перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка испрашивает приоритет предварительной патентной заявки США № 62/628233, поданной 8 февраля 2018 г., которая включена в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки.
Область техники
Данное изобретение относится к способам лечения целиакии с использованием вызывающих толерантность иммуномодифицирующих частиц, которые инкапсулируют антигенный материал из белка глиадина или других схожих белков.
ВКЛЮЧЕНИЕ МАТЕРИАЛА, ПРЕДСТАВЛЕННОГО ЭЛЕКТРОННО, ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ
Данная заявка в качестве отдельной части описания содержит перечень последовательностей в машиночитаемой форме (имя файла: 52341_Seqlisting.txt; 6713 байт; создан 8 февраля 2019 года), который включен в полном объеме посредством ссылки.
Уровень техники
Целиакия (CD) является распространенным иммунологическим расстройством с предполагаемой распространенностью от 0,3 до 2,4% среди людей европейского происхождения (Fasano 2012). Она развивается у генетически предрасположенных субъектов в результате аномального ответа Т-клеток на пищевой белок проламин, преимущественно глиадин, который дезамидируется тканевой трансглутаминазой в кишечнике. Когда дезамидированные глиадин-специфичные CD4+ T-клетки распознают свой когнатный эпитоп глиадина, представленный антигеном лейкоцитов человека (HLA)-DQ/8 или HLA-DQ2 на антиген-презентирующих клетках (APC) в собственной пластинке слизистой оболочки, они активируются и продуцируют провоспалительные цитокины, такие как интерферон-гамма (IFN-γ). Указанное вызывает воспалительный каскад, приводящий к гиперплазии крипты и сглаживанию ворсинок, характерный для результатов биопсии CD. В кишечном эпителии глиадин также вызывает локальную продукцию интерлейкина-15 (IL-15) энтероцитами. Указанный IL-15 увеличивает экспрессию поверхностных антигенов главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I (таких как связанная с полипептидом последовательность А MHC класса I) на эпителиальных клетках, а также увеличивает экспрессию соответствующих рецепторов MHC (таких как NKG2D) на внутриэпителиальных Т-клетках (т.е. CD8+αβ Т-клетках и γδ Т-клетках, натуральных клетках-киллерах [NK]), что приводит к разрушению эпителиальных клеток. (Fasano 2012; Green 2007; Leffler 2017; Mazzarela 2008; Tack 2010)
Энтеропатия, возникающая в результате активации Т-клеток, вызывает хроническую диарею, вздутие живота/боль, запоры и другие желудочно-кишечные симптомы, повышенную проницаемость кишечника, мальабсорбцию и скрытое желудочно-кишечное кровотечение, обычно наблюдаемое при CD. Другие проявления могут включать потерю веса, хроническую усталость, остеопороз, устойчивый дефицит железа, анемию, бесплодие, отставание в росте у детей, артрит, периферическую невропатию, герпетиформный дерматит, атаксию глютена и злокачественные новообразования (Farrell 2002; Fasano 2012; Fasano 2001; Green 2007; Leffler 2017). В редких случаях пациенты с CD, в основном дети, испытывают опасную для жизни метаболическую чрезвычайную ситуацию, называемую кризисом целиакии, характеризующуюся гипокалиемией и ацидозом, вторичным по отношению к обильной диарее (Baranwal 2003, Farrell 2002; Fasano 2012).
Избегание глютена путем изменения диеты, «безглютеновой» диеты (GFD), является единственным эффективным средством лечения CD, поскольку в настоящее время нет лекарств, которые могли бы надежно и безопасно предотвратить повреждение слизистой оболочки, вызванное воздействием глютена. Хотя было показано, что GFD облегчает многие симптомы заболевания, строгое соблюдение является трудным и создает дополнительное бремя для повседневного функционирования больного целиакией. В действительности, полное исключение глютена из рациона является нереалистичным, и многократное воздействие глютена, хотя и непреднамеренное или в небольших количествах, предотвращает полное устранение симптомов и восстановление повреждения кишечника (Laurin 2002; Leffler 2017; Rubio-Tapia 2013).
Международная публикация патентной заявки WO 2010/060155 раскрывает различные эпитопы белков пшеницы, которые могут быть вовлечены в целиакию, и описывает, что все глютеновые белки считаются токсичными при целиакии. В 2006 году в общедоступную базу данных NCBI Genbank было включено 345 записей для белков глютена из хлебопекарной пшеницы (Triticum aestivum), ячменя (Hordein vulgare) и ржи (Secale cerale).
Многочисленные способы лечения были разработаны, чтобы вызвать иммунную толерантность при аутоиммунных заболеваниях. Тем не менее, эти способы лечения дали лишь незначительную эффективность в клинических испытаниях (Kaukinen 2014).
Сущность изобретения
Терапевтические подходы, делающие Т-клетки толерантными к глютену, могут потенциально излечивать CD, тем самым устраняя бремя, связанное с пожизненной GFD, и сопутствующие заболевания, связанные с такими заболеваниями, как рак.
В данном документе предложен способ лечения целиакии у субъекта, включающий введение субъекту вызывающей толерантность иммуномодифицирующей частицы (TIMP), инкапсулирующей один или более антигенных эпитопов глиадина (GLIA), в котором частицу вводят в дозе от 0,1 до 10 мг/кг.
В данном документе также предложен способ снижения чувствительности к глютену у субъекта, включающий введение субъекту вызывающей толерантность иммуномодифицирующей частицы (TIMP), инкапсулирующей один или более антигенных эпитопов глиадина (GLIA), в котором частицу вводят в дозе от около 0,1 до около 10 мг/кг. В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в дозе около 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 8,0 мг/кг или 10 мг/кг. В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в дозе около 8,0 мг, 80 мг, 320 мг, 640 мг или 800 мг.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в однократной дозе или в многократных дозах.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят внутривенно, подкожно, внутримышечно, интраперитонеально или перорально.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA содержит сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA). В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA является карбоксильно функционализированной на поверхности, то есть карбоксилированным PLGA.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA имеет отрицательный дзета-потенциал. В различных вариантах осуществления дзета-потенциал составляет от -80 до -30 мВ, или от -70 до -30 мВ, или от -60 до -35 мВ, или от -50 до -40 мВ.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA содержит сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA) с соотношением полимолочной кислоты к полигликолевой кислоте около 50:50 в сополимере. Дополнительные предполагаемые соотношения сополимеров описаны в Подробном описании изобретения.
В различных вариантах осуществления размер частиц составляет от 100 до 1500 нм, или от 100 до 1000 нм, или от 300 до 1000 нм, или от 400 до 800 нм, или от 200 до 700 нм.
В различных вариантах осуществления один или несколько антигенов GLIA выбраны из группы, состоящей из глиадина, глютенина, гордеина и секалина или их антигенных фрагментов или эпитопов. Типовые антигенные эпитопы, которые могут вызывать чувствительность к глютену и целиакию, предполагаемые для использования в частице, более подробно описаны в Подробном описании изобретения.
В различных вариантах осуществления субъект находится на безглютеновой диете. В различных вариантах осуществления субъект имеет генетический профиль HLA-DQ2.5 (HLA-DQA1*0501/B1*0201) или HLA-DQ8.1 (DQA1*0301/B1*0302). В различных вариантах осуществления субъект имеет устойчивую целиакию.
В различных вариантах осуществления введение частицы TIMP-GLIA улучшает один или более признаков или симптомов целиакии или чувствительности к глютену. Типовые симптомы включают один или более симптомов, выбранных из группы, состоящей из потери веса, усталости, головной боли, дефицита железа, дефицита фолиевой кислоты, дефицита витамина D, дефицита витамина B12, атрофии ворсинок, повреждения слизистой оболочки кишечника и низкой плотности костной ткани, но не ограничиваются ими. Один или более симптомов включают субъективные симптомы, такие как атрофия ворсинок, окрашивание тетрамером, метод иммуноферментных пятен, микроРНК, экзосомы, РНК и ДНК. В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводится в течение 30 минут, 1 часа, 2 часов, 3 часов или более.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводится с увеличивающейся интенсивностью. В различных вариантах осуществления возрастающая скорость увеличивается в два раза после 15 минут начальной инфузии. В различных вариантах осуществления возрастающая скорость увеличивается в два раза после вторых 15 минут инфузии, например, в 4 раза превышает начальную скорость инфузии. В некоторых вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в течение приблизительно 2,5 часов при около 20 мл/час в течение первых 15 минут, 40 мл/час в течение следующих 15 минут и 80 мл/час во время инфузии.
В различных вариантах осуществления введение TIMP-GLIA с увеличением дозы снижает активацию комплемента по сравнению с введением дозы без увеличения .
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят один раз в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз каждые 4 недели, один раз каждые два месяца, один раз каждые три месяца, один раз каждые 6 месяцев или один раз в год.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество.
В различных вариантах осуществления введение приводит к апоптозу макрофагов или моноцитов у субъекта. В различных вариантах осуществления введение вызывает иммунологическую анергию.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в сочетании со вторым агентом.
В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в качестве бустерной дозы. В различных вариантах осуществления бустерная доза вводится при необходимости, установленной аналитическим тестом, например, кожной инъекционной пробой или измерением уровней мононуклеарных клеток периферической крови.
Краткое описание графических материалов
На Фиг. 1 схематически показана схема введения доз для пациентов с целиакией.
На Фиг. 2 схематически показана схема введения доз для здоровых субъектов.
На Фиг. 3 схематически показана схема введения альтернативных доз для пациентов с целиакией или здоровых добровольцев.
На Фиг. 4 показана последовательность белка-глутамин гамма-глутамилтрансферазы 2 (SEQ ID NO: 3).
На Фиг. 5A-5B показаны обновленные схемы для введения TIMP-GLIA субъектам в группах с однократным (Фиг. 5A) и многократным введением доз (Фиг. 5B).
На Фиг. 6A-6F показаны концентрации TIMP-GLIA в плазме в течении времени для отдельных субъектов Этапа A, нанесенные на графики, построенные в зависимости от дозы.
Подробное описание изобретения
В данном изобретении предложена схема применения для лечения целиакии с использованием вызывающих толерантность иммуномодифицирующих частиц, которые инкапсулируют антигенные эпитопы, имеющие отношение к целиакии и чувствительности к глютену.
Определения
Используемый в данном документе термин «частица» относится к любой полученной не из ткани композиции веществ, которая может быть сферической или сфероподобной структурной единицей, гранулой или липосомой. Термин «частица», термин «иммуномодифицирующая частица», термин «частица-носитель» и термин «гранула» могут использоваться взаимозаменяемо в зависимости от контекста. Кроме того, термин «частица» может использоваться для охвата гранул и сфер.
Используемый в данном документе термин «TIMP» относится к вызывающим толерантность иммуномодифицирующим частицам, которые связаны с антигеном. В некоторых вариантах осуществления антиген прикреплен к поверхности TIMP. В других вариантах осуществления антиген инкапсулирован в TIMP.
Используемый в данном документе термин «отрицательно заряженная частица» относится к частицам, которые были модифицированы, чтобы иметь суммарный поверхностный заряд, который меньше нуля.
Термины «карбоксилированные частицы» или «карбоксилированные гранулы» или «карбоксилированные сферы» включают любую частицу, которая была модифицирована для содержания карбоксильной группы на ее поверхности. В некоторых вариантах осуществления добавление карбоксильной группы усиливает поглощение фагоцитом/моноцитом частиц из кровотока, например, посредством взаимодействия с фагоцитарными рецепторами, такими как MARCO. Карбоксилирование частиц может быть достигнуто с использованием любого соединения, которое добавляет карбоксильные группы, включая сополимер этилена, модифицированный малеиновым ангидридом (PEMA), но не ограничиваясь им.
Используемый в данном документе термин «антигенный фрагмент» относится к любому фрагменту, например пептиду, который распознается иммунной системой хозяина. Как описано в данном документе, примеры антигенных фрагментов включают глиадин, эпитопы глиадина и другие схожие белки, но не ограничиваются ими.
Термин «эпитоп» относится к той части любой молекулы, которая может распознаваться и связываться специфическим связывающим агентом в одной или более антигенсвязывающих областях и может вызывать иммунную реакцию. Эпитопы обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как боковые цепи аминокислот или углеводов, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Используемые в данном документе эпитопы могут быть последовательными или непоследовательными/прерывистыми. Типовые прерывистые эпитопы для глиадина описаны в Таблице 3 патента США № 9,616,113.
«Пептиды» или «олигопептиды» представляют собой короткие аминокислотные последовательности обычно длиной от 3 до 100 аминокислотных остатков, и охватывают встречающиеся в природе аминокислотные остатки и не встречающиеся в природе аналоги остатков, которые можно использовать отдельно или в комбинации с встречающимися в природе аминокислотными остатками, чтобы придать пептиду особую конформационную специфичность или особую биологическую активность, такую как устойчивость к протеолизу. Пептиды включают повторы пептидных последовательностей и могут включать 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более копий аминокислотной последовательности, расположенных головка-к-хвосту или голова-к-голове. Пептиды включают димеры, тримеры или мультимеры более высокого порядка, например которые образуются путем конъюгации с другими полимерными или неполимерными фрагментами, такими как ПЭГ.
«Полипептиды» представляют собой более длинные аминокислотные последовательности обычно длиной 100 и более аминокислотных остатков, и охватывают встречающиеся в природе аминокислотные остатки и не встречающиеся в природе аналоги остатков, которые можно использовать отдельно или в комбинации с встречающимися в природе аминокислотными остатками, чтобы придать полипептиду особую конформационную специфичность или особую биологическую активность, такую как устойчивость к протеолизу.
Термины «непокрытые гранулы» или «непокрытые частицы» или «непокрытые сферы» в контексте данного документа относятся к гранулам, частицам или сферам, которые не были карбоксилированы.
Используемые в данном документе термины «провоспалительные медиаторы» или «провоспалительные полипептиды» относятся к полипептидам или их фрагментам, которые вызывают, поддерживают или пролонгируют воспаление у субъекта. Примеры провоспалительных медиаторов включают цитокины и хемокины, но не ограничиваются ими.
Используемый в данном документе термин «воспалительный моноцит» относится к любой миелоидной клетке, экспрессирующей любую комбинацию CD14/CD26 и CCR2.
Используемый в данном документе термин «ингибирующий нейтрофил» относится к нейтрофилам и/или клеткам-супрессорам, происходящим из моноцитов.
Используемый в данном документе термин «клетка T-хелпер» или «хелперная T-клетка» относится к клеткам CD4+. Т-клетки CD4+ помогают другим лейкоцитам в иммунологических процессах, включая созревание В-клеток в плазматических клетках и В-клетках памяти и активацию цитотоксических Т-клеток и макрофагов. Т-клетки активируются, когда молекулы МНС класса II, которые экспрессируются на поверхности антиген-презентирующих клеток (АРС), презентируют им пептидные антигены.
Используемый в данном документе термин «клетка Th1» относится к подмножеству клеток T-хелперов, которые продуцируют провоспалительные медиаторы. Клетки Th1 секретируют цитокины для облегчения иммунного ответа и играют роль в защите хозяина от патогенов частично путем опосредования рекрутирования нейтрофилов и макрофагов в инфицированные ткани. Клетки Th1 секретируют цитокины, включая IFN-гамма, IL-2, IL-10 и альфа/бета TNF, для координации защиты от внутриклеточных патогенов, таких как вирусы и некоторые бактерии.
Используемый в данном документе термин «клетка Th2» относится к подмножеству клеток T-хелперов, которые обеспечивают активацию и поддержание антитело-опосредованного иммунного ответа против внеклеточных паразитов, бактерий, аллергенов и токсинов. Клетки Th2 опосредуют эти функции, продуцируя различные цитокины, такие как IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-13 и IL-17E (IL-25), которые отвечают за выработку антител, активацию эозинофилов и ингибирование нескольких функций макрофагов, обеспечивая тем самым независимые от фагоцитов защитные ответы.
Используемый в данном документе термин «клетка Th17» относится к подмножеству клеток T-хелперов. Клетки Th17 секретируют цитокины для облегчения иммунного ответа и играют роль в защите хозяина от патогенов путем опосредования рекрутирования нейтрофилов и макрофагов в инфицированные ткани. Клетки Th17 секретируют цитокины, такие как IL-17, IL-21, IL-22, IL-24, IL-26 и TNF-альфа, для координации защиты от внеклеточных патогенов, включая грибы и бактерии.
Термин «терапевтически эффективное количество» используется в данном документе для указания количества мишень-специфической композиции по данному изобретению, которая эффективна для ослабления или уменьшения симптомов или признаков заболевания, подлежащего лечению.
Термин «целиакия» относится к хроническому воспалительному заболеванию тонкой кишки. Заболевание охватывает спектр состояний, характеризующихся различной степенью чувствительности к глютену, включая тяжелую форму, характеризующуюся плоской слизистой оболочкой тонкого кишечника (гиперпластическая атрофия ворсинок), и другие формы, характеризующиеся более легкими симптомами, включая усталость, хроническую диарею, мальабсорбцию питательных веществ, потерю веса , вздутие живота, анемию, а также значительно повышенный риск развития остеопороза и кишечных злокачественных новообразований (лимфома и рак).
Термин «чувствительный к глютену» или «глютеновая чувствительность» относятся к состоянию, в котором какой-либо один или более симптомов целиакии или несоответствующего Т-клеточного ответа проявляются у субъекта, подвергнутого воздействию глютена или его пептидного фрагмента. У субъекта, который не чувствителен к глютену, Т-клеточный ответ, вызванный приемом глютена, незначителен или отсутствует. Напротив, у субъекта, чувствительного к глютену, опосредованный Т-клетками CD4+ иммунный ответ на пептиды, полученные из глютена после его приема внутрь, является несоответствующим.
Вызывающие толерантность иммуномодифицирующие частицы
В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении преложено применение композиций, содержащих: антиген, связанный или инкапсулированный в частицу-носитель с отрицательным дзета-потенциалом. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал частицы составляет от около -100 мВ до около 0 мВ. В некоторых вариантах осуществления дзета-потенциал частицы составляет от около -80 мВ до около -30 мВ, от около -70 мВ до около -30 мВ, от около -60 мВ до около -35 мВ или от около -50 мВ до -40 мВ. В некоторых вариантах осуществления частица представляет собой сополимер, имеющий молярное соотношение полимолочной кислоты к полигликолевой кислоте от около 50:50, 80:20 до около 100:0. В некоторых вариантах осуществления частица представляет собой частицу сополимера молочной и гликолевой кислот.
В некоторых вариантах осуществления частица имеет средний диаметр от около 0,1 до около 10 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет средний диаметр от 0,2 до около 2 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 0,3 до около 5 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 0,5 до около 3 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 0,5 до около 1 мкм. В некоторых вариантах осуществления частица имеет диаметр от около 100 до 1500 нм, от около 100 до 10000 нм, от около 300 до 1000 нм, от около 400 до 800 нм или от около 200 до 700 нм.
Способы изготовления TIMP, которые являются применимыми в способах по данному изобретению, описаны в WO 2017/112899 и WO 2017/143346, включенных в данный документ посредством ссылки.
Как описано в данном документе для введения частиц человеку или тестируемым млекопитающим предпочтительно составлять частицу в стерильной композиции, содержащей один или более стерильных фармацевтически приемлемых носителей. Фраза «фармацевтически или фармакологически приемлемый» относится к молекулярным веществам и композициям, которые не вызывают аллергических или других побочных реакций при введении с использованием способов введения, хорошо известных в данной области, как описано ниже. «Фармацевтически приемлемые носители» включают любые и все клинически применимые растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты и тому подобное.
Частица вводится любым подходящим способом, включая парентеральное, подкожное, интраперитонеальное, внутрилегочное и интраназальное. Парентеральные инфузии включают внутривенное, внутриартериальное, интраперитонеальное, внутримышечное, внутрикожное или подкожное введение. Предпочтительно дозы вводят инъекциями, наиболее предпочтительно внутривенными или подкожными инъекциями, в зависимости от того, является ли введение кратким или продолжительным. Предусматриваются другие способы введения, включая локальное, в частности трансдермальное, трансмукозальное, ректальное, пероральное или местное введение, например, через катетер, расположенный рядом с нужным участком.
Фармацевтические композиции по данному изобретению, содержащие частицу в качестве активного ингредиента, могут содержать стерильные фармацевтически приемлемые носители или добавки в зависимости от способа введения. Примеры таких носителей или добавок включают воду, фармацевтически приемлемый органический растворитель, коллаген, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, карбоксивиниловый полимер, карбоксиметилцеллюлозу натрия, полиакрилат натрий, альгинат натрия, водорастворимый декстран, карбоксиметилкрахмал натрия, пектин, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, ксантановую камедь, гуммиарабик, казеин, желатин, агар, диглицерин, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, вазелин, парафин, стеариловый спирт, стеариновую кислоту, сывороточный альбумин человека (HSA), маннит, сорбит, лактозу, фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество и тому подобное. Используемые добавки выбираются из вышеуказанных или их комбинаций, но не ограничиваются ими, в зависимости от ситуации, в зависимости от дозированной формы по данному изобретению. Для растворов или эмульсий подходящие носители включают, например, водные или спиртово/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая физиологический раствор и забуференные среды. Парентеральные носители могут включать раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера или нелетучие масла. Внутривенные носители могут включать различные добавки, консерванты или добавки для восполнения жидкости, питательных веществ или электролитов. Подходящими являются различные водные носители, например, стерильные фосфатно-солевые растворы, бактериостатическая вода, вода, буферная вода, 0,4% физиологический раствор, 0,3% глицин и тому подобное, и могут включать другие белки для повышенной стабильности, такие как альбумин, липопротеин, глобулин и т. д., подвергнутые мягким химическим модификациям, или тому подобное.
Предполагается, что частица может дополнительно содержать поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное вещество может быть анионным, катионным или неионным. Поверхностно-активные вещества семейства полоксамеров и полоаксаминов обычно используются в синтезе частиц. Поверхностно-активные вещества, которые могут быть использованы, включают ПЭГ, Tween-80, желатин, декстран, плюроник L-63, PVA, метилцеллюлозу, лецитин, DMAB и PEMA, но не ограничиваются ими. Кроме того, биоразлагаемые и биосовместимые поверхностно-активные вещества, включая витамин Е TPGS (D-α-токоферилполиэтиленгликоль 1000 сукцинат). В определенных вариантах осуществления используются два поверхностно-активных вещества. Например, если частицу получают методом двойной эмульсии, два поверхностно-активных вещества могут включать гидрофобное поверхностно-активное вещество для первой эмульсии и гидрофобное поверхностно-активное вещество для второй эмульсии.
Терапевтические составы полипептидсвязывающего агента готовят для хранения путем смешивания полипептидсвязывающего агента, имеющего желаемую степень чистоты, с необязательными физиологически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами.(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), в форме лиофилизированных составов или водных растворов. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфат, цитрат, сукцинат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем около 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатообразующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; или комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок).
Частица TIMP-GLIA
Вызывающие толерантность иммуномодифицирующие частицы (TIMP) - Глиадин («TIMP-GLIA») являются первым в своей группе неиммуносупрессивным средством, которое специфически инактивирует глиадин-специфические Т-клетки или вызывает у них толерантность, тем самым устраняя и/или обращая вспять основную патологию CD. TIMP-GLIA также может рассматриваться как терапевтическая вакцина против неинфекционных заболеваний или «обратная вакцина» (Steinman 2010).
TIMP-GLIA состоит из лекарственного вещества экстракта глиадина в отрицательно заряженной полимерной матрице частиц PLGA (сополимер молочной и гликолевой кислот). TIMP доставляют глиадиновый антиген посредством естественного фагоцитоза частиц PLGA, невоспалительного процесса. Предполагается, что такой фагоцитоз частиц приводит к антиген-презентации глиадина антигенпрезентирующими клетками (APC) в основном в селезенке и печени. Глиадин-специфичные Т-клетки становятся анергичными, или удаляются, или переключаются на Т-регуляторные клетки, тем самым вызывая толерантность иммунной системы к антигену глиадину и устраняя вредный иммунный каскад, обычно инициируемый глиадин-специфичными Т-клетками в ответ на глиадин. TIMP-GLIA разработан и направлен на то, чтобы исключительно направлять и отменять ответ Т-клеток, который управляет CD. (Getts 2015).
Типовые антигены глиадина раскрыты в патенте США № 9,616,113. Прерывистые эпитопы глиадина (белок-глутамин-гамма-глутамилтрансфераза 2) включают D151, E153, E154, E155, E158, D306, N308, N310; SEQ ID NO: 1725 D434, E435, E437, D438; E329; E153; R19, E153, M659 или C277, H335, D358. Дополнительные белки или пептиды, которые индуцируют чувствительность к глютену, раскрыты в WO 2010/060155, представлены в SEQ ID NO: 631-1116. Например, «глютен» или «белок глютена» охватывает глиадины альфа (α), бета (β), гамма (γ) и омега (ω), а также глютенины с низкой и высокой молекулярной массой (LMW и HMW) в пшенице, гордеины B, C и D в ячмене, секелины β, γ и CO во ржи и, необязательно, авенины в овсе. «Пептиды глютена» представляют собой пептиды, полученные из или включенные в один или более белков глютена. Глиадин относится к водно-спирторастворимой фракции глютена, в частности, но не исключительно, глютена, полученного, например, из пшеницы Triticum aestivum. Глютенин относится к водно-спиртонерастворимой фракции глютена, в частности, но не исключительно, глютена, полученного, например, из пшеницы Triticum aestivum. Гордеин относится к глютену, полученному из ячменя, Hordein vulgare. Секалин относится к глютену, полученному из ржи, Secale cerale. Аведин относится к глютену, полученному из овса, Avena sativa. Типовые антигенные последовательности представлены в SEQ ID NO: 1-1116 WO 2010/060155.
В различных вариантах осуществления частицу вводят в дозе от около 0,1 до около 10 мг/кг. В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в дозе около 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг, 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 8,0 мг/кг или 10 мг/кг. В различных вариантах осуществления TIMP-GLIA вводят в дозе около 8,0 мг, 80 мг, 320 мг, 640 мг или 800 мг. Также предусматриваются значения внутри и между конечными точками указанной дозы.
Популяции APC селезенки и печени экспрессируют многочисленные фагоцитарные рецепторы, которые во время гомеостаза играют важную роль в распознавании и утилизации умирающих лейкоцитов, эритроцитов и другого дебриса на ежедневной основе. Нацеливание APC и их стимуляция, вызывающая иммунную толерантность, имеет решающее значение для индукции иммунной толерантности. Важно отметить, что указанные действия происходят без вызова воспаления или нарушения периферической иммунной толерантности. TIMP были разработаны, чтобы воспользоваться преимуществами указанного пути нацеливания.
Исследования in vitro показали, что TIMP-GLIA не вызывает митогенность Т-клеток. TIMP-GLIA не взаимодействует напрямую с T-клеточным рецептором (TCR) и не вызывает активацию T-клеток путем связывания молекул костимуляции, экспрессируемых на T-клетках, тромбоцитах и других лейкоцитах. TIMP-GLIA опосредованно регулирует глиадин-специфические Т-клетки через антигенпрезентирующие клетки.
Все ранее предпринятые стратегии иммунной толерантности с использованием моноклональных антител (т.е., анти-CD3, антиген цитотоксического Т-лимфоцита 4 [CTLA-4]) или малых молекул (рапамицин) не использовали указанный путь. Предполагается, что механизм действия TIMP зависит от поглощения частиц APC, в частности макрофагами маргинальной зоны селезенки, экспрессирующими фагоцитарные рецепторы, такие как рецептор макрофага с коллагеновой структурой (MARCO), способом, сходным с выведением апоптического дебриса. Исследования с использованием частиц или апоптотических клеток показали, что лечение индуцирует выработку регуляторных цитокинов интерлейкин-10 (IL-10) и трансформирующего фактора роста бета (TGF-β) в селезенке, а также активацию ингибирующих лигандов на макрофагах, таких как белок 1 запрограммированной смерти клетки (PD-1). Последующие события включают индукцию Т-клеточной анергии и активацию регуляторных Т-клеток. Общим результатом является снижение активности провоспалительных Т-клеток, уменьшение накопления лейкоцитов в тканях и, что важно, исчезновение признаков заболевания (Getts 2015).
Введение частицы TIMP-GLIA улучшает один или более признаков или симптомов целиакии или чувствительности к глютену. Типовые симптомы включают один или более симптомов, выбранных из группы, состоящей из потери веса, усталости, головной боли, дефицита железа, дефицита фолиевой кислоты, дефицита витамина D, дефицита витамина B12, атрофии ворсинок, повреждения слизистой оболочки кишечника и низкой плотности костной ткани, но не ограничиваются ими. Смотрите, например, Woodward, Clin Exp Gastroenterol. 2016; 9: 225-236. Один или более симптомов включают субъективные симптомы, такие как атрофия ворсинок, окрашивание тетрамером, метод иммуноферментных пятен, микроРНК, экзосомы, РНК и ДНК.
В данном изобретении рассматривают модуляцию толерантности путем модуляции ответа Th1, ответа Th2, ответа Th17 или комбинации указанных ответов. Модулирование ответа Th1 охватывает изменение экспрессии, например, интерферона-гамма. Модулирование ответа Th2 охватывает изменение экспрессии, например, любой комбинации IL-4, IL-5, IL-10 и IL-13. Обычно увеличение (уменьшение) ответа Th2 будет включать увеличение (уменьшение) экспрессии по меньшей мере одного из IL-4, IL-5, IL-10 или IL-13.; более типично увеличение (уменьшение) ответа Th2 будет включать увеличение экспрессии по меньшей мере двух из IL-4, IL-5, IL-10 или IL-13, наиболее типично увеличение (уменьшение) ответа Th2 будет включать увеличение по меньшей мере трех из IL-4, IL-5, IL-10 или IL-13, в то время как в идеальном варианте увеличение (уменьшение) ответа Th2 будет включать увеличение (уменьшение) экспрессии всех IL-4, IL-5, IL-10 и IL-13. Модулирование Th17 включает изменение экспрессии, например, TGF-β, IL-6, IL-21 и IL-23, и воздействие на уровни IL-17, IL-21 и IL-22.
Примеры
Пример 1 - Протокол для первого введения человеку дозы TIMP-GLIA
[0001] Предыдущие токсикологические исследования на животных показали, что дозировки TIMP-GLIA, использованные во время исследования без GLP, составляли 0, 10, 50, 75, 100 и 200 мг/кг (HED: 0, 1,6, 8, 12, 16 и 32 мг/кг) и вводили внутривенно в Дни 1 и 8, при этом вскрытие проводилось в День 15 или 17 в зависимости от требований к отбору образцов ткани/крови. Таким образом, TIMP-GLIA не вызывал значительных токсикологических или патологических эффектов при 10 мг/кг при внутривенном введении в Дни 1 и 8. Ряд клинических патологий и микроскопических гистопатологических эффектов наблюдались при дозировках > 50 мг/кг, преимущественно в печени и селезенке. При 200 мг/кг двух животных подвергали эвтаназии из-за связанных с лекарством эффектов.
[0002] TIMP-GLIA, которая подверглась очистке продукта, упомянутой выше, вводили внутривенно крысам (группа из 10 крыс каждого пола) в дозировках 0, 4, 10, 50 и 75 мг/кг (HED: 0, 0,64, 1,6, 8, и 12 мг/кг). Инфузии вводили в Дни 1, 8 и 15 со вскрытием в День 16. Дополнительная группа из 5 крыс каждого пола прошла тот же режим введения доз, за которым следовал 28-дневный период восстановления после последней дозы и вскрытие в День 43. Другой группе из 5 крыс каждого пола были введены дозы в 1-й и 8-й День и она была подвергнута эвтаназии в 11-й День для исследований патологии, а группе TIMP-GLIA из 12 крыс каждого пола плюс контрольной группе из 6 крыс каждого пола были введены дозы в 1-й и 8-й День для измерения концентраций TGLIA во времени для токсикокинетического (ТК) анализа и измерения цитокинов. Животных в группе TK/цитокинов умерщвляли после последнего забора крови.
[0003] Все животные дожили до запланированного вскрытия и оставались в добром здравии на протяжении всего исследования. В ходе исследования не было выявлено каких-либо значительных патологических клинических проявлений, а также не было отмечено связанных с лекарством воздействий на массу тела, прирост массы тела, потребление пищи, офтальмологические осмотры, физические осмотры, клинические наблюдения, батарею стандартных тестов, температуру тела и уровни цитокинов в сыворотке. Результаты микроскопической оценки тканей, полученных при вскрытии животных, умерщвленных на 16-й или 43-й День, каждого пола из каждой группы дозы, не показали каких-либо патологически значимых результатов.
В настоящем изобретении описана Фаза 1 многоцентрового двухэтапного исследования, впервые проводимого на человеке (FIH), для оценки безопасности, переносимости и фармакокинетики (PK) TIMP-GLIA у субъектов с CD и здоровых субъектов.
Этап A - это традиционное открытое исследование с однократной возрастающей дозой (SAD) с отсроченным во времени дозированием. Увеличение дозы и размера когорты на Этапе A основаны на принятой методологии для исследований фазы I (Le Tourneau 2009, Rubinstein 2003). Этап A включает ускоренное титрование 2+2 и традиционную схему 3+3 с быстрым увеличением дозы в каждой популяции (CD и здоровые субъекты).
Последовательные когорты каждой популяции будут получать однократную дозу TIMP-GLIA. Решения относительно прогрессирования или прекращения дозирования будут приниматься отдельно для каждой популяции (CD или здоровые субъекты) на основании соответствующих данных о безопасности.
Подходящие субъекты (по меньшей мере 19 субъектов с СD и по меньшей мере 19 здоровых субъектов) будут включены в когорты с увеличением дозы (n=2/когорта для 2 уровней дозы, а затем n=3/когорта для 5 уровней дозы). TIMP-GLIA будет вводиться в виде однократной инфузии в День 1. Стратегия с отсроченным во времени дозированием используется на Этапе А.
Для субъектов с CD пройдет не менее 168 часов (7 дней) до введения дозы следующему субъекту. Перед введением дозы следующему субъекту(ам) будут оцениваться неблагоприятные события (AE), показатели жизнедеятельности, пульсоксиметрия и электрокардиограммы (ЭКГ) и лабораторные данные (биохимический анализ крови, коагуляция, гематология и общий анализ мочи, цитокины) из образцов, полученных не менее чем через 24 часа после введения дозы.
Для здоровых субъектов пройдет не менее 48 часов до введения дозы следующему субъекту. Это соответствует времени, когда субъекты будут выписаны из клиники, при условии, что, по мнению исследователя, расширенный медицинский надзор не требуется. Перед введением дозы следующему субъекту(ам) будут оцениваться неблагоприятные события (AE), показатели жизнедеятельности, пульсоксиметрия и электрокардиограммы (ЭКГ) и лабораторные данные (биохимический анализ крови, коагуляция, гематология и общий анализ мочи) из образцов, полученных не менее чем через 24 часа после введения дозы.
Продолжительность исследовательского периода исследования для субъектов с CD составляет до 91 дня (скрининг до 28 дней+1 день лечения+наблюдение в динамике до 60-го дня +/- 3 дня). Кроме того, после амбулаторного посещения в 60-й день требуется телефонное сопровождение практикующим врачом (т.е. 90-й день, 120-й день и 180-й день, все +/- 3 дня). В одном варианте осуществления продолжительность исследования может составлять до 73 дней для получателя однократной дозы (то есть период скрининга до 28 дней+период исследования до 45 дней [День 42 +/- 3 дня]).
В другом варианте общая продолжительность исследовательского периода исследования для здоровых субъектов составляет до 91 дня (скрининг до 28 дней+1 день лечения+наблюдение в динамике до 60-го дня +/- 3 дня).
Этап B будет следовать схеме повторных доз с использованием уровня дозы, выбранного на Этапе A. Согласившиеся субъекты будут проверены в течение 28 дней (день от -28 до -1) до поступления в отдел клинических исследований в день -1 для исходных оценок.
Этап B будет исследованием повторных доз с 3-мя субъектами, которые получат первую инфузию в 1-й день и вторую инфузию в 8-й день. Выбор дозы для Этапа B будет основан на полученных данных о безопасности и переносимости. Первый субъект на Этапе B будет наблюдаться в течение по меньшей мере 48 часов после введения второй дозы перед введением доз оставшимся субъектам на Этапе B. Для субъектов с CD должно пройти по меньшей мере 168 часов (7 дней) после введения второй дозы и безопасность должна быть подтверждена перед тем как следующему субъекту будут вводить дозу. Для здоровых субъектов должно пройти по меньшей мере 48 часов после введения второй дозы и безопасность должна быть подтверждена до введения дозы следующему субъекту.
После этого дозирование субъектов на Этапе B может происходить в тот же день или в течение нескольких дней в участвующих клинических центрах для удовлетворения оперативных потребностей. Если дозолимитирующая токсичность возникает у 1 из 3 субъектов на Этапе B, Комитет по безопасности может принять решение о включении дополнительных 3 субъектов с той же дозой для подтверждения неоднозначных выводов о безопасности или переносимости. В зависимости от полученных данных о безопасности, они могут также рекомендовать включение дополнительной когорты из 3 субъектов с более низкой дозой, чтобы определить профиль безопасности повторного дозирования. Повторное дозирование обеспечит поддержку для безопасного и переносимого дозирования с использованием схемы с 2 дозами, которая будет исследована в будущем клиническом испытании с проверкой концепции (POC).
Общее дозирование Этапа B: Общая продолжительность исследовательского периода исследования для пациентов с CD составляет до 91 дня (скрининг до 28 дней+2 дня лечения с интервалом 7 дней+наблюдение в динамике до 60 +/- 3 дня после последней дозы). Кроме того, после амбулаторного посещения в 60-й день требуется телефонное сопровождение практикующего врача (т.е. 90-й день, 120-й день, 180-й день, все +/- 3 дня). В одном варианте осуществления общая продолжительность исследования составляет до 80 дней для получателя повторной дозы (то есть период скрининга до 28 дней+период исследования до 52 дней [День 49 +/- 3 дня]).
Этап B: Общая продолжительность исследовательского периода исследования для здоровых пациентов составляет до 91 дня (скрининг до 28 дней+2 дня лечения с интервалом 7 дней+наблюдение в динамике до 60 +/- 3 дня после последней дозы).
Начальная доза: начальная доза 0,1 мг/кг, а затем 0,5 мг/кг будет исследована у 1 субъекта по схеме ускоренного титрования 1+1. Затем следует введение доз когортам из 3 субъектов в соответствии со стандартной 3+3 схемой увеличения дозы, начиная с дозы 1 мг/кг. Большие когорты используются при дозе 1 мг/кг, когда фармакологические эффекты, скорее всего, будут заметны. Запланированные дозы и обоснование приведены ниже в Таблице 1 и на Фиг. 1 и 2.
Таблица 1
мг/кг
Уровень 2
= 0,5
10x ниже PAD для начальной фармакологической активности
20x ниже NOAEL
При PAD для начальной фармакологической активности
мг/кг
определена
NOAEL: Уровень, не вызывающий видимых неблагоприятных воздействий
PAD: Фармакологически активная доза
В альтернативной схеме применения субъектам (здоровым или с целиакией) можно вводить TIMP-GLIA в дозе 8 мг, 80 мг, 320 мг, 640 мг или 800 мг, вводимой внутривенной инфузией (Фиг. 3). Начальный уровень 8,0 мг приблизительно равен 0,1 мг/кг, например, для субъекта весом 80 кг. Увеличение дозы на указанных уровнях приведено в Таблице 2.
Таблица 2 Запланированные уровни доз и обоснование
Основные конечные точки: Безопасность будет характеризоваться частотой, тяжестью и обратимостью АЕ, результатами физического обследования, результатами ЭКГ в 12 отведениях, уровнями насыщения артериальной крови кислородом с помощью пульсовой оксиметрии, показателями жизненно важных функций, измерениями, антителами против глиадина (то есть антителами против лекарственного препарата), результатами рутинных клинических лабораторных исследований (гематология, биохимический анализ крови, коагуляция, анализ мочи) и результатами специальных лабораторных анализов (например, цитокинами в острой фазе; дополнительными сосудистыми/тромботическими маркерами; активацией тучных клеток с помощью триптазы; маркерами комплемента, пролиферацией Т-клеток периферической крови), при наличии клинических показаний посредством появления системных симптомов анафилаксии/анальфилактоидной реакции/синдрома высвобождения цитокинов или IRR.
Анализ образцов, взятых для тестирования цитокинов (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-4, IL-5, IFN-δ, IL-8, IL-10, GM-CSF, MIP1α , MIP1β, GROα, IFNα, фракталкин, IP-10, IL-1α, IL-1β, EGF и другие цитокины). Если симптомы не проявляются, запланированные образцы для тестирования цитокинов до введения дозы и от 8 до 24 часов после введения дозы могут быть проанализированы в конце исследования, если иное не указано медицинским наблюдателем, спонсором или Комитетом по безопасности, или если это необходимо для соответствия установленной стабильности образца. Если выполняется пролиферация Т-клеток периферической крови в ответ на стимуляцию ex vivo глиадином после прохождения анализа TIMP-GLIA, результаты будут сообщены в конце исследования или иначе как указано спонсором, медицинским наблюдателем или Комитетом по безопасности. Переносимость будет характеризоваться степенью увеличения дозы, достигнутой без ограничивающей дозу токсичности.
ВТОРИЧНЫЕ КОНЕЧНЫЕ ТОЧКИ: PK TIMP-GLIA будет получена из концентрации TIMP-GLIA в плазме - кривой времени с помощью некомпартментного анализа. Первичными параметрами РК являются максимальная наблюдаемая концентрация (Cmax), последняя измеримая концентрация (Clast), время максимальной наблюдаемой концентрации (Tmax), и площадь под кривой с нулевого момента времени и экстраполированная до бесконечности (AUCinf) и площадь под кривой концентрация-время с нулевого момента времени до времени последней измеримой концентрации (AUClast).
Другие переменные PK будут получены, если это возможно: конечный период полувыведения (t½), площадь под кривой в течение интервала дозирования (AUCτ), площадь под кривой с нулевого момента времени (время введения дозы) до времени t, где соответствующее t будет определяться на основе данных наблюдений (AUCt), общий клиренс (CL), объем распределения (Vd) и индекс накопления (Racc). Конечный период полувыведения будет рассчитываться как t½ = ln(2)/λz, где λz представляет собой константу скорости. λz будет оцениваться как наклон от линейной регрессии с натуральным логарифмом к концентрации в качестве переменной отклика и времени в качестве независимой переменной. Для анализа будут использованы достоверные наблюдения из последней части кривой, которая является приблизительно линейной.
Кроме того, в исследовании будут оцениваться титры циркулирующих антителами против глиадина к TIMP-GLIA (то есть антитела против лекарственного препарата) в День 14, День 30 (Этап A) или 38 (Этап B) и День 60 исследования.
Субъекты: Субъект имеет целиакию и характеризуется следующим:
a. У субъекта в анамнезе подтверждена биопсией целиакии (гистология кишечника с атрофией ворсинок) согласно рекомендациям экспертов, действующим на момент постановки диагноза; и
b. Субъект является положительным на HLA-DQ2.5 (HLA-DQA1*0501/B1*0201) или HLA-DQ8.1 (DQA1*0301/B1*0302). Фенотипирование на HLA-DQ2.5 (HLA-DQA1*0501/B1*0201) и HLA-DQ8.1 (DQA1*0301/B1*0302) выполняются биоаналитической лабораторией и могут быть оценены при посещении скринингового визита, если это не было сделано ранее или неизвестно;
c. Субъект не подвергался известному воздействию глютена в течение приблизительно 2 месяцев до зачисления и желает поддерживать безглютеновую диету в течение всего исследования;
d. Субъект имеет общий титр иммуноглобулина A (IgA) в пределах нормы или имеет частичный дефицит IgA (~ 5% пациентов с целиакией), определяемый сниженным уровнем IgA в сыворотке 3-70 мг/дл при скрининге, и у субъекта титр IgА, специфического к рекомбинантной трансглутаминазе (тТГ) человека, является отрицательным или слабо положительным при скрининге или для субъекта с селективным дефицитом IgA (~ 2% больных целиакией), титр IgG, специфического к деамидированному глиадиновому пептиду (DGP), является отрицательным или слабопозитивным при скрининге. Общая сывороточная концентрация иммуноглобулина А (IgA), IgA-антитела, специфического к тканевой трансглутаминазе (тТГ), или IgG-антитела, специфического к дезамидированному глиадиновому пептиду (DGP), будет измерена в биоаналитической лаборатории.
Здоровый субъект при скрининговом визите (n=не менее 22) - это взрослый мужчина или женщина в возрасте от 18 до 65 лет включительно. У здорового субъекта индекс массы тела (ИМТ) составляет > 16 кг/м2 с минимальной массой тела 33 кг до максимальной массы тела 129 кг включительно (или альтернативно имеет минимальную массу тела > 45 кг (99,0 фунтов) до максимальной массы тела 121 кг (266,2 фунта) при скрининговом визите и, если ИМТ <18 («недостаточный вес») или> 25 («избыточный вес» или «ожирение»), пациент считается здоровым в других отношениях, по мнению исследователя. Здоровые субъекты также находятся в определенных диапазонах клинических лабораторных тестов, как того требуют критерии исследования.
TIMP-GLIA: Для этого исследования TIMP-GLIA состоит из экстракта глиадина в отрицательно заряженной (от -35 до -50 мВ) полимерной матрице частиц PLGA со средним размером от 400 до 800 нм и приблизительным распределением по размерам между ~ 200 нм и ~ 700 нм. Около 10 мкг очищенного глиадина приходится на мг частиц PLGA.
TIMP-GLIA поставляется в виде лиофилизированного порошка в одноразовом стеклянном флаконе объемом 20 мл, содержащем приблизительно 1 мг очищенного глиадина и 100 мг частиц PLGA. TIMP-GLIA должен быть восстановлен с помощью 2,5 мл стерильной воды для инъекций (SWI) и дополнительно разбавлен для инфузии с помощью 0,9% раствора хлорида натрия, USP. Раствор лекарственного препарата вводят внутривенной инфузией в день приготовления с использованием контролируемого инфузионного устройства. Конкретные инструкции по восстановлению, разведению и хранению приведены в Фармацевтическом руководстве. Флаконы TIMP-GLIA хранятся в безопасном месте с ограниченным доступом с контролем температуры при температуре от 2° C до 8° C (36-46° F) и защищены от света.
Дозирование и режим введения доз: изначально TIMP-GLIA вводят один раз в виде внутривенной инфузии с помощью контролируемого инфузионного устройства. Запланированные дозы будут варьироваться, как показано на Фиг. 1, Фиг. 2 и Фиг. 3. Дозирование будет происходить в День 1 Этапа A, а также в День 1 и 8 Этапа B (повторное дозирование) (с интервалом в 7 дней). Например, на Этапе А субъектам вводят дозу 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг и 1 мг/кг за одну в/в инфузию. В некоторых группах исследования начальная доза 0,1 мг/кг, а затем 0,5 мг/кг будет исследована у 1 субъекта по схеме ускоренного титрования 1+1. Затем следует введение доз когортам из 3 субъектов в соответствии со стандартной 3+3 схемой увеличения дозы, начиная с дозы 1 мг/кг. Для инфузии 3+3 3 субъекта могут быть дозированы по 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг, 6,0 мг/кг или 8,0 мг/кг, и дополнительно от 1 до 3 субъектов могут быть добавлены в группы, если есть событие выбывания. Субъектам также могут быть введены дозы в соответствии с указанной схемой с использованием доз, как показано на Фиг. 3.
В качестве меры предосторожности венозный доступ должен быть сохранен для экстренного использования в течение 24 часов после дозирования. В дни дозирования субъекты получают назначенное исследуемое лекарственное вещество после того, как субъект воздерживался от приема еды и напитков приблизительно 2 часа до начала инфузии и через 1 час после окончания инфузии. Вода может быть предоставлена по желанию.
После того, как все субъекты на уровне дозы завершили процедуры исследования в течение 3-го дня (48 часов после введения дозы), определяют общую безопасность и переносимость дозы с помощью оценки Комитетом по безопасности данных о безопасности [Неблагоприятные события (AE), показатели жизненно важных функций, ЭКГ в 12 отведениях, клинические лабораторные тесты] для текущей когорты и имеющихся кумулятивных данных АЕ из предыдущих когорт в соответствии с правилами прекращения участия в исследовании.
Снижение дозы: В зависимости от полученных данных о безопасности Комитет по безопасности может рекомендовать дозировать когорту из 1 субъекта (ускоренное титрование 1+1, Этап A) или 3 субъектов (стандарт 3+3, Этап A и Этап B) дозой ниже запланированного уровня, чтобы лучше определить максимально переносимую дозу TIMP-GLIA.
Образцы крови собирают через периферически размещенную в/в канюлю или путем прямой венопункции в подходящую вену предплечья. Образцы для биохимического анализа будут собираться в условиях голодания и в соответствии с приемлемыми лабораторными процедурами/протоколами.
Аналитические методы
Оценка активации тучных клеток и активации комплемента и дополнительная оценка сосудистых/тромботических маркеров: Симптомы анафилаксии/анафилактоидного ответа или IRR (например, лихорадка, тошнота, озноб, дрожь, гипотензия, тахикардия, астения, головная боль, сыпь, першение в горле и одышка) сопровождаются дополнительным лабораторным тестированием активации тучных клеток (триптаза), активации комплемента (C3a, C5a, CH50, C5-9) и сосудистых/тромботических маркеров (D-димер, vWG, ICAM-1, фибриноген, протромбиновый фрагмент 1,2 и P-селектин). Образцы до введения дозы будут получены от всех субъектов, с дополнительными образцами после введения дозы, которые будут взяты у субъектов с симптомами по мере необходимости (prn) при наличии клинических показаний. Образцы должны быть проанализированы незамедлительно, и результаты должны быть сообщены исследователю как можно скорее в случае клинического проявления анафилаксии/анафилактоидного ответа или IRR.
Цельная кровь для выделения РВМС: Образцы получены от всех субъектов до введения дозы. Дополнительный(е) образец(ы) будут собран по мере необходимости при наличии клинических показаний посредством появления симптомов анафилаксии/анафилактоидного ответа/синдрома высвобождения цитокинов или IRR. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) будут выделены из образцов цельной крови при наличии клинических показаний, чтобы определить количество Т-клеток, продуцирующих IFN-γ и IL-10, с помощью анализа с использованием метода иммуноферментных пятен (ELISpot) и пролиферацию Т-клеток в ответ на ex vivo стимуляцию глиадином (с помощью установленного анализа пролиферации). Результаты анализируются только при наличии клинических показаний или по усмотрению спонсора и доступны в конце испытания или по мере необходимости для соблюдения установленной стабильности образца.
Анализ цитокинов: образцы для определения цитокинов в острой фазе (TNF-α, IFN-γ, IL-2, IL-6, IL-4, IL-5, IFN-δ, IL-8, IL-10, GM-CSF , MIP1α, MIP1β, GROα, IFNα, фракталкин, IP-10, IL-1α, IL-1β или другие цитокины) следует собирать до введения дозы и через 24 часа после введения дозы, например, через 8 часов и 24 часа (для всех субъектов). Дополнительные образцы должны быть получены у пациентов с системными симптомами анафилаксии/анальфилактоидной реакции/синдрома высвобождения цитокинов или IRR, такими как лихорадка, тошнота, озноб, дрожь, гипотензия, тахикардия, астения, головная боль, сыпь, першение в горле и одышка. Измерение антител против глиадина (то есть антител против лекарственного препарата) и определение иммунного комплекса с помощью анализа связывания с C1q и клеток Раджи в сыворотке будут выполняться с использованием утвержденной методики в соответствующей биоаналитической(их) лаборатории (ях). Например, IgG-антитело, специфическое к дезамидированному глиадиновому пептиду (DGP), будет использоваться в качестве теста на антитело против лекарственного препарата.
Пример 2 - Оценка безопасности и переносимости после первого введения человеку дозы TIMP-GLIA
В настоящем исследовании использовались критерии, приведенные выше в Примере 1 для проведения исследования, с изменениями, отмеченными ниже.
Критерию включения при скрининговом визите соответствовал пациент, который был взрослым мужчиной или женщиной в возрасте от 18 до 75 лет включительно. У субъекта индекс массы тела (ИМТ) составляет > 16 кг/м2 с минимальной массой тела 33 кг до максимальной массы тела 129 кг включительно при скрининговом визите и, если ИМТ <18 («недостаточный вес») или> 25 («избыточный вес» или «ожирение»), пациент считается здоровым в других отношениях, по мнению исследователя.
Пациент с CD не обязан подвергаться генотипированию, но биопсии, подтверждающей CD, достаточно. Также, субъекта не подвергался известному воздействия глютена в течение по меньшей мере 10 дней до скринингового визита, и он придерживался диеты без глютена в течение всего исследования.
ИССЛЕДОВАНИЕ. Чтобы установить безопасность, переносимость и фармакокинетику (РК) TIMP-GLIA у людей, 23 пациента с подтвержденной биопсией целиакией (CD) были включены в Фазу 1 многоцентрового двухэтапного исследования. На Этапе A исследования оценивались однократные возрастающие дозы TIMP-GLIA; на Этапе B оценивались повторные (Дни 1 и 8) возрастающие дозы TIMP-GLIA. Согласившиеся субъекты были проверены на соответствие критериям в течение 28 дней после Дня 1/Дозы 1. Субъекты находились в отделении клинического исследования в течение 12 часов до введения дозы и в течение 48 часов после введения дозы. За безопасностью всех субъектов следили до 180 дня. Безопасность и переносимость оценивали с помощью физического обследования, электрокардиограммы, дистанционного измерения, пульсовой оксиметрии, показателей жизненно важных функций, побочных эффектов (AEs), биохимический анализ крови, общего анализа крови с подсчетом форменных элементов, сывороточных цитокинов и хемокинов, уровней комплемента в плазме, пролиферации глиадин-специфических Т-клеток и секреции цитокинов, и дезамидированного глиадинового пептида (DGP) иммуноглобулина G (IgG). РК измеряли до введения дозы, через 30 минут, 35 минут, в конце инфузии, через 1, 4, 12, 24, 48 и 144 часа после каждой дозы. Безопасность контролировали на протяжении всего испытания независимый Комитет по мониторингу данных.
На Этапе A исследования 17 субъектам вводили однократную внутривенную (IV) дозу TIMP-GLIA в диапазоне от 0,5 мг/кг до 8 мг/кг (Фиг. 5A). TIMP-GLIA вводили инфузию в течение 30 минут, за исключением 2 субъектов с дозой 8 мг/кг, которым вводили инфузию в течение ~ 2,5 часов. Субъектам вводили дозу по меньшей мере через 7 дней после подтверждения безопасности и переносимости у предыдущего субъекта. Повышение дозы происходило, когда безопасность и переносимость были подтверждены для предшествующего уровня дозы.
На Этапе B исследования 6 субъектам вводили 2 внутривенных дозы TIMP-GLIA в диапазоне от 2 до 8 мг/кг до максимум 650 мг (Фиг. 5B) в Дни 1 и 8. TIMP-GLIA вводили инфузией в течение более ~ 2,5 часа. Повышение дозы происходило, когда безопасность и переносимость были подтверждены для предшествующего уровня дозы.
ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ:
Неблагоприятные события: Оценка пациентов на Этапе A и Этапе B исследования показала, что TIMP-GLIA безопасен и переносим до дозы 8 мг/кг. Во время Этапа A исследования 2 из 4 субъектов, получавших однократную дозу 8 мг/кг, испытывали инфузионную реакцию от легкой до умеренной степени (IR). У первого субъекта появилась сыпь (степень 2), систолическая гипотензия (степень 2) и нарушение концентрации (степень 1) через ~ 5 минут после введения инфузии. Исследователь прекратил инфузию, и симптомы исчезли в течение нескольких минут. Второй субъект испытывал приливы (степень 2), тошноту (степень 1), рвоту (степень 1), боль в спине (степень 1) и визуальные изменения (степень 1). Исследователь прервал инфузию и назначил пациенту дифенгидрамин. Симптомы исчезли в течение нескольких минут, и инфузия была возобновлена и завершена без дальнейших инцидентов.
После рассмотрения всех данных по безопасности Этапа A Комитет по мониторингу данных рекомендовал, чтобы 1) частица TIMP-GLIA разводилась в 200 мл физиологического раствора (первоначально в 100 мл), и 2) частицу вводили в течение ~ 2,5 часов - 20 мл/час в течение первых 15 минут, 40 мл/час в течение следующих 15 минут, а затем 80 мл/час в течение инфузии.
Во время Этапа B исследования 1 пациент (из 2), получавший 4 мг/кг, испытывал легкую боль в спине во время обеих инфузий через ~ 10 минут после инфузии. Исследователь ненадолго прервал первую инфузию и не прервал вторую инфузию. Ни у одного из других 5 субъектов, получавших повторную дозу TIMP-GLIA, не сообщалось о других АЕ.
Не было никаких серьезных AE (SAE), о которых сообщалось, ни у одного субъекта на Этапе A или Этапе B. Все кроме 1 AE были ≤ 2-й степени (умеренные); 1 субъект сообщил о колите 3-й степени (без целиакии), который, по мнению исследователя, не имеет отношения к TIMP-GLIA. Наиболее частые события, наблюдаемые у ≥ 2 субъектов, включают: приливы (n=5, 22%), головную боль (n=4, 17%), боль в спине (n=3, 13%), усталость (n=2, 9% ), боль в животе (n=2, 9%) и диарею (n=2, 9%). Приливы наблюдались только у субъектов с однократной дозой. Два субъекта на Этапе А испытывали боль в спине (1 при 4 мг/кг, 1 при 8 мг/кг) по сравнению с 1 субъектом (4 мг/кг) в группе с повторной дозой. Никаких тенденций для любого другого AE не было.
Сывороточные цитокины и хемокины: Уровни следующих цитокинов и хемокинов измеряли методом ИФА: EGF, фракталкина, GM-CSF, GRO α, IFN-α, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, растворимого рецептора IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL -10, IL-12, IL-13, IL-17, IP-10, MIP1α, MIP1β и TNF-α). Образцы отбирали в обеих Частях A и B: до введения дозы, через 8 и 24 часа, через 7 и 14 дней после каждой дозы. Не было клинически значимых изменений каких-либо сывороточных цитокинов или хемокинов, включая воспалительные цитокины, через 14 дней после каждой дозы.
Глиадин-специфическая пролиферация Т-клеток и высвобождение цитокинов ex vivo: Цельную кровь собирали у пациентов как на Этапе А (только для групп доз 4 и 8 мг/кг), так и на Этапе В для выделения моноцитов периферической крови (РВМС). Цельную кровь собирали до введения дозы и через 7 дней после каждой дозы. Антиген-специфические (в данном случае глиадин) анализы пролиферации и высвобождения цитокинов ex vivo (IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, TNF-α) проводили с использованием стандартизированных и утвержденных анализов. Вкратце, PBMC, выделенные от каждого субъекта, высевали в концентрации 100000 клеток/лунку в многолуночный аналитический планшет и стимулировали только культуральной средой (отрицательный контроль), анти-CD3 (положительный контроль), объединенными пептидами MHC-II CEFT (положительный контроль) или глиадин-иммунодоминантными пептидами (альфа-глиадин - QLQPFPQPELPYPQPQS (SEQ ID NO: 1) или омега глиадин - PFPQPEQPFPW (SEQ ID NO: 2)). После 48-72 часов инкубации культуральные супернатанты собирали для анализа цитокинов с использованием мультиплексированными планшетами для цитокинов Mesoscale Discovery (MSD). Пролиферацию Т-клеток измеряли с использованием анализа на основе люминесценции с использованием химического реактива Promega CellTiterGlo®.
Никаких изменений в пролиферации Т-клеток или уровнях цитокинов не наблюдалось ни в одной из групп доз. Таблицы 3A-D ниже показывают изменение по сравнению с исходными значениями для субъектов Этапа B для пролиферации T-клеток (Таблица 3A) и воспалительных цитокинов IFN-γ (Таблица 3B), IL-4 (Таблица 3C) и IL-6 (Таблица 3D) в зависимости от группы дозы.
Таблица 3А
Таблица 3В
Таблица 3С
Таблица 3D
Активация комплемента: Чтобы определить влияние введения TIMP-GLIA на активацию комплемента, у пациентов на Этапе В исследования были взяты образцы крови: до введения дозы, через 15 и 30 минут после инфузии и через 24 часа после инфузии. Уровни комплемента C3a, C5a и SC5B-9 измеряли в образцах от каждого субъекта с помощью ИФА. Таблицы 4A-C показывают результаты по маркеру комплемента, группе дозы и субъекту.
Таблица 4А
Таблица 4В
Таблица 4C
PK TIMP-GLIA: Как отмечено выше, образцы плазмы для РК были получены в следующие моменты времени: PK до введения дозы, через 30 минут, 35 минут, в конце инфузии, через 1, 4, 12, 24, 48 и 144 часа после каждой дозы, для субъектов в Частях A и B. Концентрации TIMP-GLIA в плазме отдельного субъекта во времени (фактическое время, прошедшее с момента введения дозы) будут использоваться для получения параметров PK с использованием некомпартментного анализа: максимальная наблюдаемая концентрации (Cmax), последняя измеримая концентрация (Clast), время максимальной наблюдаемой концентрации (Tmax) и площадь под кривой с нулевого момента времени и экстраполированная до бесконечности (AUCinf) и площадь под кривой концентрация-время с нулевого момента времени до времени последней измеримой концентрации (AUClast). Концентрации TIMP-GLIA в плазме отдельного субъекта, измеренные по уровням глиадина в плазме с течением времени и нанесенные на график в зависимости от дозы, показаны на Фиг. 6 A-F.
Данные Фазы 1 многоцентрового клинического испытания, впервые проводимого на человеке, демонстрируют, что TIMP-GLIA, вводимый внутривенно в дозах от 0,1 до 8 мг/кг, в целом безопасна и хорошо переносится. Сообщается, что наиболее частыми проявлениями АЕ были приливы, головная боль, боль в спине, усталость, боль в животе (n=2, 9%) и диарея. Все АЕ были от легкой до умеренной степени. Не было доказательств иммунной активации, о чем свидетельствует отсутствие увеличения количества сывороточных цитокинов и хемокинов, а также отсутствие увеличения пролиферации глиадин-специфических Т-клеток и секреции цитокинов в РВМС.
Два из четырех субъектов, получавших однократную дозу 8 мг/кг TIMP-GLIA, испытывали инфузионные реакции от легкой до умеренной степени. Никаких инфузионных реакций не наблюдалось у субъектов, получавших повторные дозы TIMP-GLIA (Этап B). Однако, кратковременное увеличение уровней комплемента (C3a и SC5b-9) наблюдалось через 15 и 30 минут после инфузии, но возвращалось к исходному значению через 24 часа после введения дозы. Ни у одного из субъектов не наблюдалось увеличения количества сывороточных цитокинов и хемокинов, глиадин-специфической пролиферации Т-клеток или секреции цитокинов, связывания C1q или уровней DGP-IgG, что позволяет предположить, что реакции не являются IgE-опосредованными, а являются результатом связанной с активацией комплемента псевдоаллергией (CARPA). Исследование механизма увеличения комплемента продолжается. Фармакокинетика (PK) TIMP-GLIA, измеренная по уровням глиадина в плазме, по-видимому, пропорциональна дозе и возвращается к исходным уровням в течение 24 часов после введения.
Ожидается, что специалистам в данной области техники будут понятны многочисленные модификации и варианты изобретения, изложенного в приведенных выше иллюстративных примерах. Следовательно, данное изобретение имеет только ограничения, указанные в прилагаемой формуле изобретения.
Список использованных источников
Anderson RP, van Heel DA, Tye-Din JA, et al. T cells in peripheral blood after gluten challenge in coeliac disease. Gut. 2005;54:1217-23.
Anderson RP, Degano P, Godkin AJ, et al. In vivo antigen challenge in celiac disease identifies a single transglutaminase-modified peptide as the dominant A-gliadin T-cell epitope. Nat Med. 2000; 6:337-342.
Baranwal AK, Singhi SC, Thapa BR, Kakkar N. Celiac Crisis. Indian J Pediatr. 2003;70:433-35.
Christophersen A, Risnes LF, Bergseng E, et al. Healthy HLA-DQ2.5+ subjects lack regulatory and memory t cells specific for immunodominant gluten epitopes of celiac disease. J Immunol. 2016;196(6):2819-26.
Farrell RJ, Kelly C. Celiac Sprue. N Engl J Med. 2002;346:180-8.
Fasano A, Catassi C. Celiac Disease. N Engl J Med. 2012;367:2419-26.
Fasano A, Catassi C. Current Approaches to Diagnosis and Treatment of Celiac Disease: An Evolving Spectrum. Gastroenterol. 2001;120:636-51.
Getts DR, Shea LD, Miller SD, King NJC. Harnessing nanoparticles for immune modulation. Trends Immunol. 2015;36(7):419-27.
Green PHR, Cellier C. Celiac Disease. N Engl J Med. 2007;357:1731-43.
Han A, Newell EW, Glanville J, et al. Dietary gluten triggers concomitant activation of CD4+ and CD8+ αβ T cells and γδ T cells in celiac disease. PNAS. 2013; 110(32):13073-8.
Kaukinen K, Lindfors K, Mäki M. Advances in the treatment of coeliac disease: an immunopathogenic perspective. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2014;11:36-44.
Laurin P, Wolving M, Fälth-Magnusson K. J Ped Gastroenterol Nutr. 2002; 34:26-30
Leffler DA, Schuppan D, Pallav K, et al. Kinetics of the histological, serological and symptomatic responses to gluten challenge in adults with coeliac disease. Gut. 2013;62(7):996-1004.
Leffler DA, Acaster S, Gallop K, et al. A novel patient-derived conceptual model of the impact of celiac disease in adults: implications for patient-reported outcome and health-related quality-of-life instrument development. Value in Health. 2017;20:637-43.
Le Tourneau C, Lee JJ, Siu LL. Dose escalation methods in phase 1 cancer trials. J Natl Cancer Inst. 2009;101:708-20.
Makadia HK, Siegel SJ. Poly lactic-co-glycolic acid (PLGA) as biodegradable controlled drug delivery carrier. Polymers (Basel). 2011;3(3): 1377-97.
Mazzarella G, Stefanile R, Camarca A, Giliberti P, Cosentini E, Marano C et al. Gliadin activates HLA class I-restricted CD8+ T cells in celiac disease intestinal mucosa and induces the enterocyte apoptosis. Gastroenerol 2008;134:1017-27.
Rubio-Tapia A, Hill ID, Kelly CP et al. ACG Clinical Guidelines: Diagnosis and Management of Celiac Disease. Am J Gastroenterol. 2013;108:656-76. Rubinstein LV, Simon RM. Phase 1 Clinical Trial Design. In Handbook of Anticancer Drug Development. Budman DR, Calvert AH, Rowinsky EK (eds). Lippincott Williams & Wilkens, Baltimore, MD, 2003. pp. 297-308.
Steinman L. Inverse vaccination, the opposite of Jenner’s concept, for therapy of autoimmunity. J Intern Med. 2010; 267: 441-51.
Suntharalingam G, Perry MR, Ward S, et al. Cytokine storm in a phase 1 trial of the anti-CD28 monoclonal antibody TGN1412. N Engl J Med 2006;355(10):1018-28.
Tack GJ, Verbeek WHM, Schreurs MWJ, Mulder CJJ. The spectrum of celiac disease: epidemiology, clinical aspects and treatment. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2010;7:204-13. TIMP-GLIA Investigator’s Brochure version 1 2017.
Wang Y, Qu W, Choi S. FDA’s Regulatory Science Program for Generic PLA/ PLGA-Based Drug Products. Center for Drug Evaluation and Research FDA. Posted: June 15, 2016.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
--->
<110> COUR PHARMACEUTICALS DEVELOPMENT COMPANY INC.
< 120> ЛЕЧЕНИЕ ЦЕЛИАКИИ С ПОМОЩЬЮ ЧАСТИЦ, ВЫЗЫВАЮЩИХ ТОЛЕРАНТНОСТЬ
<130> 32821/52341/PC
<150> US 62/628 233
<151> 08.02.2018
<160> 3
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 17
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 1
Gln Leu Gln Pro Phe Pro Gln Pro Glu Leu Pro Tyr Pro Gln Pro Gln
1 5 10 15
Ser
<210> 2
<211> 11
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 2
Pro Phe Pro Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro Trp
1 5 10
<210> 3
<211> 687
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический полипептид
<400> 3
Met Ala Glu Glu Leu Val Leu Glu Arg Cys Asp Leu Glu Leu Glu Thr
1 5 10 15
Asn Gly Arg Asp His His Thr Ala Asp Leu Cys Arg Glu Lys Leu Val
20 25 30
Val Arg Arg Gly Gln Pro Phe Trp Leu Thr Leu His Phe Glu Gly Arg
35 40 45
Asn Tyr Glu Ala Ser Val Asp Ser Leu Thr Phe Ser Val Val Thr Gly
50 55 60
Pro Ala Pro Ser Gln Glu Ala Gly Thr Lys Ala Arg Phe Pro Leu Arg
65 70 75 80
Asp Ala Val Glu Glu Gly Asp Trp Thr Ala Thr Val Val Asp Gln Gln
85 90 95
Asp Cys Thr Leu Ser Leu Gln Leu Thr Thr Pro Ala Asn Ala Pro Ile
100 105 110
Gly Leu Tyr Arg Leu Ser Leu Glu Ala Ser Thr Gly Tyr Gln Gly Ser
115 120 125
Ser Phe Val Leu Gly His Phe Ile Leu Leu Phe Asn Ala Trp Cys Pro
130 135 140
Ala Asp Ala Val Tyr Leu Asp Ser Glu Glu Glu Arg Gln Glu Tyr Val
145 150 155 160
Leu Thr Gln Gln Gly Phe Ile Tyr Gln Gly Ser Ala Lys Phe Ile Lys
165 170 175
Asn Ile Pro Trp Asn Phe Gly Gln Phe Glu Asp Gly Ile Leu Asp Ile
180 185 190
Cys Leu Ile Leu Leu Asp Val Asn Pro Lys Phe Leu Lys Asn Ala Gly
195 200 205
Arg Asp Cys Ser Arg Arg Ser Ser Pro Val Tyr Val Gly Arg Val Val
210 215 220
Ser Gly Met Val Asn Cys Asn Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu Gly Arg
225 230 235 240
Trp Asp Asn Asn Tyr Gly Asp Gly Val Ser Pro Met Ser Trp Ile Gly
245 250 255
Ser Val Asp Ile Leu Arg Arg Trp Lys Asn His Gly Cys Gln Arg Val
260 265 270
Lys Tyr Gly Gln Cys Trp Val Phe Ala Ala Val Ala Cys Thr Val Leu
275 280 285
Arg Cys Leu Gly Ile Pro Thr Arg Val Val Thr Asn Tyr Asn Ser Ala
290 295 300
His Asp Gln Asn Ser Asn Leu Leu Ile Glu Tyr Phe Arg Asn Glu Phe
305 310 315 320
Gly Glu Ile Gln Gly Asp Lys Ser Glu Met Ile Trp Asn Phe His Cys
325 330 335
Trp Val Glu Ser Trp Met Thr Arg Pro Asp Leu Gln Pro Gly Tyr Glu
340 345 350
Gly Trp Gln Ala Leu Asp Pro Thr Pro Gln Glu Lys Ser Glu Gly Thr
355 360 365
Tyr Cys Cys Gly Pro Val Pro Val Arg Ala Ile Lys Glu Gly Asp Leu
370 375 380
Ser Thr Lys Tyr Asp Ala Pro Phe Val Phe Ala Glu Val Asn Ala Asp
385 390 395 400
Val Val Asp Trp Ile Gln Gln Asp Asp Gly Ser Val His Lys Ser Ile
405 410 415
Asn Arg Ser Leu Ile Val Gly Leu Lys Ile Ser Thr Lys Ser Val Gly
420 425 430
Arg Asp Glu Arg Glu Asp Ile Thr His Thr Tyr Lys Tyr Pro Glu Gly
435 440 445
Ser Ser Glu Glu Arg Glu Ala Phe Thr Arg Ala Asn His Leu Asn Lys
450 455 460
Leu Ala Glu Lys Glu Glu Thr Gly Met Ala Met Arg Ile Arg Val Gly
465 470 475 480
Gln Ser Met Asn Met Gly Ser Asp Phe Asp Val Phe Ala His Ile Thr
485 490 495
Asn Asn Thr Ala Glu Glu Tyr Val Cys Arg Leu Leu Leu Cys Ala Arg
500 505 510
Thr Val Ser Tyr Asn Gly Ile Leu Gly Pro Glu Cys Gly Thr Lys Tyr
515 520 525
Leu Leu Asn Leu Asn Leu Glu Pro Phe Ser Glu Lys Ser Val Pro Leu
530 535 540
Cys Ile Leu Tyr Glu Lys Tyr Arg Asp Cys Leu Thr Glu Ser Asn Leu
545 550 555 560
Ile Lys Val Arg Ala Leu Leu Val Glu Pro Val Ile Asn Ser Tyr Leu
565 570 575
Leu Ala Glu Arg Asp Leu Tyr Leu Glu Asn Pro Glu Ile Lys Ile Arg
580 585 590
Ile Leu Gly Glu Pro Lys Gln Lys Arg Lys Leu Val Ala Glu Val Ser
595 600 605
Leu Gln Asn Pro Leu Pro Val Ala Leu Glu Gly Cys Thr Phe Thr Val
610 615 620
Glu Gly Ala Gly Leu Thr Glu Glu Gln Lys Thr Val Glu Ile Pro Asp
625 630 635 640
Pro Val Glu Ala Gly Glu Glu Val Lys Val Arg Met Asp Leu Leu Pro
645 650 655
Leu His Met Gly Leu His Lys Leu Val Val Asn Phe Glu Ser Asp Lys
660 665 670
Leu Lys Ala Val Lys Gly Phe Arg Asn Val Ile Ile Gly Pro Ala
675 680 685
<---
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СОЧЕТАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ И ИММУНОМОДУЛЯТОРНОГО СОЕДИНЕНИЯ | 2018 |
|
RU2777911C2 |
| СПОСОБ УВЕЛИЧЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ЛИМФОЦИТОВ В ОПУХОЛЯХ С ПОМОЩЬЮ ГИБРИДНОГО БЕЛКА IL-7 | 2020 |
|
RU2822396C1 |
| СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ АСТМЫ ПОСРЕДСТВОМ ВВЕДЕНИЯ АНТАГОНИСТА IL-4R | 2013 |
|
RU2801531C2 |
| СЛИТЫЙ БЕЛОК, ВКЛЮЧАЮЩИЙ БЕЛОК IL-2 И БЕЛОК CD80, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2811541C2 |
| КОМПОЗИЦИИ АНТИТЕЛ К CD6 И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ И СНИЖЕНИЯ НЕГАТИВНЫХ ПОСЛЕДСТВИЙ КОРОНАВИРУСА, ВКЛЮЧАЯ COVID-19 | 2021 |
|
RU2828013C1 |
| АНТИТЕЛА, ИХ ПРИМЕНЕНИЕ И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ | 2016 |
|
RU2725221C2 |
| УСТОЙЧИВЫЕ К РИТУКСИМАБУ ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ И ПУТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2020 |
|
RU2816370C2 |
| СТРАТЕГИЯ ДОЗИРОВАНИЯ, УМЕНЬШАЮЩАЯ СИНДРОМ ВЫСВОБОЖДЕНИЯ ЦИТОКИНОВ ДЛЯ БИСПЕЦИФИЧНЫХ АНТИТЕЛ К CD3/C20 | 2019 |
|
RU2799529C2 |
| ИММУНОЦИТОКИНЫ НА ОСНОВЕ IL-15 И IL-15Rα ДОМЕНА SUSHI | 2012 |
|
RU2763298C2 |
| СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ АНТИТЕЛАМИ, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С РЕЦЕПТОРОМ КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА 1 (CSF1R) | 2013 |
|
RU2718751C2 |
Данное изобретение относится к области фармацевтики, а именно к способу лечения рефрактерной целиакии у субъекта. Способ лечения рефрактерной целиакии у субъекта, включающий введение субъекту вызывающей толерантность иммуномодифицирующей частицы (TIMP), инкапсулирующей один или более антигенных эпитопов глиадина (GLIA), где TIMP-GLIA вводят в дозе от 0,1 до 10 мг/кг, где у субъекта имеется генетический профиль HLA-DQ2.5 (HLA-DQA1*0501/B1*0201) или HLA-DQ8.1 (DQA1*0301/B1*0302). Изобретение позволяет лечить рефрактерную целиакию с использованием TIMP-GLIA. 13 з.п. ф-лы, 12 ил., 9 табл., 2 пр.
1. Способ лечения рефрактерной целиакии у субъекта, включающий введение субъекту вызывающей толерантность иммуномодифицирующей частицы (TIMP), инкапсулирующей один или более антигенных эпитопов глиадина (GLIA),
где TIMP-GLIA вводят в дозе от 0,1 до 10 мг/кг,
где у субъекта имеется генетический профиль HLA-DQ2.5 (HLA-DQA1*0501/B1*0201) или HLA-DQ8.1 (DQA1*0301/B1*0302).
2. Способ по п. 1, где TIMP-GLIA вводят внутривенно, подкожно, внутримышечно, интраперитонеально или перорально в однократной или в многократных дозах.
3. Способ по п. 1 или 2, где TIMP-GLIA содержит сополимер молочной и гликолевой кислот (PLGA).
4. Способ по любому из пп. 1-3, где TIMP-GLIA модифицирована функциональной карбоксильной группой на поверхности.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, где TIMP-GLIA имеет отрицательный дзета-потенциал от -80 до -30 мВ или -60 до -35 мВ.
6. Способ по п. 3, где PLGA представляет собой сополимер с соотношением полимолочной кислоты и полигликолевой кислоты, равным около 50:50.
7. Способ по любому из предыдущих пунктов, где размер частиц составляет от 100 до 1500 нм, от 100 до 1000 нм или от 400 до 800 нм.
8. Способ по любому из предыдущих пунктов, где антигены выбраны из группы, состоящей из глиадина, глютенина, гордеина и секалина.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, где субъект находится на безглютеновой диете.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, где TIMP-GLIA вводят в течение 30 минут, 1 часа, 2 часов, 3 часов или более; необязательно, вводят с возрастающей интенсивностью.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, где введение улучшает один или более признаков или симптомов целиакии или чувствительности к глютену,
где симптомы включают потерю веса, усталость, головную боль, дефицит железа, дефицит фолиевой кислоты, дефицит витамина D, дефицит витамина B12, повреждение слизистой оболочки кишечника или низкую плотность костной ткани,
где признаки включают атрофию ворсинок, окрашивание тетрамером, ELISPOT, микроРНК, экзосомы, ДНК и РНК.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, где введение приводит к апоптозу макрофагов или моноцитов у субъекта.
13. Способ по любому из предыдущих пунктов, где введение вызывает иммунологическую анергию.
14. Способ по любому из предыдущих пунктов, где TIMP-GLIA вводят в сочетании со вторым агентом.
| WO 2017143346 A1, 24.08.2017 | |||
| WO 2017112899 A1, 29.06.2017 | |||
| US 20150150996 A1, 04.06.2015 | |||
| WO 2013192532 A2, 27.12.2013 | |||
| US 20150174199 A1, 25.06.2015 | |||
| СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММУННОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОСОВМЕСТИМЫХ БИОАБСОРБИРУЕМЫХ НАНОСФЕР | 2011 |
|
RU2635537C2 |
