Способ получения производных пептидов Советский патент 1985 года по МПК C07K5/87 A61K38/06 C07K5/23 

Изобретение относится к новому способу получения новых производных пептидов - соединений, содержащих хромофорную группу, которые могут найти применение в биологии, биохимии и медицине.

Известный способ получения пептидных производных с хромофорной группой состоит во взаимодействии пептидов с соединениями, содержащим хромофорную группу l .

CN

СН-СНг Л- СН-Ш-С-СН-Ш-С-СРз

N III III

сн.

где R - он, НН,

заключающемся в том, чтр пептид

общей формулы П:

R-C-CH-NH-C-CH-KH-C-CH-NH2X II III I II I

О CHz О СНг

сн

СНз СНз где Па) R-- КН , X - Н; fl S R - ОСН5, X-COCF или Пав вине ацетата . подвергают взаимодействию с нитрило фумаровой кислоты в присутствии дегидратизующего агента при температуре 60-80 С, в случае, когда в реакцию вводится пептид формулы П а процесс проводят в присутствии ангидрида трифторуксусной кислоты. Пример 1. Смешивают 2,2 г (5 ммоль) амида фенилаланил-аланил-дейцина )ацетата) 0,6 г (8 ммоль) фумаронитрила, 8 мл (400 ммоль) ангидрида трифторуксусной кислоты,, к смеси добавляют 0,6 г (4 ммоль) пятиокиси фосфора м полученную суспензию перемешивают в течение 172 ч при . Избыток реагентов удаляют в вакууме, остаток нейтрали зуют насьщенным-раствором соды и экстрагируютХлороформом, раствор высушивают над сульфатсэм натрия, хлорофор удаляют s вакууме. Остато растворяют в этилацетате, отбирают апиквоТную часть и наносят на колон

Однако известный способ не позволяет модифицировать сразу два аминокислотных остатка пептида.

Цель изобретения - новый способ получения новых производных пептидов.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения ..ПРОИЗВОДНЫХ пептидов общей формулы ку (3 X 40 см), заполненную сили-, кагелем, для элюирования используют этилацетат. Отбирают первые флюоресцирующие фракции (V20 мл) , упаривают их в вакууме. Получают 190 мг (7%) трифторацетил-фенилалаНИЛ-ft-зтил3,4-дициап -5-амино-6-изобутил-пиридиламиДа. R 0,9 (этилацетат) на пластинке сйликагель Мерк Масс-спектр: М 486; 374; 242; 228; 227; 131; 91. ПНР-спектр содержит сигналы (В.м.д.) 0,9 (С4П,); 1,7 (СН.); 2,9 (СН); 7,3 (); 9,1 (Н); 9,7 (Н). Спектр возбуждения 360 нм. Спектр испускания 430 нм. Гидролиз 2,3 мг пептидилпиридина (24 ч; 6 н HCt; ) дал 4,6 мкмоль фенилаланина, расчитанное количество 4,9 мкмоль. Пример 2. Смешивают 2,29 г (5 ммоль) метилового эфира трифтор-ацетилфенилаланил-аланил-лейцина, iO,6 г (8 ммоль) фумаронитрила, 5 г силикагеля в 20 мл хлороформа, к смеси добавляют 1 г (7 ммоль) пятиокиси

фосфора и полученную суспензию размешивают 172 ч при 40-60°С. Суспензию нейтрализуют насыщенным раствором бикарбоната натрия, силикагель отфильтровывают, хлороформенный слой высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Остаток pacjBOряют в этилацетате, отбирают аликвотную часть, наносят ее на колонку (3x40 см), заполненную силикагелем и элюируют этщгацетатом. Собирают флюоресцентную фракцию(50 мл) и упаривают в вакууме. Получают 120 мг (5%) трифторацетил-фенилаланил Л-этил3,4 дициан-5-окси-6-изобутил-пиридш1амида RI 0,5 (этилацетат) на пластинке силикагель Мерк, Масс-спектр; М -487; 375; 243; 229; 131; 91.

Спектр возбуждения 360 нм, спектр испускания 462 нм. Гидролиз 2,4 мг пептидил-пиридина (24 ч, 6 н fiCE, дал 4,89 мкмоль .фенилаланина (расчетное количество 5 мкмоль).

Пример 3. Конденсацию пептида амрзда лейцил-аланил-фенилалани;на с фумаронитрилом в присутствии ангидрида трифторуксусной кислоты проводят как описано в примере 1.

При этом с колонки с силикагелем элюирую флуоресцирующий продукт трифторацетилированное по пиридиновому ядру производное, отличающееся по n-j от целевого продукта формулы 1 .

5,7 мг трифторацетилированного по пиридиновому ядру производного растворяют в 5 мл метанола, к полученному раствору добавляют 1 мл насьщ;енного раствора бикарбоната натрия Смесь перемащивают 6 ч при комнатной температуре. Получают трифторацетилфенилаланил 1 -этил-3,4-дициан-5-окси-6-изобутил-пиридиламид,Я i 0,5 (этилацетат, силикагель Мерк), масс-спектр: И : 486; 375; 243; , 229; 131; 91. Суммарный выход целе.вого продукта 17%.

Предлагаемый способ позволяет получать новые производные пептидов с пространственно закрепленной коцформацией элементов пептидной цепи вследствие жесткости ароматической системы пиридина, что может позволить получить аналоги пептидов с сохранением функции, но устойчивых к действию протеаз.

Cnncofi получения производных пептидов общей формулы I : ,CN CH-NH-C-CH-NH-C-CFj ОСНг СН, (Л где R- ОН, NHj,, отлич-ающийся тем, что пептид общей формулы И R-C-CH-NH-C-CH-NH-C-CH-NH2X М « М Н « I а I ОСНг О СН CHj CHj где П а) R - ни 2 , X - Н и 81 R- осн, X - cocfj или II а в виде ацетата подвергают взаимодействию с нитри- , лом фумаровой кислоты в присутствии ел дегидратирующего агента при темперасл туре 60-80 С, в слечае, когда в i о со реакцию вводится пептид формулы Па процесс проводят в присутствии анО) гидоида трифторуксусной кислоты.