Штамм @ @ Советский патент 1984 года по МПК C12N15/00 

......i.,. ,....„,л л . 67 Изобретение относится к микробиологической промьппленностй, в част H dCTM к полученшо нового штамма, испоЛьзуемого для биосинтеза фермента протеаэы.. ,. Наиболее распространенными продуцентами протеаз являются микроорганизмы - грибы, дрожжи, бактерий, в том числе ёактерии рода Bacillus. ГГо своим культурально-морфологическим и физ/иологическим свойствам наиболее бли:зок к заявляемоьгу Штамм Bacillus subfcilis 103, который в на стрящеё время используется для произ од ства.прЬтёазы в промышленном масш табе li.. , ., Однако, известный шамм-продуцёнт протеаз Bacillus subtilis 103 имеет недостаточно высокую активность, кро ме того, при углубленном культивировании данного штамма ферментации мал стабильна, сама кулйтура подвержена фаголизису,и, как следствие, выход изготовления продукции невысок. Целью изобретения является получе ние высокоактивного нового штаммапродуцента протеазы, относящегося к виду Bafiillus subtilis и 6твё:чающего всем требованиям производства данног фермента свысокой истабильной протеолитической активностью в условиях -глубинного культивирования. Для получения.такого штамма из различных Природных сусбстратов были выделены чистые культуры бактерийj , способных к биосинтезу протеаз. Из них далее был отобран высокоактивный штамм, обозначеннь1Й после проведения видовой идентификации как Bacillus subtilis V-50.. Полученный новый штамм Bacillus subtilis V-50 обладает следующ ши Морфологическими и культурально-физи блбгическими свойствами. Величины односуточной культуры на мясо пептонном агаре ,ОхО,4-0,6 мкм. На богатых органических средах (ММ. с глюкозой, картофельная среда) тол стыё крупные клетки оёьтно трас гголоже ны в цепочках. Палочки равномерно ок рашиваютсяэ грамположятельны, подвшк ны, имеют. перитрихиальн1 1й тип жгути™ кования, Споры оЕ5разуются. терминально, реж расположены в центре. Споры цилиндри ческие или эллипсоидальные размером 1,2-1„4хО,6-0.8 мкм. На МПА после суточной инкубации при 37 С образуются сероватые, непрозрачные шероховатые, складчатые колонки диаметром 3-6 NOT. Па ломтиках картофеля рост обильньпЧ в виде серовато-белой сухой толстой, морщинистой, иногда со складками пленки. На мясо-пептонном бульоне рост в виде поверхностной толстой морщи- , нистой желтовато-белой пленки. Аэроб. Оптимальные условия роста: температура , рН 5,8-6,2. Культура использует для следующие сахара: глюкозу, сахарозуj фруктозу и 1/3 маннита с образованием кислоты без выделения газа. Не сваивает лактозу,-арабинозу, ксилозу, -мальтозу, рамнозу, дульцит, инозит и сорбит. Восстанавливает нитраты до нитритов. Образует ацетилметилкарбинол на среде Кларка. Не ассимилирует нитрат. Хорошо развивает в среде с 7%-ным раствором NaCl, гидролизует крахмал, молоко свертывает и частично его пептонизирует, жела,тину разжижает. Культура устойчива к фаголйзису.. И р и м е р. Выращивание нового niTat ia - продуцен а протезы Bacillus sibtilis V-50 производят на стандартной производственной питательной среде (ГОСТ 59-12-73 .Главмикробиопром) при 37°С в термостате на круговых чалках (180 об/мин), а также на бродильных установках типа Биолофит. На 48 часу роста в культуральной жидкости определяют протеолитическую . активность по стандартной методике (ГОСТ 20264 2.74 Главмикробиопром). Во всех опытах в качестве контроля взят произвойственный штамм Bacillus sibtilia 103. Результаты определения протеолитической активности представлены в таблице . При использовании нового штамма г продуцента протеазы Bacillus subtilis V-50 для производства ферментного пре парата протссубтилина активностью в культуральной жидкости увеличивается на 17% по сравнению со штам-сом Bacillus subtilis 103.

в колбах

в биолофитах

3,42 2,89 3,46

Штамм Bacillua .subtille v-50-продуцент протеазы (коллекция лаборатории чистых микробных культур Всесоюзного научно-исследовательского института прикладной энзимологии под номером ИПЭ-74),Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размером 1,7- 3,0x0,4-0,6 мкм, обычно расположенные в цепочках. Клетки равномерно окрашиваются, грамполежительны, подвижны, имеют перитрихиальный тип жгути- . кования. Капсул не имеют. Споры обра- эуются терминально, реже в центре. Споры имеют цилиндрическую или эллипсоидальную форму, размеры 1,2-1,4х хО,6-0,8 мкм.Культуральные гфизнаки. На мясо-пептонном агаре после суточной инкубации при 37^С образуются сероватые, непрозрачные, шероховатые складчатые колонки диаметром 3-6 мм. На ломтиках картофеля рост обильный в виде серовато-белой сухой и толстой морщинистой пленки, иногда со складками. На мясЬ-пептонном бульоне рост в ви- ' де поверхностной желтовато-белой толстой и морщинистой пленки, при этом собственно бульон остается прозрач- ньм.Физиологические признаки. Аэроб. Оптимальные условия роста; температура 37°С, рН. 5,8-6,2. Гидролизует крахмал, молоко свертывает и частично ; пептонизирует, разжижает желатину. Культура ^1спользует для роста глюкозу, сахарозу ,1/3 маннита и фруктозу с об- 'разованием кислоты без выделения газа. Не усваивает лактозу, арабинозу, ксилозу, мальтозу, рамнозу, кульцйт, инозит и сорбит. На среде Кларка . образует ацетилметилкарбинол, не растет на среде с нитратом, восстанавливает нитраты до нитритов. Хорошо развивается на среде с 7%-ным раствором NaCl. Культура устойчива;к фаголизи-су.- ,Культура хранится в анаэробнг^пс условиях на ломтиках картофеля в пробирках с дополнительной пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофили- зированном виде.^ -^ •^СП