Способ изготовления ферментного электрода Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

ts9

сл 1 1 Изобретение относится к измерительной технике, в частности к способам изготовления ферментных рНэлектродов для определения концентра ции субстратов ферментативных реакций, сопровождающихся связьшанием или освобождением ионов водорода, и может найти применение в здравоохра нении и медицине при проведении клинических анализов, при контроле проницаемости ультрафильтрационных устройств, например, во время,сеанса гемодиализа. Целью изобретения является сниже ние времени стационарного ответа и повышение чувствительности ферментативного исследования. Способ осуществляют следующим об разом. На чувствительную поверхность стеклянного рН-электрода при комнат ной температуре наносят слой эмульсии, содержащей водньш раствор фермента в концентрации 20-80 мг/мл и латекс натурального каучука ИР-42 (в -соотношении от 1:1 до 1:2,5 и сушат на воздухе в течение 20-60 ми затем поверхность электрода обрабатьшают водным раствором глутарового альдегида в концентрации 0,2-0,3% в течение 8-12 мин при . После удаления следов глутарового альдегида ферментный рН-элек род готов к использованию. Пример 1. Для изготовления уреазного рН-электрода навеску уреа зы 2 мг (препарат фирмы Merck, с удельной активностью 200 Е/мг), соответствующую 400 Е, растворяют в 0,1 мл 0,2 М трис ИСК буфера, содер жащего ЭДТА, рН 7,4 при 6°С в течение 12ч, а затем добавляют 0,1 мл латекса натурального каучука ИР-42 (соотношение 1:1). Полученную эмульсию тонким слоем наносят на чувствительную поверхность стеклянного рН-электрода и сушат на воз духе в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем электродное покрытие обрабатывают 0,2%-ным водным раствором глутарового альдегида (препарат фирмы Merck) в течение 8 мин при 6°С. Электрод отмывают 50 мл дистиллированной воды в течение 10 мин, а затем 50 мл буферного раствора (в течение 15 мин) который -используют при аналитическом определении мочевины (10 .М фосфат02ньй буфер, содержащий ЭДТА и 0,9% хлорида натрия, рН 7,2). В качестве измерительного прибора используют рН-метр рН-М62, снабженный самописцем РЕА 260 (Radiometer, Дания), или рН-340 (СССР), а в качестве рН-электрода используют стеклянные рН-электроды С2040С (Radiometer, Дания) или ЭСЛ-41Г-04 (СССР). Характеристики полученного таким способом ферментного рН-электрода: время достижения 99%-ного уровня от величины стационарного ответа (Ojas составляет 60-80 с, максимальная чувствительность в единицах рН на декаду (S) составляет 0,4, величина максимального изменения рН при насыщающих концентрациях мочевины ( арНоо) равна 0,7 единиц рН. Снижение чувствительности электрода после двух месяцев непрерывной работы при комнатной температуре составило 10% от исходной. Пример 2. Ферментньй рНэлектрод получают способом, аналогичным примеру 1, с тем отличием, что растворяют 8 мг уреазы в 0,1 мл буфера, сушку проводят в течение 60 мин и электродное покрытие обрабатывают 0,3% раствором глутарового альдегида в течение 12 мин. Характеристики ферментного электрода: 1Го,9г 60-80 с, 5 1,1 ед. рН, 4рНоо 1,9 ед. рН, снижение чувствительности электрода после двух месяцев непрерывной работы при комнатной температуре составило 8% от исходной. Пример 3. Ферментный рН электрод получают способом, аналогичным примеру 1, с тем отличием, что к раствору уреазы добавляют 0,04 мл латекса (соотношение 2,5:1) сушку проводят в течение 60 мин. Характеристики ферментного электрода: 30-40 с , 5 0,7 ед. рН, /1рН со 1,1 ед. рН. Снижение чувствительности электрода после двух месяцев непрерывной работы при комнатной температуре составило 11% от исходной. Пример 4. Для изготовления глюкозооксидазного рН-электрода навеску глюкозооксидазы (10 мг) (препарат фирмы Boehvinger, ФРГ, с удельной активностью 100 Е/мг), содержащую 1000 Е, растворяют в

311762504

0,2 мл 0,1 М фосфатного буфера, со-ца непрерывной работы при комнатной

держащего 10-ЗмЭДТА, рН 7,0 притемпературе составило 30% от исход4°С в течение 12ч, затем добавляютной. 0,15 мл латекса ИР-42 (соотношение

1,3:1). Далее ферментный рН-элект- 5 Изобретение позволяет упростить род получают способом, аналогичнымтехнологию изготовления ферментного примеру 1, с тем отличием, что суш-рН-электрода за счет уменьшения коку на воздухе проводят в течениеличества операций и количества ис40 мин, обработку глутаровым альде-ходных ингредиентов, а также за счет гидом проводят при 1°С. снижения температуры изготовления

Характеристики полученного такимферментного рН-электрода до комнат-

способом глюкозооксидазного рН-злект-ной, снизить время развития стациорода: 60-80 с, 5 -0,9 ед. рН/наршого ответа и повысить чувствиЛрН 00 -1,6 ед. рН. Снижение чув-тельность ферментативного исследоствительности электрода после 1 меся- 5вания.

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ .ФЕРМЕНТНОГО ЭЛЕКТРОДА, включающий иммобилизацию фермента на поверхностном слое стеклянного рН-электрода, отличающийся тем, что, с целью снижения времени стационарного ответа и повьшения чувствительности ферментативного исследования, на поверхность стеклянного электрода наносят слой латекса натурального каучука ИР-42 и водный раствор фермента в концентрации 20-80 мг/мл .в соотношении от 1:2,5 до 1:1 сушат на воздухе 20-60 мин, полученный слой фиксируют 0,2.-0,3%-Hbw водным раствором глутарового альдегида при 1-6С , в течение 8-12 мин.