Способ дифференциальной диагностики гемобластозов Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

О5 00

Изобретение относится к медицине в частности к диагностике гемобластэов.

Известен способ диагностики гемобластозов, основанный на цитоморфологическом исследовании, позволяюще Проводить количественную дифференцировку отдельных элементов гемограммы, миелограммы и констатироват степень зрелости клеток крови П.

Недостатком способа является его невысокая точность.

Известен также способ дифференциальной диагностики гемобластозов путем исследования клеток крови 21

Однако известный способ также не обладает высокой точностью.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифференциальной диагностики гемобластозов путем исследования клеток в крови, проводят реакцию роэеткообразования лейкоцитов пациентов с тучными клетками в со тношении (50-100): соответственно,.полученную смесь центрифугируют, осадок ресуспендируют, подсчитывают образовавшиеся розетки и при величине розеткообразования 5,0-6,2% диагностируют . ,лимфогранулематоз, а при величине этого показателя 16,7-31,5% диагностируют лейкоз .

Способ осуществляютследующим образом.

Из гепаризированной крови пациента в градиенте фиколла и верографина вьвделяют лимфоциты известным способом.

Тучные клетки получают путем промывания брюшной полости крыс 10 мл раствора гемоцелл с последующей очисткой суспензии клеток в градиенте фиколла и верографина.

Пробы, содержащие смесь, лейкоцитов и тучных клеток в соотношении (50-100): соответственно, центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин.

Образовавшийся осадок клеток ресуспендируют пастеровской пипеткой и в виде капли переносят на предметное стекло, покрытое тонким слоем 0,1% нейтрального красного. Тучные клетки окрашивают при трехкратном пипетировании капли. Суспензию вносят в гемоцитометр и подсчитывают количество розеток на 200 тучных клеток. Розеткой считают клеточную ассоциацию, включающую тучную клетку с присоединенными к ней тремя и более лейкоцитами.

И при величине розеткообразования 5,0-6,2% диагностируют лимфогранулематоз, а при величине этого показателя 16,7-31,5% диагностируют лейкоз.

Пример 1.У больного А берут кровь на исследование. В центрифужную пробирку наливают 2 мл смеси фиколла и верографина (плотность 1,077) и наслаивают на нее 2 мл гепаризированной крови больного. Полученную смесь центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин.

По окончании центрифугирования в интерфазе на границе плазмы крови и смеси фиколла с ферографином наблюдают образование белого кольца, содержсццего преимущественно лимфоциты.

Клетки кольца отбирают пастеровской пипеткой и переносят в пробирку, где дважды отмывают раствором гемоцелл, ресуспендируют в этом растворе, подсчитывают в гемоцитометре и разводят до концентрации .

Тучные клетки получают следующим образом. Под гексеналовым внутримьшючным наркозом крысам .весом 150-200 г внутрибрюшинно вводят 10 МП подогретого до 37°С раствора/ гемоцелл .

В течение 2 мин делают массаж брюшной стенки, затем делают ее срединный разрез и кишечник крысы перекладывают в стеклянную воронку, помещенную в центрифужную пробирку. Введенный в брюшную полость раствор гемоцелл, содержащий вымытые клетки перионеальной полости, собирают в пробирку,затем 5 мл этой взвеси клеток наслаивают в центрифужной прбирке на 2 мл смеси фиколла и центрифугируют 15 мин при 250 об/мин. По окончании центрифугирования в гетерофазе собираются лимфоциты,а тучные клетки оседают на дно про.бирки. Содержимое пробирки до самог ее дна отбрасывают, а тучные клетки лежащие на дне пробирки,ресуспендируют в растворе гемоцелл.и 2 раза им же откивают. .

Затем взвесь клеток в виде капли переносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, покрытого тонким слоем высохшего 0,1% нейтрального красного. .1

Каплю 3 раза пипетируют пастеровской пипеткой. При этом нейтральный красный окрашивает тучные клетки,а лимфоциты, содержащиеся в виде небольшой примеси, остаются б ее цветными.

Затем эту взвесь переносят в гемцитометр, подсчитывают количество Тучных клеток и разводят до концентрации .

В пробирку помещают 1 мл взвеси лейкоцитов больного лимфогранулематозом и 1 мл взвеси тучных клеток ,содержимое перемешивают и центрифугируют 5 мин при 250 об/мин.

Образовавшийся осадок клеток ресуспендируют пастеровской пипеткой и в виде капли переносят на покровное стекло, покрытое тонким слоем 0,1% нейтрального красного. Вносят суспензию в гемоцитометр и подсчитывают количество образовавшихся розеток на 200 тучных клеток. При этом наблюдают величину розеткообразования равную 6,0%, что соответствует диагнозу лимфогранулематоз.

Пример 2.У больного Б берут кровь на исследование. В пробирку помещают взвеси лейкоцитов больного лейкозом и взвесь тучных клеток, полученные способом описанным г в примере 1, в соотношении 50:1 соотвзтственно.

Пробы центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин., осадок ресуспендируют и подсчитывают количество образовавшихся розеток на 200 тучных клеток. В даннсйи случае наблюдают величину розеткообразования равную 30,0%, что соответствует диагнозу лейкоза.

Пример 3. Пробу, содержащую смесь лимфоцитов больного лейкозом и тучных клеток в соотношении 100:1 соответственно, центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин., осадок ресуспендируют. и подсчиты- .

вают количество образовавшихся розеток на 200 тучных клеток. При этом величина розеткообразования составила 16,7%, что соответствует диагнозу лейкоза.

Использование предлагаемого способа дифференциальной диагностики гемобластозов позволит повысить точность диагностики, способствовать развитию представлений о природе этихпатогенетических процесicos, что (ПОЗВОЛИТ повысить эффективность лечения Ъольных.

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ путем исследования клеток крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, проводят реакцию розеткообразования лейкоцитов пациентов с тучными клет ками в соотношении