Штамм @ @ @ @ 36-8-продуцент ингибитора трипсина Советский патент 1984 года по МПК C12P1/06 C12P1/06 C12R1/625 

со о

9 д Изобретение относится к микробиологии, э частности к получению ингибитора трипсина. Известен продуцент иигибитора трипсина белковой природы из группы фиолетовых актиномидетов Yj. Однако для получения ингибитора трипсина с помощью известного штамма используется сложная технология. Цель изобретения - создание, нового штамма - продуцента ингибитора трипсина, не требующего сложного ци ла ферментации. Эта цель достигается с.помощью штамма Streptoverticillium cinnamoneum 36-8, Шатмм 36-8 выделен из образца карбонатной почвы Крыма. Депонирован в Центральном музее промьшшенных микроорганизмов ВНИИгенетика под номером и характеризуется следующими свойствами. Культурально-морфологические при наки. На большинстве сред штамм формирует прямые опоровые цепочки, распо ложенные в мутовках, споровая оболоч ка гладкая. На среде № 1 Гаузе субстратный мицелий неокрашен, воздушный мицелий бледно-розовый,. На среде Чапека субстратный мицелий желтовато-бурый, воздушный мицелий белый, растворимого пигмента нет. На глюкозс аспарагиновой среде субстратный мицелий от неокрашенно го до желтовато-бурого, воздушный мицелий образуется, растворимый пигмент яркий, золотисто-желтый, образующий узкую зону. На среде Линденбайна субстратны мицелий светло-буровато-желтый, до желтого, воздушный мицелий белый слабый, растворимый пигмент отсутствует. На среде № 2 Гаузе субстратный м целий темно-жёлтовато-бурый, возду нь1й мицелий слабый, беловатый, рас воримый пигмент желто-бурый. На овсяной среде субстратный ми целий неокрашен, воздушный мицелий и растворимый пигмент отсутствует. Штамм меланин отрицательный, Физиолого-биохимические свойств Желатину не разжижает, молоко н изменяет, крахмал гидролизует, на клетчатке не растет, нитраты не во станавливает, усваивает глюкозу. 32 арабинозу, сахарозу, не усваивает ксилозу, маннифруктозу,раффинозу, Пример 1, Трехсуточную культуру штамма 36-8 на среде следующего состава: пептон 0,5%, перевар Хоттингера 3% (о/о) глюкоза l%j NaCl 0,5%, вода водопроводная, рН 6,8-7,2 (стерилизация - 0,5 атм, 30 мин) засевают в количестве 10% в среду того же состава. Через 16 ч выращивания при 28 С с перемешиванием культурапьную жидкость отделяют фильтрованием. Активность ингибитора достигает в культуральной жидкости максимального значения через 16 ч и составляет 33 ед/мл. Характеристика целевого продукта. Препарат ингибитора трипсина, содержащийся в культуральной жидкости Streptoverticillium cinnamanemn 36-8, представляет собой смесь 3-5 кислых пептидов (в зависимости от условий культивирования) молекулярной массой 400-600, с антитрипсиновой активностью 12 ед/мп. Пример 2. /сравнительный), Для выращивания трехсуточную культуру на среде следующего состава: пептон 5 г/л; перевар Хоттингера 30 мл/л, вода водопроврдная, глюкоза 10 г/л, рН 6,8-7,2; стерилизация 5 атм, 30 мин , NaCl 5г/л, засевают в количестве 10% в среду того же состава. Через 16 ч выращивания при с перемешиванием культурапьную жидкость отделяют фильтрованием. Актив-ность ингибитора определяют по подавлению гидролиза 1-ного % казеина 5 мкг трипсина в 2 мл 0,Ш боратного буфера (рН 7,4) за 30 мин при Q 37 С, Реакцию останавливают 2 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты, Количество гидролизовавшегося казеина определяют спектрофотометрически по поглощению растворимых в трихлоруксусной кислоте компонентов при длине волны 280 нм. За единицу активности принимают дакое количество ингибитора, которое вызывает 50%-ное подавление гидролиза казеина. Активность ингибитора достигает в культуральной жидкости максимального значения через 16 ч культивирования и составляет 33 ед/мп или 65%. Актиномицеты фиолетовой группы образуют ингибитор трипсина иа описанной среде за 48-76 ч культивирования, В качестве посевного мате3- ИЗОЬОЗл

риала испольэуют культуру,выращеннуюболее короткие сроки (за 16-18 ч)

на среде,содержащей крахмал,кукуруч-вместо 48 -- 72 ч с использова ныйэкстракт идрожжевый автолизат.Ий-ннем в качестве, посевной и фергибирующая активность достигает 50-7035,ментационной сред одной среды ,

. Использование штамма 36-8 позво- jчто упрощает технологию полуляет получать ингибитор трипсина эчення i

Штамм Screptoverticillium cinnamoneum 36-8, ЦМПМ-8-645 (Центральный музей промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика) - продуцент ингибитора трипсина.