Способ определения витаминов @ и @ Советский патент 1986 года по МПК G01N30/00 

Изобретение относится к химическим меТ;рдам определения витаминов группы Д с применением хроматографи- ческих методов очистки, в частности, тонкослойной хроматогра эии и может быть использовано при определении содержания витаминов группы Д в мас- ляных концентратах, тривитамине, тетравитамине и других объектах в зоотехнических, ветеринарных, медицинских и прочих биологических исследованиях, а также для контроля производства витаминов группы Д {преимущественно Д,,) для медицинских целей и ветеринарии (применяется для крупного рогатого скота) и витамина Д , для нужд птицеводства.

Целью изобретения является сокращение длительности анализа и повышение чувствительности способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определени витамина Д путем хроматографической очистки на пластинке с закрепленным слоем сорбента в подвижной фазе, содержащей органический растворитель, удалением целевого компонента с пластинки и фотометрированием в качестве подвижной фазы используют смесь гексан:эфир:н-бутанол при объемном соотношении компонентов (45-53 :(53-45):(1-3), а цветную реакцию проводят непосредственно на пластине путем последовательной ее обработки треххлористым железом, парами йода и 2,2 -дипиридилом.

Пример 1. Определение витамина Дд в масляном растворе.

2,5 г препарата витамина Д растворяют в 2 мл хлороформа, переносят в. мернук .кол бу на 25 мл и доводят до метки хлороформом. На стартовую линн пластинки Силуфол с закрепленным слоем силикагеля-размером 15x15 см наносят О,1 мм полученного раствора в виде полосы длиною 80 мм, рядом наносят точки стандартного раствора витамина Д. (1 мкг холекальциферола)

Хроматографическае разделение ви тамина Д осуществляют в камере,, насыщенной парами подвгекной фазы (гек- са:эфир:н-бутанол, смещанных в объемных соотношениях 49:49.2), через которую в, течение 15 мин продували азот. Когда фронт растворителя приблизится К: верхнему краю пластинки, ее извлекают из камеры и высушивают в токе азота при . Затем опрыскивают пластинку О,2%-ным раствором

хлорида железа (ПТ) п этаноле. Пластинку высушивают при комнатной температуре и помещают на 10 с в камеру, насьпценную парами йода. После этого

пластинку извлекают из камеры, прогревают в токе теплового воздуха до полного удаления из пластинки следов йода с последунщим опрыскиванием ее О,5%-ным раствором 2,2-дипиридила в

этаноле. На пластинке появляется розово-красная полоса целевого продукта на белом фоне.

Локализацию витамина Д, определяют по свидетелю и окрашенный участок силикагеля количественно переносят в пробирку с притертой пробкой. Затем в пробирку приливают 3 мл злюи- рующей смеси, состоящей из этанола,

соляной и фосфорной кислот и дистил- лиров.анной воды в объемных соотношениях 6:3:1:2, энергично встряхивают в течение 20 си отфильтровывают через беззольный фильтр (красная лента)

Ополаскивают пробирку 1 мл элюкрую- щей смеси, которую переносят на тот же фильтр. Полученный розово-красный элюат фотометрируют при 492 нм. Содержание витамина Д в препарате

определяют по формуле

A-40-d-Y,

X

где X - количество витамина Д,, найденного а препарате, ИЕ/мл; А - количество витамина Д„, найденного по калибровочной кривой, мкг; 40 - коэффициент пересчета в

интернациональные единицы (ИЕ);

d - плотность масла, г/мл; Y,, - объем хлороформа, в котором растворена навеска препарата (25 мл);

Y - объем Хлорофррменного раствора препарата, нанесенного на хроматографическую плас- . тинку (0,1 мл); m - навеска препарата (2,5 г). Пример 2. Определение витамина Д в спиртовом, растворе.

1 мл спиртового раствора препарата витамина Д разбавляют хлороформом в мерной колбе до 100 мл. На . стартовую линию хроматографической пластинки наносят 0,1 мл полученного раствора в виде полосы длиной 80 мм и рядом наносят точки стандартного

раствора витамина Д (1 мкг). Хро- матографическое разделение и все дальнейшие процедуры проводят .так же как описано в примере 1.

П р и м ер 3. Определение вита- мина Д, в масляном растворе -тетрави- тамина (смесь в итаминов А, Е, Д и F).

5 г масляного раствора тетравита- мина вносят в мерную колбу на 25 мл и доводят до метки хлороформом. На стартовую линию хроматографической пластинки наносят 0,1 мл полученного раствора в виде полосы длиной 80 мм, рядом наносят точки стандарт- ного раств.ора витамина Д, (I мкг). Хроматографическое разделение и все дальнейшие операции.проводят так же, как описано в примере 1.

Пример 4. Определение вита- мина Д в масляном стабилизированном растворе тривитамина (смесь ви- таминов А, Е, Д и сантохина).

4 г масляного раствора тривитамина вносят в мерную колбу на 25 мл и доводят до метки хлороформом. Все дальнейшие операции проводят так же, как описано в примере 1.

Преимущества способа заключают- ся в следующем: применение в кач.ест- ве подвижной фазы предлагаемой системы растворителей дает возможность селективно определять витамины групСоставитель В. Каюкрва Редактор М. Циткина Техред А.Кравчук Корректор С. Черни

Заказ 4713/47 Тираж 778 . Подписное ВНИЙТШ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предцриятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

пы Д в присутствии других жирорастворимых витаминов и антиоксидантов; проведение цветной реакции непосредственно на пластинке согласно предлагаемому способу позволяет повысить чувствительность способа; применение предлагаемой недвижной фазы, и цветной реакции непосредственно на пластинке сокращает продолжительность анализа более чем в 3 раза; исключение из работы треххлористой с.урьмы значительно улучшает условия труда аналитиков и расширяет возможности использования метода.

Фор мула и 3 о б р е е н и я

Способ определения витаминов Д и Д, путем растворения образца в хлороформе, нанесения на пластинку с закрепленным слоем сорбента, хромл- тографирования в системе органических растворителей, проявления, элюи- рования и фотометрирования целевых соединений, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что,, с целью сокращения времени анализа и повышения чувствительности способа, в качестве системы органических растворителей использут гексан - эфир - н-бутанол (.49:49: :2), а проявление проводят поспедова- тельной обработкой раствором хлорного железа,, парами иода и раствором 2,2 -дипиридила.

Изобретение относится к химическим методам определения витаминов группы Д. Цель изобретения - сокращение времени анализа и повышение чувствительности способа. Образец растворяют в хлороформе. Полученный, раствор наносят на пластинку с закрепленным слоем сорбента. графическое разделени е витамина Д осуществляют в системе гексан - . эфир - н-бутанол (49:49:2). Затем опрыскивают пластинку 0,2%-ным раствором хлорида железа в этаноле. Пластинку высушивают и помещают в камеру, насыщенную парами йода. Пластинку извлекают из камеры, прогревают до полного удаления следов йода. После этого пластинку опрыскивают 0,5%-ным раствором 2,2 -дипиридила в этаноле. Производят элюирование целевого продукта. Полученный элюаТ фотометрируют. (Л с 1C ел 4 СО ч1 Ц9