Способ получения 5- @ 3 -(2- @ 2,2,2-трифторэтил @ -гуанидино)-пиразол- 1- ил @ -валерамида или его малеината Советский патент 1985 года по МПК C07C127/19 

Изобретение относится к синтезу гуанидиновых производных, являкгщихся антагонистами гистамина и ингибирующими секрецию кислоты же лудочного сока, а именно к синтезу 5 З (,2,2-трифторэтил гуанидино)пиразол 1-11л валерамида фор- мулы егдзНп-1 зн . / . -(сн ч-сощо г 0) Цель изобретения - изыскание нового гуанидинового производного, проявляющего улучшенные свойства как антагонист гистамина H-Z и ин гибирующего секрецию кислоты желудочного сока. Пример 1. (2-(2,2,2-Трифторэтил гуанидино)пиразол- 1-Ш13 валеронитрШ1 (13 г) добав ляют в течение 10 мин к. концентрированной серной кислоте (65 мм) при одновременном перемешивании. Полученный раствор поддерживают при 20 С в течение 18 ч и затем разбавляют льдом (300 мл) и подщела чивают посредством 10,8 н. гидрата окиси натрия до достижения величины рН 9. Смесь экстрагируют этилацетатом (3x200 мл) и экстракт высуш вают (нар, сульфатом магния) и выпаривают в вакууме до получения в остатке масла, которое кристаллизуется Сырой продукт перекристаллизовывают из EtOAc, в результате чего получается 5- З- (2-(2,2,2-трифторэтид -гуанидино)-пиразол-1-ил -валерамид с т.пл. 130 С. Соль малеиновой кислоты получают путем растворения продукта в ацетоне. Т.пл. получаемой соли 183- 84°С. исходный материал может быть получен следующим образом. . Гидрид натрия, в виде пастообразной массы (6,16 г 61%-ной (вес/вес) суспензии в жидком парафине) вводят отдельными порциями в течение 30 ми в раствор 3-нитропиразола (17,4 г) в обезвоженном диметилформамиде (ВМФ) (150 мл) с внешним охлаждением льдом с целью поддержания температуры раствора . Смесь перемешивают в течение 45 мин и к почти про- чрачному раствору добавляют 5-бромвалеронитрил (25 г) в течение 30 мин при 25-30 С. Смесь перемешивают в те чение 4 ч. Добавляют воду (45 мл) и EtOAc (4SO мл) и верхний слой отделяют, высушивают (над MgSO) и выпаривают в вакууме до получения в остатке масла, которое представляет собой смесь 5-(3-нитропиразол-1- -ил)-валеронитрш1а и 5-(5-нитропира- зол-1-ил)-валеронитрила. Это масло разделяют на две (по 15 г) порции, которые фракционируют, пропуская их .через колонку с силикагелем (диаметр 3,5 см, длина 100 см); элюирование осуществляют при давлении 2 атм смесью этилацетат - петролейный эфир (т.кип. 60-80 с), взятой в соотношении (об/об) 3:7. Сначала элюирует- ся 3:5 изомер, а затем 1:3 изомер. Получаемый 5-(4-нитропиразол-1-ил)-валеронитрил имеет т.пл. 32-33 С. К раствору 5-(3-нитpoпиpaзoл-l- -ил)-вaлepoнитpилa (9,16 г) в обезвоженном тетрагидрофуране (200 мп-) добавляют палладий (5% вес/вес) на угле (1,8 г). Смесь перемешивают при в атмосфере водорода. В течение 4 абсорбируется 3,2 л водорода. Катализатор отфильтровывают и фильтрат выпаривают в вакууме, в результате чего получается 5-(3-аминопиразол-1-ил)-валеронитрил в виде масла. В раствор- 5-(З-аминопиразол-1- -ил)-валеронитрила (7,0 г) в ацетонитриле (25 мл) вводят 2,2,2-трифторэтилизотиоцианат (6,02 г). Спустя 15 мин растворитель выпаривают в вакууме, в результате чего получается 5- (2,2,2-трифторэтил)-тиоуроидо -пиразол-1-ил -валеронитрилв виде белого кристаллического твердого вещества, с т.пл. 96-98°С. Указанную тиомочевину (12,5 г) растворяют в 8-молярном растворе аммиака в EtOH (120 мл). К раствору добавляют ртути (12,8 г) и смесь перемешивают при в течение 30 мин. Полученную смесь фильтруют и фильтрат выпаривают в вакууме, в результате чего получается 5- З- (2-( 2,2,2-трифторэтил -гуа- нидино )-пиразол- -валеронитрил в виде масла. Образец этого масла растворяют в ацетоне и добавляют 5молярные эквиваленты малеиновой кислоты. К образукяцемуся прозрачному раствору добавляют диэтиловый эфир, в результате чего получается кристаллический малеат с т.пл. 123- 125°С.

Кроме этого, (2--{2,2,2-трифторэтил}-туанидино)пиразол-1-ил валеронитрил может быть получен в результате реакции 3-аминопиразола с 2,2,2-трифторэтилизотиоцианатомJ реакции полученной тиомочевины с аммиаком в присутствии окиси ртути и алкилирования у азота в I-положении 3-(2,2,2-трифторэтил -гуаниди- но -пиразола с 5-бромвалеронитрилом

Пример 2. В раствор 2,2,2-трифторэтилцианамида (0,65 г) и 5-(3-аминопиразол-1-ил)-вал рамида (0,87. г).в EtOH (10 мл) вводят концентрированную соляную кислоту (5 капель), Полученную смесь нагревают с обратным холодильником в течение 5 ч. В течение этого периода периодически добавляют концентрированную соляную кислоту в виде капель с целью поддержания величины рН 4. Летучий материал выпаривают в вакууме, и остаток после выпаривания взбалтывают вместе с 2 н, водны раствором гидрата окиси натрия (10 мл) и EtOAc (35 мл). Органический слой отделяют, и водную фазу снова экстрагируют этилацетатом (2x35 мл). Объединенные экстракты высушивают над MgSQ и добавляют малеиновую кислоту, растворенную в ацетоне, в результате чего получается малеат (2,2,2-три- фторэтил)-гуанидиноП -пиразол-1-ил -

-валерамида с т.пл. 180-182°С. .

Альтернативно объединенные экстракты можно выпарить и остаток пере кристаллизовать из этилацетата, получая при этом продукт в виде свободного основания. Т.пл. 130°С.

2,2,2-Трифторэтш1ацианамид, ис- пользуемьй в качестве исходного материала, может быть получен следующим образом.

Цианогенбромид (l,06 г раство- ряют в холодном диэтиловом эфире (5 мл) и добавляют к раствору 2,2,2 -трифторэтил амин а U,98 г) в холодн диэтиловом эфире (5 мл). Смесь нагревают до 20 С в течение 30 мин, затем фильтруют. Осадок на фильтре промывают диэтиловым эфиром и соединенные фильтраты выпаривают в вйкууме при 20 С, в результате чего получается 2,2,2-трифторэтилцианамид в виде те- кучего масла, которое отверждается при выдержке при -15 С. Инфракрасный спектр показывает полосу при 228 см

(которая соответствует -CNJ. Спектр ядерного магнитного резонанса (ЯМР) в D-метаноле с тетраметилсиланом, служащим в качестве внутреннего стандарта () показывает резонанс (8) 3,65 (квартет).

Активность антагонистов гистамина Н-2 была испытана посредством стандартных испытаний, например, по способности соединения формулы I инги- бировать вызванную гистамином положительную хронотропную ответную реакцию при спонтанном биении правого предсердия морских свинок, или по-способности этого соединения ингибиро- вать вызванное гистамином поглощение аминопирина в кислотное пространство париетальных клеток (т.е. обкла- дочных клеток желез желудка).

Испытания на морских свинках осуществляют следующим образом. Правое предсердие морской свинки подвешивают с натяжением 1 г (изометрическое натяжение) в тканевой ванне с термостатическим регулированием (воС, емкость 25 мм), содержащей насыщенный кислородом (95% Og, 5% 00) буфер КгеЪз Henseleit (рН 7,4). Ткань стабилизируется в течение 1 ч,, и в течение этого времени она промывается 2-4 раза. Отдельные сокращения регистрируются посредством датчика силового смещения с использованием измерителя деформации, а мгновенные частоты сокращения регис-г- рируются посредством кардиотахомет- ра. Получают значение контрольной ответной реакции на I мкмоль гистамина, после чего ткань промывают три раза и снова приводят в равновесное состояние до основного показателя частоты. После установления равновесия, лящегося 15 мин, вводят испытываемое соединение до желаемой конечной конентрации. Через 10 мин после ввеения соединения снова вводят гиста- ин (l ммоль), и ответную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной реакцией на гистамин. Результат выажен в процентах от контрольной ре-, акции на гистамин. После этого станартными методами определяют кажууюся константу диссоциации антаго- ниста гистамина Н-2.

Испытание с аминопирином осуествляют следующим образом. Удаяют слизистую оболочку желудка из

мьпицы дна желудка и промьгоают ее в буфере 1 (содержащем на 1 л раст вора, г: NaCl 8,007; КС1 0,201; Na2HP04 0,113; 0,204; CaCl Х2Н20 0,132; М Cl 0,101 и глюкоза 1 , С регулированием величины рН до 7,4посредством NaOH). Ткань тонко измельчают, суспендирзпот в -буфере 1 и промывают три раза буфером 1 Затем ткань суспензируют в диспергирующей среде: коллагеназа (Sigma Chemical Со Тип У; 100 мг) и альбумин коровьей сыворотки (Miles Laboratories Ltd, фракции У; 100 мг в буфере 1 (100 мл); 50 мл на 10 г чистого веса ткани, и термостатируют при и величине рН 7,4 (поддерживаемой путем непрерывного регулирования) при перемешивании в атмосфере кислорода. По прошествии О мин ткани дают возможность осесть и поверхностный жидкостный слой удаляют. Вводят свежую порцию диспергирующей среды и продолжают термостатирование с :использованием ткани, которая в большей своейчасти диспергируется в железы и целые клет- ки по прошествии 40-60 мин. Любые оставшиеся большие кусочки ткани удаляют путем фильтрации через нейлоновую сетку. Смесь желез и клеток извле1 :ают путей центрифугирования при 200 X г, и суспензируют в буфере 1, содержащем 1% альбумина коровьей сыворотки (Miles Laboratories Ltd, фракция У). ,И, наконец, железы и клетки промывают три раза буфером 1, и суспензируют в буфере 2 (содержащем bagles MEM (500 мл), Апротин (Sigma Chemical Со 10 мг), и HEPES (т.е. (2-оксиэтш1 -пи перазин-1-ил1-этаноульфокислоты)

150 ммоль; 20 мл), при поддержании величины рН 7,4 посредством МаОН; 150 мл на 10 г чистого веса ткани. Эту тканевую суспензию перемешивают в атмосфере кислорода при 32 С в течение по меньшей мере 1 ч, после чего ее можно использовать. Тканевую суспензию термостатируют вместе с испытываемым соединением и atta- нопирином (Ю мкмоль) , меченым С в диметиламиновой группе (0,1 мк г хдюйм /мл), в течение 20 мин. Затем поглощение аминопирина стимулируют путем добавления гистамина и ингибитора фосфодизстеразы 1С1 63197 до конечных концентраций 10 моль и 5x10 моль соответственно. По прошествии 18 мин клетки (железы) извлекают из термостатированной среды путем фильтрации суспензии через стеклянный микрофибрильный фильтр. . Клетки (железы) быстро (в течение менее чем 10 с) промывают три раза охлажденным льдом буфером 1. Амино- пирин, меченый С , удерживаемый тканью, измеряют с помощью сцинтилляционного счетчика и степень ингиби- рования поглощения испытываемым соединением рассчитывают путем сопоставления с контрольным образцом.Затем с помощью графиков, полученных в ряде испытаний, проводимых при различных концентрациях, рассчйтьшают концентрацию испытьгааемого соеди: нения, дающую ингибирование на 50%. Соединение формулы I и его соли были активными в опыте в концентрации 0,0036 мкмоль.

Активность известного вещества 3-(2-гуанидинотиазол-4-илметилтио)-пропионамида в 100 раз меньше, чем соединения формулы Т. .

Способ получе1шя (,2,2-трифторэтил -гуанидино)-пиразол- -1-ил} Еалерамида формулы г /(СН2)4-СОЪ Н2 тян,или его малеината, отличающийся тем, что 2,2,2 трифторэтилцианамид подвергают взаимодействию с 5-( З-аминоггиразол-1-Ил )-валерамидом при кипении реакционной массы в кислой среде, после чего реакционную массу обрабатывают водным щелочным раствором Ш и этилацетатом, органический слой отделяют и вьщеляют целевой продукт либо в свободном виде, либо в С виде соли с малеиновой кислотой.