Способ получения биоспецифичных фосфолипидсодержащих сорбентов Советский патент 1983 года по МПК B01J20/22 

сл

со

ел

Изобретение относится к способам получения биоспецеЛических сорбентов на основе гелей агарозы, содержар1Их и мoбилизoвaнныe фосфолипидные лиганда, и может быть использовано при хроматографии веществ, отли.чающихся высоким средством по отношению к лигшдам, таким как Jшпид-пepeносящие белки, «Ферменты липидиого метаболизма, липид-зависимые ферменты, мембранные белки, сывороточные лилопротеиды и апопротеины.

Известен способ получения полимерйых гидрогелей с привитыми на их поверхность функциональными группами кислого и основного характера, что обеспечивает возможность дальнейпгего присоединения к ним биологически активных веществ Q.

Недостатком данного способа является трудность получения сорбентов с воспроизводимыми свойствами вследствие различных механизмов -связываНИН иммобилизированных 1сомпонентов.

Наиболее близким к предпагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ получения биоспеци чных Аосфолипид-содержащих сорбейтов иа основе гелей агарозы, включающий конденсацию карбоксипроизводных фосфотшпидов с аминоалкилсефарозой в присутствии водорастворимого карбодиимида в растворе полярного Органического растворителя г.

Согласно данному способу реакцию конденсации проводят в интервале рЙ 5,5-6,5, используя в качестве раетво рителя 4П-50%-ные растворы тетрапидрофурана, перемешивая в течение 2448 ч, АН-сефарозу с карбоксифосфолипидами в присутствии аминоалкильнык производных карбодиимида.

Недостатком данного способа является низкая эффективность реакции конденсаоди фосфолипидов на сорбенте и, как следствие этого, их невысокое содержание на геле MI-сефарозы (1,22,5 мкмоль на 1 мл геля)

Цель-изобретения - улучшение адсорбционных характеристик путем повышения содержания иммобилизованных фосфолипидов на сорбенте.

Поставленная цель достигается тем что согласно способу получения биоспецифических фосфолипидсодержащих сорбентов на основе гелей агарозы, вкгдачагачему конденсацию карбоксипронзвод5 мх фосфолипидов с аминоапкилсефарозой в присутствии водорастворимого карбодиимида в растворе полярного органического растворителя, в качестве последнего используют диметилсульфоксид,

- Способ осуществляют следующим образом.Промытый хлористым натрием и водой гель аминоалкилсефарозы (АН-сефарозы) перемешивают в течение 2448 ч при комнатной температуре с раствором карбоксипроизводных фосфолипидов, таких как 1-ацш1-2-азелаш1-Sn-глицеро-З-фосфохолин или 2-ациламино-3-окси-З-карбокси-О-эритропропаноло-}-(юсфохолин, в диметилсульфоксиде (ч50%-нь Й вод|а1Й раствор) в присутствии водораствори1«)1х карбодиимидов, поддерживая в первые часы

реакции рН в пределах 5,. Соотношение реагентов подбирают из расчета содержания в конечном продукте 5-14 мк моль фосфолипидов на 1 мл геля.Затем полученный адсор бейт промывают тетрагидрофураном, метанолом, физраствором и в заключение водой

В конечном итоге получают сорбент на основе геля агарозы с высоким содержанием (5-J4 мк моль на I мл) имьюбилйзованного лиганда, ковалентно связанного с основой,

П р и м е р I, 3 г АН-сефарозы 4 В выдерживают в течегше 30 мин в 0,5 М растворе NaCl, прощав азот на стеклянном Фильтре тем же раствором NaCI и водой до отсутствия реакции а GI От «11тый гель (10 мл) перемешивают 24-48 ч iTpH комнатной температуре с 400 мкмоль 1-ацил-2-азелаил- -5п-глиц6ро-3-фос(холин в 20 мп смеси даметилсульфоксид: вода (1:I) в присутствии 2 ммоль гидрохлорида 1-этил-З-(З-диметиламинопропил) карбодиимида, поддерживая в первые часы реакции рН в пределах 5у5-6,5. Полученный адсорбент про швают 100 мл тетрагидроАурана, 100 мп метанола, 200 МП 1 М раствора Had и водой. Содержание фосфатидилхолмна, ковалентно связанного с гелем, определяют по йюсфору Получено 9,5 мл геля с содержанием 12-14 мкмоль фосфатидилхоли|{а. на 1 мп,

П р и м е р 2, 1,56 г АН-сефарозы 4 В выдерживают в течение 30 мин

в 0,5 М растворе NaCl, промывают на стеклянном фильтре тем же раствором NaCI и водой до отсутствия реакции С, От1Ф№ый гель перемепшвают 2431048 ч при комнатной температуре с 250 мкмоль 2-ациламино-3-оКси-3-карбоксил-О-эритро-пропаноло-1-фосфохоли,н и 1 ммоль гидрохпоряда 1-этил3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида в 10 МП смеся диметилсульфоксид: вода (1; 1). R первые часы реакции понижение рН компенсируют добавлением .N раствора NaOH до рН 6,0-6,5. Полученный сорбент прокивают 50 мл тетрагидроЛурана, 50 мл метанола, 100 мл ГМ раствора HaCl и водой. Содержанке с(йгомиелина, ковалентно связанного с гелем, определяют по содержанию ЛосЛора, Получено 4,5 мл сорбента с содержанием 5 мкмоль сАингомиелина на I мп. 5 Технико-экономнче екая эЛфективность предлагаемого способа заключается в том, что содержание иммобилизованных фосфолипидных лигандов на сорбентах, полученных по нему, возрастает в 5-6 раз по сравнению с содержанием лигандов на сорбентах, полученных известным способом. Это увеличивает адсорбцию емкость гелей, повьюает их селективность и уменьшает неспеци1 ичную адсорбцию примесных белков. Крсше того, протекание амидноЙ конденсации в водном диметилсульфоксиде с высоким выходом обеспечивает более эффективное использование исходных карбоксипроизводных фосфолипидов.

СПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ ШЮСПЕЦИФИЧНЫХ ФОСФОЛИПИДСаЛЕРЖАГДК СОРБЕНТОВ на основе гелей агарозы; пключаюр91й конденсацию карбоксипроизводных фосфолипидов с аминоалкилсе-, фарозой в присутствии водорастворимого карбодиимида в растворе полярного органического растворителя, о тл и ч а ю ц и и с я тем, что, с целью улучгаения адсорбционных характеристик путем повышения содержания фосАолитшдов на сорбенте, в качестве растворителя используют диметилсульфоксид.