Штамм @ @ 17-5,используемый для получения ингибитора трипсина Советский патент 1986 года по МПК C12P1/06 C12P1/06 C12R1/465 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения ингибриторов протеаз.

Цель изобретения - повышение выхода ингибитора трипсина.

Штамм Streptomyces bikiniensis выделен из образца бурой горной почвы из района Майкопа.

Штамм Streptomyces bikiniensis 17-5 хранится в центральном музее промышленных микроорганизмов института ВНИИГенетика под номером ЦМПМ S-644 и характеризуется следую- щими признаками.

Культурально-морфологические приз- 15 вировсшном угле, элюцией кислым

наки.

Споровые цепочки прямые, споровая оболочка гладкая.

На среде № 1 Гаузе субстратный мицелий неокрашен, воздушный бело-серый, серый. Растворимый пигмент отсутствует.

На среде Чапека субстратный мицелий бесцветный, в центре колонии чернеющий, воздушный мицелий беловатый, до светло-серого, растворимый пигмент отсутствует.

На глюкозо-аспарагиновой среде субстратный мицелий тонкий, грязно- кремовый, воздушный мицелий беловатый, растворимый пигмент отсутствует На среде Линденбайна субстратный мицелий тонкий, бесцветньй, воздушный мицелий слабый, белый, растворимьй пигмент отсутствует.

На среде № 2 субстратный мицелий тонкий, темно-бурый, воздушный мицелий обильный, светло-серый растворимьш, пигмент бистровий .

На овсяной среде субстратный мицелий, тонкий, бесцветный по краю буровато-коричневый, воздушный мицелий обильный, порошистьй, средне- серый, растворимый пигмент слабый, светло-ореховый. Меланинотрицатель- ный.

Физиолого-биохимические свойства. Желатин не разжижает, молоко пепто низирует, крахмал гидролизует, на клетчатке растет. Усваивает глюкозу рафинозу, маннит; не усваивает сахарозу, рамнозу, арабинозу, ксилозу, инозит.

Антагонистические свойства: угнетает рост грамположительньпс и грам- отрицательных бактерий.

Пример 1-. Трехсуточную . культуру штамма 17-5, выращенную на среде следующего состава, %:

пептон 0,5; перевар Хоттингера 3 об.%, глюкоза 1; NaCl 0,5; вода водопроводная рН 6,8-7,2, стерилизация 0,5 атм 30.мин, засевают в среду того же состава в количестве

10%. Через 28 ч роста при 28 С с

перемешиванием культуральную жидкость .подвергают центрифугированию.

Активность ингибитора составляет в этот момент 130 ед./мл.

Характеристика целевого продукта; препарат ингибитора трипсина, частично очищенный из фильтрата культу- ральной жидкости адсорбцией на акти

спиртом, обессоливанием и частичным обесцвечиванием на смоле Dowex 1 В (Serva) и хроматографией на КМ-цел- люлозе, представляет собой смесь из

трех пептидов с мол.мае. 400-500, щелочной и нейтральной природы. Ак- тивнос.ть препарата 25 ед./мг.

Пример2, В качестве посевного материала используют трехсуточную культуру штамма на среде следующего состава, %: пептон 0,5; перевар Хоттингера 3 (по объему); NaCl 0,5, глюкоза 1; вода водопроводная, рН 6,8-7,2, стерилизование при 0,5 атм 0,5 ч. Посевной ма териал засевают в количестве 10% в описанную среду без глюкозы. Культивируют в течение 28 ч при 28 С с перемешиванием. Культуральную жидкость отделяют фильтрованием.

Активность ингибитора определяют по подавлению гидролиза 1% казеина 5 мкг трипсина в 2 мл 0,1 М боратно- го буфера рН 7,4 за 30 мин при 37 с. Реакцию останавливают добавлением 2 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты, Количестззо гидролизованного казеина определяют спектрофотометрически ло поглощению растворимых в трихлоруксусной кислоте компонентов при 280 нм. За единицу активности принимают такое количество ингибитора, которое вызывает 50%-ное подавление гидролиза казеина.

Активность в культуральной жидкости достигает 130 ед./мл по срав- нению с 33 ед./Nm при использовании известного штамма.

Препарат ингибитора, полученный хроматографией на КМ-целлюлозе, опробован на способность ингибировать грибные протеазы. При получении фермента К-ацетил -О-глюкозаминидазы

3 12425244

из фильтрата кулг туральной жидкости ингибитора на 1 мл культурапьной жид- AcmeTOnium 237 высаливанием сульфа- кости выход препарата увеличивается том аммония при добавлении 10 ед. на 20%,

ШТАММ Streptomyces bikiniensis 17-5 ЦМПМ S-644 (Центральный му- зей промьшшенных микроорганизмов института ВНИИГенетика), используемый для получения ингибитора трипсина.. ю 4 1чЭ сл to 14;: