Способ определения цистеина Советский патент 1985 года по МПК G01N31/16 

1

Изобретение относится к области анализа органических лекарственных препаратов, а именно к способу количественного определения цистеина, используемому для контроля качества продукции, выпускаемой фармацевтической промышленностью и изготавливаемой аптеками,

Цистеин (2-амино- -меркапто-пропирновая кислота) является незаменимой сминокислотой, существенно влияет на состояние обменных процессов в организме, В медицине применяется, главным образом, при глазных бoheзняx, а также как препарат антидотного действия, в качестве консерванта инъекционных растворов и др.

В глазных каплях цистеин применяется в растворах самостоятельно, часто в сочетании с аскорбиновой кислотой, а также с другими препаратами.

Целью изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа за счет устранения влияния анионов, образующих соединения с медью.

Способ количественного определения цистеина разработанв двух вариантах: полумикрометод (чувствительность 1,5 мг препарата) и микрометод (чувствительность 0,15 мг).

Пример 1, Полумикрометод титриметрического определения цистеина в препарате: около 0,03 г цистеина (точная навеска) растворяют в 10 мл воды. 1 мл полученного раствора или 1 мл 0,3% раствора цистеина (3 мг препарата) помещают в колбу, прибавляют 5 мл буферного раствора рН 4,6, две капли раствора индикатора ПАН и титруют медленно по каплям 0,02 м раствором сульфата меди до образования розовофиолетовой окраски, не исчезающей при взбалтывании в течение 1 мин..

1 мл 0,02 М раствора сульфата меди соответствует 0,004846 г цистеина.

Буферный раствор с рН 4,6: растворяют в воде в мерной колбе на 50 мл 0,7 г ацетата натрия, прибавляют 1 мл разведенной уксусной кислоты и доводят объем раствора водой до метки.

Индикатор ПАН представляет собой 0,1%-ный спиртовый раствор 1-(2-пиридилазо)-нафтола-2.

0,02 М раствор сульфата меди: 5 растворяют 0,4994 г CuSO. 5Н20 в воде в мерной колбе емкостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. При необходимости титр полученного раствора устанавливают

0 йодометрически,

0,002 М раствор сульфата меди готовят разбавлением 0,02 М раствора водой 1:10.

Результаты количественного определения хщстеина (полумикрометод) представлены в табл.1.

Микрометод титриметрического определения цистеина в препарате: около 0,03 г цистеина (точная на20. веска) растворяют в 100 мл воды. 1 мл полученного раствора или 1 мл 0,03% раствора цистеина (0,3 мг препарата) помещают в небольшую колбу или пробирку, прибавляют

25- 0,5 мл буферного раствора рН 4,6,

одну каплю раствора индикатора ПАН и титруют медленно по каплям 0,002 М раствором сульфата меди до образования розово-фиолетовой 30 окраски, не исчезающей при взбалтывании в течение более 1 мин.

1 мл 0,002 М раствора сульфата меди соответствует 0,0004846 г цистеина.

Результаты количественного определения цистеина,в препарате по известному способу приводятся в табл.3, результаты определения цистеина в препарате по известному спо.Q собу (количество цистеина соответствует микрометоду) представлены в табл.4-.

Пример 2. Определение цис.- теина в лекарственных формах.

Смесь № 1. Раствор цистеина 1% - 5 мл (глазные капли).

Отбирают 0,3 мл испытуемого раствора и производят определение ,,. по описанной методике (полумккрометод),

Пример 2. Определение цистеина в лекарственных формах.

Смесь № 1. Раствор цистеина 55 1%-5 мл (глазные капли). Отбирают 0,3 мл испытуемого раствора и проводят определение по описанной методике (полумикрометод), 31 Смесь 2. Цистеин0,06 г Нипагин0,02 г Борная кислота 0,4 г Аскорбиновая кислота0,04 г Раствор метилцеллюлозы 1 % - 20 мл (глазные капли) Количественное определение цисте ина. К 1 мл исследуемого раствора прибавляют 9 мл воды. К 1. мл полученного раствора прибавляют 0,5 мл буферного раствора рН 4,6; 2 мл насыщенного раствора сульфата натрия, одну каплю раствора индикатора ПАН и титруют по каплям при взбалтывании 0,002 М раствором суль фата меди до устойчивого розовофиолетового окрашивания. 1 мл 0,002 М раствора сульфата меди соответствует 0,0004846 г цистеина. 176 5 - 10 15 20 414 В табл.5 даны результаты опреде- ления ингредиентов в лекарственных смесях с цистеином. Результаты определения цистеина с использованием буферного раствора с различной величиной рН представлены в табл. 6 и 7 (соответственно полумикрометод и микрометод). Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным обеспечивает более высокую чувствительHQCTb (чувствительность известного способа 1,25-7,50 мс) и избирательность, что дает возможность проведения, анализа в присутствии ряда. |Других анионов и восстановителей (например глютаминовой, аденозинтрифосфорной, аскорбиновой кислот), цистеина, продукта окисления цистеина, что имеет значение ввиду неустойчивости растворов цистеина. Метод позволяет контролировать степень разложения препарата в растворе. Таблица 1

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСХЕИHA путем прямого титрования анализируемой пробы раствором сульфата меди в присутствии индикатора, о тличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и избирательности способа, в качестве индикатора используют 1

0,32 0,63 0,62 0,89

Таблица 2

X 100,03 S 3,34 Sr 0,033 +St t10,61 Примечание.

Таблица 3 При оттитровании на 120% окраска жидкости еще | фиолетовая, затем постепенно переходит (через оранжевую) в желтую. В присутствии аскорбиновой кислоты титрование невозможно, перехода окраски индикатора нет. ТаблицаЗ Примечание.

Таблица 6 При рН 4,3 и 4,9 переход окраски несколько растянут, но титрование возможно Таблица Примечание.

.322S2ffi5§SS§ IS53iI. При рН 4,3 и 4,9 переход окраски индикатора несколько растянут, титрование возможно.