Способ получения сложных эфиров антибиотиков из группы полиеновых макролидов или их @ -замещенных производных Советский патент 1983 года по МПК C07G11/00 A61K31/7048 

Изобретение относится к усоверше ствованному способу получения сложн эфиров антибиотиков из группы полие новых макролидов или их N-замеиенны производных, которые могут найти св применение в медицинской практике. Известен способ получения сложны эфиров антибиотиков из, например ме тилового эфира нистатина, пимарицин амфотерицина, кандицидина, группы п лиеновых макролидов, заключающийся во взаимодействии соответствующего |11олиенового макролида в тетрагйдроф ;ране с диазрметаном в тетрагидрофур не при комнатной температуре 13. Недостатком известного способа по лучения сложных эфиров полиеновых макролидов является использование для реакции алкилирования диазоалканов, взрывоопасных и токсичных веществ.. Цель изобретения - упрощение процесса и расширение ассортимента целевого продукта. Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения сложных эфиров антибиотиков из группы полиеновых макролидов или их N-замещенных производных общей формулы. где R - остаток полиенового макроли . Да такого, -как пимарицин, нистатин, полифунгин, амфотерицин В, ауреофацин, или его N-замещенное производное, причем заместителем .является N-ацетил, N-(N,N-диметиламино)-метилен, М-пентен-2-он-4-ил-2, N-(1-карбоалкокси)-пропен-1-ил : :. -2, ;,/ :- -; -. , R - С -С -алкил, фенил, п-нитрофенил, бензил, метоксибен .-.: . зил, , . . , Ма соответствунадий полиеновый макролид, или на его N-замещенное производное действуют спиртом формулы , (II) . где R. имеет указанные значения, в среде органического раС ворителя такого, как N,N-диметилацетамид, М,К-дим1 тилформамид, пиридин или тетрагидрофуран в присутствии дицйклогексилкарбодиимида или дициклогексилкарбодиимида с добавкой гидроксибензтриазола при 20-40°С. РЯД соединений, полученных этим путем, являются новыми. Структур полученных производных доказана путем сравнения с исходным антибиотиком из группы полиеновых макролндов, а также на основе спектроскопического анализа в ультрафиолете, видимом свете и в инфракрасном излучении и массовой спектрометрии, ,выполненной техникой десорбции полем. Абсорбционные спектры в области видимого света и ультрафиолета полученных эфиров .и исходных антибиотиков незначительно отличаются только интенсивностью, а положение максимумов абсорб ции и осциллационная структура являются одйнаков1-ми. Это свидетельствует о неизменной структуре полиенового хромофора в полученных производных. Доказательством присутствия эфирной связи в молекуле производной антибиотика является присутствие интен;сивной абсорбционной полосы в инфра. красном спектре при см (апя алифатических и ароматических эфирсзв) при одновременном отсутствии полосы карбоксиланового иона, характерного для исходного антибиотика при 1590 см-, . Пример. 1 г нистатина (Е,°, 800 при 304 нм) и 1 г дициклогексилкарбодиимида (ДЦГК) растворяют в 200 см безводного метанола и смешивают при в течение 15 мин. В течение этого времени практически весь антибиотик прореагирует. Ход реакции контролируют с помощью тонкослойной хроматографии состава эТилацетат:уксусная кислота:вода (4:1:1). Затем испаряют метанол при уменьшен- . ном давлении до объема в несколько кубических сантиметров и осаждают этиловым эфиром. После очистки продукт центрифугируют, промывают поочередно этиловым спиртом и гексаном и сушат при уменьшенном давлении. Получают 0,9 г сырого метилового эфира нистатина с при 304 нм. после очистки методом колоночной хроматографии на Sephadex.e 20 в составе хлороформ: метанол (5:1) получают 0,8 г метилового эфира нистатина 720 при 304 нм), что составляет 80% от теоретического. При м е р 2. К 1 г нистатина (Е,-800 при 304 нм) и 1 ДЦГК добавляют 20 мл свежедистиллированного бензилового спЩэта, смешивают до растворения и оставляют на ночь. Добавксэй 300 мл смеси этиловый спирт:гексан (2:1) осаждают продукт, центрифугируют, промывают поочередно этиловым спиртом и гексаном и сушат при уменьшенном давлении. Получают О,75 г эфира сырого продукта с 670 при 304 нм, который очищаютМетодом колоночной хроматографии на Sephadexe.20 в составе хлороформгметанол (10:1). Получают 0,65 г бензилового эфира нистатина с 760 при 304 нм, что состав-ляет бЬ% от теоретического. Примерз. О,4 г нистатина, 0,3 г ДЦГК и.О,5 г р-нитрофенола

растворяют в смеси 3 см N,N-диметилацетамида и пиридина (1:1). и оставлягот на ночь при . После осаждения этиловым эфиром и неоднокра - i ной промывки эфиром и гексаном получают 0,35 г сырогх продукта (. 630 при 304 им). Его очищают методом колоночной хроматографии на СИликагеле, предварительно насьпченнём водой, в составе хлороформ:бутанол: гвода (20:20:1) и получают 0,3 г р-ни«)офенилового эфира нистатина . (с Е.дм fiPH 304 нм) , что состав ляет 65Г% от теоретического. П р и м е р 4. 0,5 г нистатина и 0,5 г ДЦГК растворяют в 3 см насы1|4ённого раствора фенола в М,Ы-диме- тилацетамида и оставляют на ночь при . Осаждают этиловым эфиром прог дукт и очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, предва- ительно насыщенном водой, в состав ё хлороформ:метанол:вода (20:10:О,5). , Получают 0,3 г фенилевого эфира нистатина ( 700 при 304 нм), что составляет 55% от теоретического.

П р и м е р 5 Н-(1-карбоалкокси)- пропент1-ил-2-ЫРА производная. 1 г NРА-производной ауреофацина при 373 им и 0,5 г ЩТК растворяют в 20 см смеси г-ютанола и тетратадрофурайа (1:1.) и оставляют на ночь при 40°С. Затем сгущают ; при уменьшенном давлении до нескольких кубический, сантиметров и осаждают, продукт этиловым спиртом.

Ioлyчa эт 0,9 г метилового эфира ЫРА-производн0й ауреофацина (ЕП 500 при 378 им). При м е р б. 0,5 г NPA-npOK3iводной кандицидина (Et, 503 прц 383 им) и г дагК растворяют в 10 см смеси метанола и тетрдгидррфурана (1:1) и оставляют на ночь при температуре . Выделение анаиогичао примеру 5. Попучают 0,45 г (Е1Й,« 400) , что составляет 80% от теоре- тическогр. . - . .. ;

При мер 7. 0,3 г N-ацетилпЙ марицийа с 110 при 304 нм и 0,2 г растворяют в 2 wi свеже дистиллированного бензилового спирта и оставляют на ночь при комнатной температуре. :

Осадок, виделенний смесью этилови ,эфир: гексан (2:1), наносят на коярн ку, наполненную гелем Sephadex LH 20 и хроматографируют в системе хлорог форм : иетачол (5:1). Получают 0,2 г бензилового эфкра и Н-ацетилпиратшцина (, 1000 при 304 нм) , что соСгташшет 60% от теоретического.

Пример 8. 0,5 г Ы-аце±иламфотерицина В с 1, 1200 .при 383 НМ и 0,4 г ДЦГК растворяют в 5 14Л свежедистиллированного бензилового спирта и оставляют на ночь при кси иатной

температуре. Способ выделения аналогичен примеру 7.

Получают 0,45 г бензилового эфира N-ацетиламфотерицина В с 1200 при 383 нм, что составляет 85% от теоретического.

П р и м е р. 9. 0,5 г N-ацетилнистатина (,900 при 304 нм) и 0,4 г ДдГК растворяйт в 3 мп свежедастил ; лированного бензилового спирта и оставляют на ночь при комнатной текшературе. Способ выделения аналоточен примеру 7. Получают 0,4 г бензиловогс эфира N-ацетилнистатина ( или 304 нм), что составляет 75% от теоретического.

П р и м е р 10. 1 г полйфунгина ( при 304 нм) растворяют в 10 uci безводного метанола, добавляют 1 г дициклогексилкарбодиилетда и смеиивают 24 ч при коглнатной тег пературе. Ход реакции контролируют с поыощью тонкослойной хроматографии в составе этилацетат : уксусная кислота : : вода (4:1:1). Затем добавляют 5 1лп бутанола, испаряют метанол при уменьиеиии давления и oca}Jcдaют этилогл4 эфиром осадок метилового эфира полифунгина. Оса;кденный продукт пролива- ;ют около трех раз и сушат при уменьшенном давлении. Получают 580 г метилового эфира полйфунгина с Е 760 при 304 нм, что составляет около 70% от теоретического. 1С 0,25 мкг/мл.

Приме р 11. 0,5 г NРА-производной амфотерицина В с Е 1550 при 382 нм растворяют в 5 мл безводного этанола, добавляют 0,5 г ЩГК и отвешивают при комнатной температуре 24 ч. Реакцию контролируют с помощью тонкослойной хроматографии в составе этилгщетат : уксусная кислота : вода (4:1:1). Затем добавляют 1 мп пиридина и Через 4ч рсаждают этиловым эфиром из раствора осадок этилового эфира NРА-производной амфотерицина Б осадок двукратно прокывают этиловым эфиром и сушат при уменьшенном давлении. Получают 0,4 г этилового эфира NPA-прРизводной амфотерицина.В. iCgQ 0,05 мкг/м)1,чтосоставляет 80% о теоретического с El|l 1260 при 382 им Осадок этиловогР эфира NpA-производной амфотерицина В растворяют в составе хлороформ : метанол : вода (lOOtlO:) и наносят на копоиху Sephadex L1I. 20. После колонки выделяют 250 г эфира с Е 1400.

П р и м е р 12. 0,5 г ЫРА-п$юизводной нистатина с Е , растворяют ё 100 МП этанола, добавляют 0,4 г ДДГК и оставляют при комнатной температуре на 24 ч. Полученный продукт .этилового эфира NPA-производной ниститина осаждают .этиловым эфиром, двукратно этиловым эфиром и сушат при уменьшенном давлении .о Получают 0,5 г этилового эфира NPA7npo йзводной нистатина с El5° 500, iCcr, . . rCWvt f « 0,5 мкг/мл. П, p и м e p 13. 100 мг NPA-npoH3 воЛ)Ной амфотврицйна с при 382 им растворяют в 20 мп бутанола, добавляют 100 мг ДЦГК и оставляют на 24 ч при . После проверки с поглощью тонкослойной хроматографии в составе этилацетат : уксусная кисло:та : вода (4,1:1) и прореагирования из реакционной смеси осаокдают этиловым Э:фиром осадок, который двукратно промывают этиловым эфиром и сушат при уменьшенном давлении. Получают . 85 мг бутилового эфира NPА-производной амфотерицина с при 304 нм, что составляет 80% от теоретического. П р и м е р 14, 0,4 г NPA-произвойной пирамицина с при 304 нм растворяют в 20 мл безводного метанола.и добавляют 100 мг ДЦГК. После реакции в течение 20 ч при комнатной температуре ход этой реакции проверяют методом тонкослойной хроматографии (практически прореагировала целая N РА-производная). Осаждают осадок из метанола с помощью этилового эфира, двукратно промывают этиловым эфиром и сушат при уменьшенном давлении. Получают 14 мг метилового эфира J PA-производной пирамицина с , 1Сд мкг/г-ш. П Р:й мер 15. 50 мг кандицидина с Е.| 600 астворяют в 1 мл пиридина, добавляют 50 мг дициклогексилкарбодиимида и 50 мг гексаметилбенэтриазола. ..После смешивания в течение 1 ч при добавляют 3 мл метанола и оставляют при комнатной температу-, ре на 24 ч. Продукт реакции осаждают этиловым эфиром, двукратно промывают этиловым эфиром и сушат при уменьшенном давлении. Получают 35 мг метилового эфира кандицидина с , 0,001 мкг/мп. Пример: 16. К 50 мг полифунгина с добавляют 1 мл анисового спирта и 50 мг ДЦГК. Реакция продолжается 30 ч при . Ход реакции контролируют методом тонкослойной хроматс 11}афии в составе хлорбформ : метанол : вода (100:25:3). По окончании реакции продукт осаждают этиловым эфиром, два раза промывают этиловым эфиром и сушат при уменьшенном давлении. Получают 30 мг анисового эфира полифунгина с , 1Сзд.0,4 мкг/мл. алход 65% от теоретического. Противогрибковая активность сложных эфиров антибиотиков изобретения представлена в таблице. Таким образом, изобретение позволяет получать сложные эфиры антибиотиков из группы полиеновых макролидов и их N-замещенных производных без использования взрывоопасных и токсичных ииэоалканов и поз воляет расширить ассортимент целевого продукта.

Способ получения сложных эфиров антибиотиков из группы полиеновых макролидов или их К-заг 1е1ценных производных общей формулы , / R-C- OBi где R - остаток полиенового макролида такого, как пимарицин, нистатин, полифуигии, гшфо-терицин в, ауреофасцин, или ) его N-згцлещенное пр 1звод ное, причем заместителем является.N-ацетил, N-(NvN -диметиламино)-метилен, N-пентен-2-он-4-иЛ2, N-

р-Нитрофениловый Эфир

Фениловый эфир

Ауреофацин

Метиловый эфир Кандицидин

Бензиловый эфир N-ацетилнистатина Этиловый эфир N-(пентен-2-он-4-ило-2)-нистатина

Метиловый эфир Ы-(пентен-2-он-4-ило-2)-ауреофацина

Метиловый эфир N-(neHTeH72-он-4-ило-2)-кандицидина

АМфотерицин в

ttiilpuiMriitMfi

ПсмМфуйти Метиловый эфир

.Анисовый эфир

л ч

1 11«актм яый сложный эфир

Продолжениа таблицы

Бенэиловый эфир N-ацетиламфотерицийа В

Этиловый эфир (4-(пеитен-2-он -4-11Лб-2-)-амфотврицииа В

Бутиловый эфир Ы-(пеитен-2 -он 4гило-2)-амфоте1р Ицина/В

{Вёнэиловый эфир N-ацетилпицина

метиловый эфир Н-(пеитен-он-4-ило 2)-пимарицииа