Способ получения мутантов бактерий-продуцентов полисахаридов Советский патент 1985 года по МПК C12N15/00 

ел tc

со Изобретение относится к микробио логии, и частностти к генетике и селекции высокоактивных штаммов продуцентов полисахаридов. Цель изобретения - повышение час тоты выхода генетически стабильных мутантов. Способ осуществляют следующим образом. Бульонную культуру неслизистого родительского штамма после серийных разведений в физиологическом раство ре высевают на поверхность минималь ной агаризованной среды, 1-2 дня выдерживают при повышенной температуре, ингибируклдей деление клеток, но не приводящей к их гибели. Затем переносят на температуру ниже оптимальной на 5-7 С или в комнатную и инкубируют до образования, видимых колоний. Отбор мутантов, продуцирую щих полисахариды с высоким % выхода ведут по слизистой морфологии колоХотя положительный эффект достигается для E.coli К-12 при повышенных температурах в пределах 4346,5 С, увеличение температуры вьш1е 44 С нерационально, что требует дополнительных затрат энергии, поэто му оптимальным является повышение температуры на вьшзе максималь ной. Выдерживание культуры при повышенной температуре в течение суток связано с необходимостью проведения контроля за отсутствием роста коло НИИ в сравнении с ростом при оптимальной температуре. Инкубация микcoli

43,5

Ингибируется

Количество слизистых

мутантов, 7

20-22 (комнатная)

тимальная) 23 роорганизмов в сроки свыше 2 сут приводит к естественному отмиранию клеток, что отражается на выходе мутантов. Пример 1. Неслизистый штамм Escherichia. coli К-12 выращивается в мясо-пептонном бульоне при 37 С с аэрацией до достижения экспоненциальной фазы роста, делаются серийные разведения в физиологическом растворе и пробы по О,1 мл высеваются на поверхность агаризованной минимальной среды следующего составд, г/л: Na, КН 3; NH,C1 1; MgSOv 0,013; глюкоза - 5; агар-агар 15. Засеянные чашки ставятся на инкубацию при 43,5с, полностью подавлякяцей рост культуры, вьщерживаются 24 ч, а затем при комнатной температуре. Через 4-5 сут инкубации на поверхности агара образуются колонии, более 50% которых обладают слизистой морфологией. Полученные мутанты при культивировании глубинным способом на глюкозо-солевой питательной среде синтезируют в больших количествах кислый гетерополисахарид, состоящий из L, -фруктозы D-галактозы, D-глюкозы и глюкуроновой кислоты в соотношениях 2:2:1:1 соответственно. Результаты изменения границ повышенной и пониженной температуры инкубации даны в табл. 1 Пример 2. Проводят опыты с неслизистым штаммом f almonella typhimunium LT-2. Условия опыта аналогичны условиям, описанным в примере 1. Результаты опыта даны в табл.2. Таблица 1

Таблица 2

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МУТАНТОВ БАКТЕРИЙ - ПРОДУЦЕНТОВ ПОЛНСАХАРВДОВ, предусматривающий выращивание бактерий кишечной группы, имеющей неслнзистую морфологию колоний, на питательной среде с последуюо1им отбором мутантов,продуцирующих полисахариды, по слизистой морфологии колоний, отличающийся тем, что, с целью повышения частоты выхода генетически стабильных мутантов, выращивание осуществляют в жидком питательном бульоне, после чего высевают культуру на поверхность питательной среды, содержащей глюкозу в качестве источника углерода, вьщерживают сначала при 43-44°С в течение 24-48 ч, а затем ад при 28-30 С до образования колоний, (Л имеющих слизистую морфологию.

balmonella typhimunium