Способ диагностики генитального туберкулеза Советский патент 1982 года по МПК A61B10/00 

перемешивают пастеровской пипеткой и сгавяг в гермосгаг при на 2530 мин для огсгаивания эригроцигов. Весь слой плазмы забирают в соликони рованную круглодониую пробирку объе MOM 5 мл, доливают питательную среду № 199 объемом 3-4 мл, перемешивают, центрифугируют при 800 об/мин в течение 10 мин. Недостаточную й идкость сливают, к осадку вновь добавляют пига тельную среду № 199, в которой осадок взвешивают пастеровской пипеткой и нен трифугируют при тех же режимах. После двухкратного отмывания концентрацию клеток доводят до 2x10- в I мл суспен зии. Затем проводят сенсибилизацию эритроцитов туберкулином. Для этого одну ампулу туберкулина разводят в I мл питательной среды JV 199 исходное разведение, из которого готовят рабочее разведение 1:10. Эритроциты человека IIО) группы Rt {-) крови трижды отмывают питательной средой N 199, центрифугируя при loOO об/мин в течение 7.мин. После последнего центрифугирования- надосадок сливают, ИЗ осадка готовят 5%-ную взвесь в среде № 199 с туберкулином. Взвесь тщательно перемешивают пастеровской пипеткой и ставят в термостат при 37 С на 2 ч для сенсибилизации эритроцитов туберкулином. Через каждые ЗО мин взвесь встряхивают. После инкубации в термостате эритроциты триходы отмывают от несвязавшегося туберкулина питательной средой № 199, центрифугируя при 15ОО об/мин в течение 7 мин. Из осадка сенсибилизированных яритроцитов готовят 0,5%-ную взвесь, перенося микропипеткой О,О5мл эритроцитов в -мерную центрифужную пробирку и прибавляют питательную среду № 199 до метки Ю мл. Взвесь ima тельно перемешивают. Затем в микропробирку длиной 80 мм QI 7-8 мм приливают по О,1 мл лейкоцитарной взвеси и сенсибизированных . эритроцитов, пробирку встряхивают, ставят в термостат на ЗО мин при 37С. После инкубации смесь центрифугируют в течение 5 мин при 8ОО об/мин. Содержи мое -пробирки фиксируют, глитаровым альдегидом (0,05 мл 0,6%-ногс раствора в фосфатном буфере) в течение 2О мин при комнатной температуре. Затем добавляют I мл дистиллированной воды, центрифугируют, недосадок сливают, из осадка готовят смазки на предметном стекле, ВЫ сушиваюг, фиксируют в метиловом спирте 10 мин. Преператы окрашивают гемагоксилин-эозин л. Подсчет ЗОО лимфоцитов производят в световом микроскопе под иммерсией (90х1О). За розеткообразующую клетку принимают лимфоцит, фиксирующий на своей поверхности 3 и более эригроцитов. Кроме того, подсчитывают и абсолютное содержание розеткообразующих лимфоцитов по формуле ЮООО где X - абсолютное содержание розеткообразующих лимфоцитов в I мм периферической крови; А «. общее количество лейкоцитов в 1 мм периферической крови; В - процентное содержание лимфоцитов периферической крови; С - процентное содержание розегкообразу1рщго{; лимфоцитов. Реакция ечитается положительной при обнаружении свыше 2% иммунных рсзеткообразуюших лимфоцитов. После определения иммунных розегкообразуюЕШх лимфоцитов больным подкожно вводят 1ОО ТЕ туберкулина. Через 48 ч повторно определяют содержание иммунных розеткообразуюших лимфоцитов в периферической крови. По разнице показателей иммунных розеток судят о наличии туберкулезного процесса и его активности. По ук-азанной методике обследована 61 женщина. В группа здоровых содержание иммунных розеток колебалось в пределах О-2%. Наиболее высокие показатели иммунных розеток были у больных с активным туберкулезом гениталий (1%-7%). В группе больных с неактивным процессом в гениталиях уровень имм нных розеток колебался в небольших , пределах ( 1-3%). У больных с неспецифическим воспалением гениталий количество иммунных розеток было в пределах О-4%. После введения турбекулина у больных со скрытой активностью процесса уровень иммунных розеток увеличился почти вдвое (4,7+0,6%), у лиц с неактивным туберкулезом, у больных с неспецифическим воспалением гениталий и у здоровых лиц наблюдалось незначительное yjvie- кьшение числа иммунных розеток, соответственно 1,4+р,3%; О,7+О,2%; 0,9+О,3%. Таким образом, предложенный способ является высокочувсгвительным диагносгичесхим tecroM. Способ технически прост и доступен в выполнении, не требует дефицитных реактивов-и оборудовани стерильных условий. Для анализа достаточно 3 мл крови. Результаты метода иммунного розеткообрааования оцениваются в течение 6-7 ч. ормула изобретения Способ диагностики генитапьного туберкулеза путем иммунологического исследования лейкоцитов до и после введе- ния туберкулина пациенту, отличающийся тем что, с целью ускорения способа, взвесь лейкоцитов инкубируют с эритроцитами, сенсибилизированнымк губеркулином, полученную смесь центрифугируют, из образовавшегося осадка готосят мазки, окрашивают, затем под микроскопом подсчитывают число розегкообразующих лимфоцитов и по разнице розеткообразующих лимфоцитов до и после введения туберкулина пациенту диагноспьруют генитальный туберкулез. Источники информации, принятые во внимание при эксперти.зе I. Авторское свидетельство СССР № 552О74. кл. А 61 В Ю/ОО, 1976