Способ получения антительного чумного диагностикума Советский патент 1992 года по МПК A61K39/395 A61K39/44 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к серологическим метолам лабораторной лиагностики чумы..

Известен способ получения антительного чумного лиагностикума путем прел верительной обработки носителя с послелующей сенсибилизацией имунным гамма-глобулином и .отмыванием целевого пролукта.

0лнако получаемый лиагностикум является нелостаточно стабильным.

Наиболее близким по лостигаемому результату является способ получения

О 00

ел

антительного чумного лиагностикума, который заключается в тоМ, что частицы карбоксильного катионита обрабатывают раствором альбумина в течение 18 ч в соотношении k:, затем связавшийся с катионитом белок ленатурируют нагреванием взвеси в волном спирте при 75°С, покрытые белком частицы полимера отмывают буферным раствором и.обрабатывают послеловательно растворами глутарового лиальлегила, после чего ceнcиf лизиpyют иммунным гаммаглобуЛином. Взвесь целевого пролук- зуют в серологических реакциях,, Указанный способ имеет ряд недостатков; активность л.иагностикума зави сит от качества препарата альбумина, обработка катионита альбумином длится 18 ни включает стадию нагревания в водном спирте Целью изобретения является ynpoiieние способа получения антительного чумного диагностикумас Поставленная цель достигается тем, что в спобобе получения антительиого чумного диагностикума путем предваСН -СН-С(0)Н + S02, + Диагностический препарат имеет такую же чувствительность и специфичность , что и препарат, полученный по известному способу Это было установлено в одномоментной проверке препаратов в равных условиях на одних и тех же бактериальных взвесях. Оба пре парата обладали специАичностью и не давали перекрестных реакций при проверке с гетерологичными штаммами (см. таблицу)„ Однако предлагаемый способ получения препарата более прост, П1Х)цесс приготовления препарата содержит менее трудоемкие операции (исключает обработку альбумином и процесс его де йатуриробанйя на носителе), продолжи-, тельность его приготовления на 18 ч меньше. Кроме того, дополнительным преимуществом получаемого продукта является то, что он окрашен и образует контрастную картину в серологических реак циях в отлимие от препарата, полученного по прототипуо Таким образом, по вышается демонстративность иммунологи ческой реакции, что. облегчает учет и регистрацию ее результатов при исполь зовании данного диагностикума« П р и М е р 1 о Частицы катионитаkPK-8n размером 2-5 мкм в количестве 100 мг суспендируют в 10 мл 0,| М рас jpopa едкого натра в течение 2 ч, зате цснтриЛугируют, осадок отмывают центрифугированием 10 мл дистиллированной воды, суспендируют 1 ч в 10 мл 0,1 К соляной кислоты и отмывают дистиллиро ванной водой до нейтральной реакции супернатанта. Осадок суспендируют в 2 мл дистиллированной воды и при пере ного катионита с последующей сенсибилизацией иммунным гамма-глобулином и отмыванием целевого продукта предварительную обработку частиц карбоксильного катионита ос: ест8ляют красителем нейтраль ным -краснын в соотношении ТОО:1f затем раствором бисульфитного эддукта полиакролеина при рН 7-й. Используемый бисульфитный аддукт ПрлиакролеиНа образуется при растворении полиакролеина в водном растворе двуокиси серы„ Реакцию можно представить следующим «эбразом .Г, / ; : :, ./ , , : . CEj-СН-СН(он)-SOjН мешивании прибавляют к суспензии 2 мл 0,05 -ного раствора нейтрального красного (З-амино-б-дцметиламино-2-метил феназин гидрохлорид), перемешивают 15 мин, .центрифугируют и отмываю т осадок 3 раза 5 мл дистиллированной воды. Полученный ярко-красный осадок отмывают 3 раза 10 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7), суспендируют в 1 мл этого буфера, к смеси добавляют при перемешивании 1 мл 5 -ного раствора бисульфитног-о аддукта полиакролеина, перемешивают 0,5 ч, центрифугируют и отмывают 10 дл 0,2 М фосфатного буфера с рН 7« Осадок суспендируют в 2мл этого же буфера и добавляют к взвеси 5-10 кг умного иммуноглобулина в 0,2-0, мл физиологического раствора. Суспензию перемешивают при комнатной температуре 0,5 ч, выдерживают 18 ч при (,затем отмывают трижды 10 мл Физиологического раствора центрифугированием. Осадок суспендируют в 5 мл физиологического раствора и эту взвесь используют для серологических реакций. - П р и М е р 2, ИетоДика приготовлеигия препарата, как в примере 1, но исНояъзуют 0,2 И фосфатный буфер (piH ), а окрашенный носитель обрабатывают раствором сернистого аддукта полиакропеина в течение 0 мин. П р и М е.р 3. Нетодика приготовления препарата, как в примере 1, но слользуют 0,2М фосфатный буфер (рН 8) ;; окрашенный носитель обрабатывают раствором сернистого аддукта полиакролеина в течение 1ч. ; Методика постановки реакции. В полистироловых пластин готовят последовательные двухкратные разведения исследуемого материала на Фивиологим Ском растворе. Контроль : ные лунки не содержат антигена ь В ; каждую лунку добавляют по 1 .каплег сенсиб| лизированной полимерной суспензии., пластинку тщательно встряхивают,Ю оставляют на 1,5-2 ч, послёЧ|ег6 пр6 и зводял У«ет реакции. При полржитель ной реакции образуются агглютй наты ;равч6мерно выстилающее дно лунки. ; отр ица ельной иммунЬсо рбеит ; как ив контроле, собирается ЛАктивность диагнрсти (чкробньнг ТПЯБО 15 6 на дне лунки в виле компактного или колечка ярко-красного цвета. Лиагностикум позволяет выявлять с , высокой чувствительностью как типичные штаммь возбудителя чумы, выращенные при 2П и , так и /тефектнуе по одному и более антигенам. Липгностикум специфичен, перекрестных реакций с гетерологичными щтаммами (возбудитель псевдотуберкулеза и кишечнотифозное ceMeitcTBo бактерий) не дает Результаты исследования препаратов получаемых оп-исываемЫМ:и известным . способами приведены в таблице, ческих препаратов , ки/млУ ;

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТЕЛЬНбгО ЧУМНОГО У АГНОСТИКУНА путем гфедвзрительной обработки частиц кар ксйльного катионита с послелующей сенсибилизацией иммунным гамма-глобулином и отмыванием целевого пролукта, о т л ич а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения сп(Уеоба, п релварител ьную обработку частиц карбоксильного катионита осуществляют красителем нейтральным красным в соотношении tDO:1, затем раствором бйсульфитного аллукта полиакррлеина при рН