Способ получения производных мурамилдипептида Советский патент 1985 года по МПК C07K9/00 

Изобретение относится к способу получения новых производных мурамил дипептида, общей формулы , OHfa , . СШН2 1ШСОШз I СНзСНСО Хг-МНСНСНг СН СО-Т Ш) где X - остаток L-аланина, L-серина или L-валина; Y - NHCHCCOOHXCHjXj-NH-CO-A, где А - разветвленный или неразветвленный Су-С -алкил, обладающий ценными фармакологически свойствами. Цель изобретения - получение новых производных мурамилдипептидов, обладающих преимуществами в фармако логическом отношении перед известными структурными аналогами. Пример 1. 11,4 г бензилового эфира N - L1-(l(.-0-бeнзил-4,6-0-бензилиден-Н-ацетилмурамил-Ь-алани-В-изрглутаминил1-N -бензилоксикарб нил-L-лизина суспендируют в 115 мл 60%-ной уксусной кислоты и нагреваю да кипящей водяной бдне в течение приблизительно 1 ч. После охлаждени до йомнатной температуры реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и к остатку добавляют воду Выпавшие кристаллы собирают фильтро ванием и перекристаллизуют из смеси диметилформамид (ДМФА) - этилацетат при этом получают 7,6 г бензилового эфира N - 1-(Л-0-бензил-К-ацетилмура мил-Ь-аланил-Э-изоглутаминил2-N - бензилоксикарбонил-Ь-лизина, т.пл. 207-2. (с разлож.), v;3|+56,6 (С 0,3; ДМФА, через 17ч). ; Вычислено, %: С 59,80; Н 6,73; N 8,90.. 1/2 Н,0 Найдено, %: С 59,65; Н 6,67; N 8,96. Полученное соединение растворяют в приблизительно 20-кратном избытке уксусной кислоты и гидрируют в присутствии катализатора палладия на углероде в токе водорода при комнатной температуре. После завершения ,реакции катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают кроматографически на силикагеле с использованием в качестве элюента смёси бутанол - уксусная кислота вода (4:1:2 по объему). Фракции, со-, держащие требуемое вещество концентрируют при пониженном давлении и пропускают через основную ионообменную смолу (ацетатная форма). Элюат сушат вымораживанием, при этом получают N -(Н-ацетилмурамил-Ь-аланил-О-изоглутаминил)-L-лизин. 300.мг (N-aцeтилмypaмил-L-aлaнил-П-изоглутаминил)-L-лизина суспендируют в 7 мл ДМФА и добавляют при. охлаждении льдом 148 мг активного эфира октановой кислоты и гидрЬк си-5-норборнен-2,3-дикарбоксилида и 0,05 мл N-метилморфолина. Через 30 мин смесь постепенно нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и к остатку добавляют диэтиловый эфир.. -Выпавшие кристаллы отделяют фильтрованием и промывают последовательно дизтиловым эфиром и водой. При перекристаллизации из смеси ДМФА - ДИЭТШ10ВЫЙ эфир получают 310 мг N -(К-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминил)-Ы -октаноил-Ь-лизина, т.пл. 126-130°С (с разлож.), .8,8° (С 0,2, ДМФА, через 17 ч). Вычислено, %:С 50,63; Н 7,98; N 10,74. ,,gO,3N,. 2Н,0. Найдено, %: С 50,32; Н 7,54; N11,00. Также синтезируют следующие соединения. N -(К-Ацетш1мурамил-1-аланил-В изоглутаминил)-К -лауроил-Ъ-лизин, т.пл. 174,5-176,5°С (с. разлож.), ,2(С 0,6, ДМФА, через 17ч). Вычислено, .%: С 54,13; Н 8,35; N 10,24.. СзтНббО| «б- . Найдено, %: С 53,90; Н 8,40; N 10,17. fj (1д-Ацетш1мурамил-Ъ-ал анил-D-из.оглутаминил) -Ы-стеароил-Ь-лизин, т.пл. 175,0-177,0 С (с разлож.) ,oi.p + 25,9 (С 0,6 ДМФА, через 17 ч). Вычислено, %;С 57,06; Н 8,91; N 9,29. СчзНтвО.зКбНаО. Найдено, %: С 57,21; Н 8,87; N 9,19. N -(Н-Ацетилмурамил-Ь аланил-П-изрглутаминил)-N -триаконтаноил-L-лизин, т.пл. 165,0-168 С (разлож.). 3 . Вычислено, %: С 61,03; Н 9,78; N 7,76. C55Hit O,,(1-1/2)-Н.О. Найдено, %: С 6Q,89;-H 9,58; N 7,63. . . N -(N-Aцeтилмypaмил-L-aлaнил-D-изоглутаминил) изопентадеканои -L-лизин, т.пл. 144,5-147,5С (с ра лож. +20,2° (С 0,3; ДМФА, через 17ч). Вычислено, %: С 56,85; Н 8,59; N 9,95.. С4оН„0„Нь. Найдено, %: С 57,26; Н 8,63; N 9,81. N -(Ы-Ацетилмурамшт-Ь-серил-О-изоглутаминил)-Ы -стеароил-Ь-лизи т.пл. 175,0-177°С (с разл.) ,(у: + 27,8° (С 0,5, ДМФА, через 17 ч Вычислено, %: С 55,52; Н 8,78; N 9,04. C,,H,gO,,Ng (1-1/2) Н,0. Найдено,. %: С 55,46; Н 8,62; N 9,.06. N -(Н-Ацетш1мурамил-Ъ-валил-В-изоглутаминил)-N -стеарол-L-лизин т.пл, 182,0-185,0°С (с разлож.), 22,8 (С 0,5,. ДМФА, через 17 ч). Вычислено, %: С 58,48; Н 9,05; N 9,01. С 5Н8гО,эМб-1/2 Н,0. Найдено, %: С 58,48; Н 8,89; N 9.,12. . Пример 2. 300 мг N-ацетнл мурамш1-Ь-аланил-В-изоглутамина, растворяют в 2 мп ДМФА, в которые добавлено 72 мл октиламира, 64 мг (0,56 ммоль) N-гидроксисукцинимида и 7 мл тетрагидрофурана. К этой смеси при охлаждении льдом и nepe-мешивании добавляют 115 мл . (0,56 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Через 30 мин смесь медленно нагревают до комнатной температуры и оставляют на ночь. Выпавшую в ос док дициклогексилмочевину отфильтр вывают фильтрат концентрируют при пониженном давлении и с целью пони жения осадка добавляют воду. Перекристаллизация осадка из смеси ДМ диэтиловый эфир дает 165 мг N-ацет мурамил-Ь-аланил-В- изоглутаминокти амида,т.пл. 1 /,0-175,5°С(с разлож. 30,5 (С 0,4, уксусная кис лота , через t ч) . Вычислено, %: С 52,15; Н 8,26; N 11,26. 90 ,oN,.H,0. Найдено, %: С 51,88; Н 8,00; N 11,35.. . . Так же получают следующие соединения. Ы-Ацетилмурамил-Ъ-аланил-В-изоглутаминлауриламид, т.пл. 186-187°С (с разлож. ), 30,0 ( 0,5, уксусная кислота, через 21ч). Вычислено, %: С 54,20; Н 8,82; N 10,20. C,,,oN,- (1-1/2) . Найдено , %: С 54,43; Н 8,60; N 9,88. Ы-Ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминстеариламид, т .пл. 189-190°С (с разлож. ), 28,0° (С 0,5, уксусная кислота, через 21 ч). Вычислено, %: С 59,00; Н 9,39; N 9,30. C3,H,,0,oN5-1/2 Н,0. Найдено, %: С 58,80, Н 9,37; N 9,33. Ы-Ацетилмурамил-1-валил-В-изоглутаминстеариламин. т.пл, 217-219°С-(с разлож.) . Вычислено, %: С 59,96; Н 9,57; N 8,97, C,H730,oN,-1/2 HjO Найдено, %: С 59,73; Н 9,58; N 9,16, Методика получения активного эфира жирной кислоты. .1,0 Ммоль жирной кислоты растворяют в 10 мл тетрагидрофурана и при перемешивании и охлаждении льдом добавляют 206 мг дициклогексилкарбодиимида и 179 мг Ы-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимида. Через 30 мин смесь медленно нагревают до комнатной температуры и оставляют на 5 ч, Выпавшую в осадок дициклогексилмочевину отфильтровывают, фильтрат концентрируют, К остатку добавляют сут хой диэтиловый эфир, нерастворившуюся часть отфильтровывают. Фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении, при этом получают активный эфир жирной кислоты и Ы-гидрокси-5-норборнен-2,3-жикарбоксимида в виде белых кристаллов, В случае получения активного эфира триаконтановой кислоты используют смешанный растворитель - тетрагидрофуран - с хлороформом (1:1 по объему), Группам по двадцать мышей линии Sld-ddy/26+l г, возрастом 5 недель

вводили подкожно соответственно по 0,1 мг каждого из соединений и контрольные соединения. Через 24 ч мышей заражали подкожным введением инокулума Е. coli штамм Е 77156, материалом 6x10 х 9x10 и 1,2x10 кле ток/мьш1ь, соответственно. Об эффекте судили по проценту мьш1ей, выживших через 7 дней после заражения. Как видно из результатов, приведенных в табл. 1, предлагаемые соединения продемонстрировали прекрасный профилактический эффект против данной инфекции..

Адъюзантная активность.

Проводили роговичный тест на морских свинках, считающийся одним из 5 показателей адъювантной активности. Как показано в табл. 2, результаты свидетельствуют о том, что предлагаемые соединения обладают адъювантной активностью такой же, и даже 10 более высокой , чем мурамилдипептид.

Г , .

Контрольные соединениы 1-4 и соединения 1-11, приведенные в табл.1 15 и 2.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ МУРАМИЛДИПЕПТИДА общей формулы СН20Н .НОН даошз S (..... ч.1 СНзСНСО-Х-МНСНСН2СН СО-У где X - остаток L-аланина, L-серина или L-валина; Y - NHCH(COOH)(CH2)4-NH-CO-A, где А - разветвленный или неразветвленный С -С -алкил., заключающийся в том, что соединение общей формулы А-СООН, где А - имеет указанное значение, подвергают взаимодействию с N-окси 5-норбЬрнен-2,3-дикарбоксимидом или N-оксисукцинимидом в присутствии дициклогексилкарбодиимида в среде тетрагидрофурана в некоторых случаях в смеси с хлороформом при комнатной температуре в течение 1-24 ч и полученное соединение подвергают взаимодействию с соединением общей формулы снгон -о,н-он /OvV ф СО но hsiH iTsIHCOCHs СНзСНСО-Х- COllHoСООН I I - NHCHCH CH COl H CH( где X - имеет указанное значение, со о со со в среде Ы,Н-диметилформамида при комнатн(эй температуре в течение 1-24 ч.

0,9

152

Контрольное соединение 1: (N-ацетилмурамил-Ь-аланил-О-изоглутаминил)-L-лизин.

Ко нтрольное соединение 2: N-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутамиН.

Контрольное соединение 3: N-ацетилмурамил-Ь-серил-В-изоглутамин.

Контрольное соединение 4: N-ацетилмурамил-Ь-валил-В-изоглутамин.

. , . Предлагаемое соединение 1: N -CN-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминил)-К-октаноил-Ъ-лизин.

Предлагаемое соединение 2: N -CN-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминил)-Ы -лауроил-Ъ-лизин.

Предлагаемое соединение 3: N -(N-адетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминил)-Ы-.стеароил-Ь-лизин. .

Предлагаемое -со.единение 4: (N-ацетилмурамкл-Ь-серил-В-изоглутаминшт)-Н -стеароил-Ь-лизин.;

Предлагаемое соединение 5: N -(N-ацетилмуранил-Ъ-вапил-В-изоглутаминш1)-Ы -стеароил-L-лизин.

Предлагаемое соединение 6: N -(N-ацетилмурамил-Ъ-аланнл-В-изоглутаминш1)-Ы -триаконтаноил-лизин.

Предлага емое соединение 7: N -(N-ацетилмурамил-Ъ-алил-В-изоглутаминил)-Н -изопентадеканонл-Ъ-лизин.

Предлагаемое соединение 8: N-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминоктиламид.

Предлагаемое соединение 9: N-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутамин лауриламид.

Предлагаемое соединение 10: N-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминстеариламид.

Предлагаемое соединение 11: N-ацетилмурамил-Ъ-валил-В-нзоглутаминстеариламид.

(Ы-ацетилмурамил-Ь-аланил-В-изоглутаминил)-К-стеароил-Ь-лизин является типичным примером предлагаемого соединения и имеет токсичность (LBj. ), определенную на мьппах, представленную в табл. 3.

Таблица 3

Как видно из табл. 3, указанное соединение является эффективным при ;Дозе 10.0 г/мышь (26 г). Этот факт iпоказывает, что детальная доза этого соединения более чем в 100 раз больше эффективной-дозы и, следовательно, предлагаемые соединения являются безопасными и полезными фармацевтическими агентами.