcctgaccg tggacaagtc taggtggcaa gagggcaacg tgttctcctg ctctgtgctg 1380

cacgaggctc tgcacaacca ctacacccag aagtccctgt ctctgtctct tggaggtggt 1440

ggcggttctg cccctacctc cagctctacc aagaaaaccc agctccagtt ggagcatctg 1500

ctgctggacc tccagatgat cctgaatggc atcaacaatt acaagaaccc caagctgacc 1560

gccatgctga ccgctaagtt ctacatgccc aagaaggcca ccgagctgaa gcacttgcag 1620

tgcctggaaa gggaactgaa gcccctggaa gaagtgctga atctggccca gtccaagaac 1680

ttccacctga ggcctaggga cctgatctcc aacatcaacg tgatcgtgct ggaactgaaa 1740

ggctccgaga caaccttcat gtgcgagtac gccgacgaga cagccaccat cgtggaattt 1800

ctgaaccggt ggatcacctt ctgccagagc atcatctcca cactgacc 1848

<210> 34

<211> 616

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> слитый белок (mGI102-M61)

<400> 34

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala Val Asp Glu Gln Leu Ser Lys

20 25 30

Ser Val Lys Asp Lys Val Leu Leu Pro Cys Arg Tyr Asn Ser Pro His

35 40 45

Glu Asp Glu Ser Glu Asp Arg Ile Tyr Trp Gln Lys His Asp Lys Val

50 55 60

Val Leu Ser Val Ile Ala Gly Lys Leu Lys Val Trp Pro Glu Tyr Lys

65 70 75 80

Asn Arg Thr Leu Tyr Asp Asn Thr Thr Tyr Ser Leu Ile Ile Leu Gly

85 90 95

Leu Val Leu Ser Asp Arg Gly Thr Tyr Ser Cys Val Val Gln Lys Lys

100 105 110

Glu Arg Gly Thr Tyr Glu Val Lys His Leu Ala Leu Val Lys Leu Ser

115 120 125

Ile Lys Ala Asp Phe Ser Thr Pro Asn Ile Thr Glu Ser Gly Asn Pro

130 135 140

Ser Ala Asp Thr Lys Arg Ile Thr Cys Phe Ala Ser Gly Gly Phe Pro

145 150 155 160

Lys Pro Arg Phe Ser Trp Leu Glu Asn Gly Arg Glu Leu Pro Gly Ile

165 170 175

Asn Thr Thr Ile Ser Gln Asp Pro Glu Ser Glu Leu Tyr Thr Ile Ser

180 185 190

Ser Gln Leu Asp Phe Asn Thr Thr Arg Asn His Thr Ile Lys Cys Leu

195 200 205

Ile Lys Tyr Gly Asp Ala His Val Ser Glu Asp Phe Thr Trp Glu Lys

210 215 220

Pro Pro Glu Asp Pro Pro Asp Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

225 230 235 240

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

245 250 255

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val

260 265 270

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr

275 280 285

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

290 295 300

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

305 310 315 320

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

325 330 335

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

340 345 350

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

355 360 365

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

370 375 380

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

385 390 395 400

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

405 410 415

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

420 425 430

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

435 440 445

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu

450 455 460

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly

465 470 475 480

Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln

485 490 495

Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn

500 505 510

Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr

515 520 525

Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Arg

530 535 540

Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn

545 550 555 560

Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val

565 570 575

Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp

580 585 590

Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys

595 600 605

Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

610 615

<210> 35

<211> 153

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hIL-2 дикого типа

<400> 35

Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu

1 5 10 15

Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu

20 25 30

Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile

35 40 45

Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe

50 55 60

Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu

65 70 75 80

Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys

85 90 95

Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile

100 105 110

Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala

115 120 125

Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe

130 135 140

Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

145 150

<210> 36

<211> 158

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IL-2 с сигнальной последовательностью

<400> 36

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr

20 25 30

Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met

35 40 45

Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met

50 55 60

Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His

65 70 75 80

Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn

85 90 95

Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser

100 105 110

Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe

115 120 125

Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn

130 135 140

Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

145 150 155

<210> 37

<211> 474

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> nucleotide sequence coding IL-2 с сигнальной последовательностью

<400> 37

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgcccc taccagctcc tctaccaaga aaacccagct ccagttggag 120

catctgctgc tggacctcca gatgattctg aacgggatca acaactataa gaaccccaag 180

ctgacccgca tgctgacctt taagttctac atgcccaaga aggccaccga gctgaagcac 240

ctccagtgcc tggaagaaga actgaagccc ctggaagagg tgctgaatct ggcccagtcc 300

aagaacttcc acctgaggcc acgggacctg atcagcaaca tcaacgtgat cgtgctggaa 360

ctgaagggct ccgagacaac ctttatgtgc gagtacgccg acgagacagc caccatcgtg 420

gaatttctga accggtggat caccttctgc cagagcatca tctccacact gacc 474

<210> 38

<211> 13

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шарнир

<400> 38

Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10

<210> 39

<211> 1461

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие белок CD80-Fc

<400> 39

ggatccgcca ccatggatgc tatgctgaga ggcctgtgtt gcgtgctgct gctgtgtggc 60

gctgtgttcg tgtctccttc tcacgctgtg atccacgtga ccaaagaagt gaaagaggtc 120

gccacactgt cctgcggcca caacgtttca gtggaagaac tggcccagac caggatctac 180

tggcagaaag aaaagaaaat ggtgctgacc atgatgtccg gcgacatgaa catctggcct 240

gagtacaaga accggaccat cttcgacatc accaacaacc tgtccatcgt gattctggcc 300

ctgaggcctt ctgatgaggg cacctatgag tgcgtggtgc tgaagtacga gaaggacgcc 360

ttcaagcgcg agcacctggc tgaagtgaca ctgtccgtga aggccgactt tcccacacct 420

tccatctccg acttcgagat ccctacctcc aacatccggc ggatcatctg ttctacctct 480

ggcggctttc ctgagcctca cctgtcttgg ctggaaaacg gcgaggaact gaacgccatc 540

aacaccaccg tgtctcagga ccccgaaacc gagctgtacg ctgtgtcctc caagctggac 600

ttcaacatga ccaccaacca cagcttcatg tgcctgatta agtacggcca cctgagagtg 660

aaccagacct tcaactggaa caccaccaag caagagcact tccctgacaa tggatctggc 720

ggcggaggtt ctggcggagg tggaagcgga ggcggaggat ctgctgagtc taagtatggc 780

cctccttgtc ctccatgtcc tgctccagaa gctgctggcg gaccctctgt gttcctgttt 840

cctccaaagc ctaaggacca gctcatgatc tctcggacac ccgaagtgac ctgcgtggtg 900

gtggatgtgt ctcaagagga ccctgaggtg cagttcaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 960

gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag gaacagttca actccaccta cagagtggtg 1020

tccgtgctga ccgtgctgca ccaggattgg ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg 1080

tccaacaagg gcctgccttc cagcatcgaa aagaccatct ccaaggctaa gggccagcct 1140

agggaacccc aggtttacac cctgcctcca agccaagagg aaatgaccaa gaaccaggtg 1200

tccctgacct gcctggtcaa gggcttctac ccttccgaca ttgccgtgga atgggagtcc 1260

aatggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acacctcctg tgctggactc cgacggctcc 1320

ttctttctgt actctcgcct gaccgtggac aagtctaggt ggcaagaggg caacgtgttc 1380

tcctgctctg tgctgcacga ggccctgcac aatcactaca cccagaagtc cctgtctctg 1440

tccctgggct gatgactcga g 1461

<210> 40

<211> 479

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CD80-Fc белок

<400> 40

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala Val Ile His Val Thr Lys Glu

20 25 30

Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu

35 40 45

Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val

50 55 60

Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn

65 70 75 80

Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala

85 90 95

Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr

100 105 110

Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser

115 120 125

Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro

130 135 140

Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro

145 150 155 160

Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile

165 170 175

Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser

180 185 190

Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys Leu

195 200 205

Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr

210 215 220

Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

225 230 235 240

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly

245 250 255

Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser

260 265 270

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg

275 280 285

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

290 295 300

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

305 310 315 320

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

325 330 335

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

340 345 350

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

355 360 365

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

370 375 380

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

385 390 395 400

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

405 410 415

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

420 425 430

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

435 440 445

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala

450 455 460

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

465 470 475

<210> 41

<211> 1851

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие слитый белок (hCD80-Fc-IL2wt)

<400> 41

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgtgat ccacgtgacc aaagaagtga aagaggtcgc cacactgtcc 120

tgcggccaca acgtttcagt ggaagaactg gcccagacca ggatctactg gcagaaagaa 180

aagaaaatgg tgctgaccat gatgtccggc gacatgaaca tctggcctga gtacaagaac 240

cggaccatct tcgacatcac caacaacctg tccatcgtga ttctggccct gaggccttct 300

gatgagggca cctatgagtg cgtggtgctg aagtacgaga aggacgcctt caagcgcgag 360

cacctggctg aagtgacact gtccgtgaag gccgactttc ccacaccttc catctccgac 420

ttcgagatcc ctacctccaa catccggcgg atcatctgtt ctacctctgg cggctttcct 480

gagcctcacc tgtcttggct ggaaaacggc gaggaactga acgccatcaa caccaccgtg 540

tctcaggacc ccgaaaccga gctgtacgct gtgtcctcca agctggactt caacatgacc 600

accaaccaca gcttcatgtg cctgattaag tacggccacc tgagagtgaa ccagaccttc 660

aactggaaca ccaccaagca agagcacttc cctgacaatg gatctggcgg cggaggttct 720

ggcggaggtg gaagcggagg cggaggatct gctgagtcta agtatggccc tccttgtcct 780

ccatgtcctg ctccagaagc tgctggcgga ccctctgtgt tcctgtttcc tccaaagcct 840

aaggaccagc tcatgatctc tcggacaccc gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct 900

caagaggacc ctgaggtgca gttcaattgg tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc 960

aagaccaagc ctagagagga acagttcaac tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc 1020

gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa gagtacaagt gcaaggtgtc caacaagggc 1080

ctgccttcca gcatcgaaaa gaccatctcc aaggctaagg gccagcctag ggaaccccag 1140

gtttacaccc tgcctccaag ccaagaggaa atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc 1200

ctggtcaagg gcttctaccc ttccgacatt gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct 1260

gagaacaact acaagaccac acctcctgtg ctggactccg acggctcctt ctttctgtac 1320

tctcgcctga ccgtggacaa gtctagatgg caagagggca acgtgttctc ctgctctgtg 1380

ctgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc cagaagtccc tgtctctgtc tcttggaggt 1440

ggtggcggtt ctgcccctac cagctcctct accaagaaaa cccagctcca gttggagcat 1500

ctgctgctgg acctccagat gattctgaac gggatcaaca actataagaa ccccaagctg 1560

acccgcatgc tgacctttaa gttctacatg cccaagaagg ccaccgagct gaagcacctc 1620

cagtgcctgg aagaagaact gaagcccctg gaagaggtgc tgaatctggc ccagtccaag 1680

aacttccacc tgaggccacg ggacctgatc agcaacatca acgtgatcgt gctggaactg 1740

aagggctccg agacaacctt tatgtgcgag tacgccgacg agacagccac catcgtggaa 1800

tttctgaacc ggtggatcac cttctgccag agcatcatct ccacactgac c 1851

<210> 42

<211> 367

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc-IL2wt

<400> 42

Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

20 25 30

Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

35 40 45

Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

50 55 60

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

65 70 75 80

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

85 90 95

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

100 105 110

Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

115 120 125

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn

130 135 140

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

145 150 155 160

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

165 170 175

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg

180 185 190

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

195 200 205

Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

210 215 220

Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser

225 230 235 240

Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln

245 250 255

Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg

260 265 270

Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys

275 280 285

His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu

290 295 300

Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile

305 310 315 320

Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr

325 330 335

Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu

340 345 350

Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

355 360 365

<210> 43

<211> 1176

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc-IL2wt

<400> 43

atggatgcta tgctgagagg cctgtgttgc gtgctgctgc tgtgtggcgc tgtgttcgtg 60

tctccttctc acgctgctga gtctaagtat ggccctcctt gtcctccatg tcctgctcca 120

gaagctgctg gcggaccctc tgtgttcctg tttcctccaa agcctaagga ccagctcatg 180

atctctcgga cacccgaagt gacctgcgtg gtggtggatg tgtctcaaga ggaccctgag 240

gtgcagttca attggtacgt ggacggcgtg gaagtgcaca acgccaagac caagcctaga 300

gaggaacagt tcaactccac ctacagagtg gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggat 360

tggctgaacg gcaaagagta caagtgcaag gtgtccaaca agggcctgcc ttccagcatc 420

gaaaagacca tctccaaggc taagggccag cctagggaac cccaggttta caccctgcct 480

ccaagccaag aggaaatgac caagaaccag gtgtccctga cctgcctggt caagggcttc 540

tacccttccg acattgccgt ggaatgggag tccaatggcc agcctgagaa caactacaag 600

accacacctc ctgtgctgga ctccgacggc tccttctttc tgtactctcg cctgaccgtg 660

gacaagtcta gatggcaaga gggcaacgtg ttctcctgct ctgtgctgca cgaggccctg 720

cacaatcact acacccagaa gtccctgtct ctgtctcttg gaggtggtgg cggttctgcc 780

cctaccagct cctctaccaa gaaaacccag ctccagttgg agcatctgct gctggacctc 840

cagatgattc tgaacgggat caacaactat aagaacccca agctgacccg catgctgacc 900

tttaagttct acatgcccaa gaaggccacc gagctgaagc acctccagtg cctggaagaa 960

gaactgaagc ccctggaaga ggtgctgaat ctggcccagt ccaagaactt ccacctgagg 1020

ccacgggacc tgatcagcaa catcaacgtg atcgtgctgg aactgaaggg ctccgagaca 1080

acctttatgt gcgagtacgc cgacgagaca gccaccatcg tggaatttct gaaccggtgg 1140

atcaccttct gccagagcat catctccaca ctgacc 1176

<210> 44

<211> 392

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc-IL2v2

<400> 44

Met Asp Ala Met Leu Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Ser His Ala Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

20 25 30

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val

35 40 45

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr

50 55 60

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

65 70 75 80

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

85 90 95

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

100 105 110

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

115 120 125

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

130 135 140

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

145 150 155 160

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

165 170 175

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

180 185 190

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

195 200 205

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

210 215 220

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu

225 230 235 240

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly

245 250 255

Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln

260 265 270

Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn

275 280 285

Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr

290 295 300

Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu

305 310 315 320

Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn

325 330 335

Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val

340 345 350

Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp

355 360 365

Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys

370 375 380

Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

385 390

<210> 45

<211> 1200

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> нуклеотиды, кодирующие Fc-IL2v2

<400> 45

ggatccgcca ccatggatgc tatgctgaga ggcctgtgtt gcgtgctgct gctgtgtggc 60

gctgtgttcg tgtctccatc tcacgccgct gagtctaagt acggccctcc ttgtcctcca 120

tgtcctgctc cagaagctgc tggcggaccc tctgtgttcc tgtttcctcc aaagcctaag 180

gaccagctca tgatctctcg gacccctgaa gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtctcaa 240

gaggaccctg aggtgcagtt caattggtac gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag 300

accaagccta gagaggaaca gttcaactcc acctacagag tggtgtccgt gctgaccgtg 360

ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg 420

ccttccagca tcgaaaagac catctccaag gctaagggcc agcctaggga accccaggtt 480

tacaccctgc ctccaagcca agaggaaatg accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg 540

gtcaagggct tctacccttc cgacattgcc gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag 600

aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg gactccgacg gctccttctt tctgtactct 660

cgcctgaccg tggacaagtc taggtggcaa gagggcaacg tgttctcctg ctctgtgctg 720

cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag aagtccctgt ctctgtctct tggcggaggc 780

ggaggatctg ctcctacctc cagctccacc aagaaaaccc agctccagtt ggagcatctg 840

ctgctggacc tccagatgat cctgaatggc atcaacaatt acaagaaccc caagctgacc 900

gccatgctga ccgctaagtt ctacatgccc aagaaggcca ccgagctgaa gcacctccag 960

tgcctggaag aggaactgaa gcccctggaa gaagtgctga atctggccca gtccaagaac 1020

ttccacctga ggcctaggga cctgatctcc aacatcaacg tgatcgtgct ggaactgaaa 1080

ggctccgaga caaccttcat gtgcgagtac gccgacgaga cagccaccat cgtggaattt 1140

ctgaaccggt ggatcacctt ctgccagtcc atcatctcca cactgacctg atgactcgag 1200

<210> 46

<211> 592

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CD80-Fc-IL2wt

<400> 46

Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys

1 5 10 15

Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp

20 25 30

Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn

35 40 45

Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn

50 55 60

Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His

85 90 95

Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser

100 105 110

Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys

115 120 125

Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr

165 170 175

Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn

180 185 190

Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

195 200 205

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

210 215 220

Ser Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255

Asp Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

325 330 335

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430

Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser

450 455 460

Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu

465 470 475 480

Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr

485 490 495

Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu

500 505 510

Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val

515 520 525

Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu

530 535 540

Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr

545 550 555 560

Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe

565 570 575

Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

580 585 590

<210> 47

<211> 591

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mGI-101

<400> 47

Val Asp Glu Gln Leu Ser Lys Ser Val Lys Asp Lys Val Leu Leu Pro

1 5 10 15

Cys Arg Tyr Asn Ser Pro His Glu Asp Glu Ser Glu Asp Arg Ile Tyr

20 25 30

Trp Gln Lys His Asp Lys Val Val Leu Ser Val Ile Ala Gly Lys Leu

35 40 45

Lys Val Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Leu Tyr Asp Asn Thr Thr

50 55 60

Tyr Ser Leu Ile Ile Leu Gly Leu Val Leu Ser Asp Arg Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Ser Cys Val Val Gln Lys Lys Glu Arg Gly Thr Tyr Glu Val Lys His

85 90 95

Leu Ala Leu Val Lys Leu Ser Ile Lys Ala Asp Phe Ser Thr Pro Asn

100 105 110

Ile Thr Glu Ser Gly Asn Pro Ser Ala Asp Thr Lys Arg Ile Thr Cys

115 120 125

Phe Ala Ser Gly Gly Phe Pro Lys Pro Arg Phe Ser Trp Leu Glu Asn

130 135 140

Gly Arg Glu Leu Pro Gly Ile Asn Thr Thr Ile Ser Gln Asp Pro Glu

145 150 155 160

Ser Glu Leu Tyr Thr Ile Ser Ser Gln Leu Asp Phe Asn Thr Thr Arg

165 170 175

Asn His Thr Ile Lys Cys Leu Ile Lys Tyr Gly Asp Ala His Val Ser

180 185 190

Glu Asp Phe Thr Trp Glu Lys Pro Pro Glu Asp Pro Pro Asp Ser Gly

195 200 205

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

210 215 220

Ala Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Gln Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

325 330 335

Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser

450 455 460

Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln

465 470 475 480

Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Ala

485 490 495

Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys

500 505 510

His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu

515 520 525

Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile

530 535 540

Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr

545 550 555 560

Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu

565 570 575

Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr

580 585 590

<---

Изобретения относятся к области биотехнологии, конкретно к средству, содержащему в качестве активных ингредиентов NK-клетки и слитый белок, который содержит белок IL-2 и белок CD80, и может быть использовано в медицине для иммунотерапии рака. Предложены способ лечения рака, включающий введение димера слитого белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 26, 28 или 30, в комбинации с естественными клетками-киллерами, и фармацевтическая композиция указанного димера слитого белка и естественных клеток-киллеров. Изобретения обеспечивают значительное ингибирование роста опухоли по сравнению с группами, обрабатываемыми естественными клетками-киллерами или слитым белком в отдельности. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 35 ил., 10 табл., 14 пр.

1. Способ лечения рака, включающий введение димера слитого белка в комбинации с естественными клетками-киллерами, где слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 26, 28 или 30.

2. Способ по п. 1, где рак представляет собой любой рак, выбранный из группы, состоящей из рака желудка, рака печени, рака легкого, колоректального рака, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака шейки матки, рака щитовидной железы, рака гортани, острого лимфобластного лейкоза, опухоли головного мозга, нейробластомы, ретинобластомы, рака головы и шеи, рака слюнной железы и лимфомы.

3. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая в качестве активного ингредиента димер слитого белка, естественные клетки-киллеры, где слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, 26, 28 или 30.